HPLC-MS在麝香酮分析中的应用

目的：测定剂中麝香酮含量，方法：标准加入法、2，4－二硝基苯腙（DNP）衍生化法及高效液相／电喷雾串联质谱法。结果：根据标准品麝香酮腙特有的质量谱图对样品中的麝香酮进行了鉴别，并在优化的高效液相及质谱条件下观察到了[M＋H]^＋峰及其特征碎片峰。ESI及APCI对m/z419作MS／MS全扫描质谱图有相同的相对分子质量及断裂方式。回收率102．5％，RSD≤2．76％（n=5)。结论：本方法可同时实现麝香酮的定性和定量分析。     

丙烯酰胺-4-乙烯基吡啶胶束共聚合的动力学研究

以十二烷基苯磺酸钠为表面活性剂，过硫酸钾／亚硫酸氢钠为引发剂，丙烯酰胺／4－乙烯基吡啶胶束共聚合，并用^1H-NMR表征该共聚物。研究亲水单体用量、亲油单体用量、引发剂用量、表面活性剂用量对聚合反应动力学的影响。结果表明：Rp∝[M]^1.24,Rp∝[E]^-0.33,Rp∝[I]^0.28。     

亮氨酸脑啡肽一级结构的电喷雾质谱分析

目的：测定亮氨酸脑啡肽的精确相对分子质量及其一级结构。方法：应用高分辨电喷雾质谱法及碰撞活化解离技术对亮氨酸脑啡肽进行测定,根据典型的碎片离子确证其氨基酸序列及精确相对分子质量。结果：测得亮氨酸脑啡肽的准分子离子峰[M＋H]＋m／z556,2773,[M＋Na]＋m／z578．2587,与理论值相符合。通过适当调整碰撞解离电压,得到一系列典型的Y离子、b离子及部分碎片离子,进而确证亮氨酸脑啡肽的完整序列。结论：该方法简单,快速,实用,测试成本低。     

液相色谱-质谱联用法对桂枝茯苓胶囊指纹图谱中特征峰的鉴定

目的:对桂枝茯苓胶囊指纹图谱特征峰进行指认鉴定。方法:应用二极管阵列（DAD）和电喷雾质谱（ESI MS）2种在线检测方法。结果:经过分析对照品与样品峰谱特征及与文献的对比研究,鉴定了指纹图谱中的8个成分,并推测了一个萜类化合物。结论: HPLC/DAD/ESI-MS方法所得谱图易于解析,且重现性和特征性较好,可以用于桂枝茯苓胶囊的指纹图谱鉴别。      

手性钌配合物△-[Ru（bpy）2IPBP]^2＋的合成及其细胞毒作用

目的采用△-[Ru（bpy）2（PY）2][o,o＇-dibenzoyltartrate]·12H2O和3-醛基色酮为原料,制备手性钌多吡啶配合物△-[Ru（bpy）2IPBP]^2＋（△-1）（bpy：bipyridine,IPBP：2-（4-甲苯并吡喃-2-酮）咪唑[4,5-f]^[1,10]菲咯啉）,并对其体外抗肿瘤活性进行初步评价。方法采用元素分析,电喷雾质谱（ESI—MS）,核磁共振（NMR）等对目标化合物进行了表征,并采用MTT法初步研究了配合物△-1对人肝癌细胞Bel—7402,肺腺癌细胞HCT-8有明显的抑制作用。结果与结论目标化合物的元素分析、电喷雾质谱实验结果与理论值基本一致;当配合物浓度为50μg/mL时,配合物△-1对人肝癌细胞Bel—7402,肺腺癌细胞HCT-8有明显的抑制作用。     

茜草炮制前后红外图谱分析

[目的]分析茜草及茜草炭的红外原谱及二阶导数谱,提取红外谱图特征。[方法]利用现代红外光谱技术,对茜草及茜草炭进行分析。[结果]茜草炒炭前后红外原谱、二阶导数谱有明显的变化,表明红外技术用于中药材及其炮制品的鉴别是可行的。[结论]红外光谱法样品的制备较简单,仪器设备普及性较强,在中药材饮片的快速鉴别中占据一定的优势。     

