miR-195靶向调控CHEK1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭的作用

目的研究miR-195靶向调控细胞周期检测点激酶1(CHEK1)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。方法选取非小细胞肺癌A549、H1299、H197细胞株为研究对象,分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195的表达水平; MTT检测转染miR-195对肿瘤细胞分裂增殖能力的影响; Transwell侵袭实验分析miR-195对细胞侵袭能力的作用;细胞划痕实验检测miR-195对细胞迁移能力的作用;流式细胞仪检测并评价转染miR-195对肿瘤细胞分裂周期的影响; Western blot探究miR-195对肿瘤细胞CHEK1表达的调节;采用Spearman相关分析法分析miR-195及CHEK1表达的相关性。结果 MTT实验表明高表达miR-195可明显抑制肺癌A549、H1299、H1975细胞的体外增殖能力; Transwell侵袭实验结果提示转染miR-195可导致肺癌A549、H1299、H1975细胞侵袭能力明显降低;流式细胞术结果表明,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞系的G1和G2期细胞增加,S期细胞减少;划痕实验结果表明,转染miR-195可以抑制细胞的迁移能力;Western blot结果显示,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞中CHEK1蛋白水平显著降低,上述差异均具有统计学意义(P 0. 05)。Spearman相关分析显示细胞miR-195 mRNA水平与CHEK1蛋白含量呈负相关(r=-0. 464 8,P=0. 00)。结论miR-195可靶向调控CHEK1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭。     

尿激酶受体反义核糖核酸抑制肺癌细胞的侵袭转移

目的用反义核糖核酸(RNA)封闭尿激酶受体的表达,抑制人肺癌细胞株95D的侵袭转移能力,验证反义RNA技术在抗肿瘤中的作用.方法将尿激酶受体(uPAR)反义核糖核酸表达质粒转染具有高度侵袭转移能力的人肺癌细胞株95D,利用改良Bovden小室分析转染细胞的体外侵袭能力,并将转染细胞接种裸小鼠以观察其体内转移能力.结果G418筛选后,鉴定出2个表达uPAR反义RNA细胞克隆,uPAR蛋白质水平相应降低.表达uPAR反义RNA的细胞克隆的体外侵袭能力及在裸小鼠体内的肺转移能力较亲本细胞和空载体对照细胞均有显著性降低(P＜0.05).结论抑制尿激酶受体的表达,能够有效抑制肺癌的侵袭转移,反义RNA技术在抗肿瘤治疗中有良好的应用前景.     

Effect of Ezrin overexpression on pancreatic cancer cell line Panc-1

目的 探讨Ezrin过表达对胰腺癌细胞系Panc-1生物学行为的影响.方法 用过表达载体pcb6-Ezrin稳定转染Panc-1细胞,并用流式细胞仪检测细胞周期,CCK-8法检测细胞生长曲线,扫描电镜观察细胞表面形态及表面突起的变化,用未包被及包被Matrigel胶的Transwell小室分别检测细胞的运动和侵袭能力,并用免疫印迹法检测信号相关蛋白Erk1/2的变化.结果 过表达Ezrin后其蛋白的表达明显升高,Panc-1细胞表面的细胞突起、微绒毛数量明显增加,运动及侵袭能力也明显增加,但对细胞的体外增殖和细胞周期无明显的影响.Ezrin的过表达能够激活Erk1/2的表达.结论 Ezrin蛋白对胰腺癌细胞的细胞突起、表面微绒毛的形成、细胞骨架及细胞的运动和侵袭发挥着重要的作用.因此,Ezrin可能在胰腺癌的进展中发挥着重要的作用,Erk1/2信号转导途径在这一过程中发挥着重要的作用.     

埃兹蛋白(Ezrin)在肺癌发生发展中的作用

Ezrin是埃兹蛋白、 根蛋白和膜突蛋白(Ezrin-Radixin-Moesin,ERM)家族中的一员,参与细胞增殖、 迁移、 黏附、 侵袭,并影响细胞周期和细胞凋亡,在肺癌中高表达,与肺癌发生发展有重要相关性.Ezrin可以作为肺癌诊断和治疗的生物标志物.以Ezrin作为特异性靶点,可以作为肺癌治疗的新方案.     

