脱钙骨免疫组化染色方法的构建

在对骨骼生理和病理的研究过程中，经常需要制备脱钙的骨免疫组化标本，然而由于骨骼组织的特殊性，制备好的骨组化标本也并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，脱钙是标本制备中至关重要的过程。一些强酸如盐酸，硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏，使接下来的工作无法进行；我们仿照目前国外方法：EDTA低温脱钙^[1]，得到的结果比较满意，现总结如下。     

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。方法选择12例骨组织,随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色。结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。     

免疫组化染色中脱片的原因分析

免疫组化操作步骤多,历时长,且在反复浸泡过程中进行,脱片是免疫组化检测中最常遇到的现象之一.如果染色过程中出现脱片,不但影响日常工作,也浪费试剂.我们通过摸索和实践,针对脱片的原因加以分析,用以下的方法有效的减少了脱片的现象.现介绍如下.1 玻片处理不当玻片的处理是做好免疫组化染色的重要步骤之一,多聚赖氨酸具有良好的防脱片效果,为目前大多病理实验采用.     

EDTA微波快速脱钙法

1材料和方法1．1材料固定后松质骨修成0．7cm×0．5cm×0．2cm；惠而浦微波炉AVM600型，功率900W，分七档；5种脱钙液：中性EDTA、PlankRycho液、10％硝酸．水溶液、Thoma’s液、Bouin＇s液。1．2方法微波设定在二档（160w），辐射smin，测量脱钙液温度，间隙Zmin，重复辐射3～4次后，以针顺利刺入骨组织为脱钙的标准。酸性脱钙液脱钙后，用5％硫酸钠水溶液碱化处理，微波辐射二档smin。中性EDTA脱钙无需碱化．常规石蜡制片，HE染色和免疫组化染色。2结果和讨论2．1经EDTA微波辐射脱钙的骨组织，石蜡切片完整，染色鲜艳，组织细胞…     

光波-微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的应用

目的探讨光波．微波辐射技术在骨组织快速脱钙与免疫组化染色中的作用。方法用8％硝酸分别在单纯微波、单纯光波、光波,微波组合Ⅰ和光波-微波组合Ⅱ的条件下脱钙，同时以室温脱钙作为对照；应用光波-微波-LSAB免疫组织化学染色技术检测不同脱钙条件下ANP、CD31、CD34、5-HT、S-100、NF、GFAP和Vimentin的表达。结果8％硝酸室温脱钙时间最长，光波．微波组合脱钙时间最短；微波组、光波组、光波．微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显比对照组好；光波．微波组合Ⅰ组、Ⅱ组脱钙的免疫组化染色均明显优于单纯微波、单纯光波法；光波-微波组合Ⅱ-LSAB免疫组织化学染色技术比常规免疫组织化学染色所用时间短、染色效果好。结论光波．微波辐射脱钙及免疫组化染色所用的时间明显缩短，染色效果好。     

应用微波技术提高免疫组化染色质量

免疫组织化学染色技术是目前病理教学、科研及临床检验工作中的常用手段，成为有价值的病理外检辅助方法之一。但在实际工作中常会出现一些问题，如对存在于细胞膜上或细胞浆内的少数某些抗原，特别是存在于细胞核内的抗原(PCNA)等，用常规免疫组化染色技术往往不能取得较好的染色效果。近年来，我们通过应用微波技术处理组织切片，     

应用微波辐射脱钙技术改善骨组织免疫组化染色效果

应用微波辐射EDTA脱钙技术，革新传统的强酸脱钙法，缩短了脱钙时间，达到了完全保存骨组织形态结构及抗原物质的传统方法难以达到目的，增哟了免疫组化染色效果。     

EDTA抗原修复缓冲液在ER、PR免疫组化染色中的应用

目的 选择能显示最佳的ER、PR染色效果的抗原修复液。方法 分别采用柠檬酸和EDTA两种抗原修复液对50例乳腺癌切片进行微波抗原修复,比较二者对ER、PR免疫组化检测效果的影响。结果 经EDTA修复后,乳腺癌ER、PR染色 ／ 者分别为44．0％(22／50)、64．0%(32／50),显著高于经柠檬酸修复的染色效果24．0％(12／50)、24．0％(12／50),且前者背景清晰。结论 乳腺癌ER、PR免疫组化染色采用EDTA进行微波抗原修复后,染色阳性强度明显优于经柠檬酸修复者,值得推广应用。     

人工骨成骨模型免疫组织化学染色方法的构建

目的以大鼠单纯胫骨骨折后加入骨粉复合物为模型,观察乙二胺四乙酸(EDTA)-2Na脱钙和混合酸脱钙后免疫组织化学检测的效果。方法将骨粉复合物放置于大鼠左侧胫骨的骨块缺损中建立人工骨成骨模型,将模型分为两组(每组标本10例),实验组用EDTA-2Na脱钙,对照组采取混合酸脱钙后分别观察两组的免疫组织化学检测效果。结果EDTA脱钙组骨小梁结构保存完整,阳性表达较多。混合酸脱钙后,骨结构破坏较多,抗原破坏较严重,阳性表达明显减少。结论EDTA脱钙优于传统的脱钙方法,更适合于骨组织脱钙和免疫组织学化制片。     

