HBV血清标志物不同方法检测结果分析

目的 探讨酶联免疫吸附法(ELISA)和电化学发光法(ECLIA)检测乙型肝炎病毒血清标志物(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc)的模式特征及差异.方法 回顾性分析2010年3～5月以ELISA检测的11 923例标本及2011年同期以ECLIA检测的8 786例标本的乙型肝炎血清标志物结果.应用SPSS17.0软件对上述检测数据进行统计分析.结果 在ELISA检测的11 923例患者及ECLIA检测的8 786例患者中,男性患者HBsAg阳性率分别为10.75%和13.60%,女性患者分别为9.36%和10.81%,男性阳性率均高于女性.与ELISA相比,ECLIA可检出4种新模式,即345、1235、1345、12345阳性模式,5种ELISA模式ECLIA未能检出.不同月份间,ECLIA检测2、25及245模式阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).ECLIA及ELISA对HBsAg与抗HBs双阳性标本的检出率分别为0.88%和0.09%,差异有统计学意义(P<0.05).2、25、245阳性模式组抗HBs定量中位数分别为167.9、136.8、245.3 IU/L,组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 ECLIA与ELISA可检出HBV血清标志物不同模式结果,在审核和解释检测结果时需加以注意.抗HBs浓度水平可能与是否存在抗HBe和(或)抗HBc有一定关系.     

TIMP-1 ELISA检测方法的建立及临床初步应用

目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的酶联免疫吸附方法（ELISA），用于血清学诊断人肝纤维化病程进展。方法以抗人TIMP-1单克隆抗体（McAb）为包被抗体，15％小牛血清为封闭液，和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1 McAb作为标记抗体建立检测人血清TIMP-1 ELISA法。并用于临床初步检测408例肝病患者血清。结果实验理想的包被抗体浓度为1μg／ml，血清稀释倍数1：100，HRP标抗体的最佳工作浓度1：400。该法具有良好的重复性，灵敏度达3ng／ml，中和抑制率在85％以上，稳定性能好，与国外TIMP-1 ELISA试剂盒进行对比试验，表明两种检测方法有良好的相关性（Y=0．0085＋0．9892X，r=0．988）。临床检测表明TIMP-1随着病损纤维化程度加重而升高，与正常人血清TIMP-1水平相比差异显著（P〈0．01）。结论该法可用于肝纤维化进展定量血清学诊断。同时对影响因素的判定进行了初步的摸索研究，结果可靠。为国内TIMPs诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据。     

基于不同检测方法的乙型肝炎病毒感染血清标志物模式分析

目的对酶联免疫吸附试验(ELISA)和电化学发光法(ECLIA)检测乙型肝炎血清标志物[乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体、乙型肝炎病毒e抗原、乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗HBc)]的结果进行回顾性分析,探讨两种方法检测乙型肝炎血清标志物结果的模式特征。方法从检验系统数据库中分别查询出2010年3～5月用ELISA检测的11 923例住院患者以及2011年3～5月用ECLIA检测的8 786例住院患者的乙型肝炎血清标志物结果。应用Excel和SPSS17.0软件对上述检测数据进行统计分析。结果在ELISA检测的11 923例患者中以及ECLIA检测的8 786例患者中,均发现男性HBsAg阳性率明显高于女性。2011年3月用ECLIA检测乙型肝炎血清学标志物后,出现4种新的模式,即3、4、5,1、2、3、5,1、3、4、5,1、2、3、4、5阳性模式,同时原先用ELISA检测可见的5种模式未能重现。ECLIA检测结果分析表明,2011年3、4和5月的住院患者之间2,2、5及2、4、5这3种模式阳性率差异均无统计学意义。2,2、5,2、4、5这3种阳性模式组抗-HBe定量中位数分别为167.9、136.8和245.3U/L,其差异有统计学意义(χ2=86.24,P<0.01)。结论应用ECLIA检测乙型肝炎血清学标志物可能出现不同于ELISA检测的结果模式,临床上在审核和解释乙型肝炎血清学标志物检测结果时需加以注意。     

