重组人白细胞介素6对SW872脂肪细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨白细胞介素 6(IL 6)对SW872脂肪细胞增殖及凋亡的影响。方法　体外培养SW872脂肪细胞 ,0 .6mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化 ,化学比色法检测细胞内三酰甘油的总量 ;油红O染色观察细胞内脂肪的聚积 ;MTT法检测不同浓度IL 6对SW872前脂肪细胞增殖活力的影响 ;流式细胞仪分析IL 6对SW872成熟脂肪细胞凋亡的影响。结果　 0 .6mmol/L油酸刺激 72h ,几乎 10 0 %SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞 ,细胞内三酰甘油的含量明显增加 ,油红O染色胞浆内可见丰富的脂滴 ;5 μg/LIL 6对SW872前脂肪细胞的增殖没有影响 ,10～ 5 0 μg/LIL 6明显抑制SW872前脂肪细胞的增殖 ;IL 6对SW872成熟脂肪细胞的凋亡无影响。结论　IL 6能明显抑制SW872前脂肪细胞的增殖 ,其抑制效应呈剂量依赖性 ,表明IL 6可能与肥胖有关 ,高剂量IL 6可降低肥胖的程度。     

Visfatin在油酸诱导的SW872脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用

目的探讨Visfatin在油酸诱导的SW872成熟脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)中的作用。方法体外培养SW872前脂肪细胞,当细胞完全汇合后,加入0.6mmol·L-1油酸诱导分化48h,此时SW872前脂肪细胞被诱导分化为成熟脂肪细胞,以SW872成熟脂肪细胞为研究对象,采用1.0mmol·L-1油酸诱导SW872成熟脂肪细胞产生IR。将其分为正常对照组(成熟SW872脂肪细胞)和IR组(采用1.0mmol·L-1油酸诱导SW872成熟脂肪细胞产生IR)。采用2-脱氧-[3H]-右旋葡萄糖掺入法检测2组SW872成熟脂肪细胞基础状态(基础状态组)、Visfatin和Insulin刺激状态(Visfatin和Insulin刺激组)下的葡萄糖转运能力。结果1.在正常对照组中,Visfatin和Insulin刺激组SW872成熟脂肪细胞葡萄糖转运率显著增加,分别是基础状态组的1.10倍(P<0.01)和1.34倍(P<0.01)。2.在IR组中,SW872成熟脂肪细胞的葡萄糖转运率均显著下降。与正常对照组比较,Visfatin刺激组和基础状态组的葡萄糖转运率分别减少12.30%(P<0.01)和9.73%(P<0.0...     

内脏脂肪素对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的影响

目的 观察不同水平重组人内脏脂肪素(visfatin)对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的影响,探讨visfatin在胰岛素抵抗形成中的意义.方法 体外培养SW872前脂肪细胞,当细胞完全汇合后,加入0.6 mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化48 h,光学显微镜下观察SW872前脂肪细胞和成熟脂肪细胞形态的变化.以诱导分化成熟的SW872脂肪细胞为研究对象,利用2-脱氧-[3H]-右旋葡萄糖掺入法测定SW872成熟脂肪细胞的葡萄糖转运能力.结果 油酸诱导分化24 h SW872前脂肪细胞胞体由小变大,形态由梭形变为圆形,胞浆中出现细小脂滴;诱导48 h细胞体积进一步变大,细胞已完全分化,胞浆中脂滴明显增多;诱导分化72 h细胞呈戒环状,胞浆脂滴含量更多.用5、10 nmol/L visfatin作用24 h,对基础状态及胰岛素诱导的SW872成熟脂肪细胞葡萄糖转运无影响;25、50、100、200 nmol/L visfatin作用24 h,使基础状态葡萄糖转运率分别增加2.90%、7.70%、12.01%、12.29%(P<0.05,0.01);胰岛素诱导的SW872脂肪细胞葡萄糖转运率分别增加3.40%、16.37%、30.30%、30.83%(P<0.05,0.01).100 nmol/L visfatin刺激时,SW872脂肪细胞的基础状态和胰岛素诱导的葡萄糖转运率趋近于高峰,与50 nmol/L和对照组0 nmol/L比较均有统计学差异(Pa<0.01);200 nmol/L visfatin刺激时,与100 nmol/L visfatin刺激时的基础状态和胰岛素诱导的葡萄糖转运率比较无统计学差异(Pa>0.05).结论 visfatin可促进SW872脂肪细胞的葡萄糖转运,且以100 nmol/L的质量浓度刺激时,葡萄糖转运率最趋近高峰.     

