男性不育与金属硫蛋白制剂临床干预的研究

目的探讨男性不育患者血液和精浆中微量元素含量和精子质量以及用金属硫蛋白制剂干预治疗前后患者改善状况。方法对男性不育症患者进行血液、精液微量元素、血清激素及精液常规检查,并进行金属硫蛋白干预治疗两个月,每日2支,空腹口服。结果就诊130名患者中有84.68%血铅〉70μg/L（102.41±43.77）,40.54%精浆铅〉70μg/L（69.13±41.19）,70.29%血镉〉1.0μg/L（2.74±2.29）,41.82%精浆镉〉1.0μg/L（1.69±2.17）。对52例患者进行了含金属硫蛋白制剂干预,血铅、镉与干预后精浆铅、镉下降值呈极显著的正相关（r=0.727、r=0.692）。干预前、后患者血铅、血镉、精浆铅、精浆镉有极显著性差异P〈0.01,干预前、后精子密度、A级精子、A＋B级精子之间有极显著差异P〈0.01。干预显效率（至少三项精液指标改善）70.90%。结论金属硫蛋白对重金属（铅、镉）损伤引起的男性不育有显著的治疗效果。     

金属硫蛋白与人类疾病

金属硫蛋白(MT)是一种低分子量,富含半胱氨酸可结合重金属的蛋白质。从微生物到脊椎动物由Cd、Zn、Cu、Ag、激素及各种应急诱导产生金属硫蛋白。金属硫蛋白主要参与重金属解毒及氧化损伤解毒,储存金属,调节Zn及Cu的代谢,清除自由基。金属硫蛋白基因的表达调控是在转录水平上进行的,通过与金属,糖皮质激素及血反应元素顺式作用,及与DNA-结合蛋白,金属调节蛋白的反式作用达到调节的作用。众所周知,MT与一些疾病的发病过程密切相关。科学研究广泛地探索了心脏MT的抗氧化功能。最近采用心脏定位的MT-表达过量的转基因小鼠模型研究结果强力支持MT的这一生理作用。在急性及慢性刺激下如用阿霉素处理、局部缺血-再灌注损伤、食物中铜的限制,MT-表达过量的转基因小鼠心脏显示了对损伤的显著抗性。实验结果表明MT调节免疫系统,但MT的主要功能还不清楚。     

二价金属铁离子（Fe~（＋＋））在体内和体外对阴道滴虫蛋白表达的调控

阴道滴虫是世界范围的性传染的阴道滴虫病的病原体。病原微生物在机体内生存，不仅要逃避宿主的免疫反应，而且还要能获得其生存所必需的生长因子。金属铁离子（Ｆｅ~（＋＋））是关系到阴道滴虫能否正常生长的必需因子之一。先前的工作已证明，在离体条件下，高铁离子环境促进滴虫吸附到Ｈｅｌａ细胞上。本文主要研究在体内和体外条件下，滴虫是如何在蛋白质表达水平上对环境中铁离子浓度高低作出反应。这里观察到至少３个铁诱导蛋白和两个铁抑制蛋白。其中分子量为１３６ｋＤ的蛋白是以前报道的乳铁蛋白受体。也研究了环境ｐＨ对于这些铁调节蛋白的影响。结果表明：在所研究的ｐＨ５．０～６．４范围内，虽然较低的ｐＨ环境促进滴虫细胞的增殖，但并不明显地影响铁离子对铁调节蛋白的调控。通过使用阴道滴虫病患者的血清进行放射免疫沉淀实验，间接证明铁离子不仅在体外，而且可能也在体内调节这些铁调节蛋白的表达。环境铁离子在体内调节滴虫蛋白表达这一事实在国内外鲜有报道。尚需做进一步研究才能全面理解铁离子调控滴虫蛋白的分子机制和水平。     

应用金属硫蛋白治疗儿童铅中毒致腹痛的临床分析

目的 探讨金属硫蛋白（MT）治疗儿童铅中毒致腹痛的效果.方法 应用金属硫蛋白制剂对58名以腹痛为主诉的轻、中度铅中毒患儿进行治疗观察,以服用MT后血铅＜100μg/L,腹痛症状消失作为临床治愈标准进行观察.结果 服用MT 2～3个月效果较显著,未见不良反应.随着血铅水平的下降,腹痛及伴随症状消失.患儿腹痛症状消失与服用时间长短无关联关系（χ^2=3.65,P＞0.05）.结论 应用MT治疗儿童铅中毒是一种既安全又有效的新型预防和干预手段.     

