不同剂量的rhG CSF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织VEGF的影响

目的 探讨不同剂量的rhG-CSF对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织VEGF的影响.方法 7日龄Wistar大鼠96只随机分为四组:缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型组,rhG-CSF小剂量组(60μg/kg),中剂量组(100μg/kg),大剂量组(200μg/kg),每组各24只.每组根据处死时间不同又分为三个亚组:24 h组,48 h组,72 h组,每亚组各8只.各组均建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,治疗组分别在缺氧缺血后即刻给予rhG-CSF 60μg/kg,100μg/kg,200μg/kg颈部皮下注射,并连用3 d.各组于不同时间点取脑组织,用免疫组化法检测脑组织中VEGF的表达.结果 与HIBD模型组各时间点相比,rhG-CSF各剂量组脑组织VEGF表达均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01);同一时间点rhG-CSF各剂量组间VEGF表达差异均无统计学意义(P>0.05),但小剂量组各时间点脑组织外观两侧基本对称,而中剂量组及大剂量组缺氧缺血侧脑组织出现水肿,大剂量组较明显.结论 rhG-CSF治疗可明显增加脑组织VEGF的表达,有利于脑组织结构和功能的恢复,60μg/kg为较合适的剂量.     

缺氧预处理抑制新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的观察

目的观察缺氧预处理(HPC)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨HPC对新生大鼠HIBD的保护机制。方法7日龄新生SD大鼠40只随机分为空白对照组、假手术组、HIBD组、HPC组。各组实验动物于缺氧缺血后24h处死,用免疫组织化学方法,检测脑组织海马区Bcl-2和Bax表达的变化。结果与空白对照组、假手术组相比,HIBD组和HPC组海马区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达明显增多(P<0.05);与HIBD组相比,HPC组海马区Bcl-2蛋白表达明显增多,Bax蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论促进Bcl-2表达,抑制Bax表达,从而抑制细胞凋亡,是HPC对随后的HIBD的脑保护机制之一。     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。     

硫酸镁和神经节苷脂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的影响

目的 :研究硫酸镁与神经节苷脂 (GM 1)对新生鼠缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)的影响。方法 :用SD大鼠 (7日龄 )制备HIBD模型 ,以末端脱氧核酸转移酶介导的三磷酸去氧鸟苷转移酶原位缺口末端标记技术检测大鼠脑皮质凋亡细胞数 ;观察硫酸镁或GM 1对大鼠体重、脑重量变化和脑细胞凋亡的影响。结果 :硫酸镁与GM 1干预组的体重增加值和左右脑重量差值与缺氧缺血性脑病 (HIE)对照组比较有统计学意义 ;两干预组皮质凋亡细胞数与HIE对照组比较明显减少 (P <0 0 1)。提示硫酸镁和GM 1有促进大鼠体重增长、改善脑水肿、减轻脑细胞凋亡发生的作用。结论 :硫酸镁和GM 1早期干预对HIBD具有一定的保护作用     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后学习记忆功能的影响

目的动态观察促红细胞生长素（erythropoietin,EPO）早期对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后（hypoxic ischemicbrain damage,HIBD）学习记忆功能的影响,从神经行为学方面探索不同剂量EPO早期对新生鼠HIBD的保护作用,为临床早期应用EPO治疗新生儿缺氧缺血性脑病选择合适的治疗剂量提供实验参考。方法新生7日龄Wistar大鼠40只随机分为HIBD生理盐水对照组、假手术组、EPO治疗Ⅰ组、EPO治疗Ⅱ组、EPO治疗Ⅲ组,每组8只,通过结扎并剪断7日龄新生大鼠右侧颈总动脉,吸入8%O2＋92%N2的低氧气源2小时制备新生鼠HIBD模型。EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别于缺氧缺血完成后即刻注射rhEPO5u/g、10u/g、15u/g,HIBD对照组即刻注射生理盐水0.5mL/只,连续14天,通过Morris水迷宫实验观察五组大鼠的学习记忆功能。结果①学习能力：五组大鼠逃逸伏期总体比较差异有统计学意义（〈0.05）,其中假手术组最短,EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组次之,HIBD对照组最长。②记忆能力：HIBD对照组穿环指数与假手术组、EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间差异均有统计学意义（〈0.05）,而假手术组与EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间比较,差异无统计学意义（〉0.05）,EPO治疗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组间相互比较,差异亦无统计学意义（〉0.05）。结论①EPO早期治疗可改善新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后的学习和记忆功能;②通过对本试验的选择的三种EPO实验剂量对新生大鼠HIBD的影响结果表明,随着EPO剂量的增加并不能增强脑保护作用。     

