乙型肝炎患者血清HBV DNA定量检测

近年来 ,定量ＰＣＲ检测技术不仅用于科研领域 ,也成为临床检验重要的检测手段。现将 16 9例乙型肝炎(以下简称乙肝 )患者的血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ定量检测结果 ,结合临床资料 ,报告如下。1　材料和方法1.1　检测对象　 2 0 0 0年 10月至2 0 0 1年 2月 ,在我院住院治疗的各型乙肝患者共 16 9例 ,其中男 118例 ,女5 1例 ,平均年龄 37.3岁。按 2 0 0 0年全国病毒性肝炎治疗方案的诊断标准分型 ,急性肝炎 14例 ,慢性肝炎轻度47例 ,慢性肝炎中度 6 4例 ,慢性肝炎重度 16例 ,重型肝炎 8例 ,肝硬化 2 0例。1.2　检测方法　 16 9例乙肝患者均作Ｈ…     

荧光定量PCR检测慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA及其意义

随着医学分子生物学的发展,荧光定量(FQ)-PCR技术已逐渐应用于临床实验诊断,应用FQ-PCR检测慢性乙型肝炎患者血清中的HBV-DNA,从方法学上提高了检测的灵敏度,通过观察HBV-DNA动态变化对乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择以及抗病毒疗效观察均有很重要的临床指导意义。     

HBV-DNA定量检测的临床应用

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应方法定量检测乙肝病毒核酸的临床应用价值。方法　荧光定量聚合酶链反应方法定量检测肝炎病人血清标本的HBV DNA。结果　 2 85例乙肝患者HBV DNA定量范围为 1.6 2× 10 3～9.4 2× 10 1 0 ,呈现不同的血清标志模式。HBsAg“ ”者 2 75例 (96 .5 % ) ,仅HBcAb“ ”或HBV M全阴者各 5例 (分别为 1.75 % )。结论　FQ PCR是了解HBV在体内复制和判断疗效的有利手段。     

HBV-M与HBV-DNA的定量关系探讨

目的:探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙型肝炎患者血清免疫标志物(HBV-M)与实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)含量之间的关系。方法:采用FQ-PCR技术检测239例患者血清中HBV-DNA含量,同时用TRFIA检测乙型肝炎病毒五项标志物及含量,并对各项检测结果进行统计学分析,同时以HBV-DNA拷贝数的对数为横坐标,HBV-M含量的对数为纵坐标,求线性回归及相关系数(r)。结果:239例乙肝患者血清中,HBV-DNA的阳性率与HBV-M不同组合之间有差异,HBsAg+/HBeAg+/HBcAb+组HBV-DNA的阳性检出率明显高于其它组,达96.33%(105/109),HBsAg+/HBeAb+/HBcAb+组为43.90%(54/123),HBsAg+/HBcAb+组为42.86%(3/7)。并且随HBsAg、HBeAg含量增高,HBV-DNA含量也增高,存在一定的相关性(r=0.364,r=0.536)。抗-HBs,抗-HBe及抗-HBc与HBV-DNA之间,无明显相关性。结论:HBeAg阳性是病毒复制的重要指标;抗-HBe的出现不能作为HBV复制停止的指标;HBsAg、HBeAg浓度与HBV-DNA之间有良好的相关性,HBsAg和HBeAg浓度变化可以作为临床评价乙肝病毒复制程度和抗病毒疗效的参考指标;联合采用TRFIA检测HBV-M与FQ-PCR定量检测HBV-DNA能更早的诊断HBV感染,了解病毒的复制情况和观察疗效及判断预后。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与血清HBV标志物关系探讨

