PCR技术和ELISA法诊断HCMV宫内感染的敏感性与可靠性比较

用聚合酶链反应(PCR)技术.对78例妊娠早期孕妇进行外周血、尿中人巨细胞病毒(HCMV)DNA测定;用酶联免疫吸附法对78例妊娠早期孕妇进行外周血中人巨细胞病毒IgG、IgM测定.结果:PCR技术中外周血阳性率10%、尿中阳性率11.4%;ELISA反应中血IgG阳性率1.1%、IgM阳性率1.1%.统计结果表明在同一孕妇中HCMV阳性检出率PCR技术明显高于ELISA法,在PCR技术中,尿的阳性率又高于血的阳性率,这进一步证实了PCR技术是诊断宫内感染较理想的手段.     

自然流产妇女巨细胞病毒近期感染的检测

目的为了解自然流产妇女人巨细胞病毒(HCMV)近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对1587名自然流产妇女和111名孕前检查的健康育龄妇女静脉血标本进行了HCMV—IgM检测。结果在1587名上述自然流产妇女中检测出HCMV—IgM阳性标本41例，阳性率为2．58％，111例健康育龄妇女中未检测到HCMV—IgM阳性标本。结论在自然流产妇女中巨细胞病毒有较高的近期感染率。     

HCMVpp65抗原、HCMV mRNA和IgM抗体检测在诊断HCMV活动性感染中的比较

目的比较人巨细胞病毒（HCMV）pp65抗原、HCMV mRNA和血清HCMV—IgM抗体检测3种方法在诊断HCMV活动性感染中的实用意义。方法采集医院TORCH检查HCMV—IgM阳性的病人外周血（60份）。将标本分2份2ml和3ml,别用于HCMV mRNA和pp65检测。将三者结果进行比较。结果pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的阳性符合率为81．67％。与HCMV mRNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为81．67％,81．81％和81．63％。而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关。结论pp65抗原血症反映该病毒活动状况,可监测HCMV活动性感染,联合HCMV—IgM的检测可以提高临床的诊断率并可用于指导临床用药及监测药物疗效。     

监测HCMV活动性感染的一种新方法-HCMV PP65抗原血症检测

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染对人类的影响甚广 ,尤其是对免疫功能低下者 ,往往是致死的[1] 。随着移植学的长足进步 ,严重困扰移植术后生存率的棘手问题之一仍是移植受者ＨＣＭＶ的原发或潜伏—再激活感染[2 ] 。ＨＣＭＶ感染对宿主有两方负效应 ,即病毒本身导致的细胞损伤和病毒诱导的免疫病理损伤外 ,还极易激发宿主受损于细菌、真菌、原虫以及其他病毒的双重感染。　　ＨＣＭＶＰＰ6 5抗原血症检测能早期、快速监测ＨＣＭＶ的激活 ,适时以予抗病毒药物治疗 ,对免疫功能受抑的宿主来说是至关重要的。1　ＨＣＭＶＰＰ6 5抗原血症检测方法…     

巨细胞病毒感染的致病机制初探

目的 探讨人巨细胞(HCMV)的致病机制。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对36例早孕人工流产妇女进行了HCMV抗体IgG、IgM的检测，对抗体阳性者的绒毛及蜕膜进行了HCMV的PCR检测，对DNA阳性者进行了绒毛蜕膜的病理切片分析。结果 HCMV免疫抗体阳性的31例患者仅有10例DNA阳性者绒毛蜕膜均发生了明显的病理变化，绒毛细胞滋养层增生过长，蜕膜变性坏死，伴淋巴细胞浸润。结论 绒毛蜕膜的病理改变可能参与了HCMV的致病机制。     

HCMV抗原（pp65）血症检测技术诊断活动性HCMV感染

人类巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）感染在人群中广泛存在，自从１９８８年ＨＣＭＶ抗原血症检测技术建立以来，该技术发展迅速，检测外周血ＰＭＮＬｓ中的ＨＣＭＶ晚期结构抗原ｐｐ６５是早期、快速、准确、定量诊断活动性ＨＣＭＶ感染的主要手段。本综述主要涉及ＨＣＭＶ抗原（ｐｐ６５）血症检测技术及其临床意义的研究近况。     