乙型肝炎患者血清学标志物检测结果分析

目的探讨HBV血清学标记的表现模式。方法酶联免疫吸附法检测。结果本组血清病毒学标记分为10种感染期模式。主要以HBsAg、HBcAb、HBeAg即“大三阳”和HBsAg、HBcAb、HBeAb即“小三阳”模式为主，占全部病例的68．19％。结论HBV血清免疫学标记的模式较为复杂，除检验误差外，产生少见模式的主要原因有低滴度HBcAb、低滴度HBeAb等。     

ECLIA法定量检测乙肝血清标志物的临床应用

目的：探讨采用电化学发光免疫分析（ECLIA）法检测某院医务人员乙型肝炎（乙肝）血清标志物（HBV‐M）及HB‐sAg临界或弱反应标本进行ElecsysHBsAg确证试验的临床应用价值。方法对1847例血清标本经RocheModularE170进行HBV‐M半定量分析,并对所有HBsAg处于临界或低浓度的标本进行了确证试验分析。结果检出HBsAg阳性标本共52例,其中HBsAg、HBeAg、HBcAb结果有反应性3例,检出率0．16％;HBsAg、HBeAb、HBcAb结果有反应性47例,检出率2．54％;HBsAg、HBsAb、HBeAb、HBcAb结果有反应性1例,检出率0．05％;HBsAg、HBcAb结果有反应性1例,检出率0．05％。HB‐sAg阴性标本共1795例,其中单HBsAb结果有反应性538例,检出率29．13％;HBsAb、HBeAb、HBcAb结果有反应性330例,检出率17．87％;HBsAb、HBcAb结果有反应性276例,检出率14．94％;HBsAb、HBeAb结果有反应性2例,检出率0．11％;HBe‐Ab、HBcAb结果有反应性14例,检出率0．76％;单HBcAb结果有反应性60例,检出率3．25％;HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBe‐Ab、HBcAb结果均无反应性575例占受检人数的31．13％。将HBsAg处于临界或低浓度的标本进行了确证试验,半定量试验COI结果为0．80～0．99的8例标本,经ElecsysHBsAg确证试验结果均为无反应性;1例半定量试验COI结果为3．81的标本,经ElecsysHBsAg确证试验结果为阳性;5例半定量试验COI结果分别为9．13、10．86、11．15、11．11、10．42的标本,经ElecsysHB‐sAg确证试验结果均为阳性。HBV‐M半定量检测与ElecsysHBsAg确证试验的符合率为100％。结论ECLIA法在HBV‐M半定量检测及确证试验过程中具有重要临床应用价值,为乙型肝炎临床诊断及病情的治疗监测提供了科学的实验室依据。     

血清载脂蛋白A5 ELISA的建立及其初步应用

目的建立人血清中载脂蛋白A5(ApoA5)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并初步观察其在2型糖尿病(T2DM)中的应用价值。方法用棋盘滴定法确定捕获抗体、检测抗体的最佳工作浓度;绘制标准曲线,确定线性范围、检测限;检测该方法的精密度和特异性,并分别检测T2DM患者及健康人血清中ApoA5水平以及其它生化指标。结果本研究建立的方法测定范围为5-640ng/ml,最低检出量2ng/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.7%。T2DM患者血清中ApoA5水平为(494.2±233.1)ng/ml,显著低于健康对照组(668.2±357.0ng/ml,P=0.001);血清ApoA5浓度与HDL-c呈正相关(r=0.16,P=0.031),与TG呈负相关,但是没有达到统计学差异(r=-0.028,P=0.717)。结论本研究建立的人血清ApoA5双抗体夹心ELISA灵敏度高,特异性好,可应用于临床ApoA5的检测;ApoA5可能是T2DM的独立危险因素,监测ApoA5浓度对于T2DM的预防和干预具有一定临床意义。     

