Tranilast抑制TGF-β2对人眼小梁细胞胶原合成的促进作用

目的 :观察tranilast对转化生长因子 -β2 (Transforminggwowthfactor -β2 ,TGF -β2 )促进体外培养人眼小梁细胞胶原合成作用的影响。方法 :采用3 H -脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术观察 0 μg·ml-1(对照组 )、 12 5 μg·ml-1、 2 5 μg·ml-1和 5 0 μg·ml-1tranilast对3 2ng·ml-1TGF -β2 促进体外培养人眼小梁细胞胶原合成作用的影响。结果 :12 5 μg·ml-1(q′ =4 2 6,P <0 0 5 )tranilast处理组3 H -脯氨酸掺入量为 62 0 3 3± 80 46,与对照组的 817 3 7± 12 4 2 1比较有显著差异 ;2 5 μg·ml-1(q′ =4 81,P <0 0 1)和 5 0 μg·ml-1(q′ =8 62 ,P <0 0 1)tranilast处理组3 H -脯氨酸掺入量为5 94 5 8± 88 13、 418 64± 67 90 ,与对照组比较有极显著差异 ;同时 ,3 H -脯氨酸掺入量随tranilast浓度增加而减少 ,呈现明显的量效关系。结论 :Tranilast明显抑制TGF -β2 对体外培养人眼小梁细胞胶原合成的促进作用。利用tranilast防治原发开角型青光眼的可能性值得作进一步研究。     

转化生长因子β1对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响

目的观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对培养人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原的影响.方法在成功地培养人眼小粱细胞的基础上,应用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)及免疫组织化学技术,分别观察1ng/ml TGF-β1作用于小梁细胞后培养上清液中及细胞铺片上Ⅳ型胶原的含量.结果ELISA法TGF-β1作用第一个4天,实验组Ⅳ型胶原的含量为187.50±29.01pg/ml(x±s),对照组为93.75±20.56pg/ml,两者间的差异有统计学意义.TGF-β1作用第二个4天,实验组为128.75±52.02 pg/ml,对照组为91.25±21.36pg/ml,差异无统计学意义.Ⅳ型胶原的含量在对照组之间及实验组之间也无统计学差异.免疫组化法TGF-β1作用12天,实验组铺片与对照组相比Ⅳ型胶原的阳性着色增强.结论TGF-β1可以促进培养的人眼小梁细胞分泌Ⅳ型胶原,它可能是原发性开角型青光眼患者小梁细胞外基质堆积的原因之一.眼科学报2000;16217～219.     

人眼小梁细胞体外培养与细胞鉴定

建立人眼小梁细胞体外培养方法和确定该细胞的鉴定要点。方法：小梁网和我巩膜组织来源于除眼部疾患以外各种原因死亡的６岁以下儿童，在２４小时内取材的３４人６８只正常眼球。组织块原代培养和细胞传代培养。用光镜和电镜观察培养细胞，用免疫组织细胞化学Ｓ－Ｐ法染色培养细胞的细胞外基质包括纤粘连蛋白，层粘连蛋白和Ⅳ型胶原。     

维拉帕米对牛眼小梁细胞合成细胞外基质的影响

目的 探讨维拉帕米(Verapamil)对牛眼小梁细胞(BTMC)合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。方法 采用免疫组化结合计算机图像分析和放免技术检测等于和低于0.01 mg/ml维拉帕米对BTMC合成胶原、纤维连接蛋白、透明质酸的影响。结果 0.001、0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白的合成(P<0.05),而促进透明质酸的合成(P<0.05)。0.005、0.01mg/ml维拉帕米可质量浓度依赖性抑制Ⅳ型胶原(P<0.05),而0.001mg/ml维拉帕米无此作用(P>0.05)。结论 维拉帕米可通过抑制细胞外基质在小梁网异常沉积,减少房水外流阻力,有望在发病学环节上治疗原发性开角型青光眼。     

