槲皮素对培养人视网膜色素上皮细胞增生及DNA合成的影响

目的研究槲皮素(quercetin, QUE)对培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞增生和DNA合成以及对表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)促RPE细胞增生和DNA合成作用的影响。方法用细胞计数和3H-胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine, 3H-TdR)掺入方法,观察不同浓度(200、100、50、1μmol/L)的QUE和最大浓度的QUE(200μmol/L)在不同作用时间（24-168小时）,分别单独或与EGF共同作用时,对RPE细胞增生及DNA合成的影响,排除着色的死细胞,用活细胞计数法判断药物的细胞毒性作用。结果QUE 200μmol/L具有最强的抑制效应,48小时时抑制效应已明显出现,96小时时抑制达到高峰。与QUE单独作用相比,QUE对EGF的促RPE细胞增生效应能产生更强的抑制。QUE无细胞毒性作用,各实验组细胞活力均在85.00%以上。结论QUE以剂量依赖和时间依赖的方式抑制RPE细胞的增生,尤其是由EGF刺激的增生,并且对培养的RPE细胞无细胞毒作用。(中华眼底病杂志,1999,15:27-29)     

神经生长因子对人胚胎视网膜色素上皮细胞生长及其DNA合成的影响

研究表明一些细胞因子 (如碱性成纤维细胞生长因子等 )在体外能促进培养的视网膜色素上皮细胞 (retinal pigmentepithelium,RPE)增生和 DNA合成[1 ] 。神经生长因子 (nervegrowth factor,NGF)不同于其他细胞因子 ,是主要作用于神经细胞和神经系统生长、发育以及发挥正常生理功能所必须的一类神经营养因子 ,虽然 RPE细胞不是神经细胞 ,但它是从神经外胚层分化而来的 ,因此 ,我们试图在体外探讨 NGF是否对RPE细胞生长以及 DNA合成有促进作用。1　材料和方法4只人胚眼取自孕 16～ 32周水囊引产的胎儿。将胚眼收集在 4℃ D- Hanks液中…     

曲尼司特对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:观察曲尼司特对体外培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的影响。方法:用不同浓度的曲尼司特0(对照组),12.5,25,50,100mg/L作用于体外培养的3~5代人RPE细胞(RPE-19细胞株),在倒置显微镜下、结合HE染色观察细胞形态,并采用细胞角蛋白CK18对细胞进行鉴定。分别在作用12,24,48h后采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞抑制率,蛋白质印迹法(Western-Blot)和免疫组织化学法观察不同浓度的曲尼司特作用24h后细胞表达转化生成因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子受体A(PDGFR-A)蛋白的情况。结果:相同时间点不同浓度曲尼司特对细胞抑制率随浓度增加而增大,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1蛋白表达定位于细胞浆,PDGFR-A蛋白定位于胞膜和胞浆,它们的表达量都随曲尼司特浓度的增加而下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:曲尼司特可以抑制人RPE细胞的增殖,并有剂量依赖性,其机制可能与下调TGF-β1和PDGFR-A蛋白表达有关。     

苏拉明对体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cells)生长、增殖的影响。方法 以300mg·L~(-1)苏拉明作用于培养的视网膜色素上皮细胞,于不同的时间点行细胞计数,绘制生长曲线,台盼蓝染色判定细胞的活性;将不同浓度的苏拉明(0、100、200、300、400mg·L~(-1))加入RPE细胞培养液,72h后用四甲基唑盐(MTT)比色法测吸光值A,并计算不同浓度条件下的细胞增殖抑制率;流式细胞技术检测细胞周期变化。结果 苏拉明在所设浓度内均抑制RPE细胞增殖,并存在时间-效应及剂量-效应关系,最大增殖抑制率约78％,72h时IC_(50)为272mg·L~(-1)。FCM示suramin使G_2/M期细胞增加了14.2％。结论 苏拉明能抑制体外培养的人视网膜色素上皮细胞增殖,可作为防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的候选药物作进一步研究。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

透明质酸刺激活性物对人视网膜色素上皮细胞的抑制

目的观察透明质酸(hyaluronic acid,HA)刺激活性物(HA-stimulating activity,HASA)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的作用。方法将不同质量浓度的HASA加入RPE细胞培养液, 采用活细胞计数、四甲基偶氮唑盐(tetrazolium,MTT)比色法及氚标胸腺嘧啶核苷(³ H-th ymidine,^3 H-TdR)掺入法检测细胞活力,用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析RPE细胞周期。结果HASA在12.5～200．0 μg/ml范围及48小时内对人RPE细胞的抑制存在剂量-效应及时间-效应关系。最大细胞抑制率约48.0%。FCM显示 HASA作用后G₁期细胞数较对照组增加7.2%,S期减少9.7%。结论HASA在一定时间和剂量范围内对人RPE细胞有抑制作用。(中华眼底病杂志,1999,15:72-74)     