卵巢癌细胞诱导的CD8+T细胞凋亡与Caspase-3活性及细胞内钙的关系

目的 探讨卵巢癌细胞诱导CD8^＋T细胞发生凋亡，及Caspase-3与细胞内游离钙离子在CD8^＋T细胞凋亡过程中的作用。方法分别采用透射电镜、流式细胞术观察3株卵巢癌细胞（OVCAR3、CAOV3和SKOV3）的培养上清液诱导的CD8^＋T细胞凋亡和细胞周期变化；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和比色法检测CD8^＋T细胞Caspase-3mRNA的表达和Caspase-3活性；Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。结果 经3株卵巢癌细胞的培养上清液分别作用后，CD8^＋T细胞被阻滞在G1／G0期，电镜下出现典型的凋亡改变，流式细胞仪检测见凋亡峰，细胞凋亡率增高；CD8^＋T细胞凋亡过程中Caspase-3mRNA的表达水平、Caspase-3的活性和[Ca^2＋]，均明显升高。结论 卵巢癌细胞能诱导CD8^＋T细胞凋亡，CasDase-3激活及细胞内钙超载在此过程中起雷要作用。     

食道癌患者CD4^＋、CD25^＋、Foxp3^＋调节性T细胞的变化及意义

[目的]初步探讨CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞在食道癌患者外周血中的变化及临床意义。[方法]59例食道癌患者,分为鳞癌组47例,腺癌组12例,另外30例健康志愿者为对照组,用流式细胞术分别检测外周血中CD4^＋、CD25^＋、Foxp3^＋T细胞占CD4^＋T细胞的比例。[结果]食道癌初诊患者组CD4^＋、CD25^＋、Foxp3^＋T细胞比例为（10．33±5．72）％,明显高于健康志愿者组（4．56±1．06）％（P〈0．01）,而食道鳞癌组和食道腺癌组CD4^＋、CD25^＋、Foxp3^＋T细胞比例没有明显差异。[结论]CD4^＋、CD25^＋、Foxp3^＋调节性T细胞在食道癌初诊患者外周血中比例增加,可能是食道癌免疫抑制的一个重要原因。     

EHP引发AM/DMMC反相微乳液聚合的研究

以油酸失水山梨醇酯Span80和壬基酚聚氧乙烯醚OP-10为乳化剂，白油为连续介质，过氧化二碳酸（2-乙基已酯）（EHP）为引发剂，进行丙烯酰胺/（2-甲基丙烯酰氧乙基）三甲基氯化铵（AM/DMMC）反相微乳液共聚合反应。研究了ωM=0.25-0.50范围内单体总浓度[M]、引发剂浓度[I]、乳化剂浓度[E]对聚合速率Rp和共聚物分子量M^-V的影响，得到Rp∝[M]^2.47[I]^0.76[E]^0.19,M^-v∝[M]^2.05[I]^-0.37[E]^-0.47。测定了AM/DMMC反相微乳液共聚合中单体的竞聚率，得到rAM=0.44,rDMMC=1.31。     

新型尾式卟啉的制备、表征及其与DNA相互作用的初步研究

目的合成1个新型尾式卟啉化合物（目标化合物1）,并对其与小牛胸腺DNA（CT-DNA）的相互作用方式进行初步研究。方法以吡咯、对羟基苯甲醛和苯甲醛为原料,制备得到以柔性碳链连接的目标化合物1,采用MS1、HNMR以及UV-vis等对化合物进行表征;并采用紫外光谱、荧光光谱以及黏度实验初步研究目标化合物1与CT-DNA的相互作用。结果目标化合物1的电喷雾质谱（ESI-MS）在997.4出现一个归属于[M＋H]＋的分子离子峰,实验结果与理论计算一致;目标化合物1的电子吸收光谱分别在419 nm出现一个归属于卟啉环的特征Soret吸收,在500~700 nm之间出现归属于卟啉环的特征Q-带吸收。结论目标化合物1能够以插入方式与DNA分子发生结合。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS的防风质量差异标志物初步研究