川芎嗪对新生鼠缺血缺氧脑损伤HIF-1α表达的影响

目的:探讨实验性大鼠缺血缺氧脑损伤(HIBD)时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及川芎嗪对HIF-1ɑ表达的影响?方法:新生SD大鼠结扎左侧颈总动脉并置于缺氧环境中,制备HIBD模型?川芎嗪干预组在缺血前和缺血后腹腔注射川芎嗪(50 mg/kg)?应用逆转录PCR和免疫组化方法观察川芎嗪对HIBD新生鼠皮质部位HIF-1α mRNA 及蛋白表达的影响?结果:缺血缺氧2 h后HIF-1α mRNA 及蛋白表达有增加的趋势,但与假手术组相比无统计学意义(P > 0.05);川芎嗪干预组HIF-1α mRNA 及蛋白表达显著增加,明显高于缺血缺氧组(P < 0.05)?结论:川芎嗪促进新生鼠缺血缺氧脑损伤皮质部位HIF-1α mRNA 及蛋白表达,是其神经保护作用的重要机制?     

高压氧在新生鼠缺氧缺血性脑损伤神经修复中的作用机制

目的 探讨高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)在新生鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)神经修复中的作用机制.方法 新生7日龄SD乳鼠30只,随机分为HIBD+HBO干预组、HIBD组和正常对照组,每组10只.干预组于建模后予以HBO治疗,连续7 d.采用免疫组化技术检测各组骨形态发生蛋白4(BMP-4)及神经巢蛋白(nestin)在海马的表达;采用原位杂交技术检测各组BMP-4及nestin mRNA在海马的表达;采用TUNEL方法 检测各组神经细胞凋亡.结果 3组中,干预组BMP-4蛋白在海马的表达最多,HIBD组BMP-4蛋白在海马的表达最少;干预组nestin蛋白在海马的表达最多,HIBD组nestin蛋白在海马的表达最少;干预组BMP-4 mRNA在海马的表达最多,HIBD组BMP-4 mRNA在海马的表达最少;干预组nestin mRNA在海马的表达最多,HIBD组nestin mRNA在海马的表达最少;HIBD组凋亡神经细胞最多.HBO干预组凋亡神经细胞与HIBD组差异有统计学意义(P<0.01).结论 HBO对HIBD具有神经修复作用,其作用机制可能与促进BMP-4及nesfin在海马的表达以及抑制神经细胞的凋亡有关.     

NS398对缺氧缺血性脑损伤新生鼠远期学习记忆能力的干预效应

目的 研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时应用选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398干预后的远期学习记忆能力干预效应.方法 于制备新生大鼠左脑的HIBD模型后30min,应用腹腔注射NS398 20mg/kg,同时建立未注射HIBD组及假手术组,于HIBD后28d,用Morris水迷宫实验及穿梭箱实验测试大鼠的远期学习记忆能力.结果 28d后HIBD组远期学习记忆能力显著低于假手术组;NS398组远期学习记忆能力优于HIBD组.结论 应用选择性COX-2抑制剂NS398可以改善HIBD新生鼠的远期学习记忆能力.     