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA与血清HBV标志物(HBV-M)之间的关系。方法:对801例患者采用FQ-PCR法测HBV-DNA含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-M。结果:HBV-DNA在各种模式的HBV标志物中均可检出。HBsAg+、HBeAg+、抗HBc+组患者血清中HBV-DNA检出率为97.6%,且多处在高拷贝HBV-DNA;HBsAg+、抗HBe+、抗HBc+组患者血清HBV-DNA检出率为47.12%,多数是低拷贝HBV-DNA;另发现抗HBs+组阳性率为13.33%;全阴组中阳性率为11.11%。不同HBV-M患者血清HBV-DNA的检出率差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.001)。结论:FQ-PCR法检测HBV-DNA对乙型肝炎的诊断、传染性的判断有临床实用意义,可反映HBV真实感染的各种复制状态,对于乙肝的临床诊断、治疗方案的选择和预后具有重要的指导意义。     

肝癌患者HBV血清学标志和HBV-DNA的关系

目的 为了探讨肝癌患血清中HBV标志物与HBV－DNA之间的相关性。方法 运用酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应同时检测血清中HBV标志物和HBV－DNA。结果 在427例肝癌患的血清中，HBV－M（＋）为74．0％，HBV－DNA（＋）为44．0％，与正常对照组差异非常显。结论 乙型肝炎病毒的感染与复制仍是肝癌的主要致病因素。     

乙型肝炎标志物定量检测结果与HBV-DNA含量相关性分析

目的 :研究乙型肝炎病毒标志物定量检测结果与 HBV- DNA含量的临床关系。方法 :采用时间分辨荧光免疫定量检测 (TRFIA)和荧光定量 - PCR技术 (FQ- PCR)对 341例血清标本的乙型肝炎标志物 (HBV- M)和 HBV-DNA含量进行检测。结果 :在 16 8例 HBs Ag/ HBe Ag/ Hbc Ab( ) ,10 1例 HBs Ag/ HBe Ab/ HBc Ab( ) ,72例 HBs Ag/HBc Ab( )阳性的三个组别中 HBV- DNA的平均含量分别为 7.4 0、4 .4 5、5 .0 2。把 HBs Ag和 HBe Ag按浓度的不同分为高中低三组 ,其 HBV- DNA的含量分别为 7.12 ,5 .2 3,4 .0 3,7.74 ,6 .72 ,5 .0 5。结论 :HBV- DNA的含量与 HBs Ag和HBe Ag的浓度存在一定的相关性 ,综合分析乙型肝炎标志物和 HBV- DNA的含量对疾病的诊断、治疗以及疗效的观察有较大的指导意义     

HBV-DNA检测的临床探讨

目的 :评价 HBV- DNA在诊治乙型肝炎中的临床价值。方法 :治疗前后检测 12 6例慢性乙型肝炎患者血清中 HBs Ag、HBV- DNA、AL T。结果 :12 6例慢性乙型肝炎病人经治疗 1年后 ,血清中的 AL T异常率由治疗前的 95 .2 3%下降为 30 .95 % (P<0 .0 0 1) ;HBs Ag阳性率由治疗前的 10 0 %下降为 6 9.84% (P <0 .0 0 1) ;而血清中 HBV- DNA的阳性率由治疗前的 10 0 %仅下降为 93.6 5 % (P >0 .0 5 )。结论 :通过检测乙型肝炎患者血清中的 HBV- DNA,可以使 HBV标志物的检测得到补充和完善 ,并对监测乙型肝炎病毒感染的病情发展及抗 HBV复制药物的治疗具有十分重要的意义。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量与e抗原关系

分别用定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）法和酶标法（ＥＬＩＳＡ）检测６４例慢性乙型肝炎患血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量与乙肝病毒血清标记物（ＨＢＶ－Ｍ）。结果显示，ｅ抗原阳性组与ｅ抗原阴性血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量分别为１０＾７．９１±４．１６ｃｏｐｙ／ｍｌ和１０＾５．８２±３．２８ｃｏｐｙ／ｍｌ，二组相比具有显性差异（Ｐ〈０．０５），此结果进一步证实，ｅ抗原阳性是乙肝病毒体内复制的指标，但同时也有３２．９％（２     