肺癌细胞中p120-catenin的基因缺失促进肺癌细胞的侵袭和转移能力

目的探讨肺癌细胞中p120-catenin(p120ctn)在非小细胞肺癌侵袭、转移中的作用及其可能的机制。方法应用siRNA方法干扰肺癌细胞系BE1,SPC,LTE中p120ctn的表达后,应用Westernblot及RT-PCR方法检测E-cadherin、β-catenin蛋白及mRNA表达情况的变化;应用流式细胞术及Transwell实验检测肺癌细胞增殖、侵袭和转移能力变化;应用Pull-down方法检测小GTP酶活性的变化;应用体内侵袭实验检测肿瘤形成情况。结果 p120ctn表达下调明显地减弱E-cadherin和β-catenin的蛋白表达,同时,还可以下调β-catenin的mRNA表达。p120ctn表达下调还能使Cdc42和Rac1活性增高,RhoA的活性降低,并且促进肺癌细胞的增殖、侵袭和转移。将稳定转染了p120siRNA和转染空质粒的细胞克隆分别移植至裸鼠皮下,发现整合了p120siRNA的荷瘤鼠的肿瘤生长迅速,侵袭和转移能力增强。结论 p120-catenin的缺失可促进肺癌细胞的侵袭和转移能力,其机制可能通过下调E-cadherin和β-catenin的表达从而降低细胞间粘附,以及激活Cdc42/Rac1、失活RhoA来实现。     

非小细胞肺癌中Ezrin和CD44v6的表达及意义

目的 探讨非小细胞肺癌中Ezrin和CD44v6的表达及其与肺癌各种临床病理参数之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测55例非小细胞肺癌组织中Ezrin及CD44v6的表达.结果 Ezrin的表达程度与非小细胞肺癌的TNM分期(P=0.004)和淋巴结转移(P=0.003)密切相关; CD44v6的表达程度与非小细胞肺癌的TNM分期(P=0.012)和淋巴结转移(P=0.010)密切相关;Ezrin 和CD44v6两者在非小细胞肺癌组织中的表达呈正相关(r=0.568, P=0.000).结论 Ezrin和CD44v6与肺癌淋巴结转移和临床TNM分期密切相关,联合检测Ezrin和CD44v6有助于判断肺癌的预后.     

Snail在卵巢癌细胞侵袭转移潜能方面研究

目的研究Snail与卵巢癌侵袭转移问的关系,并探讨其分子机制。方法分别构建正义全长Snail真核表达载体和小分子干扰RNA,分别转染卵巢癌细胞系A2780、C13＊。采用Western印迹方法分析相关蛋白表达,Transwell试验检测细胞侵袭转移能力。结果①成功构建Snail正义全长真核表达载体,并合成Snail小分子RNA干扰片段;②在转染PEGFPCI／Snail的卵巢癌细胞株A2780、C13＊中E-eadhefin表达明显下调,Snail和Vimentin则表达上调;而在转染Snail／SiRNA的卵巢癌细胞株A2780、C13‘中E—cadherin表达明显上调,Snail和Vimentin则表达下调;③Snail过表达可显著促进卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能;封闭Snail表达水平可一定水平抑制卵巢癌细胞株A2780、C13＊的侵袭转移潜能。结论snail可通过促进卵巢癌上皮细胞间质化转变（epithelial—mesenchymaltransition,EMT）而提高其侵袭转移能力;封闭Snail表达可一定程度逆转卵巢癌上皮细胞间质化转变（EMT）而抑制其侵袭转移能力。     

Ezrin蛋白过表达对胰腺癌细胞系Panc-1生物学行为的影响

目的探讨Ezrin过表达对胰腺癌细胞系Panc-1生物学行为的影响。方法用过表达载体pcb6-Ezrin稳定转染Panc-1细胞,并用流式细胞仪检测细胞周期,CCK-8法检测细胞生长曲线,扫描电镜观察细胞表面形态及表面突起的变化,用未包被及包被Matrigel胶的Transwell小室分别检测细胞的运动和侵袭能力,并用免疫印迹法检测信号相关蛋白Erk1/2的变化。结果过表达Ezrin后其蛋白的表达明显升高,Panc-1细胞表面的细胞突起、微绒毛数量明显增加,运动及侵袭能力也明显增加,但对细胞的体外增殖和细胞周期无明显的影响。Ezrin的过表达能够激活Erk1/2的表达。结论 Ezrin蛋白对胰腺癌细胞的细胞突起、表面微绒毛的形成、细胞骨架及细胞的运动和侵袭发挥着重要的作用。因此,Ezrin可能在胰腺癌的进展中发挥着重要的作用,Erk1/2信号转导途径在这一过程中发挥着重要的作用。     

C6orf106促进肺癌细胞的侵袭和增殖

目的探讨C6orf106(chromosome 6 open reading frame 106)对肺癌细胞中侵袭和增殖能力的影响。方法分别在肺癌细胞A549和SPC细胞中转染和干扰C6orf106的表达,Transwell和MTT检测细胞侵袭和增殖能力的改变,同时Western Blot检测E-cadherin、c-myc、cyclin A2和cyclin B1等一系列侵袭、增殖相关因子的改变。结果转染外源性的C6orf106可促进A549细胞的侵袭和增殖能力,而si RNA干扰C6orf106可抑制SPC细胞的侵袭和增殖能力。C6orf106可以调控E-cadherin、c-myc、cyclin A2和cyclin B1等侵袭、增殖相关因子的表达水平。结论 C6orf106能够促进肺癌细胞的侵袭和增殖,且这种作用可能通过调控E-cadherin、c-myc、cyclin A2和cyclin B1等侵袭、增殖相关因子的表达而实现的。     

