人细胞色素p450 IA2基因的构建及其功能检测──该基因在啮齿类细胞中代谢

本文首先构建了含人类细胞色素ｐ４５０ＩＡ２ｃＤＮＡ的ｐＺｉｐ－ｐ４５０ＩＡ２的真核表达载体，并分别将其转染到Ｖ７９细胞和原代大鼠肝上皮细胞中．Ｎｏｒｔｈｃｒｎ杂交和免疫组化实验显示，Ｖ７９转染细胞中有人ｐ４５０ＩＡ２的ＲＮＡ和蛋白水平的表达。细胞毒实验和ＨＧＰＲＴ位点突变率检测结果证明，外源性ｐ４５０ＩＡ２基因可在Ｖ７９细胞中代谢活化黄曲霉毒素Ｂ１．转染有ｐＺｉｐ－ｐ４５０ＩＡ２质粒的原代大鼠肝细胞可代谢活化５ｎｇ／ｍｌ的黄曲霉毒素Ｂ１．本研究说明了人ｐ４５０ＩＡ２ｃＤＮＡ在ＭＭＬＶ的５′ＬＴＲ系统驱动下，可在体外啮齿类细胞中代谢活化黄曲霉毒素Ｂ１．它为ＡＦＢ１致癌机制的研究提供了一个新的、更为有效的途径。     

逆转录病毒介导人细胞色素p450IA＿2cDNA在V79细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素B＿1

逆转录病毒介导人细胞色素ｐ４５０ＩＡ＿２ｃＤＮＡ在Ｖ７９细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素Ｂ＿１袁宝珠，孙宗棠目前认为黄曲霉毒素Ｂ１（ＡｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，ＡＦＢ１）是肝细胞致癌剂，它经肝细胞内微粒体细胞色素ｐ４５０代谢活化成最终致癌剂。为了加强...     

腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

AnnexinI基因转染对BEP2D细胞生长的影响

研究ＡｎｎｅｘｉｎⅠ基因ｃＤＮＡ转染对生化人支气管细胞系ＢＥＰ２Ｄ生长的影响。方法：ｐＴ７Ｔ３Ｄ质粒经ＮｏｔⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切获得 人ＡｎｎｅｘｉｎⅠ基因ｃＤＮＡ片段，亚克隆至真核表达载体ｐＣＩ－ｎｅｏ，构建人ＡｎｎｅｘｉｎⅠ基因真核表达载体ｐＣＩ－ＡＸＩ。通过采用脂质体介导转染技术，将ＡｎｎｅｘｉｎⅠ的真核表达重组质粒和空载体质粒分别导入永生化人支气管管细胞系ＢＥＰ２Ｄ；合成ＡｎｎｅｘｉⅠ反应寡     

小鼠H-2K b基因转染人肝癌细胞后激活免疫排斥反应的研究

目的：增强人肝癌细胞的免疫原性以激活宿主免疫细胞识别杀伤相应的肝癌细胞。方法：以脂质体介导小鼠Ｈ－２Ｋｂ基因转染肝癌细胞株,并检测Ｈ－２Ｋｂ抗原表达情况,然后用Ｈ－２Ｋｂ基因转染后的肝癌细胞体外激活效应细胞杀伤活性,再进行裸鼠动物实验。结果：Ｈ－２Ｋｂ基因转染人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２后,Ｓｏｕｔｈｅｍ印迹杂交结果显示,Ｈ－２Ｋｂ基因整合于肿瘤细胞染色体中,ＲＮＡ点杂交结果显示,Ｈ－２ＫｂＤＮＡ已转录成ｍＲＮＡ。免疫组化及流式细胞仪检测显示,Ｈ－２Ｋｂ抗原已在肝癌细胞胞膜上表达。转染后肝癌细胞在体外能强烈诱发效应细胞毒性,这种细胞毒性现象在裸鼠实验中得到进一步验证。结论：异源ＭＨＧ－Ｉ类基因Ｈ－２Ｋｂ转染肝癌细胞后可增强其免疫原性并激活免疫效应细胞杀伤活性。     

