STAT1对hsp90α基因表达的负调控作用

目的探讨转录因子STAT1对hsp90α基因表达的调控作用.方法将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞,利用竞争性RT-PCR定量检测其内源性hsp90α基因mRNA水平.共转染STAT1表达质粒和hsp90α基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因质粒,利用定量RT-PCR检测CAT报告基因转录水平.用Western印迹分析方法检测42℃1h热激前后Jurkat细胞中STAT1酪氨酸磷酸化状态,用电泳迁移率变更分析(EMSA)检测STAT1与hsp90α5′基因上游调控区中含有STAT1特异结合元件的双链寡核苷酸片段特异性结合程度.结果STAT1既可抑制Jurkat细胞hsp90α基因的表达,又能抑制hsp90α基因5′上游调控区驱动的CAT报告基因活性.热激以前Jurkat细胞中的STAT1701位酪氨酸已有一定程度的磷酸化,热激以后其磷酸化程度明显升高,而且STAT1与hsp90α基因5′上游调控区中的STAT1结合元件呈特异性结合.结论STAT1对hsp90α基因的表达具有负调控作用.     

STAT1对hsp90∝基因表达的负调控作用

目的 探讨转录因子STAT1对hsp90∝基因表达的调控作用。方法 将STAT1表达质粒转染Jurkat细胞,利用竞争性RT－PCR定量检测其内源性hsp90∝基因mRNA水平。共转染STAT1表达质粒和hsp90∝基因上游调控区不同长度的片段驱动的氯霉素乙酰转移酶（CAT）报告基因质粒,利用定量RT－PCR检测CAT报告基因转录水平,用Western印迹分析方法检测42℃ 1h热激前后Jurkat细胞中STAT1酪氨酸磷酸化状态,用电泳迁移率变更分析（EMSA）检测STAT1与hsp90∝5‘基因上游调控区中含有STAT1特异结合元件的双链寡核苷酸片段特异性结合程度。结果 STAT1既可抑制Jurkat细胞hsp90∝基因的表达,又能抑制hsp90∝基因5‘上游调控区驱动的CAT报告基因活性。热激以前Jurkat细胞中的STAT1 701位酪氨酸已有一定程度的磷酸化,热激以后其磷酸化程度明显升高,而且STAT1与hsp90∝基因5‘上游调控区中的STAT1结合元件呈特异性结合。结论 STAT1对hsp90∝基因的表达具有负调控作用。     

人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系

目的研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质，然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加，并与内源性的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达水平一致。结论首次证实人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控，为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型。     

热休克前后人hsp90β基因DNaseI高敏感位点的研究

１材料与方法１１材料限制性内切酶ＳａｃＩ、脱氧核糖核酸酶Ⅰ（ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅⅠ，ＤＮａｓｅⅠ）为德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品；Ｊｕｒｋａｔ细胞株、人ｈｓｐ９０β基因组ＤＮＡ１１０２ｂｐ／１７３ｂｐ片段由本...     

人hsp90β基因的诱导表达与染色质活化的关系

目的 研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法 采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质。然后采用狭缝杂交技术比较热诱地前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果 发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加,并与内源性的ｈｓｐ９０β     

入hsp90p基因的热诱导表达与染色质活化的关系

目的研究人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系.方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Jurkat细胞内的活性和非活性染色质,然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人hsp90β基因在活性和非活性染色质中的分布,并用Northern印迹杂交的方法研究热休克诱导下的hsp90β mRNA表达.结果发现热休克诱导使细胞内人hsp90β基因在活性染色质中的含量明显增加,并与内源性的hsp90βmRNA表达水平一致.结论首次证实人hsp90β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控,为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型.     

p53反式结合hsp90β基因

目的 探讨hsp90β基因中p53结合位点（＋31／＋60）是否参与p53与hsp90β基因的反式结合,以进一步揭示该位点在p53调节hsp90β基因转录中的作用。方法 将含有p53结合位点的hsp90β基因片段插入质粒pBS-SK,然后将综与突变引物和选择引物一起依次退火和延伸,经过两 轮细菌转化,酶切筛选出突变阳性粒后进行序列分析。采用电泳迁移率变更测定（EMSA）检测突变后基因片段与转染p53表达质粒的Jurkat细胞核抽提物的结合。结果 序列分析证实p53结合。结论 hsp90β基因中p53结合位点的核心序列在p53与hsp90β基因的反式结合中关键作用。     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路与白血病的关系

丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinases,MAPK)是细胞内的一种丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在受到刺激后经磷酸化而活化。其激活采用高度保守的三级激酶级联反应形式 :细胞外刺激通过某些环节激活丝裂原活化蛋白激酶的激酶的激酶 (MAPkinasekinasekinase ,MAPKKK/MKKK)     

BTB/POZ结构域蛋白GRP对热休克中hsp90α基因表达的增强作用

目的探讨人BTB/POZ结构域GAGA元件结合相关蛋白(GRP)在hsp90α基因表达中的作用.方法用正义或反义GRP真核表达质粒或空载体,分别与装有hsp90α基因启动子(-1756- 37)的pREP4 episomal vector质粒和对照质粒pMCAT共转染Jurkat细胞,提取总RNA,用竞争性半定量RT-PCR测定hsp90α-氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因相对启动子活性.结果热休克时,GRP明显促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90α-CAT报告基因启动子活性.结论GRP可能通过参与染色质动态调整促进pREP4 episomal veetor质粒上hsp90α CAT的表达.     

