应用FQ-PCR技术检测乌鲁木齐地区性病病原体的流行病学分析

目的掌握本地区性病病原体的现行感染水平及发展规律,为控制该疾病的传播和流行提供科学依据.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应技术,定量测定病原体基因.结果连续4年对引起性病的5种主要病原体UU、HPV、HSV、NG及CT进行了检测,结果显示①阳性率分别为45.84%、29.68%、21.45%、9.09%和7.10%,与国内已有文献比较,本组UU感染率最高,而NG、CT却较低.②UU、NG及CT在女性中的阳性率高于男性,但HPV和HSV却低于男性,其性别差异与通常的认识既相一致(如UU、CT),也有不同(如HPV、HSV、NG).③4年间UU、HPV和NG感染逐年升高,CT感染逐年下降,流行趋势与国内外相关报道存在较大差异.结论乌鲁木齐性病病原体的感染现状显示明显的地区特点,深入研究并从流行病学角度分析该地性病病原体的发生、发展趋势,对加强性病防治工作具有重要意义.     

实时荧光定量RT-PCR法定量检测手足口病病原体的探讨

目的了解北京市门头沟区手足口病患儿感染病毒的型别,探索用荧光定量RT—PCR法对手足口病患者咽拭子标本中肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A16（CoxA16）型病毒载量进行定量检测的可行性。方法采用实时荧光RT—PCR体外扩增法对81例手足口病患儿咽拭子标本提取的RNA进行检测。结果28例手足口病患者体内CoxA16病毒载量〉10^3 copies·ml-1。实时荧光定量RT—PCR法构建的标准曲线显示,样本阈值环数（Ct）值与病毒拷贝数的对数（10g10）之间的相关系数为0．9998,相关性良好。4例手足口病患者咽拭子标本中EV71型病毒载量〉10^3 copies·ml-1。实时荧光定量RT-PCR法标准曲线显示,Ct值与病毒拷贝数的对数之间的相关系数为0．9996,相关性较好。结论门头沟区手足口病病原谱以CoxA16型为主,34．6％的手足口病患儿CoxA16型病毒载量〉10^3 copies·ml-1,4．9％的患儿EV71型〉10^3 copies·ml-1。实时荧光定量RT-PCR法对咽拭子标本中CoxA16、EV71核酸定量检测比较简便快速、结果直观、稳定性强,为进一步探讨患者体内病毒载量与临床症状的关系打下了良好的基础。     

性病门诊中单纯疱疹病毒的荧光定量PCR检测与分析

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)系双链DNA病毒, 人类是其唯一的自然宿主.HSV主要引起生殖器疱疹(genital herpes, GH), 即感染泌尿生殖器及肛门部位的皮肤黏膜, 导致生产一种慢性、复发性的性传播疾病[1].GH的发生和复发可给患者带来很大的身心痛苦, 影响其生活质量.绝大多数GH由HSV-2引起, 目前尚无彻底治愈的方法[2],因此, GH已成为一个为人关注的危害人类健康的公共卫生问题.为了解本地区GH中HSV-2的感染现状, 我们对性传播疾病(STD)门诊中疑似GH的患者进行了HSV的定量检测, 现将结果报道如下.     

来宾市艾滋病分子流行病学调查

目的对来宾市HIV-1感染者进行分子流行病学调查,为来宾市艾滋病的防治工作提供实验依据。方法将流行病学方法与分子生物学方法相结合,对来宾市HIV株进行序列测定和亚型分析,总结其传播途径,分析流行毒株特点及各个流行毒株间的关系。结果来宾市HIV感染者以性传播为主,流行毒株存在B、01-AE、CRF-BC3种亚型,其中以CRF-BC流行毒株为主。结论来宾市艾滋病流行形势严峻,HIV-1感染者中以流行重组型亚型CRF-BC为主,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,积极进行行为干预,及时制定新的防治策略。     

多重实时荧光定量PCR对9种常见呼吸道病原体检测

目的探讨多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测9种常见呼吸道病原体的临床应用价值。方法采用Primer Express3.0(ABI)和Primer3 Input 4.0设计引物和探针建立MRT-PCR法,通过构建质粒标准品分析该方法的最低检出限和特异性。并对204例临床标本中副流感病毒1、2、3型、肺炎支原体、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、腺病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒进行回顾性检测。结果 MRT-PCR法检测病原体的最低检出限达103copies/m L,特异性达100%,无交叉反应。204例咽拭子标本中,MRT-PCR检出呼吸道合胞病毒23例,副流感病毒1、2、3型13例,腺病毒15例,肺炎支原体15例,肺炎衣原体3例,甲型流感病毒13例与乙型流感病毒6例。该结果与其他试剂报告结果完全一致。结论多重实时荧光定量PCR具有快速、准确、特异性强等特点,在呼吸道病原体检测方面有重要价值。     