时间分辨荧光免疫法定量检测乙肝病毒血清标志物的临床意义

目的探讨时间分辨荧光免疫法用于定量检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义。方法采用时间分辨荧光免疫法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)同时对196例患者HBV血清标本进行5项指标检测。结果 TRFIA法检测患者标本乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)的阳性率分别为59.7%、24.5%、25.5%、29.1%、78.6%。ELISA法检测患者标本HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的阳性率分别为52.1%、18.4%、21.4%、23.5%、67.9%。TRFIA法检测的阳性率均显著高于ELISA法(P<0.05)。结论 TRFIA法测定乙肝病毒血清标志物的相对灵敏度高,的可为临床疗效观察及乙肝疫苗的接种提供科学依据。     

ELISA联合检测方法的建立及应用

目的在微孔板平台上建立多指标联合检测的方法,为急诊、门诊及基层等多种医疗机构提供1种新的血清学检测手段。方法本研究根据酶联免疫吸附法(ELISA法)原理,以卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、生长激素(GH)为检测靶标,在自行设计的聚苯乙烯板孔上完成反应体系的优化,包括FSH、PRL、LH、GH包被抗体浓度及酶标抗体浓度,建立1种并行分析样品中多种指标的方法。结果成功确定4种垂体激素联合检测的条件,包括4种激素抗体包被浓度、酶标抗体浓度等,并成功应用于临床样本的检测。结论本研究首次建立了1种简单、特异性高、成本低、并行分析4种垂体激素的联合检测方法,提高了常规ELISA法的检测效率。     

两种不同免疫检验方法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的临床对比分析

比较化学发光免疫分析法(CLIA)与酶联免疫吸附试验法(ELISA)法对乙型肝炎病毒(HBV)感染血清学标志物的检测价值。2015年1月~2016年1月,选取在本院确诊及接受治疗的HBV感染患者120例,均分别采用CLIA、ELISA法行血清学标志物检测,比较两种检测方法的价值。CLIA法检测HBV感染准确度为98.33%,显著高于ELISA法检测HBV感染准确度85.00%(P0.05),有显著统计学差异;CLIA法的HBs Ag、HBe Ab及HBe Ag检出率显著高于ELISA法,P0.05,有显著统计学差异,但两组的HBc Ab、HBs Ab比较无显著统计学差异(P0.05);37例CLIA法检测HBs Ag阴性的患者其低水平(≤0.50IU/ml)HBs Ag血清样本,经ELISA法检测检出率仅为67.57%,组间比较(P0.05),有显著统计学差异。与ELISA法相比,CLIA法对HBV感染患者的血清学标志物检测更为准确,在早期病情诊断及病情监测方面更具价值,值得应用。     

560例病人血清标志物检测分析

为了掌握我县农村人群乙型肝炎病毒的感染情况,我们对2000～2001年来我院检验门诊就诊并确定其HBsAg阳性者进行了血清乙肝5项指标及HBV-DNA的检测,旨在为临床提供一个准确可靠的数据资料.     

血清粗纤维调节素ELISA的建立及初步应用

以提纯的人胎盘粗纤维调节素 (Un)及兔抗人Un IgG ,建立血清Un的竞争抑制ELISA标准曲线 ,并检测了 6 0名正常人和 12 4例肝病患者。结果采用棋盘试验确定包被Un及其抗体的浓度 ,表明该法灵敏度为 5 μg/L ,回收率为 96 6 %～10 8 3% ,批内 CV为 7 5 % ,批间CV 为 7 9%。 6 0名正常成人血清Un含量为 71 14± 2 9 6 0 μg/L ,参考值范围为 11～ 130μg/L,慢性肝病患者Un含量显著高于正常人。提示此法稳定、可靠、特异 ,基本符合临床使用要求 ,可用于慢性肝病的诊断。     