下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响

目的探讨下调Snail基因对子宫内膜癌增殖和侵袭的影响及其机制。方法培养子宫内膜癌细胞株,构建Snail-shRNA表达载体,建立下调Snail基因表达的子宫内膜癌细胞株;用CCK-8法检测子宫内膜癌细胞株(Ishikawa)的增殖能力。用Transwell小室结合基质胶(Matrigel)法比较子宫内膜癌细胞株与相应的瞬时转染细胞株在细胞迁移能力及侵袭能力的差异。结果通过下调Snail基因在细胞内的表达,体外观察子宫内膜癌细胞增殖能力空白对照组高于细胞转染组;迁移与侵袭能力空白对照组高于细胞转染组。结论 Snail基因在子宫内膜癌中表达下调;与抑制子宫内膜癌的增殖和侵袭转移相关,其可能机制与逆转肿瘤的上皮细胞-间质转化过程和共同抑制下游转移靶基因相关。     

ARK5与乳腺癌侵袭转移关系的研究

目的探讨ARK5在乳腺癌侵袭和转移中的意义。方法采用免疫组化SP法检测58例乳腺癌组织和15例癌旁乳腺组织中MMP-2、MMP-9及ARK5表达。应用小RNA干扰技术,将合成的小RNA干扰质粒转染MDA-MB-435细胞株,采用Western blot法检测瞬时转染后ARK5蛋白表达情况。通过体外侵袭实验检测细胞转染后侵袭能力的变化。ARK5下降后,再次进行Western blot法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果乳腺癌组织中MMP-2、MMP-9和ARK5免疫组化阳性结果之间存在正相关性。转染后的细胞株命名:转染ARK5质粒的MDA-MB-435细胞称之为SiARK5/MDA-MB-435,转染对照质粒的MDA-MB-435细胞称之为Scr/MDA-MB-435。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-435细胞相比,SiARK5/MDA-MB-435细胞的ARK5蛋白表达水平降低。ARK5表达降低的乳腺癌细胞侵袭并穿透Matrivgel膜基质的细胞数量比对照组少(P<0.01),且MMP-2、MMP-9蛋白表达量降低。结论应用小RNA干扰技术降低ARK5蛋白的表达使MDA-MB-435细胞侵袭转移能力降低,同时MMP-2、MMP-9蛋白表达降低,提示ARK5通过MMP-2、MMP-9在乳腺癌侵袭转移中发挥重要作用。     

miR-183 inhibits the metastasis of osteosarcoma via downregulation of the expression of Ezrin in F5M2 cells

Osteosarcoma is the most common primary malignancy of bone in teenagers and approximately 30% of patients develop lung metastasis, which is the leading cause of mortality. Recent studies suggest that the Ezrin protein is correlated with the metastatic potential of several malignant tumors. In our study, ectopic overexpression of miR-183 repressed the expression levels of Ezrin and significantly inhibited the motility and invasion of osteosarcoma cells. This suggests that miR-183 may possibly play a tumor suppressor role in the metastasis of osteosarcoma by downregulating Ezrin expression levels. These findings show that through inhibition of Ezrin expression levels, miR-183 is significantly involved in cell migration and invasion of osteosarcoma.     

Down-regulation of miR-183 promotes migration and invasion of osteosarcoma by targeting Ezrin

Recent studies have emphasized causative links between aberrant microRNA expression patterns and cancer progression. miR-183 is dysregulated in certain types of human cancers. The expression pattern, clinical significance, and biological role of miR-183 in osteosarcoma, however, remain largely undefined. In this paired analysis, we found that miR-183 was markedly down-regulated in osteosarcoma cells and tissues compared with matching normal bone tissues using RT-qPCR. Statistical analyses revealed that the expression levels of miR-183 significantly correlated with lung metastasis as well as with local recurrence of osteosarcoma. miR-183 expression was inversely correlated with Ezrin mRNA and protein expression levels in osteosarcoma cells as well as in a subset of primary osteosarcoma. Ectopically expressed miR-183 inhibited migratory and invasive abilities of osteosarcoma cells, whereas knockdown of endogenous miR-183 significantly enhanced these abilities. Using a luciferase reporter carrying the 3'-untranslated region (3'-UTR) of Ezrin, we identified Ezrin as a direct target of miR-183. Moreover, ectopic expression of Ezrin could significantly rescue miR-183-suppressed migration and invasion. Of interest, suppression of Ezrin by miR-183 caused a reduction of phosphorylated p44/42 (p-p44/42). Finally, suppression of Ezrin by RNAi mimicked miR-183 action in the suppression of migration and invasion, which was associated with down-regulation of p-p44/42. Taken together, these results suggest that as a tumor suppressor miRNA, miR-183 plays an important role in the aggressiveness of osteosarcoma.     