体外培养人眼小梁细胞吞噬乳胶微粒的研究

原发性开角型青光眼及某些继发性开角型青光眼的病理改变与覆盖在小梁柱表面的小梁细胞功能改变有关［１］;小梁细胞具有增殖、移行、吞噬及合成分泌细胞外基质、激素或酶的功能。其中小梁细胞的吞噬功能在清除异物、保持房水滤道通畅方面具有重要作用［２,３］。我们采用体外培养的人眼小梁细胞,观察其吞噬乳胶微粒的过程。一、资料和方法１小梁细胞原代和传代培养：取各种原因死亡８ｈ的新生儿眼球,按王林等［４］报道的方法进行组织块培养。无菌显微镜下操作,取出小梁组织,剪成１ｍｍ×２ｍｍ组织块,置入培养瓶内,待贴壁后加入…     

人眼小梁细胞在滤膜上的生长及其水流传导功能研究

目的探讨人眼小梁细胞（ｈｕｍａｎｔｒａｂｅｃｕｌａｒｃｅｌ,ＨＴＣ）在滤膜支持物上生长的可能性,为研究小梁细胞在体内的滤过功能提供可靠的实验模型。方法将传３代ＨＴＣ接种于尼龙滤膜上,在滤过模型中测定不同灌注液流经滤膜的速率Ｌｐ值［μｌ／（ｍｉｎ·ｍｍＨｇ·ｃｍ２）］。结果ＨＴＣ可连续生长于滤膜上,正常ＨＴＣ的Ｌｐ值为１０．４５μｌ／（ｍｉｎ·ｍｍＨｇ·ｃｍ２）,用含肾上腺素及地塞米松的灌注液分别进行灌注时,相同生长时间的ＨＴＣ的Ｌｐ值明显高于正常组,但经过地塞米松作用一段时间后的ＨＴＣ滤过功能明显下降。结论（１）ＨＴＣ的滤过模型可为研究体内ＨＴＣ的水流传导功能和药物作用提供良好的信息;（２）肾上腺素可明显改善ＨＴＣ的滤过功能,地塞米松在作用的早期可促进ＨＴＣ对灌注液的渗透,但随着作用时间的延长将逐渐抑制ＨＴＣ的滤过功能。     

小梁细胞收缩特性研究进展

小梁细胞在原发性开角型青光眼发病机制的研究中日益受到重视，但其具体机制尚未明确。越来越多的资料证实小梁细胞具有平滑肌样收缩特性，主动参与房水流出及眼内压的调节。本就其收缩特性的研究进展作一综述，以期为探索青光眼新的有效治疗方法提供参考。     

氯离子通道2对压力应激状态下人眼小梁细胞功能的影响

目的 探讨分布于小梁细胞上的氯离子通道2(ClC-2)与小梁细胞数量及功能之间的关系,以进一步了解原发性开角型青光眼的形成机制.方法 首先分别利用反转录聚合酶链反应、台盼蓝染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测不同压力,以及不同压力作用时间下小梁细胞C1C-2 mRNA表达、小梁细胞活力及凋亡情况的变化;再利用RNAi技术抑制CIC-2 mRNA的表达,观察一定压力及作用时间下小梁细胞活力、凋亡情况的变化.结果 与0 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)、20 mm Hg相比,30 mm Hg及40mm Hg时,随压力作用时间的增加,CIC-2 mRNA的表达明显增高,差异有统计学意义;表达最高点为24 h;60mm Hg时,各时间点下C1C-2 mRNA的表达较30 mm Hg、40 mm Hg时明显降低,差异有统计学意义,且随时间延长,C1C-2 mRNA的表达逐渐下降.当40 mm Hg及60 mm Hg的压力持续作用一段时间后,小梁细胞活力明显降低,凋亡指数明显增加,差异有统计学意义.抑制C1C-2 mRNA表达后,压力应激状态下小梁细胞活力下降及凋亡增加更显著,差异有统计学意义.结论 压力应激条件下,C1C-2表达的变化与小梁细胞的活力及凋亡有一定的相关性,提示C1C-2对小梁细胞存在保护作用.(中国眼耳鼻喉科杂志,2012,12:26-29)     

