重组腺病毒抗小鼠移植瘤生长

目的:研究携带细胞因子基因hIL-2、hTNF-a的重组腺病毒对小鼠移植瘤生长抑制作用。方法:将分别携带有hIL-2基因、hTNF-a基因的重组腺病毒感染人肺腺癌Anip973细胞系,应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL-2、TNF-α的分泌量;通过肿瘤局部注射重组腺病毒的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:转基因的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。24h细胞培养上清IL-2的分泌量为50pg/2×105细胞,TNF-α的分泌量为20pg/2×105细胞。体内实验表明注射重组腺病毒后小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),存活期显著延长。结论:瘤内注射重组腺病毒具有明显抗肿瘤作用。     

TNFα基因和IL-2基因共转染的肿瘤细胞体内致瘤性和瘤苗效果的观察

如同联合应用两种具有协同作用的细胞因子可以达到更佳的免疫治疗效果一样，如果将两种具有协同作用的细胞因子基因共转染人一种肿瘤细胞内，此肿瘤细胞可能会具有更佳的抗肿瘤效果。IL-2和TNFα具有协同抗肿瘤作用和免疫调节作用。因此，本文选用IL-2基因和TNFα基因为共转染的目的基因，通过两步基因转移共转染人B16黑色素瘤细胞，观察了体内致瘤性和瘤苗效果。     

GM-CSF和多种细胞因子基因转导系统及其抗肿瘤免疫效应的研究

为了增强免疫基因治疗瘤菌诱导机体抗肿瘤系统免疫效应,我们应用逆病毒中介基因转移技术,将IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IFN-α、B7-1、TNF-α、GM-CSF等多种细胞因子基因导入肿瘤细胞,证实了这些基因修饰的肿瘤细胞.由于多种细胞因子基因的导入,诱导宿主抗肿瘤系统免疫能力明显增强.在此基础上,我们为了开发增强宿主免疫的肿瘤基因治疗新方案,构建了可以表达双价细胞因子GM-CSF、TNF-α、IL-4的逆病毒载体的基因修饰瘤苗.通过接种放射线灭活的分泌GM-CSF和IL-4细胞因子的肿瘤细胞即细胞因子肿瘤疫苗,来诱导有效地抗肿瘤系统免疫功能.应用构建的双价逆病毒载体和逆病毒中介基因转移技术,对肺癌、脑肿瘤小鼠模型进行了双价细胞因子基因瘤苗的抗肿瘤免疫增强效果和     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

腺病毒介导的IL—2基因及B7—1基因联合转染G422细胞致瘤原性和免疫原性的变化

目的研究联合细胞因子基因转染的D422胶质母细胞瘤细胞体内致瘤原性和免疫原性的变化,为胶质瘤的免疫基因治疗打下基础.方法IL-2基因和B7-1基因转染的G422细胞1×105皮下和脑内接种,观察肿瘤生长速度和荷瘤小鼠的存活期,2周取脾脏,检测NK、LAK和CTL的杀伤活性.结果IL-2和B7-1基因联合转染的G422细胞,皮下接种后肿瘤生长明显减慢,脑内接种动物存活期明显延长,NK、LAK和CTL的杀伤活性增强.结论IL-2基因和B7-1基因联合转染的G422细胞,致瘤原性下降,免疫原性增强,能有效激活机体特异性与非特异性抗肿瘤免疫反应.     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

用表达IL-2的重组腺病毒瘤体内注射诱导肿瘤消退及免疫反应

IL-2能通过增强CTL细胞的杀伤活性、诱导LAK细胞及激活TIL等具有抗肿瘤作用。而腺病毒以其扩增快、转染范围广,以及不整合入感染细胞的基因组等优点适于临床应用。本文作者将携带IL-2基因的重组腺病毒AdCA IL-2转入肿瘤细胞后种入小鼠体内或直接在肿瘤部位进行瘤体内注射,检测了IL-2的表达,并观察了对肿瘤生长的影响。     

比较跨膜型与分泌型TNF-α在体内的杀瘤效应

目的:比较分泌型和跨膜型TNF-α在体内抗瘤作用的异同.方法:在肿瘤局部直接注射3种TNF-α(野生型TNF-α重组体、跨膜型及分泌型TNF-α突变体)基因,观察其抗瘤效应 结果:3种TNF-α均能有效表达。并具明显抑瘤效应,跨膜型TNF-α突变体对早期肿瘤的仰制效应明显高于其它2种TNF-α(P<0.01),而野生型TNF-α对中肿瘤的抗瘤效应则最佳.此外,注射3种TNF-α裸DNA均未观察到明显副作用,结论:分泌型和跨膜型TNF-α抑瘤机制可能下同,裸DNA直接用于细胞因子基因治疗较安全,简易和有效     