产妇人巨细胞病毒激活感染的危险因素研究

本研究应用间接ELISA法检测了142例孕妇血清中HCMV特异性抗体.结果发现沈阳地区孕妇人巨细胞病毒IgG、IgM抗体阳性率分别为100%和15.5%,提示孕妇HCMV既住感染极为普遍.经流行病学分析HCMV激活感染与有无人工流产史有关,孕妇HCMV-IgM抗体的阳性率分别为24.53(12/49),10.8%(10/93),x2=4.63,P<0.05,RR=2.28).不同职业孕妇HCMV激活感染率的差异有统计学意义(x2=6.68,df=3,P<0.05)),其中农民孕妇的激活感染率最高为37.5%(6/16).孕妇的不同职业、人工流产史可能是HCMV激活感染的危险因素.另外,孕妇的年龄、文化程度、怀孕次数病理性流产史等因素对HCMV激活感染有一定作用.     

异常孕产史妇女巨细胞病毒近期感染的检测分析

目的为了解自然流产、死胎和胎儿畸形妇女人巨细胞病毒（HCMV）近期感染状况。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对1660例自然流产、61例死胎、33例胎儿畸形和120名孕前检查的健康妇女的静脉血标本进行了HC—MV—IgM检测。结果在自然流产、死胎、胎儿畸形妇女中，分别检测出HCMV～IgM阳性标本42例、4例和6例，阳性率分别为2．53％（42／1660）、6．56％（4／61）和18．18（6／33）；在120例健康妇女中未检测出HCMV—IgM阳性标本。结论巨细胞病毒近期感染率，在上述各组妇女中，以胎儿畸形组最高，死胎组次之。     

5628名孕妇巨细胞病毒近期感染检测分析

目的为了解孕妇人巨细胞病毒(HCMV)近期感染状况.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对5628名孕妇和81名孕前检查的健康妇女静脉血标本进行了HCMV-IgM检测.结果在5628名上述孕妇中检测出HCMV-IgM阳性标本66例,阳性率为1.17%,81例健康妇女中未检测到HCMV-IgM阳性标本.结论在孕妇中巨细胞病毒有一定的近期感染率.     

用Dot－ELISA检测孕妇巨细胞病毒感染

建立了快速检测孕妇血清内的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＩｇＭ、ＩｇＡ的ＤＯｔ－ＥＬＩＳＡ技术，用该法检测１２０例孕妇血清，ＨＣＭＶ－ＩｇＭ、ＩｇＡ的阳性率分别为１２．５０％和１４．１７％；总检出率为２１．６７％，显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。与ＥＬＩＳＡ相比，灵敏性为９６．３０％，特异性１００％。两者对ＨＣＭＶ－ＩｇＭ、ＩｇＡ的检出率无显著性差别（Ｐ＞０．０５），但较ＥＬＩＳＡ更为快速，简便，经济，适于推广普及。     

氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立氯霉素乙酰基转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-2T中，在大肠埃希菌DH5α中诱导表达；以纯化的融合蛋白GST-CAT为抗原免疫实验用兔，得到的CAT抗血清进行生物素标记，并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法，构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒，体外瞬时转染真核细胞，提取胞质蛋白，以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS-PAGE显示表达的GST-CAT融合蛋白相对分子质量约为54000；制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白；在不同启动子及调节序列的控制下，利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导2-8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性，以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响，使CAT作为报道基因的研究更为简单化。     