金属硫蛋白基因在上皮性卵巢肿瘤中的表达及临床意义

目的 研究金属硫蛋白（MT）基因在上皮性卵巢肿瘤中的表达及临床意义。方法 采用SABC免疫组化法，对72例上皮性卵巢肿瘤中金属硫蛋白的表达进行检测。恶性肿瘤、交界性肿瘤和良性肿瘤MT的表达分别为64．4％，30．0％和11．8％，恶性肿瘤，交界性肿瘤MT的表达明显高于良性肿瘤（分别为P＜0．01和P＜0．05）。随肿瘤组织病理分级及临床分期的增高，MT的表达也增加（P＜0．05）。MT高表达者的生存期明显缩短。结论 MT参与了上皮性卵巢恶性肿瘤的发生与发展，并有可能成为一个判定预后的有效指标。     

一种新型单克隆抗体导向血栓显像剂的基因工程制备

目的 为简化抗血小板Ｐ－选择素鼠／人嵌合单克隆抗体ＳＺ－５１／Ｈｕ的＾９９ｍＴｃ标记过程,并提高其＾９９ｍＴｃ标记效率,利用金属硫蛋白（ＭＴ）可与金属稳定结合的特点,通过基因工程的手段制备融合蛋白ＳＺ－５１／Ｈｕ－ＭＴ。方法 构建了ＳＺ－５１／Ｈｕ与ＭＴ的重组表达载体,并在小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０中进行了目的融合蛋白的表达。结果 该融合蛋白在Ｓｐ２／０细胞中的表达量为３ｍｇ／Ｌ。对融合蛋白的各项性     

锌对小鼠组织金属硫蛋白表达的影响

目的：探讨锌（Zn）对小鼠各脏器金属硫蛋白（MT）含量的影响。方法：采用[¹⁰⁹Cd]-hem饱和法测定组织MT蛋白含量。结果：10mg Zn/kg腹腔注射后8-48 h小鼠肝脏及脾脏MT含量明显高于对照组（P<0.05, P<0.01）注射后24 h，MT含量达峰值；2.5-10 mg Zn/kg注射后16 h肝脏MT含量或5-10 mg Zn/kg注射后16 h脾脏MT含量均显著高于对照组（P<0.01）。但注Zn后脑及胸腺MT含量无明显差异。结论：Zn能迅速诱导小鼠肝脏及脾脏MT蛋白合成，并呈明显的剂量依赖性增加；Zn诱导小鼠组织MT合成具有明显的组织器官特异性。     

CCl4肝纤维化过程中肝组织金属硫蛋白与肝星状细胞MMP-2表达及活性之间相关性研究

目的： 研究金属硫蛋白（MT）在体内及体外与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达、活性之间的相关性。方法: 昆明种雄性成年小鼠50只,其中实验鼠 40只,对照鼠10只,用CCl4诱导小鼠肝纤维化模型。向肝星状细胞（HSCs）条件培养基（含有MMP-2）中加不同浓度MT,使之与MMP-2酶学共浴,检测MMP-2活性。制作小鼠肝组织芯片,天狼猩红染色判断肝纤维化程度。免疫组化法测肝组织MMP-2、MT蛋白表达,酶图法测鼠肝组织匀浆和培养基中MMP-2活性。结果: ①模型组小鼠肝组织MMP-2和MT蛋白表达水平均随纤维化进展而呈波浪式交替升高,但二者时相变化相反。 ②模型组小鼠肝组织MMP-2活性随实验时间的增加而逐渐升高,亦有波动。除个别时点外,酶活性与MT表达呈负相关。③肝星状细胞条件培养基与不同浓度的MT直接作用后,MMP-2活性随MT浓度增加活性逐渐降低(P＜0.01)。结论: 在小鼠肝纤维化发生发展过程中,肝组织MT蛋白和MMP-2蛋白表达均有上升趋势,二者间可能存在相互作用;MT蛋白和MMP-2活性呈负相关,前者对后者可能起抑制作用。     

病毒孔蛋白的基本结构和功能

病毒孔蛋白（ viroporins）是由病毒编码的小分子量的疏水性蛋白,参与了病毒生命周期的不同阶段,对病毒的复制至关重要。文章主要对甲型流感病毒基质蛋白2（M2）、人类免疫缺陷病毒1型病毒蛋白U （Vpu）、丙型肝炎病毒蛋白P7、轮状病毒非结构蛋白4（NSP4）、严重急性呼吸系统综合征冠状病毒的结构蛋白（ORF?3a）和中东呼吸综合征冠状病毒小包膜蛋白E,对这几种核糖核酸病毒的病毒孔蛋白基本结构和功能方面进行总结,可以为病毒孔蛋白的基础研究以及相关抗病毒药物的筛选提供参考。     

