全脑缺血诱导海马组织信号转导与转录激活子-3的激活和DNA结合活性的调控

目的 研究全脑缺血诱导海马组织信号转导与转录激活子-3（STAT3）的激活调控。方法 采用SD雄性大鼠四动脉结扎建立的全脑缺血模型。以及腹腔注射给药的方法。运用免疫印迹和电泳迁移率改变实验检测蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸化抑制剂对海马核抽提物STAT3的磷酸化水平及DNA结合活性的影响。结果 缺血前20min腹腔注射染料大黄酮能明显抑制全脑缺血导致核内STAT3磷酸化水平及DNA结合活性的增高；而蛋白磷酸酶抑制剂矾酸钠则能明显促进两者的增加。结论 全脑缺血所致STAT3的磷酸化水平及DNA结合活性的增高可能受蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶的双重调控。     

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B与2型糖尿病相关性的研究现状

蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein tyrosine phosphatase,PTP)是蛋白质的酪氨酸磷酸化的重要参与因子。而蛋白质的酪氨酸磷酸化是翻译后修饰的主要方式之一,此反应受作用相反的一对酶调节,即蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)使酪氨酸磷酸化和蛋白酪氨酸磷酸酶使其脱磷酸。     

TEC酪氨酸激酶上下游作用分子研究进展

Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)最早是从肝癌组织中筛选出的一种重要的非受体型蛋白酪氨酸激酶,它存在于胞质内,主要在T细胞、B细胞、造血细胞及肝脏中表达.Tec是多种细胞因子、辅助分子及受体型蛋白酪氨酸激酶信号转导途径中的重要靶分子,被上游分子激活后,作用于下游底物使之磷酸化,进行信号分子的逐级传递,同时能够参与并调节多种生物学效应.现对其上下游主要作用分子作一简要综述.     

蛋白激酶C对肥大细胞活化信号转导的影响

目的 :观察蛋白激酶 C (PKC)对肥大细胞 RBL - 2 H 3活化时酪氨酸磷酸化及 c- fos和 c- jun表达等信号转导的影响。方法 :采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验测定活化的 RBL - 2 H 3细胞在佛波酯 (PMA)作用后 ,酪氨酸磷酸化和组胺浓度的改变 ;用 RT- PCR观察 PKC对 RBL - 2 H3细胞 c- fos和 c- jun基因 m RNA表达的影响。结果 :致敏 RBL - 2 H3细胞 ,在 PMA作用 48h后 ,抗原活化时磷酸化酪氨酸的平均荧光强度和组胺浓度分别为 (2 .79± 0 .0 7) %和 (6 0 .75± 1.38) nm ol/L ,都明显低于对照组的 (4 .47± 0 .0 3) %和 (10 4.47± 1.31) nm ol/L (P<0 .0 5 ) ;c- fos和 c- jun m RNA的表达量分别减少 91%和 82 %。结论 :PKC的活化可调节肥大细胞酪氨酸蛋白激酶活性 ,上调 c- fos和 c- jun m RNA的表达     

受体酪氨酸激酶调节钾离子通道功能的研究进展

受体酪氨酸激酶是一个具有内在酪氨酸蛋白激酶活性的膜受体超家族,成员众多,信号转导通路复杂多样.受体酪氨酸激酶激活后,既可以通过磷酸化其下游信号分子,影响基因转录和表达的过程,从而在细胞生长、增殖、分化和代谢方面起重要的调节作用;也可以通过活化下游分子对细胞功能进行快速调节包括对离子通道功能的调节.钾离子通道具有稳定细胞膜电位和调节细胞兴奋性的重要作用.本文主要就受体酪氨酸激酶对钾离子通道功能快速调节及目前的研究进展进行综述.     

配体诱导受体酪氨酸激酶活化的结构基础研究进展

受体酪氨酸激酶（RTK）家族是一类具有内源性蛋白酪氨酸激酶（PTK）活性的单次跨膜受体,它们在调控与细胞增殖、分化等相关的信号转导通路中起关键作用。它与配体结合后引起二聚化或结构重排而使胞内区的酪氨酸（Tyr）被自磷酸化。Tyr的自磷酸化一方面可以激活胞内PTK区的活性,另一方面可以为下游的信号蛋白提供结合位点从而完成活化过程。本文对RTK家族成员的晶体结构及其活性调节机制的研究进行了综述,阐述了由配体诱导RTK活化的结构基础,并简要讨论了RTK抑制剂可能的作用靶点。     