核仁组成区嗜银蛋白染色在人眼小梁细胞生长研究中的应用

确定在人眼小梁细胞中进行核仁组成区嗜银蛋白染色方法的可行性。方法利用改良的银染方法对不同生长时期的传３代人眼小梁细胞进行ＡｇＮＯＲｓ染色,并在显微镜下观察银染颗粒。结果ＡｇＮＯＲｓ染色法可以清晰地显示出细胞核中ＡｇＮＯＲｓ颗粒的数量、大小及分布状况。     

Freeze-fracture examination of cultured human trabecular meshwork cells: effect of dexamethasone

Glucocorticoids can alter the trabecular meshwork in the aqueous outflow pathway of the eye leading to the development of ocular hypertension and glaucoma. Previous studies have shown biochemical and ultrastructural changes in cultured human trabecular meshwork (TM) cells treated with dexamethasone (DEX). In order to assess how the membranes of these treated cells were responding to this glucocorticoid, we compared DEX-treated and control TM cells using the freeze-fracture technique. Human TM cells were grown to confluence on either Millipore HA filter inserts or glass coverslips and then treated for 14 days with or without 0.1 microM dexamethasone. The cell cultures were then aldehyde fixed and prepared for electron microscopy and freeze-fracture. Junctional complexes in control and DEX-treated cells consisted of gap junctions of various shapes and sizes. No tight junctional complexes were apparent in either control or DEX-treated cells. The majority of vesicle fusion sites on the control cells appeared to be randomly distributed and were few in number. In contrast, DEX-treated cells had a significantly greater density of fusion sites, and the majority of the vesicles were aligned into linear arrays. These findings support our previous findings of increased secretory activity in DEX-treated cultured human TM cells. These in vitro model system data appear to correlate with previous in vivo biochemical, ultrastructural and freeze-fracture data.     

Tranilast对TGF-β2抑制人眼小梁细胞生长作用的影响

目的 :观察tranilast对转化生长因子 β2 (transform inggrowthfactor β2 ,TGF β2 )抑制体外培养人眼小梁细胞生长作用的影响。方法 :采用MTT法观察 0 μg/ml、12 .5 μg/ml、2 5μg/ml和 5 0 μg/mltranilast对 3.2ng/mlTGF β2 抑制体外培养人眼小梁细胞生长作用的影响。结果 :2 5 μg/ml和 5 0 μg/ml收稿日期 :2 0 0 2 -0 3 -2 7;修回日期 :2 0 0 2 -0 4-15基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (3 8970 75 8)。作者简介 :曹阳 (1972 -) ,男 ,湖北武汉人 ,医学博士 ,主治医师 ,研究方向 :青光眼。通信作者 :曹阳 (E -mail:ytsao @sohu .com)。tranilast处理组人眼小梁细胞的光密度A值分别为 (1.136±0 .135 )和 (1.2 4 6± 0 .15 2 ) ,与对照组的 (0 .896± 0 .190 )比较 ,差异分别有显著性 (q =3.2 3,P <0 .0 5 )和非常显著性 (q =4 .70 ,P <0 .0 1)。结论 :Tranilast可明显拮抗TGF β2 对体外培养人眼小梁细胞抑制生长的作用。利用Tranilast在发病学环节防治原发性开角型青光眼的可能性 ,值得进一步研究     