孕酮对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后脑组织糖原合成酶激酶-3β的影响

目的探讨孕酮对缺氧缺血性脑损伤新生鼠皮层和海马糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)水平的影响。方法40只7日龄新生Wistar大鼠随机分成假手术组、缺氧缺血组、孕酮4 mg组、孕酮8 mg组和孕酮16 mg组。假手术组腹腔注射溶剂芝麻油,缺氧缺血组于缺氧前30 min腹腔注射溶剂芝麻油,孕酮组于缺氧前30 min腹腔注射相应剂量的孕酮溶液,建立缺氧缺血脑损伤动物模型。24 h后动物全部处死,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织中GSK-3β的含量。结果缺氧缺血组新生鼠皮层和海马组织中GSK-3β水平明显高于假手术组(P<0.01),孕酮4 mg、8 mg、16 mg组皮层和海马组织中GSK-3β水平均明显低于缺氧缺血组(P<0.05)。结论缺氧缺血可升高新生鼠皮层和海马GSK-3β水平,孕酮通过降低新生鼠缺氧缺血时皮层和海马组织中GSK-3β水平发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

不同亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探讨不同亚低温干预对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用.方法Wistar 7 d龄新生大鼠,随机分为缺氧缺血后29 ℃干预组、31 ℃干预组、34 ℃干预组、常温(37 ℃)恢复组、正常对照组(假结扎组).各组取20只动物于缺氧缺血后78 h处死,测定脑组织含水量及微管相关蛋白-2免疫组化染色;10只于生后42 d用迷宫实验检测其学习和记忆能力.结果与常温恢复组相比亚低温干预各组大鼠脑组织含水量及脑损伤程度显著降低,且随着温度的降低,脑组织含水量及脑损伤程度逐渐降低(P<0.05).亚低温干预各组大鼠学习和记忆能力显著高于常温恢复组(P<0.05),且随着温度的降低逐渐提高(P<0.05).结论亚低温干预可减轻新生大鼠HIBD,且随着温度的降低,效果越好,29 ℃亚低温干预短期效果优于31 ℃、34 ℃低温干预.     

抗癌生物活性肽对实验性裸鼠肿瘤组织中p53和Bcl-2表达的影响

目的探讨抗癌生物活性肽(ACBP)作用于荷胃癌裸鼠后对肿瘤中p53和Bcl-2蛋白表达的影响,探讨ACBP可能的作用机制。方法成功建立荷胃癌裸鼠模型后将鼠随机分为2组,各组10只。对照组给予生理盐水;实验组腹腔注射活性肽0.4 mL(50 mg/L)。连续处理35 d,停药4 d后处死裸鼠,取肿瘤,应用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法检测突变型p53蛋白及Bcl-2蛋白的表达情况。结果 p53和Bcl-2蛋白在对照组肿瘤中阳性表达较强,在活性肽组中的表达均比对照组的表达弱,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ACBP对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显的抑制作用,可能是通过影响p53和Bcl-2的表达实现的。     

肝细胞肝癌组织中survivin基因的表达及与p53、Bcl-2表达的关系

目的 探讨survivin基因在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达、定位及临床意义,以及与p53和Bcl-2表达的关系.方法 应用SABC免疫组织化学染色技术对87例HCC组织及其50例癌旁组织、4种肝癌细胞系和27例非肝癌肝组织进行survivin蛋白检测,对其中的30例HCC组织进行突变型p53和Bcl-2蛋白检测;应用Western blot和real time-PCR等技术对8例HCC组织及其癌旁组织、4种肝癌细胞系进行survivin蛋白和mRNA进行检测;对74例HCC患者的临床分期、病理分级、瘤块大小等与survivin蛋白表达情况进行相关性分析.结果 ①HCC组织、癌旁组织和非肝癌肝组织中,survivin蛋白阳性表达率分别为59.77%(52/87),26.00%(13/50)和0(0/27),HCC组织中survivin蛋白表达与癌旁组织和非肝癌肝组织比较差异均有统计学意义(P<0.01),且与患者年龄、性别、瘤块大小、有否转移、临床分期和病理分级等均无相关关系(P>0.05).②survivin mRNA在HCC组织、癌旁组织中阳性表达率分别为37.5%(3/8)和0(0/8);survivin蛋白和mRNA在4种肝癌细胞系(SMMC-7721,HHCC,HCC-9724 和HepG2)中,除HepG2外均呈高表达.③survivin蛋白表达与突变型p53表达存在明显正相关(χ2=4.693,P=0.030),与Bcl-2表达无明显相关(χ2=0.25,P=0.617).结论 survivin基因可能成为肿瘤基因治疗的靶点;survivin基因与p53基因在抑制肿瘤细胞凋亡方面可能具有某种协同作用;检测survivin表达水平对判断HCC恶性程度和预后可能无临床价值.     