γ-干扰素诱导沙眼衣原体感染细胞酪氨酸激酶活化的研究

目的　探讨IFN -γ诱导的沙眼衣原体感染细胞信号转导中酪氨酸激酶活化。方法　采用IFN -γ作用于沙眼衣原体感染的McCoy细胞 ,用免疫印迹法检测信号蛋白酪氨酸激酶磷酸化的诱导活化 ,并应用酪氨酸激酶特异性抑制剂genistein拮抗IFN -γ诱导的酪氨酸激酶磷酸化。结果　IFN -γ可以在短时间内引起沙眼衣原体感染细胞内的蛋白质酪氨酸激酶磷酸化。磷酸化程度随时间延长而改变 ,在 15min时磷酸化程度最高 ,以后逐渐减弱。Genistein可抑制IFN -γ诱导的酪氨酸激酶磷酸化 ;随着浓度增大 ,抑制作用有所增加。结论　IFN -γ诱导沙眼衣原体感染细胞酪氨酸激酶活化。     

SHP-2酪氨酸磷酸酶:信号转导机制及生物学作用

细胞对各种胞外诱因的应答反应是由胞内的信号传导通路调节的。大量事实表明 ,这种胞外因子所启动的信号传导通路的异常将导致靶细胞产生功能障碍并最终死亡。许多重要的细胞生命活动如细胞增殖、分化 ,以及死亡均与细胞信号传导密切相关。在信号转导过程中 ,蛋白质中酪氨酸的磷酸化以及去磷酸化都是其中心环节[1 3] 。目前 ,关于由蛋白酪氨酸激酶及蛋白酪氨酸磷酸酶所实现的生物学过程已经很清楚了 ,它与信号蛋白分子的活性密切相关 ,直接参与调节蛋白———蛋白间的相互作用。由此 ,蛋白酪氨酸磷酸酶PTPS即将磷酸化的信号分子的酪氨酸去…     

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B与胰岛素信号转导

2型糖尿病是一种常见的代谢紊乱疾病，其特征是外周对胰岛素产生抵抗作用，大约有90％～95％的糖尿病患者伴有胰岛素抵抗，在分子水平表现为胰岛素与胰岛素受体结合后信号转导缺失。蛋白酪氨酸的磷酸化水平是细胞内信号转导的重要调节因素，它由蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）和蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTP）共同调控．近年研究发现，蛋白酪氨酸磷酸酶1B可以去磷酸化蛋白酪氨酸，在胰岛素信号转导通路中起着重要的负调控作用。因此明确PTP-1B与胰岛素信号传导的关系可能成为2型糖尿病的治疗的新靶点，本文对其关系综述如下。     

SHP-1蛋白在γ射线诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化

目的:探讨蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1蛋白在γ射线体外诱发的白血病小鼠胸腺细胞中的变化特点.方法:建立γ射线体外诱发BALB/c小鼠白血病模型.实验分为癌变组、未癌变组及对照组,从各组小鼠获取胸腺细胞,应用Western印迹、免疫沉淀法及生物化学方法检测各组胸腺细胞SHP-1蛋白质的表达、酪氨酸磷酸化水平及酶活性.结果:癌变组SHP-1蛋白的表达明显高于对照组及未癌变组(P＜0.01),但各组SHP-1的酪氨酸磷酸化水平及酶催化活性差异不显著(P＞0.05),且其酪氨酸磷酸化水平与酶活性间存在明显相关性.结论:在γ射线诱发的白血病小鼠的胸腺细胞中,SHP-1蛋白表达明显升高,但可能存在酪氨酸磷酸化障碍,导致其活性降低,即表现出SHP-1蛋白表达与其活性分离现象,提示辐射致癌中SHP-1蛋白可能存在功能障碍.     

受体酪氨酸蛋白激酶的研究

酪氨酸蛋白激酶是细胞信号转导的主要信号酶之一，对细胞的生长、发育与功能调控起着重要的作用。受体型酪氨酸蛋白激酶是细胞内段具有酪氨酸激酶活性跨膜结构的酶蛋白受体，其胞外区与生长因子配体结合，然后激活胞内段的酶活性区启动信号转导，参与细胞的生长、增殖、转化及胚胎发育和肿瘤形成。主要介绍受体型酪氨酸蛋白激酶的结构、分类及其信号转导途径。     