荧光定量PCR检测5种常见性传播疾病DNA结果分析

目的了解我院2009年-2010年2年来5种常见性传播疾病(STD)的感染情况,以期对性病患者的治疗有指导意义。方法应用实时荧光定量PCR技术对我院两年来有可疑性传播疾病病例3457例患者进行5种最常见的性传播疾病病原体—淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疮疹病毒Ⅱ型和人乳头状病毒进行检测,并进行统计分析。结果人乳头状病毒、解脲支原体和单纯疮疹病毒Ⅱ型阳性率较高,淋球菌、沙眼衣原体阳性率较低。淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、单纯疮疹病毒Ⅱ型和人乳头状病毒阳性率分别为1.66%、2.90%、43.3%、37.2%、60.4%。结论性传播疾病仍处于高发阶段,性病患者为病毒病原体者较难治愈,为细菌病原体者较易治愈,此结果应引起医务工作者的高度重视,同时加强青年人群的健康教育及行为干预是控制性传播疾病蔓延的重点。     

513例非淋病患者不同年龄段FQ-PCR病原体检测特征

目的 本研究的目的是为了调查非淋(NCU)患者在不同年龄段解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)分布特征。方法 用荧光定量多聚酶链式反应(FO-PCR)技术对513例非淋患者进行了UU DNA和CT DNA定量检测。结果 对513例非淋患者及197例阳性结果进行了统计分析发现:①在低于35岁人群中患者以女性为主(男/女/性别不详=116/278/4),P<0.01;而年龄大于35岁人群中患者主要以男性多见(男/女/性别不详=63/48/4),P<0.05。②以21-40岁年龄段感染率较高(175/442=39.59％),其中26-30岁(44.83％)和31～35岁(41.35％)两年龄段病原体感染的阳性率高于被研究人群平均阳性率(38.40％)。③各年龄段UU单项感染均显著高于UU+CT混合感染及CT单项感染,提示UU感染在非淋感染病原体中所占比重较大。其中以26～30岁(UU+CT 7.69％,UU 80.88％,CT12.31％)和31-35岁(UU+CT4.65％,UU 83.72％,CT 11.63％)UU单项感染比例最大。④各年龄段UU和CT定量结果无差异。结论 整个非淋人群总体以青年女性和中年男性为主;阳性感染者以21-40岁人群为主,尤以30±5岁年龄段感染阳性率高于平均感染水平;非淋病原体各年龄段均以UU感染为主,尤以UU单项感染为主;各年龄段UU和CT定量结果无统计学差异。     

佛山地区841例不孕妇女生殖道感染病原体流行病学调查

目的了解不孕妇女生殖道感染（RTI）的流行情况及其病原体分布。方法对841例不孕妇女的阴道分泌物、宫颈分泌物及血清进行RTI相关病原体的实验室检查。结果841例不孕妇女RTI发生率为59．2％。其中单种病原体感染40．1％，两种及两种以上病原体感染者19．1％。病原体检出率依次为解脲支原体（40．8％）、真菌（24．9％）、沙眼衣原体（15．1％）、人型支原体（7h3％）、滴虫（0．4％）、淋球菌（0．2％）、梅毒（0．2％）、HIV（0％）。结论在不孕妇女中普及RTI相关病原体的筛查，有利于RTI防治及优生优育。     

22638例乙型肝炎患者HBVDNA载量分布特征

目的为了解乙肝患者HBVDNA载量分布特征。方法荧光定量PCR用于检测HBVDNA,选取HBVDNA阳性患者22638例进行分析,根据病毒载量（copies／ml的对数值）依次分为八组（分别为〈3、3—3．99、4—4．99、5—5．99、6—6．99、7—7．99、8—8．99、〉9）数据进行分析。结果男性和女性比例最高均为〈3．00载量的患者（分别为25．69％,3908／15215;29．83％,2214／7423）（X^2=43．36,P=4．55E—11）,其次比例较高为7．00-7．99载量患者（分别为18．41％,2801／15215;18．90％,1403／7423）（X^2=0．80,P=0．37）;病毒载量与年龄相关性分析显示男性（r=-0．87,P=0．0048）和女性（r=-0．86,P=0．006）年龄均与病毒栽量负相关。结论HBVDNA载量以〈3．00和7．00—7．99比例较多;男性和女性均显示随年龄增加病毒载量逐渐降低的特征。     