油酸诱导SW872前脂肪细胞分化过程中脂联素受体的表达

目的探讨SW872前脂肪细胞分化过程中脂联素受体基因表达的变化。方法体外培养,0.6 mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化,油红O染色观察细胞内脂肪的聚积;RT-PCR方法检测不同分化时间点脂联素受体(AdipoR)1 mRNA及AdipoR 2 mRNA水平。结果0.6 mmol/L油酸诱导分化72 h,能成功将SW872前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞;SW872前脂肪细胞表达两种脂联素受体,诱导分化刺激48 h,AdipoR 1 mRNA水平是诱导分化前的2.16倍,AdipoR 2 mRNA水平是诱导分化前的2.34倍;诱导分化72 h,AdipoR 1 mRNA水平是诱导分化前的2.54倍,AdipoR 2 mRNA水平是诱导分化前的4.09倍。结论SW872脂肪细胞表达脂联素两种受体增殖,且两种AdipoR的基因表达呈分化相关性。     

油酸诱导SW872前脂肪细胞分化的作用

目的探讨油酸对SW872前脂肪细胞的诱导分化作用,为体外研究脂肪细胞功能及其相关疾病建立细胞模型。方法体外培养,0.6 mmol/L油酸诱导SW872前脂肪细胞分化,光学显微镜观察SW872前脂肪细胞形态的变化,油红O染色观察胞浆中脂滴的聚集,化学比色法测定细胞中三酰甘油(TG)总量,RT-PCR方法检测不同分化时间点转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2(PPAR-γ2)与CAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBP-α)mRNA的时序性表达。结果1.油酸诱导分化24 h时SW872前脂肪细胞胞体由小变大,形态由梭形变为圆形,胞浆中出现细小脂滴;诱导48 h时细胞体积进一步变大,几乎所有细胞形态变圆,胞浆中脂滴明显增多;诱导分化72 h时细胞呈戒环状,胞浆脂滴含量更多,油红O染色胞浆中可见丰富的脂肪染色。2.油酸诱导分化24 h时,细胞中TG总量增多;诱导分化48 h时TG总量是分化前8.5倍;诱导分化72 h时TG总量是分化前14倍(P<0.01)。3.油酸诱导分化24 h时PPAR-γ2与C/EBP-αmRNA表达轻度升高;诱导分化48 h时PPAR-γ2与C/EBP-αmRNA表达明显升高,分别是诱导分化前的10.23倍和12.91倍;诱导分化72 h时PPAR-γ2与C/EBP-αmRNA表达进一步升高,分别是诱导分化前的14.15倍和14.82倍(P均<0.01)。结论油酸刺激72 h能促进SW872前脂肪细胞中TG的合成与积聚,可诱导SW872前脂肪细胞中转录因子PPAR-γ2与C/EBP-αmRNA时序性表达,成功诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。     

重组人白细胞介素-6对SW872脂肪细胞葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的影响及其机制