使用EDTA抗凝血检测凝血酶原时间

目的 比较病人用EDTA抗凝血和枸橼酸钠抗凝血检测PT、INR结果的差异。方法120位受试对象用枸橼酸钠和EDTA抗凝各采两管血,分离血浆后在STAGO仪器上检测胛,对两种抗凝方式所得PT、INR结果进行线性回归分析,分析其相关性及其结果间有无显著性差异。结果以枸橼酸钠法测得PT为Y,EDTA法测得PT为x,两者间PT线性方程为Y=0．86x-2．8,R^2=0．97,PT结果相关性好,但差异有显著性。INR线性方程为Y=0．95x＋0．03,R^2=0．98,相关性好且差异无显著性。讨论EDTA抗凝血浆检测胛在临床上是可接受的,但前提条件是应建立自己的参考区间,报告INR结果时还应统计EDTA抗凝血的MNPT（正常人平均Pr）,根据公式INR=（PT／MNPT）^ISI计算INR值。     

骨组织标本脱钙法的改进

骨组织是一种坚硬的结缔组织，骨基质中有机成分和无机盐紧密结合，使骨组织十分坚硬。因此，在制作骨组织切片时，必须经过脱除钙盐的过程，就是通常说的“脱钙”。传统的脱钙方法常常使用硝酸、盐酸等强酸溶液，尽管脱钙效果好，但能引起组织结构的严重破坏，     

次氯酸钠联合EDTA在牙科治疗中应用

在牙科治疗中,玷污层是牙体切割预备过程中的必然产物,临床上学者们主张用两种或两种以上化学冲洗剂去除玷污层.本文就近几年临床常用的次氯酸钠联合EDTA（乙二胺四乙酸）应用在牙科治疗中的作用机制及研究进展做一综述.     

NaClO与EDTA联合根管冲洗去除玷污层的研究进展

NaClO和EDTA是常用的根管冲洗剂,二者联合应用对去除根管壁玷污层具有重要的作用。本文就NaClO与EDTA联合根管冲洗去除玷污层的研究进展作一综述。     

EDTA抗凝剂引起的血小板减少和白细胞增多

目前临床血液学一般检查最常用的检测仪器是血细胞分析仪,它以检测速度快、精确度高、操作简便的优势为临床提供着有用的实验指标,对疾病的诊断和治疗有重要的意义。全血细胞分析常用的抗凝剂EDTA对细胞形态和血小板计数影响很小,它不影响细胞数目及体积大小,对红细胞形态影响最小,而且还可以抑制血小板聚集。根据国际血液学标准化委员会1993年文件建议血细胞计数用EDTA-K2作抗凝剂,用量为EDTA-K2-2H2O1.5mg/ml～2mg/ml血液。近年来因EDTA引起血小板聚集发生血小板假性减少并不少见,下面是1例血小板减少患者,经试验分析为EDTA依赖性假性血小板减少(EDTA-PTCT)。1资料与方法1.1临床资料患者,男,64岁,因肺癌多次入院化疗,此患者在门诊行血常规化验示血小板正常(检测结果距抽血不超过30min),入院血球分析示血小板计数明显低于参考值范围。(检测结果距抽血时间2h)。1.2仪器与试剂深圳迈瑞公司Bc-3000全血细胞分析仪,与仪器配套试剂及质控品。1.3材料EDTA-K2真空静脉采血管,枸橼酸钠(1∶9)真空静脉采血管,草酸铵稀释液,瑞氏染液,盐酸稀释液。1.4方法分别用EDTA-K2、枸橼...     

骨髓活检电镜样品制备方法

0　引言　用电镜观察骨髓活检标本是临床上诊断造血系统恶性疾病的重要手段之一 .为了获得准确而可靠的结果 ,既要求达到良好的固定 ,保存细胞原有的微细结构 ,又要求骨组织能迅速完全脱钙 ,便于切片 .为此我们摸索出一种较好的方法介绍如下 .1　材料和方法1.1　材料　收集西京医院 1997/ 1998送检我室的骨髓环钻活检标本 5例 ,其中白血病 3例 ,再障 2例 .固定脱钙液的配制 :首先量取多聚甲醛 2 g,双蒸水 2 5 m L ,加热溶解 ,待冷却后缓慢加入 10 0 mmol· L- 1 Na OH1～ 2滴至澄清 ,然后加入2 5 0 g· L- 1戊二醛 10 m L,2 0 mmol·L- …     

EDTA络合滴定法测定硫酸钡纯度

目的：采用EDTA配位滴定法准确快速测硫酸钡纯度并与常用的铬酸钡容量法进行对照。方法：本文采用EDTA络合滴定法,以二甲酚橙(XO)—氯化十六烷基吡啶(CPC)混合指示剂由紫红色变为浅灰色为终点,对硫酸钡进行定量分析。结果：与铬酸钡容量法对比结果良好,比一般采用的铬酸钡容量法、硫酸钡重量法和快速铬酸钡容量法简单易行,节约时间,结果可靠。     

骨组织脱钙后除酸方法的改进

骨、牙齿及其他钙化的组织 ,在制作切片前必须先经有机酸 (蚁酸、醋酸、甲酸 )及无机酸 (硝酸、盐酸、硫酸 )稀溶液浸渍脱钙后 ,还需经 2 4h流水冲洗除酸后才能常规脱水、浸蜡、切片、HE染色[1] 。此种方法除酸时间较长 ,而且染色效果并不十分理想。笔者经过大量的反复实践 ,探索出一种有效、方便、易掌握的快速除酸方法 ,染色效果比较满意 ,现报道如下。1　方法与结果　　将骨及钙化组织锯成 1.2cm× 1.2cm× 0 .3cm薄片 ,10 %甲醛固定 ,10 %硝酸脱钙 ,水洗 1min ;置入 2 %氢氧化钠液浸 10min ,流水冲洗 10min除酸 ;梯度乙醇脱水后再进行…