PCR技术检测结核杆菌的临床应用

结核病是长期以来危害人类生命健康的严重疾患，在发展中国家结核病迄今仍是常见病，我国近年来发病率也有所上升，随着基因工程在医学科学中的应用，一些大、中型医院都将更先进的分子生物学，运用到结核病的诊断中。但仍有多数结核病的确诊主要还是依靠痰涂片，染色镜检抗酸杆菌和结核杆菌的培养与鉴定，痰涂片阳性率低，且不能明确诊断，     

荧光定量PCR在石蜡标本结核杆菌检测中的应用价值

<正>结核病是我国第二大传染性疾病,它由结核分枝杆菌感染引起,可侵犯全身各器官,以肺部受累最为常见。结核病具有空气传播、传染性强等特点,不同患者或不同病发阶段临床表现可能不同,这增加了结核病的鉴别诊断难度。对于石蜡标本,典型结核病病理诊断容易,当出现不典型病理改变时诊断较困难。传统方法学多以抗酸染色做为检测结核杆菌的常规方法,此方法快速简便,但阳性率低,假阴性高,适合大规模普查[1]。近年来,基于结核杆菌核酸的FQ-PCR方法以其快速、简便、     

结核杆菌及其耐药性快速检测的研究进展

本文对近几年结核杆菌及其耐药性快速检测的研究进展作一综述,快速检测包括改良液体培养方法和基因扩增技术,耐药性的快速检测包括改良液体培养方法,噬菌检测测方法和基因检测方法。     

PCR—SSCP直接检测临床标本中的结核杆菌rpoB基因突变—附50例报告

目的：探讨聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）直接检测痰标本中的结核杆菌核糖核酸聚合酶亚单位基因（ropB基因,该基因突变便形成结核杆菌利福平耐药株）突变在评价结核杆菌对利福平的耐药性方面的应用价值。方法：以结构杆菌H37Rv株（标准菌株）为对照,应用PCR－SSCP技术直接检测50例痰标本中结核杆菌及培养分离的结核杆菌的rpoB基因突变,并将PCR－SSCP和细菌培养的结果进行比较分析,结果：以细菌培养作为参考方法,PR－SSCP直接检测50例痰标本中的结核杆菌ropB基因突变的敏感性和特异性分别是92％（23／25）和100％（10／10）,用于检测培养分离得到的35株结核杆菌,PCR－SSCP的敏感性和特异性分别为96％（24／25）和100％（10／10）。结论：PCR－SSCP操作简单,快速,准确,可望用于直接检测临床标本中的结核杆菌ropB基因突变,以评价结核杆菌是否对利福平产生耐药性。     

PCR-微板杂交-ELISA检测结核杆菌DNA

[目的]探讨PCR-微板杂交-ELISA方法检测结核杆菌DNA的临床价值。[方法]选择PCR扩增区域内的保守序列设计捕获探针和显色探针,分别用于DNA杂交和ELISA分析,建立PCR-微板杂交-ELISA方法并运用该方法对328份结核病人痰标本进行了检测。[结果]328份结核病人痰标本中有196例结核杆菌DNA阳性,阳性率为59．7％。检出率明显高于痰培养和痰涂片抗酸染色。[结论]PCR-DNA微板杂交-ELISA方法综合运用了PCR、DNA杂交和-ELISA技术,大大增加了DNA检测的特异性和灵敏度,在临床上具有良好的应用前景。     

多聚酶链式反应速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）以３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＤＮＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融融解法快提切片ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸色性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ〈０．０１）。说明ＰＣＲ用于活检组织诊断理一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此     

PCR检测结核杆菌标本前处理的体会

PCR即聚合酶链式反应，是80年代中期创建的一种体外基因扩增技术。自1989年被应用于结核病诊断以来已成为结核病学实验诊断领域中被世人关注的焦点，在短短数年中取得了巨大成绩。但在检测结核杆菌标本前处理时方法很多。标本前处理指行DNA扩增前的处理：包括标本处理和靶DNA的提取，它是PCR检测结核杆菌成败关键之一。目前经典的标本前处理法，步骤繁杂，不宜临床；现根据不同的标本进行简易前处理谈一点体会。     