目的观察重组人白细胞介素-6(rhIL-6)对SW872脂肪细胞葡萄糖代谢和胰岛素敏感性的影响,观察JAK2抑制剂AG490及PI3K抑制剂Wortmannin是否影响rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的抑制作用。方法体外培养SW872脂肪细胞,应用rhIL-6干预,采用3H-2-脱氧-D葡萄糖摄入法,测定葡萄糖转运率;流式细胞术检测细胞膜葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)水平。结果1.用1μg/L rhIL-6作用24 h,对基础状态及胰岛素刺激下,SW872脂肪细胞葡萄糖转运无影响;5、10、20、50μg/L rhIL-6作用24 h使基础状态及胰岛素刺激下SW872脂肪细胞葡萄糖转运率分别下降16%vs20%、28%vs36%、39%vs50%、47%vs57%。2.AG490预处理,使rhIL-6对SW872脂肪细胞在基础状态及胰岛素刺激下葡萄糖转运的抑制作用分别降低20%和33%;Wortmannin预处理,增加基础状态及胰岛素刺激下rhIL-6对SW872脂肪细胞葡萄糖转运的抑制作用。3.用20μg/L rhIL-6作用24 h,细胞膜GLUT4蛋白水平降低。结论rhIL-6通过降低脂肪细胞膜GLUT4的蛋白水平而降低脂肪细胞葡萄糖的转运,从而诱导脂肪细胞胰岛素抵抗。     

重组人生长激素对SW872脂肪细胞脂联素及其受体基因表达和蛋白分泌的影响

目的 观察重组人生长激素（rhGH）对脂肪细胞脂联素及其受体mRNA表达及蛋白分泌的影响，探讨GH诱导胰岛素抵抗的机制。方法体外培养、油酸诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，加入rhGH干预；RT-PCR方法检测脂联素、脂联素受体1和2（AdipoR1，2）mRNA水平，ELISA方法检测细胞培养上清中脂联素蛋白含量。结果rhGH100～1000μg／L作用24h不同程度的降低SW872脂肪细胞脂联素及AdipoR1 mRNA的表达及脂联素的分泌，且rhGH浓度越高抑制作用越强；500μg／L rhGH作用4h，对脂联素及AdipoR1基因表达及脂联素的分泌无影响；随作用时间的延长，rhGH抑制脂联素及AdipoR1 mRNA的表达和脂联素的分泌；rhGH对AdipoR2基因表达无影响。结论rhGH以剂量和时间相关的方式抑制SW872脂肪细胞脂联素及AdipoR1 mRNA的表达和脂联素蛋白的分泌。     

活化后血小板对小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及凋亡的影响

目的初步探讨活化后血小板(PLT)对小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)及其凋亡的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用10mg/LLPS+20U/mlIFN-γ激活RAW264.7细胞,分别用1×104/ml、1×107/ml活化后PLT刺激被激活的RAW264.7细胞,TNF-αElisa试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α水平,流式细胞术分析细胞凋亡情况。结果经活化后PLT刺激24h激活的RAW264.7细胞培养上清中TNF-α含量明显增加;活化后PLT刺激6d,凋亡明显被抑制。结论活化后PLT可促进小鼠巨噬细胞分泌TNF并抑制其凋亡。     

PRNP基因在3T3-L1脂肪前体细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子-α对其调节作用

目的 探讨3T3-L1脂肪前体细胞诱导分化过程中PRNP基因表达水平的变化及TNF-α对其调节作用.方法 体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导3T3-L1细胞分化成熟,并收集分化前、分化0～10 d各时段细胞,采用RT-PCR技术检测诱导分化不同时段3T3-L1细胞PRNP基因表达水平;同时在成功诱导3T3-L1细胞分化成熟的基础上,应用不同水平TNF-α(0.1、1.0、10.0 μg/L)干预分化后的成熟脂肪细胞(第10天),收集TNF-α刺激前(0 h)及刺激后0.5、2.0、6.0、12.0、24.0 h的脂肪细胞,通过RT-PCR测定TNF-α干预前后不同时间点脂肪细胞中PRNP基因表达水平.采用Excel软件进行统计学分析.结果 1.PRNP基因低表达于3T3-L1脂肪前体细胞中,随细胞分化成熟该基因表达水平逐渐上调,至分化第10天其表达水平最高.PRNP基因表达水平除在诱导分化前(第-1天)至第4天、第2～5天、第6～10天时段内无显著性差异外(Pa＞0.05),其余各时段间表达水平均有显著性差异(Pa＜0.05);2.在分化前的3T3-L1脂肪细胞和成熟脂肪细胞中,不同水平TNF-α(0.1、1.0、10.0 μg/L)均能在短时间内明显抑制PRNP基因mRNA的表达,且呈时间依赖性.结论 PRNP基因可能参与3T3-L1脂肪细胞分化及脂质积聚过程;不同水平重组TNF-α对成熟脂肪细胞的PRNP基因表达具有抑制作用,其抑制效应总体趋势上呈时间依赖性.     