液相芯片技术与实时荧光定量PCR在检测儿童感染性腹泻病原体的比较

目的研究液相芯片检测儿童感染性腹泻病原体的效率,为感染性腹泻病的临床快速诊断提供依据。方法收集96例婴幼儿及儿童腹泻患者粪便样本,运用Luminex液相芯片进行检测,并与实时荧光定量PCR检测结果比较。结果液相芯片技术共检测出7种病原体,阳性检出率为65.63%(63/96),其中沙门氏菌的检出率最高,为50.00%(48/96);单病原感染的阳性率为39.58%(38/96),混合感染的阳性率为26.04%(25/96)。与实时荧光定量PCR相比,液相芯片检测腹泻病原体的敏感度和特异度分别为100.00%和71.74%,阴性预测值和阳性预测值分别为100.00%和79.37%(P<0.05)。结论与实时荧光定量PCR相比,液相芯片技术具有高通量、快速、可靠等特点,有利于感染性腹泻病原体的临床检测。     

儿童甲型H1N1流感和季节性流感患者的病毒载量及相关临床症状研究

目的 分析并比较儿童甲型H1N1流感和季节性流感患者咽拭子标本的病毒载量及相关临床症状.方法 应用荧光PCR方法对采集的咽拭子标本进行检测,并通过建立核酸标准品,绘制标准曲线,测定标本中的病毒载量,同时结合所收集的患者临床症状数据资料应用随机区组方差和卡方检验方法进行统计分析.结果 2009年9月至2010年9月期间收集的1,040份咽拭子标本中,共检出甲型H1N1流感病毒阳性标本120份,甲型H3N2流感病毒阳性标本61份,乙型流感病毒阳性标本99份;对收集的流感阳性标本病毒载量测定结果显示:不同型别,不同发病时间流感患者咽拭子标本的病毒载量差异无统计学意义(P＞0.05);甲型H1N1流感、季节性流感感染者的性别比例差异无统计学意义,甲型H1N1流感感染者出现咳嗽,流涕临床症状者明显高于与乙型流感感染者.结论 甲型H1N1流感患者咳嗽,流涕症状比季节性乙型流感患者多见,而甲型H1N1流感和季节性流感患者咽拭子标本的病毒载量无显著性差异.     

HBV DNA载量与年龄相关性研究

目的为了解不同年龄段HBV DNA载量分布特点。方法荧光定量PCR用于检测21116例年龄登记完善的乙肝患者的HBV DNA,共分为15个年龄段。结果不同年龄段患者总阳性例数为12731例(阳性率60.29%),其中小于检测下限阳性例数有2281例(10.80%)。不同年龄段阳性率无统计学差异(r=1.87,P=0.08),低病毒载量比例与年龄的增加呈正相关(r=7.95,P=2.40E-6),病毒载量均值与年龄增加呈负相关(r=-20.45,P=2.9E-11)。结论 HBV DNA阳性率与患者年龄的增长无相关性;低病毒载量比例随年龄增长而增加,病毒载量均值随年龄增长而减少,分析认为随年龄增长抗病毒药物的应用机会的增加抑制了人群乙肝病毒复制。     

荧光定量PCR检测吉林地区NGU病原体基因

目的 用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR）技术准确定量检测非淋菌性尿道炎(NGU)中解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)基因，进一步了解UU、CT感染情况，为临床治疗提供依据。方法 采用FQ—PCR技术检测标本2553份，其中UUl072份、CT1481份。结果 UU阳性率为39．4％(42／1072)，其中，男性阳性率为11．1％(40/360)，女性阳性率为53．7％(382/712)。CT阳性率为10．1％(149／1481)，其个，男性阳性率为10．6％(34／322)，女性阳性率为9．9％(115／1159)。UU感染率在男女性别之间有高度显著性差别(P＜0．01)，CT感染率在性别之间无显著性差别(P＜0．05)。在男性中UU与CT感染率之间无显著性差异(P＞0．05)。在女性CT与UU感染率之间有高度显著性羞异(P＜0．01)。结论 FQ-PCR技术检测UU、CT基因具有简便、快捷、特异性高、定量准确等特点，其结果对诊断、治疗有一定指导意义。     

乙型肝炎异常血清学诊断模式与HBV-DNA载量的相关性研究

目的探讨乙型肝炎异常血清学诊断模式与HBV-DNA的关系.方法对94例慢性HBV携带患者,根据血清学结果,把病例分A、B、C、D四组,分别采用化学发光法(CLIA)定量检测HBV标志物;采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测HBV-DNA载量.结果A组患者HBsAg和HBsAb同时阳性,HBV-DNA阳性率为96.9％ (31/32);B组患者HBeAg和HBeAb同时阳性,HBV-DNA阳性率为90.0％(18/20),两组间比较差异无统计学意义(x2=2.95,P＞0.05).C组患者HBsAg阴性而HBeAg阳性,HBV-DNA阳性率为64.3％(9/14),C组与A、B组比较差异有统计学意义(x2=32.56和23.41,P＜0.05).结论在受检患者各种异常模式中,均存在HBV-DNA不同程度的复制.HBeAg阳性和HBV-DNA检测结果呈正相关.     