加味补阳还五汤对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤低氧诱导因子-1表达的调控

[目的]建立新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,观察低氧诱导因子-1（HIF-1）的表达及加味补阳还五汤对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为新生儿缺氧缺血性脑损伤提供新的治疗思路。[方法]新生7d龄SD大鼠140只,随机分为空白组（28只）、HIBD模型组（28只）及加味补阳还五汤组（84只）,加味补阳还五汤组按给药剂量分为高、中、低剂量组。每组分别在规定时间点处死,光镜下观察各组大鼠左侧脑组织HE染色的病理改变、组织中HIF-1α蛋白表达,并通过RT-PCR检测HIF-1基因表达。[结果]缺氧缺血后新生大鼠出现不同程度的行为异常,1h后逐渐由兴奋转为抑制,少数发生抽搐;HE染色结果显示,加味补阳还五汤高剂量组各时间点损伤程度比中、低剂量组均有明显减轻;免疫组化结果显示,加味补阳还五汤各剂量组各时间点HIF-1α阳性细胞数均较空白组多,高剂量组各时间点HIF-1α阳性细胞数均较HIBD组明显增多;荧光定量PCR检测结果表明加味补阳还五汤高剂量组HIF-1的表达量高于其他组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。[结论]加味补阳还五汤能通过上调HIF-1的表达来减轻缺氧缺血所致的脑损伤,此研究为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供了新的治疗思路。     

缺氧缺血对新生大鼠松果体芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶基因表达和血浆褪黑素水平的影响

目的了解缺氧缺血性脑损伤（HIBD）对松果体芳香烷基胺-N-乙酰基转移酶（AANAT）mRNA表达和血浆褪黑素（MLT）含量的影响,探讨松果体功能改变在HIBD中的意义。方法选取7日龄SD大鼠60只随机分成HIBD模型组和假手术组。HIBD模型组按改良Levine法建立,然后用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和放免技术分别测定并比较两组缺氧缺血后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h松果体中AANAT mRNA的表达水平及血浆MLT的浓度。结果 （1）松果体中AANATmRNA的表达在HIBD后6 h、12 h、24 h低于对应假手术组（P〈0.05或〈0.01）;假手术组各时点之间AANAT mRNA的表达水平无明显变化（P〉0.05）。（2）血浆MLT浓度在HIBD后12 h、24 h均低于对应假手术组（P〈0.01）;假手术组各时点之间MLT浓度均无明显变化（P〉0.05）。结论 HIBD早期松果体合成褪黑素的功能下降及内源性MLT保护作用的降低可能参与早期HIBD的发病。     

乳腺病变组织中BcL-2,p53蛋白的表达

目的　观察 Bcl- 2 ,p5 3蛋白在浸润前系列乳腺病变(包括正常乳腺组织、导管增生、不典型导管增生、小叶增生、导管原位癌 )组织中的表达 .方法　采用免疫组化方法检测15例正常乳腺组织、18例导管增生、10例不典型导管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)、10例小叶增生 ,45例导管原位癌 (ductal carcinoma in situ,DCIS)的 Bcl- 2和 p5 3蛋白的表达 .结果　 Bcl- 2蛋白在正常乳腺组织、导管增生、ADH、小叶增生组织中均阳性 ,而 p5 3蛋白染色阴性 .DCIS病例中 ,Bcl- 2蛋白表达阳性 34例 (76 % ) ,而 p5 3蛋白阳性 11例(2 4% ) .Bcl- 2蛋白表达与 DCIS组织学分级密切相关 (P<0 .0 1) ,6 7% DICS病例表现为 Bcl- 2 + / p5 3-表达表型 ,还有33%不同于正常的表型 (包括所有 Bcl- 2 - / p5 3+表型 )多代表差分化病例 .结论　 Bcl- 2蛋白在正常乳腺组织、导管增生、ADH、小叶增生组织中均有表达且高于乳腺 DCIS.大部分DCIS病例表现为 Bcl- 2 + / p5 3-表型 ,与正常乳腺上皮、良性增生病变一致     