PCR检测脑脊液中结核杆菌

ＰＣＲ检测脑脊液中结核杆菌卢奕，彭本禾，王嘉玺（天津第二医学院免疫学教研室，天津３００２０３）吕玲，佟彤（天津市儿童医院，３０００００）结核杆菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）中的免疫原性蛋白ＭＰＢ６４是结核杆菌的特异性抗原，该蛋白能诱发强的迟发型变...     

436例PCR检测结核杆菌DNA结果分析

结核病是长期以来危害人类生命健康的严重疾病。为了加强结核病的防治工作，国家卫生部位近将原是丙类传染病的肺结核废增列为乙类传染病管理。从全球和全国结核疫情看，防治形势相当严峻。我国现患肺结核病人约600万，每年病死约25万人。此外，骨结核、肾结核、淋巴结核也有所上升。近几年来，随着医学科学技术的不断发展，目前有条件的医院都将先进的分子生物学（如PCR）运用到结核病的诊断中，克服了过去结核菌难培养或阳性率低以及所需长时间才能出报告的弊端，确实具有快速、灵敏、简便、特异的特点；所以，越来越被人们广泛的接受和…     

噬菌体裂解法在结核杆菌检测及药敏实验中的应用

1993年世界卫生组织宣布结核病疫情处于紧急状态，近年来一直呈现出上升趋势。自Koch发现结核菌以来，人类对于结核病的发病机理，化学疗法，诊断的研究不断取得新进展，然而迄今为止仍有许多重要问题有待解决。在实验室诊断方面，传统诊断方法都存在严重的缺点和不足，一些新方法有待去探索、研究。如痰涂片查结核病菌，其阳性率低，只有30％左右，结核菌培养＋药敏其结果报告时间长，需要2—3个月。结核抗体检测假阴性率、假阳性率都很高，结核菌PCR实验要求高，不易推广，临床上需要灵敏度特异性都很高的实验室诊断方法。     

快速诊断结核杆菌感染的PCR方法的实验室应用

[目的]寻找一种即能提高检出的阳性率，又能减少污染环节而导致假阳性，取材方便，操作简单，便于推广的临床标本进行PCR扩增，来进行结核病的实验室快速诊断。[方法]对经X-线、胸片、痰抗酸染色、痰BLL-MGIT快速培养及临床诊断确诊为结核病例40例的痰、全血、外周血单个核细胞进行TB-Ab、PCR的检测比较。[结果]痰液中的结核杆菌-DNA的PCR检出率高达70％，而同一患者外周血分离单个核细胞的阳性率仅为40％。同一血样中TB-Ab与全血PCR方法扩增全血中所有的模版DNA，两方法之间具有显著性差异。全血PCR与外周血单个核细胞PCR比较，二者的阳性率具有显著性差异（P=0．001〈0．01），以全血细胞PCR检测阳性率最高。结核杆菌感染者红细胞粘附功能明显增加，与正常对照组比较县有显著性差异。[结论]检测结核病患者全血细胞TB的PCR实验方法可能为结核杆菌感染的早期、有效的实验室指标。     

多聚酶链式反应快速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＮＤＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融裂解法快提切片中ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸染色阴性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ＜０．０１）。说明ＰＣＲ用于肺活检组织诊断结核是一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此外，对影响ＰＣＲ结果的因素进行了分析。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的应用