HBV-DNA与其病毒免疫标志物的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV-DNA与病毒免疫标志物的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)对568份HBV感染者血清中HBV-DNA含量进行检测,同时用ELISA法检测其HBV免疫标志物。结果:HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性组HBV-DNA阳性率约为98.9%;HBsAg、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为65.4%;HBsAb、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为13.9%;三组间HBV-DNA阳性率有明显差异(P<0.01)。HBeAg阳性标本中HBV-DNA阳性率最高,达92.0%;HBsAg与HBV-DNA的符合率最高,为77.6%。结论:检测HBV-DNA含量结合血清病毒标志物对乙型肝炎的临床诊断治疗以及病情判断有重要意义。     

乙型肝炎病毒免疫学标志物与HBV-DNA的定量分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)二对半抗原抗体系统、前S1蛋白(Pre-S1)和HBV脱氧核糖核酸(HBV-DNA)之间的关系.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测209份HBV感染者血清的HBV二对半抗原抗体系统,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV DNA.结果:HBV-DNA滴度小于每毫升1×105copies者35份(16.7%),HBV-DNA滴度在1×105～1×107copies者88份(42.1%),HBV DNA滴度大于1×107copies者86份(41.1%).HBV-DNA滴度与HBeAg阳性率、Pre-S1阳性率呈正相关,相关系数分别为0.998(P=0.039)和0.882(P=0.024).结论:HBeAg和Pre-S1也是反应HBV复制的指标.对HBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者检测Pre-S1,可帮助判断HBV复制情况.     

HBV感染者血清标志物模式与HBVDNA的水平

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清标志物模式与HBVDNA水平的关系。方法：采用时间分辨荧光免疫定量分析法（TRFIA）和荧光定量PCR技术（FQ—PCR）分别检测542例乙型肝炎感染者血清HBVM和HBVDNA。结果：542例乙型肝炎感染者血清标本HBVM模式有10种,HBVDNA检出总阳性率83．39％（452／542）,各种模式HBVDNA的阳性率存在显著差异性,高拷贝数的HBVDNA主要存在于HBeAg阳性的各种模式中,与其它模式比较有显著差异（P〈0．05）。结论：动态监测HBVM和HBVDNA含量有利于对乙肝患者的诊断及疗效提供客观依据。     

Ad-1.2乙型肝炎病毒感染HepG2细胞后HBV cccDNA的动态分析

目的 研究Ad-1.2 HBV感染HepG2细胞后HBV的复制情况.方法 携带1.2拷贝FIBV DNA的腺病毒体外感染人肝癌细胞株HepG2,ELISA法检测培养上清中HBsAg、HBeAg的动态表达;利用质粒抽提试剂盒提取细胞内cccDNA,经绿豆核酸酶处理后,用特异引物进行实时定量PCR检测.结果 Ad-1.2HBV感染HepG2细胞后,可有效表达HBsAg及HBeAg;感染后第1天即可在细胞内检出cccDNA,第4天达到高峰.结论 Ad-1.2HBV感染细胞,可作为抗病毒药物筛选和评价的模型.     

乙型肝炎血清学标志物与HBV-DNA含量关系的探讨

目的:为了进一步探讨乙型肝炎患者血清中HBV-DNA含量与HBV血清学标志物之间的关系,了解荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒的应用价值。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测510例来自我院门诊就诊者和住院患者血清标本中的特异性抗原抗体,并同时应用荧光定量PCR分析系统测定血清标本中HBV-DNA的含量进行分析。结果:经ELISA法与FQ-PCR法检测的510例血清标本中,51例"大三阳"(HBsAg+HBeAg+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出数均呈阳性,阳性率为100%,其HBV-DNA的拷贝数范围为105~109/ml;76例"小三阳"(HBsAg+HBeAb+HBcAb)的血清标本,其HBV-DNA检出的阳性率为47.4%,HBV-DNA的拷贝数范围为104~107/ml。结论:HBV-DNA是乙型肝炎病毒感染和复制的特异性指标,应用FQ-PCR技术检测乙型肝炎病毒,具有较高的灵敏度和特异性,其操作简便,定量准确,结果可靠,它比HBV血清学标志物更能反映乙型肝炎病毒在体内的存在和真实复制状况,在HBV-DNA感染诊断,特别是药物疗效的观察中,具有良好的应用价值。因此,HBV-DNA与血清学标志物的相互关系是本文研究的课题。     