抗ABL酪氨酸激酶区胞内抗体对K562细胞在裸鼠体内生长的影响

目的观察人慢性粒细胞白血病细胞转导抗ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体基因后,对其在裸鼠体内生长的影响。方法应用基因重组技术构建逆转录病毒载体ＭＳＣＶ－ｉｂＥ－ＩＲＥＳ－ｅＧＦＰ,将胞内抗体基因转导Ｋ５６２细胞,观察胞内抗体的表达和细胞内ｃ－ＡＢＬ及ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶活性的变化;将表达胞内抗体的细胞与对照组Ｋ５６２细胞及转导空载体的细胞分别移植裸鼠,动态观察肿瘤的生长。结果获得表达胞内抗体基因的细胞模型：Ｋ５６２－ｉｂＥ,其靶蛋白酪氨酸激酶活性明显受抑。移植裸鼠后第１４,２１,２８天肿瘤体积均小于对照组的１／２。结论转导抗ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶区胞内抗体的细胞在裸鼠体内生长明显受抑制,这可能与胞内抗体显著抑制细胞内ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白酪氨酸激酶活性,阻断ＢＣＲ／ＡＢＬ信号途径,促进细胞凋亡,降低了细胞的体内致肿瘤性有关。     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

光动力疗法结合三羟异黄酮对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的深入了解光动力疗法与三羟异黄酮协同应用对荷瘤小鼠肿瘤生长抑制的作用特点。方法通过建立荷瘤小鼠动物模型,以光动力疗法和三羟异黄酮单独友协同应用后检测其抑瘤率及延命率,比较各组差异有无统计学意义。结果光动力疗法与三羟异黄酮的联合应用较光动力疗法或三羟异黄酮的单独作用更为显著的延缓荷瘤小鼠肿瘤体积的增长并延长荷瘤小鼠的生存时间。结论在体内实验中,三羟异黄酮能显著增强光动力疗法抗肿瘤作用疗效。     

香菇多糖对HL-60细胞酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响

目的 :研究香菇多糖对人早幼粒白血病细胞 (HL - 60 )酪氨酸蛋白磷酸化作用的影响。方法 :以不同浓度的药物处理体外培养的HL - 60细胞 ,用放射免疫法测定经过培养 48h的对照组和药物处理组胞浆和膜部分的酪氨酸蛋白激酶 (TPK)和磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶 (PTPP)的活力 ,比较酶活力变化情况。结果 :药物对胞浆和膜两部分TPK活力均有一定程度的抑制 ,但抑制作用不明显 (P >0 .0 5) ,而对两部分PTPP活力均有明显的激活作用 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。结论 :由于上述结果 ,最终导致HL - 60细胞酪氨酸蛋白磷酸化水平下降。提示香菇多糖抗肿瘤作用的分子机制可能与酪酸蛋白磷酸化作用有关     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B与胰岛素的信号转导

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP-1B)是一种胰岛素信号转导的负性调节因子,通过使胰岛素受体及其底物等信号蛋白的酪氨酸去磷酸化而阻断胰岛素的信号转导通路,其负调节作用具有组织特异性,多种因素影响其催化活性,另外PTP-1B在胰岛素信号转导通路中也与其他蛋白酪氨酸磷酸酶相互协调作用。由于PTP-1B与2型糖尿病、肥胖症等代谢性疾病的关系密切,开发小分子PTP-1B抑制剂对该类疾病的防治提供了新的思路。     

三羟异黄酮对脐静脉内皮细胞ECV304增殖影响与VEGFR的关系

目的探讨三羟异黄酮(genistein)抗肿瘤血管生成的机制.方法通过绘制生长曲线和流式细胞仪检测三羟异黄酮和血管内皮生长因子(vaScular endothelial growth factor,VEGF)对脐静脉内皮细胞ECV304增殖的影响,应用免疫沉淀和激酶活性分析方法检测ECV304细胞血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growthfactor receptor,VEGFR)磷酸化水平和蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性.结果VEGF单独处理能使ECV304细胞增殖,VEGFR磷酸化水平和PTK活性升高,而三羟异黄酮单独处理能抑制ECV304细胞生长,细胞周期主要被阻止在G2/M期,并出现细胞凋亡现象,VEGFR磷酸化水平和PTK活性降低(P＜0.01),三羟异黄酮和VEGF同时处理时,细胞周期主要仍被阻止在G2/M期,但凋亡率下降,VEGFR磷酸化水平和PTK活性与VEGF单独处理组相比降低.结论三羟异黄酮能下调ECV304细胞VEGFR的磷酸化水平及PTK活性,从而阻断胞外生长刺激信号向胞内转导的级联反应,阻遏血管内皮细胞生长,抑制肿瘤血管生成.     

Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响

目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pcDNA3．1(his-myc-Tec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体瞬时转染Hela细胞,用Western方法检测Tec蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因系统,检测Tec是否参与HGF刺激信号途径的活化。结果构建的Tec真核表达载体使Hela细胞高表达Tec蛋白;并发现Tec在HGF介导下,对Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强作用。结论构建了Tec真核表达载体,并能使HGF介导的MAPK途径活化,提示Tec可能参与HGF介导肝细胞增殖的信号调控。