热休克对H22细胞膜HSP70蛋白及其mRNA水平的影响

将IL-2或/和IFN-γ基因体内转染腹腔巨噬细胞(MΦ),其表达的基因产物能提高MΦ的细胞毒活性,并诱导MΦ分泌TNF、IL-1和NO等抗肿瘤免疫介质.激发机体的非特异性免疫功能而产生抗肿瘤效应,特别是IL-2和IFN-γ基因联合转染MΦ,其表达的基因产物既能使MΦ产生更强的细胞毒活性并分泌高水平的TNF、IL-1和NO,又能激活脾CTL细胞,从而激发机体的非特异性和特异性免疫功能,产生更强的快同抗肿瘤效应.结果表明,IL-2和IFN-γ基因转染MΦ较单基因转染具有更强的抗瘤效应     

pEgr-TNFα质粒的构建及基因-放射治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

目的 研究pEgr-TNFα重组质粒的构建及其联合放射治疗抑制小鼠黑色素瘤的效果和对免疫系统的影响。方法 将TNFα cDNA插入pcDNA3．1质粒的多克隆位点，用：Egr-1的启动子替代pcDNA3．1质粒的CMV启动子，构建成pEgr-TNFα重组质粒；建立小鼠B16黑色素瘤动物模型，肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒，在不同时问测量肿瘤体积，并检测照后15d部分免疫学指标。结果 pEgr-TNFα基因．放射联合治疗后第3～15天，肿瘤生长速率明显低于单纯照射组、单纯基因治疗组和空质粒对照组。小鼠脾脏NK细胞毒活性、IL-2分泌活性、腹腔巨噬细胞TNFα和IL-18活性均明显高于单纯放疗组。结论 pEgr-TNFα基因-放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗组和单纯基因治疗组，同时可以减轻放疗对机体免疫功能的损伤。     

转基因人腺癌细胞株的建立及其生物学特性的研究

自Rosenberg等把Neo~R、TNF基因导入肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对晚期黑色素瘤患者进行治疗以来,肿瘤基因治疗开始问世并多集中于对细胞因子基因(IL-2,TNF,IFN-α,GM-CSF等)转导后抗肿瘤的研究.常用的方法是选择适当载体把细胞因子基因导入抗肿瘤的免疫效应细胞(TIL,LAK,CTL)或肿瘤细胞中,回输或接种机体,直接或间接杀伤肿瘤细胞,增强机体的免疫调节作用,从而达到治疗肿瘤的目的.     

TNFα基因转染的肿瘤细胞抗肿瘤转移作用的探讨

肿瘤瘤苗进行的主动性免疫治疗是一条较为理想的治疗途径，近几年发展起来的细胞因子基因转染的肿瘤细胞瘤苗，开创了肿瘤主动免疫治疗的新时代。肿瘤细胞靶向的TNFα基因治疗开展得较早，TNFα基因转染的肿瘤细胞的体内致瘤性显著下降，但是对于此肿瘤细胞制备成瘤苗对已发生的肿瘤能否具有抗肿瘤转移作用尚未见报道。     

双亚基共表达人白细胞介素12重组腺病毒载体的构建与表达

白细胞介素12(IL-12)是由p40和p35两亚基组成的异源二聚体,动物试验表明其抗肿瘤和抗感染疗效显著,同时也发现全身应用的毒副作用较重,因此寻找合适的局部应用途径具有重要的临床意义.将IL-12基因导人肿瘤局部,动物试验取得了显著的抗肿瘤效果;瘤体内注射逆转录病毒载体介导的人IL-12基因修饰的成纤维细胞已经FDA批准用于治疗晚期肿瘤患者.     

GM-CSF/IL-4基因修饰的瘤苗不同的免疫途径诱导不同免疫反应的观察

对细胞因子基因修饰瘤苗的研究表明,IL-2、IL-4、IFN-γ、GM-CSF等一系列细胞因子基因以不同载体转入肿瘤细胞制成瘤苗后皮下免疫小鼠,均可增强机体抗肿瘤免疫力,其机制可能是由于瘤苗分泌的细胞因子促进了免疫细胞对肿瘤抗原的识别、提呈及对肿瘤细胞的杀伤能力.有文献报道,逆转录病毒介导的GM-CSF和IL-4共同转染瘤苗可以有效激发机体抗肿瘤免疫力,为探讨不同途径瘤苗免疫后机体的免疫反应,我们采用皮下、腹腔、脾内、静脉四种途径接种GM-CSF、IL-4基因双重转染的小鼠红白血病细胞FBL-3瘤苗,发现免疫途径不同,所激发的免疫应答类型不同,诱导机体生成的免疫力不同,提示某些瘤苗应用时应选择适当的免疫途径.     