小梁网干细胞的归巢及其在小梁创伤愈合中的作用

目的 研究胶原蛋白在小梁网干细胞（trabecular meshwork stem cells，TMSC）归巢中的作用以及小梁网（trabecular meshwork，TM）细胞和TMSC在创伤愈合中的相互作用。  设计 实验研究。研究对象 人原代TM细胞和TMSC。方法 分离、培养和传代人TM细胞和TMSC，通过定量RT-PCR和地塞米松诱导方法明确细胞类型；通过细胞贴附实验评价TM细胞及胶原蛋白对TMSC的亲和力；利用划痕损伤实验和时差显微镜观察TMSC分布及其与TM的相互作用。主要指标  TMSC和TM细胞的鉴定、TMSC穿膜数量和划痕损伤实验中TM细胞的迁移状态。 结果TMSC高表达OCT4而TM细胞高表达CHI3L1和MYOC，地塞米松刺激后TM细胞MYOC的表达显著增加。TMSC在含有TM细胞、胶原蛋白、TM细胞＋胶原蛋白的培养皿中的穿膜数分别为（13.1±5.3）个/高倍视野、（22.6±10.1）个/高倍视野、（4.8±2.2）个/高倍视野，均明显高于在单纯细胞培养皿中的穿膜数（3.7±0.5）个/高倍视野（P=0.0009，<0.0001，<0.001）。用AMD3100抑制TMSC中CXCR4的表达后，TMSC在各种状态的迁移数量差异消失。在TM细胞划痕损伤模型中加入TMSC可促进TM细胞的分化和迁移。结论  TMSC可诱导小梁网细胞分裂向受损区域迁移，从而促进组织损伤修复。胶原蛋白在TMSC归巢过程中发挥重要作用。     

Inhibition of latrunculin-A on dexamethasone-induced fibronectin production in cultured human trabecular meshwork cells

AIM: To determine the effects of a low dose latrunculin (LAT)-A on dexamethasone (Dex)-induced upregulation of extracellular matrix proteins fibronectin (FN) in cultured human trabecular meshwork (HTM) cells. METHODS: HTM cells were cultured to confluent and incubated with 0.4μmol/L Dex and/or 0.05μmol/L LAT-A. FN expression in HTM cells was evaluated by Western blot and immunofluorescence microscopy. RESULTS: Dex up-regulated FN production in HTM cells, failed to do so when co-incubated with LAT-A. LAT-A decreased production of FN in cultured HTM cells. CONCLUSION: This study indicated that LAT-A may modulate the expression of fibronectin in trabecular meshwork to achieve treatment for steroids and other types of glaucoma. It has an important prospect as an intraocular pressure- lowering drug.     

尿激酶对组织培养人眼小梁细胞的影响

为检验尿激酶在临床应用时对小梁细胞有无不良影响。本研究应用组织培养人眼小梁细胞，观察不同浓度尿激酶对细胞形态的影响，并测定其对细胞DNA合成时氚（标胸腺嘧啶核着（3H-TdR）掺入的量，来判断药物对细胞增殖功能的影响。结果示5000u／ml浓度作用6小时细胞即出现胞突回缩、胞体皱缩等变化，至48小时细胞死亡；5000和500u／ml浓度均显著抑制DNA合成。提示在应用尿激酶冲洗前房积血时，一定要冲洗干净残留药物，以免对小梁细胞造成损害。     

选择性牛眼上皮样小梁细胞的体外培养

目的选择性行牛眼上皮样小梁细胞的体外培养，为进一步研究原发性开角型青光眼提供实验材料。方法利用组织块法进行小梁细胞的原代培养，之后利用机械划除法、酶消化法、反复贴壁法，对牛眼上皮样小梁细胞进行选择性培养和传代。结果成功选择性培养出形态、性状良好的牛眼上皮样小梁细胞。结论选择性牛眼上皮样小梁细胞的体外培养所获细胞形态单一，可以用此种方法进行牛小梁细胞的体外培养并为实验应用做好准备。     

消化法牛眼小梁细胞的体外培养

目的 探讨用消化培养法体外培养牛眼小梁细胞，为进一步研究原发性开角型青光眼(POAG)提供实验材料。方法 0．25％胰蛋白酶、0．3％胶原酶等量混合行牛眼小梁细胞的原代培养和传代实验。结果 成功培养出性状良好的牛眼小梁细胞。结论 消化法培养牛眼小梁细胞可获得生长形态及特征稳定的小梁细胞，是值得提倡的培养方法。     