锌7—金属硫蛋白对过氧化氢引起NIH3T3细胞增殖的抑制作用

为了研究锌7-金属硫蛋白（Zn7-metallothionein,Zn7-MT）对细胞内外过氧化氢引起NIH3T3细胞增殖的影响,本文采用了MTT细胞计数法,^3H-TdR掺入实验,细胞周期时相测定等方法。结果显示低浓度的甲萘醌和氧化氢促进了NIH3T3细胞增殖,使其MTT计数增加,细胞周期S期比例增高,DNA合成率增加。锌7-金属硫蛋白本身对NIH3T3细胞增殖没有影响,但它可以抑制甲萘醌和过氧化氢对NIH3T3细胞促增殖作用。提示锌7-金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的成纤维细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

绿色荧光蛋白-去整合素融合蛋白的表达及其结合功能的研究

目的：构建绿色荧光蛋白（CFP）-去整合素（disintegrin）融合基因，表达并分析该重组蛋白的生物学活性。方法：利用HF-PCR扩增Ⅱ型蛇毒出血性金属蛋白酶agacutin基因的去整合素区，并与绿色荧光蛋白基因进行拼接；将GFP-去整合素融合基因克隆入表达载体pQE-30，IPTG诱导重组蛋白表达；流式细胞术（FCM）与荧光显微镜分析重组蛋白与细胞的结合能力。结果：GFP-去整合素融合蛋白的表达载体在大肠杆菌M15中得到有效表达，菌体呈绿色。表达的蛋白量占菌体总蛋白的38％左右，免疫印迹证实分子量约为39kD；FCM分析显示该重组蛋白可与表达整合素的乳腺癌细胞MDA-MB-231和内皮细胞EA．hy926特异结合，在荧光显微镜下可见与重组蛋白结合的细胞发出绿色荧光。结论：GFP-去整合素融合蛋白可与表达整合素的细胞结合，并保留了各自的生物学活性，可用作肿瘤与血管生成等研究的新的分子标记物。     

基于MMP7/mTORC1信号通路探讨小鼠脓毒症急性肾损伤的分子机制

目的：探讨基质金属蛋白酶7(MMP7)在小鼠脓毒症相关急性肾损伤模型中的表达及作用。方法：通过盲肠结扎穿孔（CLP）手术在具有C57BL/6J遗传背景的MMP7敲除（MMP7-KO）小鼠和野生型（WT）C57BL/6J小鼠中诱导脓毒症。采用外源性MMP7重组蛋白对MMP7-KO小鼠进行预处理。通过脂多糖（LPS）刺激正常人近端肾小管上皮细胞系HKC-8建立体外模型。采用Western blot检测MMP7和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)表达。HE和TUNEL染色评估小鼠的肾损伤。Hoechst 33342染色评估细胞凋亡。结果：与假手术组相比,CLP组在CLP后6 h肾脏组织中MMP7蛋白表达降低,这种降低趋势持续到48 h。MMP7-KO的CLP组小鼠肾小管损伤病理评分和TUNEL阳性肾小管细胞显著高于WT的CLP组（P<0.01）。MMP7重组蛋白孵育可很大程度上降低LPS诱导的HKC-8细胞凋亡。LPS诱导了HKC-8细胞的mTORC1表达,而MMP7可以抑制mTORC1表达。MMP7能够明显促进mTORC1降解,产生分子量为18 kD的较小片段。此外,MM...     

中华绒螯蟹重组金属硫蛋白的原核表达与分离纯化

金属硫蛋白(MT)由于其独特的结构和性质,而成为潜在的医用蛋白资源。本研究将重组中华绒螯蟹金属硫蛋白基因cDNA克隆入原核表达载体pET-GST,转化大肠杆菌BL21。重组蛋白以可溶和包涵体两种形式表达。根据金属硫蛋白的特性,优化了表达条件。Western blot证实了表达产物的正确性,用锌柱亲合层析得到高纯度的重组金属硫蛋白。为以后金属硫蛋白的生物学功能研究奠定了良好的基础。     

金属硫蛋白与线粒体功能调节

 金属硫蛋白（MTs）是一种富含半胱氨酸可结合金属离子的小分子蛋白,广泛分布于哺乳动物的各个器官。大量研究发现MTs具有调节金属离子稳态、重金属解毒、清除氧自由基、抑制炎症因子、防止机体衰老、贮存锌元素、防止细胞癌变、抗击电离辐射和抗细胞凋亡等多种生物学功能。近年来研究提示,MTs作为多功能蛋白可能直接或间接参与线粒体功能调节。特别是在氧化应激等条件下,MTs对于维持线粒体功能、促进线粒体损伤修复具有重要的意义。本文重点综述了金属硫蛋白对线粒体功能的调节作用及其可能机制。     