重组人白细胞介素-6对脂肪细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶1B、白细胞介素-6及抵抗素基因表达的影响

目的观察重组人白细胞介素-6(rhIL-6)对SW872脂肪细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、抵抗素及IL-6基因表达的影响,探讨rhIL-6对脂肪细胞分泌功能的调节作用。方法体外培养,油酸诱导SW872前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,在培养液中加入不同水平rhIL-6(0、1、5、10、20、50μg/L)作用24 h,加入20μg/L rhIL-6后分别作用不同时间(0、4、8、12、24 h)。收集细胞提取总RNA,采用半定量反转录酶聚合酶链反应方法检测SW872脂肪细胞PTP1B、抵抗素、IL-6 mRNA水平。结果rhIL-6 1μg/L作用24 h,对SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达无影响;随着rhIL-6水平的增加,SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达水平逐渐增加,但以20μg/L rhIL-6的作用最强(F=233.9 P<0.01);20μg/L rhIL-6作用4 h即可促进SW872脂肪细胞IL-6 mRNA的表达,随着作用时间的延长,其促进作用更加明显(F=247.8 P<0.01)。1μg/L rhIL-6作用24 h,对SW872脂肪细胞PTP1B mRNA的表达无影响;5μg/L rhIL-6即可促进SW872脂肪细胞PTP1B mRNA表达,50μg/L rhIL-6作用24 h,对PTP1B mRNA的表达促进作用更明显(F=515.58 P<0.01);20μg/L rhIL-6作用4 h对脂肪细胞PTP1B mRNA的表达无影响,作用8 h即可促进PTP1BmRNA的表达,随着作用时间的延长其作用更加明显(F=498.62 P<0.01)。不同水平、不同作用时间下,rhIL-6对SW872脂肪细胞抵抗素mRNA的表达无明显影响(F=9.6,10.5 Pa>0.05)。结论rhIL-6以剂量和时间相关的方式促进SW872脂肪细胞PTP1B及IL-6 mRNA表达,对抵抗素mRNA的表达无影响。     

Range of Motion of the Joints of the Lower Extremities of Newborns

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早产儿视网膜病的危险因素分析及随访调查

研究早产儿视网膜病(retinopathy of prematurity,ROP)的发生率、高危因素、治疗与随访情况。方法对2005年7月-2007年12月温州医学院附属第一医院NICU收治的符合ROP筛查标准的早产儿,于生后2周开始由资深眼科医师开始行间接眼底镜检查眼底,并进行随访。结果434例早产儿中ROP的发生率为5.5%(24/434例),24例ROP中Ⅰ期19例,Ⅱ期3例,Ⅲ期2例。Ⅲ期阈值病变者行激光光凝治疗,全部患儿均恢复正常。对434例早产儿行单因素分析得出,胎龄、出生体重、住院时间、吸氧、吸氧浓度、吸氧时间、呼吸暂停、新生儿肺透明膜病(RDS)、肺表面活性剂(PS)的应用、机械通气、输血、光疗时间、感染与ROP的发生有相关性(P<0.05)。Logistic回归分析显示胎龄、出生体重、胎数、吸氧时间、光疗时间、代谢性酸中毒、母亲妊高症、颅内出血是影响ROP发生的主要因素。结论早产是ROP的根本原因,防治各种并发症、合理的氧疗是预防ROP的关键。建立完善有效的ROP筛查制度,早期发现、早期治疗ROP,可改善ROP的预后。