外源性p53基因增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

 目的 探讨外源性ｐ５３基因转染对人卵巢癌细胞株的化疗敏感性的影响。方法用脂质体介导的转染技术，将人野生型ｐ５３基因的真核表达载体导入不表达ｐ５３的卵巢癌ＳＫＯＶ－３细胞中，经Ｇ４１８筛选，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定后，观察其对顺铂作用后的 ＳＫＯＶ－３细胞的集落形成及凋亡的影响。结果 外源性Ｐ５３基因在转染细胞中有效表达，并增强了顺铂对ＳＫＯＶ－３细胞集落形成的抑制作用及促进了顺铂诱导的细胞凋亡。结论 外源性ｐ５３基因能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，两者联合作用能更大程度地杀灭肿瘤细胞。     

IL-4基因及B7-1基因共转染新型瘤苗的制备及其治疗作用的初步研究

本文研究了ＩＬ－２，ＩＬ－４，ＩＬ－６基因转染后Ｂ１６黑色素瘤细胞表面ＭＨＣＩ类抗原及ＩＣＡＭ－１的表达水平，并探讨了基估ＣＴＬ诱导过程中的作用。结果表明，ＩＬ－２，ＩＬ－４，ＩＬ－６基因转染Ｂ１６黑素瘤细胞表面ＭＨＣＩ类抗原及ＩＣＡＭ－１表达均高于野生型Ｂ１６黑色素瘤细胞及转染对照质粒的Ｂ１６黑色素瘤细胞。     

人c－myc基因辅助黄曲霉毒素B1体外转化大鼠肝上皮细胞

人ｃ－ｍｙｃ基因辅助黄曲霉毒素Ｂ１体外转化大鼠肝上皮细胞袁宝珠，孙宗棠我们利用基因转染技术，探索黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）在人ｃ－ｍｙｃ基因辅助下，转化体外原代大鼠肝上皮细胞的可能性。首先，我们利用ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎＩ将人ｃ－ｍｙｃ基因从ｐＢＲ３２２...     

多聚阳离子对非病毒载体转移效率的影响*

目的：制备Ｔ淋巴瘤ＴＣＲＶβ核酸疫苗。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出人Ｔ淋巴瘤细胞Ｊｕｒｋａｔ的ＴＣＲ　Ｖβ基因片段,并将其重组入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３。用重组表达载体转染ＳＰ２／０细胞,在ｍＲＮＡ水平上检测其表达。再用ｐｃＤＮＡ３和重组载体分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,收集抗血清,用免疫组化技术检测抗体产生情况。结果：扩增出ＴＣＲ Ｖβ的基因片段,测序结果证实其序列与已发表的一致。并构建出重组表达载体ｐｃＤＮＡ３－ＴＣＲ Ｖβ。该质粒转染到 ＳＰ２／０细胞,可在ｍＲＮＡ水平上检测到其表达。在用ｐｃＤＮＡ３－ＴＣＲＶβ免疫的小鼠抗血清中检测到抗Ｊｕｒｋａｔ细胞 ＴＣＲ Ｖβ的抗体。免疫组化结果表明,该血清不与表达 ＴＣＲγδ的人Ｔ淋巴瘤细胞发生反应,而与转染该基因的ＳＰ２／０细胞产生强阳性反应。正常小鼠血清与ｐｃＤＮＡ３免疫的小鼠血清与Ｊｕｒｋａｔ细胞不产生显色反应。结论：所制备的Ｔ淋巴瘤ＴＣＶβ核酸疫苗能有效地诱导机体产生体液兔疫反应。     

EIA基因对肿瘤细胞放射敏感性的影响

利用外源性基因改变肿瘤原有的放射耐受性使其对放疗敏感,从而为提高肿瘤放射治疗的疗效提供实验依据。方法：利用本实验室构建的含腺病毒（Ａｄ５）早期表达基因ＥＩＡ的ＰＣＤＮＡ３－ＥＩＡ重组质粒转染肺腺癌Ａｎｉｐ－９７３细胞,Ｇ４１８筛选后,经ＰＣＲ,ＲＴ－ＰＣＲ和免疫化学染色鉴定,获得含ＥＩＡ的阳性克隆。将未转染的Ａｎｉｐ－９７３细胞,转染空载体质粒的Ａｎｉｐ－９７３细胞和转染ＥＩＡ的Ａｎｉｐ－９７细胞     