[目的]采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS),初步确定26个道地产区及其他产地的共计78批次防风样本的质量差异标志物。[方法]采用电喷雾离子源进行正离子采集,使用Waters Acquity UPLC BEH C18柱,流动相以0.1%甲酸水、0.1%甲酸-乙腈进行梯度洗脱;通过质谱解析软件(Markerview)对数据进行主成分分析(PCA分析),依据同位素峰度比和精确质量数确定其分子式,对比二级图谱与对照品图谱,进行结构鉴定。结合防风体内物质基础以及生物活性报道,确定候选质量差异标志物,进一步分析候选质量差异标志物在防风道地产区和非道地产区的含量变化规律,确定质量差异标志物。[结果]鉴定或推断了不同产地防风中含量差异较大的10种主要活性成分,其中Ledeouriellol、亥茅酚、补骨脂素、花椒毒素可初步作为防风道地药材的质量差异标志物。[结论]该方法能够准确、快速找出一批化合物可以作为质量差异标志物,提供了新的道地药材质量评价指标研究策略。     

沈阳部分职业人群代谢综合征调查分析

目的 了解沈阳地区20-84岁人群中代谢综合征（MS）及其主要成分患病率现状分析。方法 2005年6-9月对20-84岁人群共3573例（男2095例，女1478例），根据国际糖尿痛联盟2004年推荐的有关中国成人MS标准及相关组分进行统计分析。结果 男女合计，MS患病率为23．62％。男性在40岁以上及女性在50岁以上MS患病率明显升高，男性70岁组及女性60-69岁患痛率达到高峰。结论 沈阳地区20岁以上成人有相当比例个体患有MS，尽早筛查并发现MS高危人群，对降低动脉粥样硬化性心血管病的发病率和死亡率具有重要意义。     

哮喘患儿急性发作期CD4+ CD25+ 调节性 T细胞水平和体质量指数的关系

 【目的】 探讨急性发作期哮喘患儿外周血CD4+ CD25+ 调节性T细胞(Tr)的变化及其与体质量指数(BMI)的关系&;#65377; 【方法】 外周血来自70例哮喘发作组患儿&;#65380;30例缓解组和50例正常对照组小儿&;#65377;将哮喘发作组再分为体质量正常组(40例)和超重组(30例)&;#65377;应用流式细胞术检测患儿外周血的Tr细胞数变化,并计算患儿的BMI&;#65377; 【结果】 急性发作期组患儿外周血Tr水平 [(6.17 ± 1.72)%]明显低于缓解期组患儿[(7.56 ± 1.48)%]和对照组儿童[(7.13 ± 1.48)%](P < 0.05),而缓解期患儿外周血Tr水平与对照组儿童无明显差异(P > 0.05)&;#65377;正常体质量哮喘患儿CD4+ CD25+ Tr水平[(6.34 ± 1.71)%]明显高于超重患儿[(4.74 ± 1.20)%](P < 0.05)&;#65377;哮喘组患儿外周血CD4+ CD25+ Tr水平[(6.17 ± 1.72)%]与其BMI水平(16.00 ± 2.14)呈显著的负相关(rp = -0.814,P < 0.05)&;#65377; 【结论】 外周血Tr水平在哮喘患儿发作期显著降低,而在超重的患儿更低,且其水平与患儿的BMI呈显著的负相关&;#65377;     

TLC联合MS技术鉴定降糖中药制剂及保健品中的化学添加物

【目的】建立一种快速准确鉴定降糖中药中非法添加化学药品的方法。【方法】用TLC法对可能含有非法降糖类化学药品的4种中药制剂进行筛查,根据薄层色谱图找出可疑斑点,将可疑斑点分离后直接进行质谱检测,再与相应化学对照品的一二级质谱图进行比较。【结果】在可疑斑点质谱图中有与格列本脲、格列美脲、苯乙双胍对照品一致的准分子离子峰与碎片离子峰。【结论】应用TLC联合MS技术可快速准确鉴定出降糖中药制剂及保健品中是否含有非法添加的化学药品。     