Trim72基因在肝癌转移中的功能研究

目的 利用CRISPR-Cas9基因编辑技术验证与非小细胞肺癌转移相关的Trim72基因的敲除是否引起肝癌转移能力的变化.方法 建立稳定表达Cas9蛋白的小鼠肝癌细胞系Hepa1-6(Cas9),随后利用针对Trim72基因的单导向RNA(sgRNA)进行特异性基因敲除获得Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,再通过体外Transwell实验和体内皮下瘤肺转移检测评估该细胞系的迁移和侵袭能力.结果 利用CRISPR-Cas9系统成功获得了Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系.Transwell实验结果表明,敲除Trim72基因后,Hepa1-6(Cas9)细胞系的体外迁移和侵袭能力增强;体内皮下瘤肺转移病理检查结果显示,Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系(实验组)所成皮下瘤的体内转移能力明显强于未转入相应sgRNA的Hepa1-6(Cas9)细胞系(对照组).结论 通过CRISPR-Cas9系统成功获得了敲除Trim72基因的Hepa1-6(Trim72-KO)细胞系,该细胞系表现出较Hepa1-6(Cas9)细胞系更强的侵袭和转移能力,说明Trim72基因可能在肝癌的侵袭和转移中起重要作用,有望成为肝癌基因治疗的潜在靶点.     

骨髓间充质干细胞促进肺癌转移的机制

BACKGROUND:So far the positive or negative effects of mesenchymal stem cells on tumor growth and metastasis are under discussion. OBJECTIVE:To explore the mechanism of bone marrow mesenchymal cells in promoting lung cancer metastasis. METHODS: Primary rat bone marrow mesenchymal stem cells were obtained by direct adherence method of the whole bone marrow, and differential adherence combined with digestion control method was performed to purify cells. Lung cancer cell lines were cultured, and the effects of bone marrow mesenchymal stem cells on the migration, invasion and metastasis of lung cancer cells were observed by scratch test, cell invasion and migration assays. Orthotopic lung cancer models were established in rats and bone marrow mesenchymal stem cells were seeded onto the left lung of rats. Then, pathological changes of lung tissues were observed at 14 days after transplannation. RESULTS AND CONCLUSION:After the scratch test, the migration rate of lung cancer cells became higher, and the scratches healed with time. And after cell transplantation, the number of migrated lung cancer cells increased, as well as the ability of lung cancer cells penetrating the Matrigel was strengthened. Besides, fibrous connective tissues could be found around the lung cancer tissues, and necrosis with distinct boundary and large tumor nuclei; the metastatic tissues showed obvious infiltration and necrosis with large tumor nuclei. These results suggest that bone marrow mesenchymal stem cells can promote the invasion, migration and metastasis of lung cancer cell lines.       

人肿瘤转移抑制基因1转染对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生物学行为的影响

目的研究人肿瘤转移抑制基因1（TMSG-1）转染引起人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生物学行为的改变及对肿瘤转移表型的影响。方法构建TMSG-1全长编码序列真核表达载体,稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,G418筛选挑取TMSG-1过表达阳性克隆。通过MTT比色实验、软琼脂集落形成实验检测体外细胞生长能力;Matrige1穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。TMSG-1瞬时转染24、48h,分别用Annexin-V碘化丙啶（PI）双标流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡情况。结果从稳定转染TMSG-1的MDA-MB-231细胞中挑取3个TMSG-1-FLAG融合蛋白表达量较高的阳性克隆株用于下游生物学行为实验。M1Tr比色实验及软琼脂集落形成实验结果显示,TMSG-1正义转染各组（S1、S2、S3）细胞增殖速度及克隆形成数与未转染组及转染空载体组相比均明显减低（P〈0．05）;Matrigel穿膜实验显示,正义转染各组的穿膜细胞数[（72．3±8．1）个、（85．0±4．2）个、（73．5±7．8）个]与未转染组[（187．5±2．1）个]和转染空载体组[（162。3±6．8）个]相比均明显减少（P〈0．01）。TMSG．1瞬时转染MDA．MB-231细胞,转染24和48h均可引起细胞凋亡率的增加（P〈0．05）。结论TMSG．1表达上调可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生长速度、锚着不依赖性生长能力及侵袭能力明显降低,细胞凋亡增加。该实验为TMSG-1是一个新发现的肿瘤转移抑制基因提供了证据。