基于qPCR的两种试剂在HIV-1病毒载量检测中的比较研究

目的比较两种实时荧光定量PCR试剂检测HIV-1病毒载量间的相关性和一致性, 以及性能参数。方法两种检测试剂各采用3个批号对系列稀释的定值质控品检测, 分析两种检测试剂的检测线性度和精密度。再用两种试剂对166例HIV抗体阳性样品和27例阴性样品分别进行检测, 比较两者的相关性和一致性。结果 TaqMan病毒载量检测试剂与系列浓度定值质控品检测结果的决定系数为R2=0.978, Xpert病毒载量检测试剂与系列浓度定值质控品检测结果的决定系数为R2=0.987;对不同浓度定值质控品检测结果的不同批号间和总变异系数均<7%。两种试剂不同批号检测定值质控品的结果差异无统计学意义。两种试剂对血浆样本检测结果显示, 对阴性样品检测的符合率为100%, 在40 cps/mL的临界值处的观察一致性为50%, 在其量化下限附近缺乏一致性, 线性范围内检测结果之间的决定系数为R2=0.946。Bland-Altman分析显示, 偏差均值为0.41 log10(IU/mL)。结论两种试剂检测性能均良好, 在HIV-1病毒载量检测中具有较好的临床等效性。     

先天性智力低下儿童脆性X综合征的分子流行病学调查

目的根据脆性X综合征的两个分子生物学标志,建立在先天性智力低下患儿中快速分析脆性X综合征智力低下基因1(Fragile X mental retardation gene 1,FMR1)突变的方法,对先天性智力低下儿童进行脆性X综合征的大面积筛查和诊断,调查智力低下儿童中脆性X综合征的发病率。方法应用复式PCR方法检测FMR1基因的(CGG)n重复区CGG重复序列的大小,判断FMR1基因状态(正常、前突变、全突变),快速筛查脆性X综合征可疑患儿。用甲基化特异性PCR方法,检测FMR1基因启动子区CpG岛的异常甲基化情况,进一步诊断脆性X综合征患者,并用Southern印迹技术进行验证。结果1248例先天性智力低下患儿中,筛查出149名不明原因的智低儿童进行了FMR1基因分析,检出脆性X综合征携带者(FMR1基因前突变者)32例(10男22女),脆性X综合征患者(FMR1基因全突变者)12例(9男3女),脆性X综合征检出率为8.05%。结论复式PCR法灵敏、快速、简便,适应于临床和基层开展脆性X综合征筛查。脆性X综合征在先天性智力低下儿童中的发病率高,应对先天性智力低下儿童进行脆性X综合征FMR1基因的分析。     

云南大理猪戊型肝炎病毒分子流行病学调查

目的：了解云南大理农村的猪群中戊型肝炎病毒（ hepatitis E virus, HEV）感染情况,为HEV的防控提供理论依据。方法利用逆转录巢式聚合酶链反应（ RT?nested PCR）技术,对所采集大理41份猪粪便样品进行HEVORF2基因部分片段扩增,经琼脂糖凝胶电泳后对目的条带进行回收纯化及克隆测序,序列利用DNAStar和MEGA4．0软件进行同源性比较和进化树构建。结果 RT?nested PCR方法扩增出348 bp目的基因序列,系统进化树显示该病毒属于基因4型h亚型HEV。此次实验共检测41份猪粪便样品,其中23份为阳性,阳性率为56．10％。结论大理猪群存在较高的HEV感染率,存在HEV跨种间感染人的风险,应该加强防控以免HEV爆发流行。     

实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法.方法采用实时荧光定量PCR技术,检测唐氏患者23例、正常人33例,定量分析比较ΔCt值.结果正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异(p<0.001),并建立了相应的参考值范围.结论实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点,可用于快速诊断唐氏综合征.     

实时荧光定量PCR快速分子诊断唐氏综合征

目的　探讨快速诊断唐氏综合征的检测方法 .方法　采用实时荧光定量PCR技术 ,检测唐氏患者 2 3例、正常人 33例 ,定量分析比较ΔCt值 .结果　正常组和唐氏组ΔCt值有显著性差异 (p <0 .0 0 1) ,并建立了相应的参考值范围 .结论　实时荧光定量PCR具有简单、快速、特异性高等优点 ,可用于快速诊断唐氏综合征