哮喘患者CD4+T细胞对单核/巨噬细胞抗原递呈功能的影响

目的:探讨支气管哮喘患者CD4⁺T细胞对单核/巨噬细胞抗原递呈功能的影响。 方法：哮喘患者20例,健康对照22例,分别取静脉血5 mL,并 分离单核/巨噬细胞、CD4⁺T细胞和B细胞。每份血样分成4组：MΦ递呈抗原组、CD4⁺T细胞参与MΦ递呈抗原组、CD4⁺T细胞体外活化后对MΦ递呈抗原影响组及自然状态下CD4⁺T细胞对MΦ细胞递呈抗原影响组。各组用CTLL2P抗原刺激18 h后,洗去刺激原,与自体B细胞共同孵育10 d,吸取上清液,测定特异性IgM、IgE、IgG含量。 结果：哮喘患者CD4⁺T细胞与单核/巨噬细胞共同培养递呈抗原时,产生特异性IgM(A₄₉₀ nm)（0.033±0.031）低于健康人（0.098±0.062）（P<0.05）;产生特异性IgG(A₄₉₀ nm)（0.080±0.035）明显高于健康人（0.055±0.024）(P<0.05);产生特异性IgE(A₄₉₀ nm)（0.154±0.119）的调节作用与健康人（0.186±0.101）差异无显著性（P>0.05）;在无抗原刺激的自然状态下,哮喘患者CD4⁺T细胞与递呈抗原单核/巨噬细胞共同培养,也能产生高水平的特异性IgG（哮喘组：0.075±0.018,对照组：0.057±0.018;P<0.05）。 结论：哮喘患者CD4⁺T细胞对单核/巨噬细胞递呈抗原产生的各型免疫球蛋白均有不同程度的调节作用。     

小鼠MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ类分子限制性表位MAGE-3多肽疫苗的设计及其免疫效应

[目的]设计小鼠MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ类分子限制性表位黑色素瘤抗原-3(MAGE-3)多肽疫苗即包含CD4~+一CD8~+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原,并探讨其免疫效应.[方法]采用计算机模拟设计的方法,结合文献资料选择MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ类分子限制性表位的MAGE-3多肽.采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)、细胞毒性实验评价多肽诱导T淋巴细胞的增殖能力及刺激的T淋巴细胞释放细胞因子的能力.[结果]获得的联合表位多肽序列为FITC-YEEYYPLIFLDNDQETMETSEEEEYEEYYPLIF,高效液相色谱法分析多肽纯度≥90%.MAGE-3表位多肽抗原能够诱导T淋巴细胞增殖,并诱导T淋巴细胞分泌IFN-γ,高于对照组(49%vs spots/10~6,P≤0.05).MAGE-3表位多肽可诱导细胞毒T淋巴细胞使42%的MFC细胞溶解破裂,高于对照组(P≤0.05).[结论]包含CD~+-CD8~+T细胞表位的MAGE-3多肽抗原在体外实验中显示有一定的免疫效应,此抗原肽可作为多肽疫苗用于对表达MAGE-3抗原的H-2K<'K>型小鼠胃癌进行免疫治疗.     

间充质干细胞及其培养上清与融冻产物对脐血CD34+ 细胞扩增及分化的作用

 【目的】 探讨人骨髓间充质干细胞(MSC)及其培养上清&#65380;融冻产物对脐血CD34+ 细胞扩增及分化的作用&#65377;【方法】 分离纯化人骨髓MSC,收集纯化三代的MSC培养上清,采用反复冻融法获得MSC融冻产物,采用免疫磁珠分选系统纯化脐血CD34+ 细胞&#65377;实验分为4组,分别为含MSC滋养层组&#65380;MSC上清组&#65380;MSC融冻产物组及单纯造血生长因子(HGFs)对照组&#65377;流式细胞仪检测人脐血CD34+ 细胞在这四种培养体系中第6天和第12天有核细胞数及CD34+&#65380;CD34+CD38-&#65380;CD41+&#65380;CD19+&#65380;CD3+ 细胞含量&#65377; 【结果】 ①MSC滋养层组对脐血有核细胞和对脐血CD34+&#65380;CD34+ CD38- 的扩增能力最强,MSC培养上清组和MSC滋养层相比具有类似的作用,但其作用强度减弱(P < 0.05)&#65377;②MSC培养上清和MSC均具有抑制脐血CD34+ 细胞分化为CD3+ 和CD19+ 细胞的作用,差异无显著性(P > 0.05)&#65377;③MSC培养上清和MSC均具有促进脐血CD34+ 细胞向CD41+ 细胞分化的作用,MSC滋养层的作用强于MSC培养上清(P < 0.05)&#65377;④MSC融冻产物已完全丧失对脐血CD34+ 细胞扩增和分化作用,与单纯因子对照组相似(P > 0.05)&#65377;【结论】 MSC培养上清对脐血CD34+&#65380;CD34+ CD38- 细胞均具有扩增作用,而且可促进脐血CD34+ 细胞向CD41+ 细胞分化&#65377;     