地塞米松对牛眼小梁水通道蛋白表达的影响

目的观察地塞米松对牛眼小梁细胞的损伤使其水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP-1)表达的影响。方法体外培养牛眼小梁细胞,取第4代细胞鉴定后用于实验。应用浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天,通过WesternBlot方法检测培养的牛眼小梁细胞在不同浓度地塞米松作用下AQP-1的蛋白表达水平。结果牛眼小梁细胞可见AQP-1蛋白条带表达,未经地塞米松作用的AQP-1蛋白条带表达灰度值为102.87±11.73。在浓度为5,25,50,250μg/L地塞米松的培养液培养7天后AQP-1蛋白条带表达灰度值分别为111.64±13.32,115.31±9.41,121.39±9.81,129.42±13.52。当地塞米松浓度≥25μg/L时,AQP-1表达出现抑制作用(P<0.05)。结论地塞米松使培养的牛眼小梁细胞AQP-1的表达减少,这可能是皮质类固醇性青光眼房水流出阻力增加的原因之一。     

内皮素-1对体外培养人小梁网细胞纤维连接蛋白及Ⅰ型胶原表达的影响

目的观察内皮素-1（ET-1）对人小梁网细胞（TMCs）细胞外基质纤维连接蛋白（FN）、Ⅰ型胶原（COL Ⅰ）的影响。方法取死亡24h内尸眼小梁网组织,行TMCs原代和传代培养,并用FN、层黏连蛋白（LN）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）和Ⅷ因子相关抗原（FⅧRAg）鉴定为人TMCs后,取传3代的人TMCs,给予不同浓度ET-1（10^-9、10^-8、10^-7mol／L）孵育72h后,免疫荧光和Western blot观察ET-1对TMCs中FN、COLⅠ表达的影响;然后取传3代的人TMCs,分别给予10^-7mol／L ET-1、10^-7mol／L ET-1＋10^-7mol／L ETA受体拈抗剂、10^-mol／L ET-1＋10^7mol／L ETB受体拈抗剂后孵育72h,Western blot观察ET受体拮抗剂对FN、COL Ⅰ表达的影响。结果研究受到伦理委员会的批准,取材前征得供体家属的知情同意。培养的细胞形态多样,含少许色素颗粒,FN、LN、NSE染色均呈阳性反应,FⅧRAg呈阴性反应。人TMCs与10^-9～10^-7mol／L ET-1共孵育后FN表达上调（F=18．41,P〈0．05）;与10^-8mol／L、10^-7mol／L ET-1共孵育后COLⅠ表达上调（F=39．81,P〈0．05）,并呈浓度依赖性,10^-7mol／L时作用最明显;给予ETA受体拮抗剂后,与ET-1组相比,FN、COLⅠ的表达均降低（qFN=7．213,P〈0．05;qCOLⅠ=6．187,P〈0．05）,但给予ETB受体拮抗剂后,FN、COLⅠ的表达均无明显变化。结论ET-1能够促进体外培养的人TMCs中FN、COLⅠ的表达,其机制可能是通过激动ETA受体而非ETB受体发挥作用的。     

小梁细胞表达的miRNA研究新进展

ｍｉＲＮＡ是一种长约２２个核苷酸的非编码蛋白质的单链小ＲＮＡ,其对基因的调控主要是在转录后和翻译水平来调节基因表达。目前发现与眼部相关的ｍｉＲＮＡ已达上百种,有不少研究旨在探索ｍｉＲＮＡ在人小梁细胞上的表达及其与靶基因之间的调控机制,为进一步阐述青光眼的发病机制及其诊断、治疗提供更好的理论依据。近年来,有关ｍｉＲＮＡ与眼部组织发育、眼部疾病关系的探讨已成为眼科领域研究热点之一。本文就小梁细胞表达的ｍｉＲＮＡ研究最新进展作一综述。