肝炎综合征婴儿HCMV-IgM定量检测的临床价值

目的：探讨检测肝炎综合征婴儿血清中人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）IgM含量在诊断和动态监测婴儿HCMV感染中的临床意义。方法：ELISA检测了97例肝炎综合征婴儿（婴肝患儿）血清HCMV-IgM含量,并对其中48例HCMV-IgM阳性患儿在治疗过程中进行了血清HCMV-IgM定量和肝功能的动态监测。结果：97例婴肝患儿血清HCMV-IgM阳性率为49.48%（48/97）,HCMV肝炎患儿治疗前后血清HCMV-IgM定量检测均值分别为（27.7±3.92）、（12.84±2.87）IU/ml,HCMV肝炎患儿治疗后血清HCMV-IgM定量检测值显著下降（t=19.35,P〈0.05）,并与肝脏转氨酶及总胆红素的下降同步。结论：HCMV感染为婴肝患儿的主要病因,血清HCMV-IgM定量检测有助于婴肝患儿的诊断和婴儿巨细胞病毒性肝炎疗效观察。     

涎腺导管上皮细胞体外感染HCMV模型的建立

目的　建立涎腺导管上皮细胞体外人巨细胞病毒 (HCMV)感染模型。方法　用免疫细胞化学方法初步鉴定涎腺导管上皮细胞 (HSG)角蛋白 8(cytokeratin 8,CK8)和角蛋白 18(CK18)抗原的表达 ;观察HCMV感染HSG后导致的病变 ;观察宿主细胞中病毒颗粒的超微结构 ;用RT PCR及nest RT PCR检测HCMVIE1(即刻早期 1) /IE2基因的转录 ;用免疫细胞化学法检测HCMV感染细胞中IE1/IE2蛋白的表达。结果　呈上皮样贴壁生长的HSGCK8和CK18阳性表达 ;HCMV感染后 12小时 ( 12h .p .i.)即可见细胞病变 ,6 0h .p .i.CPE已极为明显 ,72h .p .i.绝大部分细胞出现病变。感染的HSG细胞在细胞核、内质网、细胞质中出现数量不等的 3种不同形态的疱疹病毒样颗粒。宿主细胞中可检测到HCMVIE1/IE2的转录以及IE1/IE2蛋白的表达。结论　成功建立了涎腺导管上皮细胞体外HCMV感染模型     

成都地区4274例妊娠妇女TORCH感染的调查研究

目的 对妊娠妇女TORCH感染进行调查研究。方法 应用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4274例妇女血清TORCH特异性抗体IgM，其中孕妇3872例和异常妊娠史妇女402例。结果 检出弓形体(TOX)活动感染率孕妇为2．75％，异常妊娠妇女为5．0％；风疹病毒(RV)活动性感染率妇女为1．49％，异常妊娠为2．75％；巨细胞病毒(CMV)活动感染率妇女为3．78％，异常妊娠妇女为6．75％；单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV)活动感染率孕妇为1．07％，异常妊娠妇女为3．0％.结论 异常妊娠史等产科病理病因与TORCH系列病原体感染有关，孕产妇仍为TORCH易感人群需要密切监视检查。本文就TORCH感染的临床作了阐述。以引起人们对TORCH感染的重视并指导高龄妇女如何预防TORCH感染做好优生优育。     

染色质免疫沉淀技术在人巨细胞病毒即刻早期蛋白研究中的应用

染色质免疫沉淀（ChIP）技术是目前研究体内DNA与蛋白质相互作用的最好方法。该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。在研究人巨细胞病毒及其他病毒的基因调控和病毒蛋白与宿主细胞DNA相互作用方面，该技术亦有很好的应用前景。利用该技术研究表明，人巨细胞病毒IE1—72和IE2—86蛋白对组蛋白乙酰化的影响可能是调控病毒转录的重要机制之一。     

分泌抗CRF单克隆抗体杂交瘤的建立及初步鉴定

采用淋巴细胞杂交瘤技术，获得了５株稳定分泌抗促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）的ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。５株单克隆抗体均为ＩｇＧ２，且均识别ＣＲＦ羧基端。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ、ＦＳＨ、ＮＰＹ、ＬＨ反应。５株杂支瘤腹水效价在１０－４～１０－５，亲和常数在５×１０７ｍｏｌ／Ｌ－１～１×１０９ｍｏｌ／Ｌ－１。     