BTB／POZ结构域蛋白GRP对热休克中hsp90a基因表达的增强作用

目的 探讨人BTB／POZ结构域GAGA元件结合相关蛋白(GRP)在hsp90a基因表达中的作用。方法 用正义或反义GRP真核表达质粒或空载体,分别与装有hsp90a基因启动子(-1756- 37)的pREP4 episomal vector质粒和对照质粒pMCAT共转染Jurkat细胞,提取总RNA,用竞争性半定量RT-PCR测定hsp90a-氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因相对启动子活性。结果 热休克时,GRP明显促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90a-CAT报告基因启动子活性。结论 GRP可能通过参与染色质动态调整促进pREP4 episomal vector质粒上hsp90a CAT的表达。     

hsp90α基因在染色质模板上的热诱导转录

目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录.方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因的转录活性.结果优化了热休克处理的HeLa全细胞抽提物在基因转录活性研究中的实验条件:用体外重组表达的染色质组装相关因子与核心组蛋白在体外与hsp90α基因启动子质粒组装成染色质;证明染色质模板的hsp90α基因体外转录水平低于裸露DNA模板,而其热诱导效率显著高于对照组.结论在体外组装的染色质模板具有阻遏hsp90α基因转录的活性,但明显提高了该基因的热诱导表达效率.     

维生素D3,9—顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因？…

目的 研究维生素Ｄ３（ＶＤ３）、９－顺式维甲酸（９－ｓｉｃ－ＲＡ）及其相应核受体对ｈｓｐ９０β基因表达的调控作用。方法 采用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ方法将人ｈｓｐ９０β基因调控片段（－１ ０３９ ｂｐ／＋１ ５３１ ｂｐ）介导的荧光素酶（Ｌｕｃ）报告基因质粒β１．１１转染Ｊｕｒｋａｔ细胞,并用ＶＤ３和９－ｃｉｓ－ＲＡ分别或同时刺激细胞,或将质粒β１．１１及野生型维生素Ｄ３受体（ＶＤＲ）或／和维甲酸     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达？…

目的 研究丝裂原活化蛋白激酶－（ＭＡＰＫ）信号传导途径对Ｊｕｒｋａｔ细胞中热休克蛋白９０基因（ｈｓｐ９０）表达的影响。方法 用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹－增强型化学光系统（ＥＣＬ）检测热休克前后Ｊｕｋａｔ细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）、ｐ３８激酶及ｃ－Ｊｕｎ Ｎ－末端蛋白激酶（ＪＮＫ）的底物ｃ－Ｊｕｎ的磷酸化程度;分别用ＪＮＤ１的显性负突变质粒ＤＮ－ＪＮＫ１、ｐ３８ｃＤＮＡ反应表达质粒ａｎｔｉ－ｐ３８及     

热休克蛋白HSP90β在人胃癌组织及耐药细胞系中的表达

了解热休克蛋白ＨＳＰ９０β在人胃癌组织及多药耐药细胞系中的表达。方法ＳＡＢＣ免疫组化法：７０例胃癌组织，其中高分化腺癌１３例，中分化腺癌３２例，低分化腺癌１８例，粘液癌７例（包括粘膜癌和印戒细胞癌）。正常胃粘膜１７例，胃炎２３例及癌旁组织３５例作为对照。组织切片用正常羊血清封闭后，加入一抗（山羊抗人ＨＳＰ９０β多克隆抗体１：２００），４℃冰箱过夜；加二抗（生物素化兔抗山羊ＩｇＧ１：２００）３７℃３     

热休克蛋白与热休克反应(-)

热休克蛋白是生物体在不良环境刺激后产生的一种特殊蛋白质,称为应激蛋白或分子伴侣,其中HSP70具有重要的细胞作用,如抗逆性,分子伴侣及抗氧化.各种应激因子引起的应激反应被称为热休克反应,是一种以基因表达和调控变化为主的细胞应激反应.本文重点介绍HSP70的分类、结构、基因调控及功能.     

cAMP信号途径和基因表达调控

环腺苷酸(cAMP)是细胞内广泛存在的第二信使,其含量取决于影响其合成与降解的多种酶与蛋白质的活性.cAMP途径可通过调控转录因子来调节细胞的增殖、分化和凋亡.本文就cAMP信号途径以及该途径所影响的部分转录因子加以综述.     

cAMP信号途径和基因表达调控

环腺苷酸(cAMP)是细胞内广泛存在的第二信使，其含量取决于影响其合成与降解的多种酶与蚩白质的活性。cAMP途径可通过调控转录因子来调节细胞的增殖、分化和凋亡。本文就cAMP信号途径以及该途径所影响的部分转录因子加以综述。