阳离子脂质体——病毒增强质粒复合物在肝细胞癌基因治疗中的应用

目的建立一种简便有效的非病毒基因治疗方法。方法用构建的含人ＩＬ┐２基因的腺相关病毒（ＡＡＶ）增强质粒（ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２）与新型阳离子脂质体（Ｄｏｓｐｅｒ）以适当比例混合形成复合物（Ｄｏｓｐｅｒ┐ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２）。体外转染小鼠肝癌细胞系ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ┐２，评估了人ＩＬ┐２基因表达情况。应用直接瘤体内注射方法评估了此方法介导ＩＬ┐２基因的抗肿瘤作用。结果应用Ｄｏｓｐｅｒ┐ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２复合物体外转染ＭＭ４５Ｔ·Ｌｉ，其ＩＬ┐２表达水平每毫升可达１７５Ｕ／４８小时，最高表达时间在转染后第４天（２２５Ｕ／ｍｌ），第１２天仍可表达３０Ｕ／ｍｌ。瘤体内直接注射Ｄｏｓｐｅｒ┐ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２复合物后，瘤组织内可检出ＩＬ┐２ｍＲＮＡ，治疗组肿瘤生长明显减慢，小鼠生存率（转染后３０天）明显提高（Ｐ＜０．０１）。结论Ｄｏｓｐｅｒ┐ＡＡＶ增强质粒复合物能有效介导ＩＬ┐２基因表达，产生较好的抗瘤效应，此方法简便、更适合于临床应用     

化学诱导剂对培养细胞CytP450IA1基因mRNA水平诱导及肝组织该

化学诱导剂对培养细胞ＣｙｔＰ４５０ＩＡ１基因ｍＲＮＡ水平诱导及肝组织该基因基础表达水平的研究余应年，董海涛，吴健敏（浙江医科大学病理生理教研室及医学分子生物学实验室杭州３１００３１）细胞色素Ｐ４５０ＩＡ１（ＣｙｔＰ４５０ＩＡ１）基因表达可被多环芳烃类...     

p14^ARF对照射后肺癌细胞加速再群体化抑制效应

目的 探讨抑癌蛋白ｐ１４＾ＡＲＦ功能恢复对照射后肺癌细胞加速再群体化的影响。方法以ＡＲＦ基因纯合缺失但表达野生型ｐ５３的人肺腺癌Ａ５４９和Ｈ４６０细胞为靶细胞，应用Ｆｕｇｅｎｅ６对照射后的细胞进行ｐＣｌ－ｎｅｏ－ｐ１４＾ＡＲＦ表达载体基因转染，检测照射前后和转染前后细胞潜在倍增时间（Ｔｐｏｔ）、细胞周期分布及克隆存活率变化。结果 ６ＧｙＸ射线照射后９６ｈ处，Ａ５４９和Ｈ４６０细胞Ｔｐｏｔ分别缩短２     

83—1除草剂及其主要代谢产物的遗传毒性研究

本文以Ａｍｅｓ试验和Ｖ７９细胞的ＨＰＲＴ位点的基因正向突变试验，微核试验及姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）试验比较研究了新农药８３－１除草剂（ＤＣＮＰＡ）及其在哺乳动物体内的主要代谢产的２，４－二氯－６－氨基酚（ＤＣＡＰ）的致突变性和细胞遗传毒性，结果显示：ＤＣＮＰＡ在本研究的所有检测终点，无论加与不加大鼠肝Ｓ９均不能检出阳性反应，而经ＤＣＡＰ染毒的Ｖ７９细胞出现了具有剂量一反应关系的ＳＣＥ和微核率增加     

细胞色素P450 2E1基因多态与肝癌遗传易感性研究

目的：探讨细胞色素Ｐ４５０ ２Ｅ１基因多态与肝癌的关系。方法：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对８４例肝癌患者和１４４例健康对照的细胞色素Ｐ４５０ ２Ｅ１基因ＲｓａⅠ多态进行检测。结果：病例组基因型Ａ频率为７１．４３％,等位基因ｃ１频率为８４．５２％,对照组则分别为５５．５６％和７５．３５％,两组差别均有统计学意义（Ｐ〈０．０５）。其比值比分别为２．００和１．７９,提示具有基因型Ａ或等位基因ｃ１的个体患肝     