目的：建立结核病荧光定量PCR快速检测方法。方法：建立检测结核杆菌的荧光定量PCR方法并进行特异性、敏感性、重复性实验，对临床样品进行检测分析。结果：该方法的敏感性达到了1Pg，且特异性高．重复性好。应用荧光定量PCR法及抗酸染色、结核杆菌培养法，对332例活动性肺结核患者晨痰、215例活动性肺结核患者外周血、187例结核性胸膜炎患者胸水进行检测．荧光定量PCR技术阳性率分别为53．0％（176／332）、34．4％（74／215）、36．9％（69／187），经统计学比较分析，3种方法检测率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：荧光定量PCR技术具有简便、快速、防污染、敏感性与特异性高等优点，是结核病诊断的有效方法之一。[著者文摘]     

痰液标本中结核杆菌DNA模板快速提取方法

PCR技术自1985年问世以来，在国际上引起了极大的反响，并以惊人的速度广泛应用于生物科学的各个领域，成为当今分子生物学研究的一个热点。随着PCR技术研究的不断深入广泛，越来越多的研究趋向临床医学对疾病的直接诊断。临床结核菌PCR检测的关键是痰液的前处理及DNA模板的提取，由于痰液标本中有形成份复杂，给标本的处理及DNA模板的提取带来一定的困难。寻找一种直接快速的痰液标本的处理及DNA模板提取方法，是近年来临床检验一直有待于解决的问题。本文对痰液临床标本的前处理及DNA模板的提取方法进行了探讨，为PCR技术在结核…     

外周血中结核杆菌检测方法的探讨

通过对结核病人痰液与全血中TB检出的相关性进行研究，探讨L-型菌检出方法，为结核杆菌感染的早期实验室诊断提供科学依据。     

几种结核杆菌检测方法在结核病中的诊断价值

结核病是一种较严重的传染病,目前的疫情呈上升趋势.结核病的实验室诊断是发现传染源的主要途径和手段,是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据,也是考核疗效、评价治疗效果的可靠标准.痰中结核杆菌的检测方法常规采用痰涂片及痰培养.涂片虽简单易行,但阳性率低,培养虽为金标准,但周期太长,均难以满足临床需要.近年来,一些针对结核分支杆菌检测的新方法陆续报道.本文对聚合酶链反应（PCR）法、噬菌体裂解法、PCR-斑点杂交法,几种结核分支杆菌检测方法的应用进行评价.     

聚合酶链反应快速检测结核杆菌的临床应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)又称体外 DNA 扩增技术或体外核酸克隆技术,自1985年初 Saiki 建立以来,在短短的几年内获得了很大发展。Hance 最先把 PCR 技术应用到结核杆菌的诊断后,国内外相继研究应用。参考国外文献,我们设计合成了一对引物。特异性地扩增结核菌 B 蛋白基     

结核杆菌及其耐药性快速检测的研究进展

本文对近几年结核杆菌及其耐药性快速检测的研究进展作一综述.快速检测包括改良液体培养方法和基因扩增技术.耐药性的快速检测包括改良液体培养方法、噬菌体检测方法和基因检测方法.     

血清结核杆菌抗体检测在结核病的临床意义

目的：探讨血清结核杆菌抗体检测在住院患者结核病诊断中的临床价值。方法150例结核病患者,80例非结核病患者以及40例健康志愿者均应用以脂阿拉伯甘露糖（LAM）为抗原的 ELISA法进行抗体阳性率的检测。并应用痰涂片和PPD实验检查对150例结核患者进行检测。结果在150例肺结核患者中,结核杆菌抗体检测的阳性检出率为72．67％（109/150）,显著高于痰涂片的51．33％（77/150）和PPD实验的58．67％（88/150）,且差异均具有统计学意义（χ2＝14．49,6．52;P＜0．001,0．011）。结核病组抗体阳性率总数为72．67％（109/150）,显著高于非结核病组的17．50％（14/80）和健康对照组的10．00％（4/40）,且与二者比较,差异均具有统计学意义（χ2＝41．15,51．45;P＜0．001,0．001）。非结核疾病组与健康人群比较,抗体阳性率的差异无统计学意义（χ2＝1．18,P＝0．27）。结论结核抗体测定对结核病的阳性检出率较高,优于传统的痰涂片和PPD实验检测,临床上具有很大的应用价值。