鼻咽癌组织淋巴细胞亚群的分布与分析

[目的]探讨鼻咽癌组织局部免疫在鼻咽癌发生发展中所起的作用。[方法]免疫组化方法检测45例鼻咽癌的肿瘤间质和33例慢性鼻咽炎组织的CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD20＋分布情况。[结果]与慢性鼻咽炎组比较,鼻咽癌肿瘤间质中CD4＋T、CD3＋T淋巴细胞均明显减少（P〈0．05）;CD8＋T淋巴细胞及CD20＋B淋巴细胞差异则无显著性意义（P〉0．05）;CD4＋／CD8＋（0．26）降低,且明显低于正常值（CD4＋／CD8＋正常比值为1．76&#177;0．58）。[结论]鼻咽癌组织中CD4＋／CD8＋比值减小,提示鼻咽部组织免疫功能受到抑制。     

代谢正常肥胖疾病与非酒精性脂肪性肝病的相关性研究

【目的】探讨代谢正常肥胖（metabolically healthy obese ,M HO ）与非酒精性脂肪性肝病（nonalco-holic fatty liver disease ,NAFLD）的相关性。【方法】收集本院2006年4月至2010年1月体检者资料,记录体检个体的各项临床指标、相关生化指标及腹部B超结果,排除资料不全者,共2830例。根据肥胖的诊断标准,共有613例纳入本研究,包括M HO 261例,肥胖伴代谢综合征（metabolic syndrome ,MS）352例。对其中M HO合并NAFLD者（ n＝134）、未合并NAFLD者（ n＝127）及MS（ n＝352）者的一般资料、血压、血糖、血脂、尿酸、外周血白细胞计数（WBCC）进行分析,并对109例MHO（其中MHO合并NAFLD者62例）随访1～3年。观察 M HO 合并 NAFLD 者发生 MS 的情况。【结果】① M HO 中,未合并 NAFLD 组体质指数（BMI）、年龄、收缩压（SBP）均较合并NAFLD组低,且差异有显著性（ P＜0．05）。合并NAFLD组BMI、年龄与肥胖伴MS组相比无统计学差异,SBP较肥胖伴MS组低,较未合并NAFLD组高,且差异有显著性（ P ＜0．05）。②M HO中合并NAFLD组代谢异常性疾病的发病率较未合并NAFLD组高（59．68％ vs 29．79％,P＜0．05）。【结论】①M HO合并NAFLD者临床及生化特征与肥胖伴MS者更相近。② NAFLD是M HO向代谢异常性疾病进展的危险因素。     

心肌灌注显像剂99mTc-替曲膦的制备与应用

亚磷酸三乙酯与1,2二-溴乙烷的加成产物经L iA lH4还原得乙二膦,后者与乙烯基乙醚发生加成反应生成1,2双-[双(2乙-氧基乙基)膦基]乙烷(替曲膦),这是一种新型的心肌灌注显像剂99mT c替-曲膦的配体,产物及中间产物经IR、1H-NMR、M S得到确证。用SnC l2将99mT cO-4还原成[99mT cO2] 后与替曲膦反应得到99mT c替-曲膦,其放射化学纯度为93%。临床使用表明:制得的99mT c替-曲膦能够满足临床显像要求,且标记简便。