基于N-ELISA的呼吸道合胞病毒快速中和抗体检测方法的建立

目的制备针对呼吸道合胞病毒(RSV) N蛋白的兔多克隆抗体, 以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法构建pET30a-N质粒, 表达纯化N蛋白, 免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与100半数组织培养感染剂量(TCID50)/孔的RSV中和, 接种Hep-2细胞培养, 80%丙酮固定细胞, ELISA方法检测感染细胞中病毒的N蛋白, 当每孔的吸光度值低于临界值时, 视为中和试验阳性孔, 阳性孔血清的最高稀释度为该血清的中和抗体滴度。优化抗体稀释度、检测时间、细胞密度及中和时间, 建立基于N-ELISA的中和抗体检测方法, 对建立的实验方法进行细胞代次、边缘孔效应、准确性、重复性以及精密度验证, 初步应用于人RSV IgG阳性血清检测, 分析与微量中和法的相关性。结果成功构建出pET30a-N质粒, 表达纯化的N蛋白纯度较高, 特异性良好;三免后兔血清效价为1∶51 200, 可特异性结合RSV;制备的抗RSV N兔多抗的效价为1∶51 200, 特异性良好, 建立的快速中和抗体检测方法在4 d就可检测, 中和时间可缩短...     

应用PCR技术对孕妇HCMV感染的前瞻性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６ 例孕妇尿中ＨＣＭＶ 进行检测,并追踪观察１１４ 例新生儿脐血中ＨＣＭＶ 垂直传播情况。结果表明：１１ 例孕妇尿ＨＣＭＶＤＮＡ 检测阳性,孕期感染率为７－０５％ ,有异常妊娠史孕妇感染率（１４－７１ ％ ）较正常孕妇（４－９２ ％） 明显升高。９ 例ＨＣＭＶ 阳性孕妇有４ 例观察新生儿脐血ＨＣＭＶＤＮＡ 阳性,占４４％ ,而ＨＣＭＶＤＮＡ阴性孕妇无１ 例新生儿脐血出现阳性结果。我们认为ＰＣＲ方法是检测ＨＣＭＶ宫内感染的可靠而灵敏的指标,对ＨＣＭＶＤＮＡ阳性的孕妇应进一步检查羊水,如羊水ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性,应终止妊娠。     

巨细胞病毒宫内感染的诊断及对胎儿的影响

采用地高辛探针斑点杂交技术和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５１例人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）血清学抗体ＩｇＭ阳性孕妇的羊水、脐血和产后两周内的新生儿尿液，进行ＨＣＭＶＤＮＡ检测。同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测脐血、羊水中ＨＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果，地高辛探针斑点杂交检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２１．５７％，脐血３３．３３％，新生儿尿液２７．４５％。ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率分别为：羊水２９．４１％，脐血４３．１４％，新生儿尿液３Ｓ，２９％。羊水ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为１１．７６％，脐血ＨＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率为２３．５３％。脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性的新生儿平均出生体重明显低于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿，而脐血ＨＤＷ－ＤＮＡ阳性的新生儿肝功能异常、血小板减少以及低Ａｐｇａｒ评分的发生率明显高于脐血ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的新生儿。结果表明：采用ＥＲ技术检测羊水、脐血或产后两周内新生儿尿液ＨＣＭＶＤＮＡ有助于ＨＣＭＶ官内感染的早期诊断，便于临床早期干预，ＨＣＭＶ官内感染严重影响胎儿的生长发育，可造成胎儿肝功能异常、血小板减少和新生儿窒息的发生。     

乌鲁木齐地区孕妇TORCH感染的检测分析

应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法及聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法。对孕妇４１０８人次及５８８人次，进行了弓形体（ＴＯ）风疹病毒（ＲＵＶ），巨细胞病毒（ＣＭＶ）血清ＩｇＭ及血清ＤＮＡ的检测。结果：ＥＬＩＳＡ法（ＴＯ、ＲＵＶ、ＣＭＶ）阳性检出率分别为２．２１％、２．４４％、２．５４％。ＰＣＲ法（ＴＯ、ＲＵＶ、ＣＭＶ）阳性检出率分别为２．１９％、５％、５．５％。两种方法的阳性检出率Ｐ值＜０．０１有非常显著性差异。并对检测结果进行初步分析。