温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡及对Bcl-2、p53表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导肠癌细胞凋亡的作用机制。方法:流式细胞技术检测肠癌细胞凋亡率及Bcl-2、p53的表达。结果:与正常血清组相比,含药血清组能明显诱导肠癌细胞凋亡,提高p53、降低Bcl-2表达(P<0.05)。结论:温下方含药血清诱导细胞凋亡的作用机制可能与提高p53、降低Bcl-2的表达有关。     

鹿石合剂对缺氧缺血脑损伤新生大鼠海马BDNF、NGF、NSE免疫表达的影响

目的探讨鹿石合剂对缺氧缺血脑损伤新生大鼠保护作用的机制。方法建立缺氧缺血新生大鼠动物模型，用HE染色及免疫组织化学方法，观测药物干预后大鼠海马CA1区锥体细胞形态学变化及对脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）和神经元烯醇化酶（NSE）免疫阳性神经元的影响。结果鹿石合剂高剂量及“洛斯宝”干预后，细胞形态接近空白组；对于BDNF及NGF，与模型组及鹿石合剂低剂量组比较，P〈0．01；对于NSE，免疫反应接近空白组。结论鹿石合剂可上调大鼠海马CA1区锥体细胞BDNF、NGF及NSE的免疫表达水平，促进神经元的修复及神经功能的重塑。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑细胞VEGF的表达与凋亡的关系

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与脑细胞凋亡的关系.方法 利用新生7日龄Wistar大鼠制备HIBD模型.应用HE染色、电镜、原位缺口末端标记(TUNEL)法及免疫组织化学法研究HIBD时脑细胞凋亡情况、VEGF蛋白的表达及两者的关系.结果 HE染色、TUNEL染色及透射电镜结果均证实,新生大鼠HIBD时凋亡是神经细胞主要的死亡形式.与坏死共存,且凋亡的发生先于坏死.免疫组化检测结果发现,VEGF蛋白在正常大鼠脑的各个部位都有表达,缺氧缺血(H1)大鼠VEGF表达明显增强,HI后即刻VEGF表达增强,1d时迭高峰,3d后逐渐减弱;HI后病变严重的皮质、纹状体中心VEGF表达减弱,在病变较轻部位表达较强,海马也存在不均匀分布的VEGF阳性细胞,尤其CAECA3区域可见较多的阳性细胞散在分布.表明HIBD时脑组织中VEGF的表达除与HI后的时间有关外,还与病变严重程度有关.结论 迟发性的细胞凋亡是HIBD加重及病损区扩展的重要因素.VEGF可能参与了HIBD的发病过程,VEGF出现在凋亡细胞较多的部位,表明其可能与脑细胞凋亡密切相关.     

多药耐药基因产物及p53、Bcl-2蛋白在胃癌组织中的表达

目的 探讨多药耐药基因产物P -糖蛋白(P - gp)、谷胱甘肽 -S-转移酶π(GSTπ)及DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、p53、Bcl-2蛋白在胃癌发生、发展和耐药性产生中的作用以及相互间的关系。 方法 应用免疫组化SP法检测胃癌组织中P - gp、GSTπ及TopoⅡ与 p53、Bcl-2蛋白的表达情况。结果 胃癌组织中P - gp在淋巴结转移组和癌组织浸润达浆膜外组的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组和浆膜内浸润组的阳性表达率(P<0.05) ;GSTπ及p53蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组的阳性表达率(P<0.05) ;Bcl-2蛋白的阳性表达率为50.0% ,高分化腺癌的阳性表达率显著高于未分化癌的阳性表达率(P<0.05)。胃癌组织中P- gp与 p53、Bcl-2蛋白的表达有正相关性 (r>0.3)。 结论 p53、Bcl-2蛋白参与了胃癌的发生 ;P - gp阳性表达提示胃癌细胞对化疗药物存在原发性耐药 ,同时与癌细胞浸润深度、淋巴结转移有关。有多种耐药机制参与了胃癌耐药性的发生。