转入TNFα基因对肾细胞癌细胞致瘤性的影响

目的 :观察转人TNFα基因对肾细胞癌细胞 (RCC)致瘤性的影响 ,为进一步对RCC的基因治疗打下基础。 方法 :将人TNFα基因构建入逆转录病毒载体 ,经包装、鉴定后 ,感染RCC细胞株 786 0 ,ELISA法测转人TNFα基因 786 0细胞上清中TNFα的活性 ,同时 ,将转人TNFα基因的 786 0细胞接种裸鼠 ,观测转TNFα前后RCC细胞致瘤性的变化。结果 :转人TNFα786 0细胞上清TNFα的浓度平均为 (5 0 0 4± 6 2 4) pg/ml,接种裸鼠后无肿瘤长出。结论 :转人TNFα基因使建株RCC失去了致瘤性。     

卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞某些细胞因子基因表达的研究

目的:研究卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞在体外扩增后某些细胞因子的表达.方法:利用RT-PCR和免疫学方法,分离5例刚分离的上皮性卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和其中3例腹水标本中肿瘤相关淋巴细胞(TAL),检测其在体外扩增后,IL-2,IL-2R,TNF-α,IFN-γ,IL-6等细胞因子基因的表达的水平与变化;测定细胞培养上清液中细胞因子的活性,分析TIL或TAL扩增前后杀伤肿瘤细胞的能力和免疫学特性的变化.结果:TIL在扩增前后的4周时间内,仅TNF-α mRNA基因表达是持续的,并可维持相当长一段时间;IFN-γmRNA基因的表达缺乏;IL-2mRNA基因表达只是一过性.体外加入抗CD3单抗或PHA(合适浓度)刺激TIL或TAL,IL-2,TNF-α,IhN-γmRNA表达明显增强.和TIL细胞因子基因表达不尽相同的是,TAL表达IL-6 mR-NA.结果还发现,体外IL-2的浓度对TIL的免疫学特性有很大的影响.结论:TIL在体外经rIL-2扩增后,免疫活性有明显提高.TIL的抗肿瘤活性在很大程度上依靠其分泌的多种细胞因子.     

靶向性溶瘤腺病毒治疗胰腺癌

采用溶瘤病毒靶向策略开展胰腺癌基因治疗研究是一个新的发展方向.目前相关研究有分子生物学、基因水平的体外实验和动物模型体内实验、靶向策略等,部分溶瘤腺病毒药物已进入Ⅲ期临床试验.溶瘤腺病毒单独使用或与其他治疗手段联合应用,能够增强抗肿瘤效应.     

转人TNFα基因对肾细胞癌细胞致瘤性的影响

目的:观察转人TNFα基因对肾细胞癌细胞(RCC) 致瘤性的影响,为进一步对RCC 的基因治疗打下基础。方法:将人TNFα基因构建入逆转录病毒载体,经包装、鉴定后,感染RCC 细胞株78620 , EL ISA 法测转人TNFα基因78620 细胞上清中TNFα的活性,同时,将转人TNFα基因的78620 细胞接种裸鼠,观测转TNFα前后RCC 细胞致瘤性的变化。结果: 转人TNFα78620 细胞上清TNFα的浓度平均为(5 004 ±624) pg/ ml ,接种裸鼠后无肿瘤长出。结论:转人TNFα基因使建株RCC 失去了致瘤性。     

IL-23在肿瘤免疫中的作用

作为具有重要免疫调节活性的细胞因子,白细胞介素(IL)-23在多种疾病中发挥着重要作用.在其对肿瘤的免疫调节中,存在着抗肿瘤与促进肿瘤生长两种观点.IL-23可以促进干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-12等细胞因子的分泌,IL-23/Th17轴是发挥免疫调节作用的关键.     

IL-2和IL-12基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的实验研究

目的观察白细胞介素-2(IL-2)基因与白细胞介素-12(IL-12)基因联合治疗小鼠头颈鳞癌的疗效. 方法建立小鼠头颈鳞癌动物模型,在荷瘤部位将脂质体包裹的IL-2基因和IL-12基因直接注入肿瘤中,观察肿瘤大小变化,并检测此两种基因在肿瘤细胞中的蛋白表达情况、小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)和细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性. 结果 IL-2基因和IL-12基因联合治疗组,肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于单独治疗组和对照组(P<0.01).在注射有IL-2、IL-12基因的肿瘤组织中,其相对应的IL-2、IL- 12蛋白水平明显升高,小鼠脾细胞NK活性和CTL杀伤活性增强. 结论 IL-2、IL-12基因治疗可抑制小鼠头颈鳞癌生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答.二者联合应用,可产生协同效应并加强其抗肿瘤效果.