血清MMP9蛋白ELISA检测方法的建立及在肝癌患者血清检测中的初步应用

目的建立基质金属蛋白酶9（MMP9）的双抗体夹心ELISA检测方法，探讨血清中MMP9在正常人及肝癌患者中的差异。方法从人肝组织中经过反转录扩增出MMP9基因721—1156bp区段，插入到原核表达质粒pQE30中，在大肠埃希菌M15中诱导蛋白表达。以纯化的融合蛋白HIS—MMP9为抗原免疫实验用兔及豚鼠，得到的MMP9抗血清经过纯化后，建立双抗体夹心ELISA法。对227份正常及193份肝癌患者血清中的MMP9进行检测。结果SDS—PAGE显示所表达的HIS—MMP9融合蛋白相对分子质量约为17000；以原核表达蛋白为抗原制备的MMP9抗血清可有效地识别重组MMP9和中性粒细胞和HepG2细胞内源性MMP9蛋白；利用建立的MMP9 ELISA检测技术发现肝细胞癌患者血清中MMP9的含量高于正常人群，差异具有统计学意义，P〈0．001。结论建立的双抗体夹心ELISA方法可用于血清MMP9的检测，为建立以MMP9为检测指标的肝细胞癌患者转移复发筛查方法提供了科学基础。     

乙型肝炎病毒标志物定量检测方法的评价

目的研究乙型肝炎(简称乙肝)病毒标志物定量检测的临床应用与意义。方法从2010年5月至2012年6月,于本院选取已确诊体内含有乙肝病毒标志物的患者110例作为研究对象。经患者同意随机分成甲组和乙组,每组55人。其中甲组采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法进行乙肝病毒标志物的定量测定,乙组采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术进行乙肝病毒标志物的定量测定,对两组检测方法检出的各项乙肝病毒标志物的阳性率进行比较。结果乙组乙肝病毒标志物定量检测的各项指标的阳性检出率均高于甲组,其中乙组抗-HBs抗体和抗-HBc抗体的阳性检出率分别为83.63%(46/55)和47.27%(26/55),明显高于甲组的阳性检出率67.27%(37/55)和29.09%(16/55),差异均具有统计学意义(P<0.05)。乙组对乙肝病毒标志物定量检测的灵敏度与特异度均明显高于甲组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRFIA技术对乙肝病毒标志物定量检测的各项指标阳性检出率显著,且特异度与灵敏度较高,安全性较好,值得临床推荐。     

多瘤病毒样颗粒的制备及血清学检测方法的建立

目的 制备多瘤病毒（John Cunningham virus,JCV）病毒样颗粒并建立JCV血清学检测方法,了解我国一般人群JCV流行情况。方法 通过基因合成技术合成JCV衣壳蛋白基因VP1,将其克隆至PET-21a质粒,转化BL21（DE3）大肠埃希菌,IPTG诱导表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定目的蛋白表达。采用2次超速离心法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE、透射电子显微镜及血凝试验鉴定纯化产物。以纯化产物为抗原建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法,筛查一般人群血清标本,分析该人群JCV感染情况。结果 通过透射电子显微镜观察及血凝试验鉴定,显示纯化产物具有和天然JCV颗粒类似的形态结构和血凝活性。以纯化的JCV病毒样颗粒为抗原建立了间接ELISA法,筛查了一般人群抗JCV IgG抗体,结果显示一般人群抗JCV IgG抗体阳性率为54.2%。结论 本研究制备了JCV病毒样颗粒,所建立的ELISA法可应用于JCV人群血清流行病学调查。     