转染纤溶酶原激活剂抑制剂－2基因对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响

作者将转染纤溶酶原激活剂抑制剂－２（ＰＡＩ－２）基因的纤维肉瘤细胞克隆和对照细胞铺在同位素标记的３Ｈ－细胞外基质（ＥＣＭ）上，液体闪烁计数法测定释放到培养液中的同位素。并进行裸小鼠皮下接种肿瘤细胞和组织学研究，以了解ＰＡＩ－２在肿瘤细胞侵袭过程中的作用。结果表明ＰＡＩ－２可抑制肿瘤细胞降解３Ｈ－ＥＣＭ能力，抑制率达８６．５％。ＨＥ染色种植瘤切片，光镜观察显示，在实验组瘤组织的周围有加厚的包膜，而对照组瘤组织旁无明显的包膜。包膜是肿瘤细胞侵袭的障碍，因此，重组ＰＡＩ－２可抑制纤维肉瘤细胞的侵袭能力     

转染外源p53基因在荷瘤裸鼠人肠癌细胞中表达的检测

采用直接注射外源ＤＮＡ－脂质体复合物的方法分别在荷瘤裸鼠人肠癌组织中转染外源正义ｐ５３ｃＤＮＡ和反义ｐ５３ｃＤＮＡ的重组表达质粒及非整合型哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９，并以注射等量生理盐水为对照，然后应用链菌素亲生物蛋白－过氧化酶免疫组化法检测肿瘤组织中突变型ｐ５３蛋白的表达。结果表明：体外培养ＳＷ１１１６细胞中约有５０％为突变型ｐ５３蛋白阳性；转染反义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组的裸鼠移植瘤细胞ｐ５３蛋白阳性率为２５％，而注射生理盐水、转染ｐＲＥＰ９及正义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组阳性率分别为６６．７％，７７．８％，６６．７％；前者与后三者之间有显著住差异（Ｐ＜０．０１，Ｘ［２］检验），但各组间肿瘤大小并无显著性差异。据此认为，肿瘤体内直接转染外源反义ｐ５３基因能封闭肠癌ＳＷ１１１６细胞中突变型ｐ５３基因的表达。     

p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的：从正常人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增人的肿瘤抑制基因Ｐ１４＾ＡＲＦ,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从培养的下沉人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增出０．４Ｋｂ的Ｐ１４＾ＡＲＦＣＤＮＡ片段,测序正确后郫具核表达载体ｐｃＤＮＡ３上的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点,命名为ｐｃＤＮＡ３ＡＲＦ。此质粒同脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ＾ＴＭ介导转染肿瘤细胞Ｈｅｐ２、ＫＢ、ＫＢ－ｖ２０     

转染纤溶酶原激活剂抑制剂—2基因对纤维肉瘤细胞侵袭能力的影响

作者将转染纤溶酶原激活剂抑制剂－２（ＰＡＩ－２）基因的纤维肉瘤细胞克隆和对照细胞铺在同位素标记的＾３Ｈ－细胞外基质（ＥＣＭ）上，液体闪烁计数法测定释放到培养液中的同位素。并进行裸小鼠皮下接种肿瘤细胞和组织学研究，以了解ＰＡＩ－２在肿瘤细胞侵袭过程中的作用。结果表明ＰＡＩ－２可抑制肿瘤细胞降解＾３Ｈ－ＥＣＭ能力，抑制率达８６．５％。ＨＥ染色种植瘤切片，光镜观察显示，在实验组瘤组织的周围有加厚的包膜，     

mdm2和p53基因在急性白血病细胞中的表达及意义

目的：探讨人急性髓细胞性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ．ＡＭＬ）细胞ｍｄｍ２及ｐ５３基因蛋白表达水平,相互关系及与临床预后的关系。方法：用免疫组化方法测定ｍｄｍ２及ｐ５３蛋白表达,ＨＰＩＡＳ－１０００高清晰度病理图像细胞测定系统分析结果。结果：７５％的ＡＭＬ患者表达不同程度的ｍｄｍ２蛋白,且在各种分型中均有ｍｄｍ２蛋白过度表达者：１８．７５％的ＡＭＬ患者表达ｐ５３蛋白;在ＡＭ