金属硫蛋白在心肌缺血再灌注损伤修复中的抗氧化作用

目的 探讨金属硫蛋白（ＭＴ）在心肌梗塞和缺血再灌注心肌损伤修复中与脂质过氧化的关系。方法 采用大鼠心肌梗塞／缺血再灌注模型,测定手术后２４ｈ和８周心肌组织的ＭＴ及脂质过氧化的中间产物丙二醛（ＭＤＡ）的含量,结果：心肌梗塞和缺血再灌注２４ｈ后ＭＤＡ含量均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）,８周后ＭＤＡ显著降低（Ｐ〈０．０５）,而ＭＴ的含量在术后２４ｈ即升高,８周ＭＴ继续升高,缺血再灌注组ＭＴ达（３１４．     

锌7-金属硫蛋白对过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的抑制作用

为了研究锌7-金属硫蛋白（Zn7-metallothionein, Zn7-MT）对细胞内外过氧化氢引起的NIH3T3细胞增殖的影响, 本文采用了MTT细胞计数法，3H-TdR掺入实验，细胞周期时相测定等方法。结果显示低浓度的甲萘醌和过氧化氢促进了NIH3T3细胞增殖, 使其MTT计数增加，细胞周期S期比例增高，DNA合成率增加。锌7-金属硫蛋白本身对NIH3T3细胞增殖没有影响，但它可以抑制甲萘醌和过氧化氢对NIH3T3细胞促增殖作用。提示锌7-金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的成纤维细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用。     

金属硫蛋白与心肌血管内皮细胞的特异结合

目的 探讨金属硫蛋白（ＭＴ）进入细胞的机制。方法 以胶体金为示踪物，采用离体心脏灌流术。电镜下观察心肌血管内皮细胞对ＭＴ的摄和。结果 心肌血管内皮细胞能特异地摄取ＭＴ。结论血管内皮细胞表面存在ＭＴ特异结合位点，为深入研究该蛋白的生理功能及其应用提供了重要依据。     

计算机结合数字成像技术分析测定凝胶电泳蛋白分子量的应用研究

本文介绍使用数字相机配合计算机组合成一套设备“计算机数字图像分析系统（ＣＤＡＳ）”，分析测定分子生物学研究中ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳所分离的目标蛋白分子量。ＣＤＡＳ可精确测量出蛋白参照标准不同分子量的迁移率，测量的方式为象素分辨点阵（Ｐｉｘｌｓ），因而保证了较高的测量精密度和准确性。根据测量得到的迁移率关系拟合计算出参照蛋白分子量迁移曲线及线性方程，而后再用方程拟合确定目标蛋白的分子量，与理论值比较误差小于０．５％。     

镉与人金属硫蛋白基因表达的诱导

过渡金属元素镉 (Cd)是一种有毒的重金属环境和工业污染物 ,可通过呼吸道、消化道等不同途径进入人体 ,对肝、肾、骨骼、血液、免疫系统等产生广泛的损害作用 ,大量实验证明 ,Cd具有致癌、致畸、致突变的三致作用 ,并已被国际癌症研究中心 (IARC)确定为第一类致癌物〔1 ,2〕。近年来 ,有关 Cd的分子毒理学研究 (如 Cd与细胞凋亡、 DNA损伤、基因调控等 )取得了重要进展。金属硫蛋白 (MT)是由 MT基因家族编码的一种低分子蛋白 ,其分子量在 60 0 0 -70 0 0 Da之间 ,其分子中富含半胱氨酸 ,广泛分布于体内 ,是唯一的在金属代谢中作用肯…     

大鼠心肌成纤维细胞通过增加基质金属蛋白酶2活性抑制心肌细胞缝隙连接功能

目的：探讨缺氧复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）后大鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts, CFs条件培养液对心肌细胞中缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)表达和缝隙连接功能的影响及其分子机制。方法：（1）将H9c2细胞随机分为5组：对照（control）组、常氧（normal）组、基质金属蛋白酶2抑制剂ARP-100(ARP)组、H/R组和H/R+ARP组。荧光划痕技术评价缝隙连接功能,Western blot实验检测Cx43的表达及磷酸化水平,明胶酶谱法测定条件培养液中基质金属蛋白酶的活性。（2）将SD大鼠随机分为control组、ARP组、缺血再灌注（I/R）组和I/R+ARP组,每组8只。微电极阵列技术采集心律失常发生类型和持续时间,免疫组织化学实验检测心肌组织中Cx43蛋白的表达及分布,Western blot实验检测Cx43的表达及磷酸化水平。结果：与control组相比,H/R组Cx43蛋白表达显著下降（P<0.01）,磷酸化水平下调（P<0.01）,荧光扩散范围变窄（P<0.01）,MMP...