血清白喉和破伤风抗体检测方法的建立及应用

目的建立定量检测抗白喉抗体、抗破伤风抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。方法分别用纯化的白喉类毒素、破伤风类毒素作为包被抗原,白喉、破伤风人源血清抗体标准品作为标准品,对供试品和标准品的剂量反应曲线进行拟合,以平行线法建立定量检测抗白喉抗体(Anti-DT)、抗破伤风抗体(Anti-TT)的ELISA方法。并进行方法学验证和应用研究。结果两种定量检测ELISA方法的验证结果均符合规定。定量检测Anti-DT的ELISA方法的定量限为0.084 mU/mL,回收率为97.6%,批内变异系数(CV)≤3.40%,批间CV≤5.05%;检测Anti-TT方法的定量限为0.175mU/mL,回收率为97.5%,批内CV≤2.42%,批间CV≤5.58%。应用上述两种ELISA方法,对白喉破伤风疫苗用于婴儿基础免疫后的免疫原性进行了检测分析和评价。结论所建立的白喉、破伤风血清抗体ELISA检测方法,准确度高,重复性好,适合于一般实验室开展工作,可用于白喉破伤风疫苗免疫接种后的血清学效果评价和白喉破伤风疾病的流行病学研究。     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的 探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M)ELISA法检测的临床价值。方法 选取2013年4~12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HbsAb)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎E抗体(HbeAb)、乙肝表面核心抗体(HbcAb);再采用FQ-PCR法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果。结果 HBsAg、HbeAg、HbcAb检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1(+)、3(+)、5(+)模式]和[1(+)、3(+)模式]的HBV-DNA阳性率分别为97.97%、94.74%,显著高于其他模式的HBV-DNA阳性率(P<0.05)。大三阳的HBV-DNA表达水平(5.59×106±2.42×105)copies/mL,明显高于其他模式(P<0.05)。结论 联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

ELISA检测乙肝病毒核心抗原的方法建立及应用

目的采用酶联免疫吸附试验(EL ISA),建立乙肝病毒核心抗原(HB cA g)的定性检测方法,用于临床标本HB cA g的检测。方法用ELS IA法检测临床血样标本乙肝表面抗原(HB sA g)阳性208例,阴性健康对照30例,与HBV DNA结果进行比较。结果208例HB sA g阳性样本,HB cA g与HBV DNA共同阳性率为58.7%,HB cA g阳性率为74.0%,HBV DNA阳性率为64.4%,二者结果显著相关。结论EL ISA法可用于临床标本HB cA g的检测。     

两种方法对比检测乙型肝炎病毒血清标志物

目的 研究乙型肝炎(下称乙肝)病毒感染者血清免疫标志物,利用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测其含量结果与酶联免疫吸附试验(ELISA)法的符合程度,灵敏度及其特异性作比较分析,并了解TRFIA法测定乙肝两对半的准确性,灵敏度及其临床应用价值.方法 分别用TRFIA法和ELISA法测定乙肝病毒感染者血清标本乙肝两对半(HBV-M)结果及含量.结果 分别用TRFIA法和ELISA法对乙型肝炎患者血清作乙肝病毒表面抗原(HBsAg)检测TRFIA法灵敏度高于ELISA法,360例乙肝患者血清中有10例标本ELISA法检测结果阴性,而用TRFIA法可以检测到.另外,对ELISA法检测HBsAg弱阳性的标本,TRFIA法检测结果为阳性,且HBsAg的浓度处在一个较低的范围(0.5～10 ng/ml),两法符合率为97%;对抗乙肝病毒表面抗体(抗-HBs)的检测,ELISA法有20例阳性,而用TRFIA法检测有28例阳性,两法符合率为98%;对乙肝病毒e抗原(HBeAg)的检测,ELISA法检测31例阴性,而用TRFIA法检测为阳性,两法符合率为91%;对抗乙肝病毒e抗体(抗-Hbe)的检测有44例ELISA法结果阴性,而用TRFIA法检测结果为阳性,两法符合率为88%;对抗乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)的检测有52例ELISA法检测结果阴性的患者,而用TRFIA法检测结果为阳性,两法符合为86%.结论 TRFIA法灵敏度明显高于ELISA法,对于一些弱阳性标本ELISA法检测不到时,TRFIA法仍可以检出.TR-FIA法定量检测乙肝两对半,灵敏度高,特异性强,能及时敏感反映病毒在体内的感染状况.