乙型肝炎患者血清中分泌型IgA水平与HBV DNA含量的关系

湖北省鹤峰县人民医院检验科,鹤峰 445800目的 研究乙型肝炎患者血清中分泌型IgA(SIgA)水平与乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量的关系,为临床提供一个新的评价HBV复制状态及肝细胞损伤的指标。方法 100份经ELISA检测并确诊为乙型肝炎的患者血清用荧光定量PCR检测HBV DNA的拷贝数,用ELISA并经酶标仪定量其SIgA的量。结果 SIgA的含量与HBVDNA的拷贝数的对数呈正相关(r=0.69,P<0.01),在HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )组和HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )组中SIgA含量差异无显著性意义(P>0.05),而HBV DNA拷贝数前者明显高于后者(P<0.01)。结论 乙型肝炎患者血清SIgA的含量在评价HBV的传染性及肝细胞损伤程度方面比乙型肝炎血清学标志物(HBV-M)更灵敏、准确。     

多聚酶链反应检测乙型肝炎后肝硬化患者血清HBV－DNA及其意义

为观察乙型肝炎后肝硬化患者体内ＨＢＶ的复制状况，为抗病毒治疗提供依据，以减少盲目用药。应用多聚酶链反应，对２６例乙型肝炎后肝硬化患者检测了血清ＨＢＶ－ＤＮＡ存在状态。结果显示，活动性乙型肝炎后肝硬化９例，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性８例，阳性率８８．８８％，静止性乙型肝炎后肝硬化１７例，ＨＢＶ－ＤＮＡ脑性６例，阳性率３５．２９％。两组比较。血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率差异显著（Ｐ＜０．０１）。结果表明，应重点对活动性乙型肝炎后肝硬化患者进行抗病毒治疗。     

应用竞争性PCR方法探讨血清HBV DNA浓度与HBV免疫标志的关系

目的：探讨血清ＨＢＶＤＮＡ浓度与ＨＢＶ免疫学标志的关系。方法：应用竞争性ＰＣＲ方法，检测ＨＢＶ免疫标志不同背景的原发性肝癌（ｎ＝３８），肝硬化（ｎ＝３６），慢性肝炎（ｎ＝５１）共１２５例的血清ＨＢＶＤＮＡ浓度，结果：ＨＢＶＤＮＡ浓度与血清ＨＢＶ免疫标志有关，而与慢性肝病类型无关，五项免疫标志均阴性或抗－ＨＢｓ阳性的慢性肝病患者中，约有三分之一病例存在低水平ＨＢＶ感染，ＨＢｅＡｇ阳性病例的ＨＢＶＤＮ     

HBV—DNA不同模板制备进行多聚酶链基因扩增

本文采用 4.2mol/L异硫氰酸胍、25mmol/L柠檬酸钠、0.1mol/L2一巯基乙醇,0.5%(W/V)十二烷基肌氨酸钠作为裂解液进行一步法程序式抽提血清标本HBV—DNA模板用于多聚酶链基因扩增.该法与常规DSD抽提法及微量直接法进行比较,具有方法简单、稳定、不易污染且敏感性高.抽提过程可在1个小时内完成,经酶切及a~(32)P标记探针放射自显影鉴定PCR产物具良好特异性,该法尤其适应于大量临床标本的检测,值得推广使用.