电场对人视网膜色素上皮细胞移行的影响

目的 观察外源性直流电场对人视网膜色素上皮（hRPE）细胞移行行为的影响，揭示电场在RPE细胞损伤修复中的生理作用及临床意义。 方法 培养的hRPE细胞依培养液成分不同分为改良Eagle培养液(DMEM)组、DMEM+10%新生小牛血清(FBS)组,两组中未暴露于电场的细胞设为对照。将细胞分别暴露于强度为0、4、6 、8 V/cm的电场中，显微摄像系统连续记录2 h中每隔15 min细胞移行的变化图像，测量细胞移行距离及细胞移行方向与场线间夹角。图像分析系统处理结果。 结果 DMEM组中细胞对电场的反应较弱，电压加至6 V/cm时可观察到细胞向阴极方向的移动趋势(不同电场强度中2 h里所有单个细胞总体的位移方向指标之间，即平均cosine Ф相比,P＜0.05）。DMEM+10%FBS组中电场对细胞的作用加强，4 V/cm时细胞出现长轴垂直于场线的排列方式，并向电场阴极运动，该现象随电场强度的增加而更为明显（不同电场强度之间及不同培养液之间平均cosine Ф相比，P＜0.05）。当电极方向转换后，细胞的定向移行方向随阴极方向而改变。 结论 外加电场可诱导hRPE细胞的电场阴极方向的定向移行,此作用受血清影响并与电场强度成正相关。在视网膜损伤后的早期修复过程中，内源性的电场可能是诱导hRPE细胞移行的始动因素之一。 （中华眼底病杂志，2006，22：404-407）     

视网膜色素上皮细胞的体外培养

视网膜色素上皮细胞培养技术是研究其生理功能，生化特征和病理过程的一个重要手段，本文介绍了视网膜色素上皮细胞的分离、培养、纯化和鉴定技术。细胞分离以机械分离和酶消化为主。细胞贴壁培养是目前最常使用的方法。细胞的鉴定以开矿学鉴定和免疫组化鉴定方法。     

视网膜色素上皮（RPE）与增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）

视网膜色素上皮（ＲＰＥ）与增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）上海医大眼耳鼻喉科医院眼科栾洁综述王文吉审阅ＰＶＲ是指增殖性玻璃体视网膜病变，表现为剥离后由视网膜在其内、外面及玻璃体内形成可以收缩的细胞性膜，常致视网膜剥离复位手术失败。许多学者认为，视网膜...     

生长因子对培养人眼视网膜色素上皮细胞增的调控作用

探讨生长因子对人眼视网膜色素上皮细胞增殖的调控作用。方法建立人眼ＲＰＥ细胞的培养体系，利用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和细胞计数观察表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子胰岛素样生长因子对培养ＲＰＥ细胞的作用。     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞促进DNA合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人RPE细胞第6代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷(³H-thymidine, ³H-TdR)掺入试验及放射自显影检测EGF、bFGF对RPE细胞的促DNA合成作用。结果EGF、bFGF均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含2%血清的培养液中,EGE、bFGF作用最佳浓度为1ng/ml,明显低于无血清培养液中EGF、bFGF作用的最佳浓度(10ng/ml)。联合应用10ng/mlEGF、10ng/mlbFGF约提高RPE细胞合成DNA能力2.96倍。结论EGF、bFGF对培养的人RPE细胞具有促进DNA合成作用，且两者可产生协同效应。(中华眼底病杂志,1998,14:98-100)     

神经生长因子对人胚胎视网膜色素上皮细胞生长及其DNA合成的影响

研究表明一些细胞因子(如碱性成纤维细胞生长因子等)在体外能促进培养的视网膜色素上皮细胞 (retinal pigment epithelium, RPE) 增生和DNA合成[1].神经生长因子(nerve growth factor, NGF)不同于其他细胞因子,是主要作用于神经细胞和神经系统生长、发育以及发挥正常生理功能所必须的一类神经营养因子,虽然 RPE 细胞不是神经细胞,但它是从神经外胚层分化而来的,因此,我们试图在体外探讨NGF是否对 RPE 细胞生长以及DNA合成有促进作用.     

细胞外基质蛋白和转化生长因子β2共同作用诱导人视网膜色素上皮细胞向肌纤维母细胞转化

目的 了解转化生长因子β2（TGFβ2）和细胞外基质（ECM）调节人胚胎视网膜色素上皮（hfRPE）细胞向肌纤维母细胞分化的作用，确定这种调节的信号传导机制。 方法 hfRPE细胞培养于由ECM包被或未包被的培养皿上，培养液中加入或不加入TGFβ2，用免疫组织化学、流式细胞仪、蛋白印迹技术检测α平滑肌机动蛋白（α-SMA）的表达。在培养液中分别加入calphostin C, 染料木黄铜（genistein）, PD98059和渥曼青霉素（Wortmannin），测定α-SMA的表达。 结果 hfRPE细胞培养于ECM包被的培养板上，培养液中加入TGFβ2后，出现明显的形态学改变，包括细胞伸展变长，可见肌动蛋白微丝的形态。流式细胞仪及免疫细胞化学检测结果显示，培养液中加入TGFβ2可明显增加α-SMA的表达，并与剂量成正相关。当TGFβ2 的刺激浓度为50 ng/ml时，与培养于未包被的培养板上的hfRPE细胞相比，用纤维连接蛋白（FN）包被培养板后，〖JP1〗总的平均荧光强度（TMFI）增加（38.01±1.14）%（P<0.05）。蛋白印迹技术检测显示同样的结果。而上述效应可以大部分被蛋白激酶C（PKC）通路抑制剂calphostin C（10 nmol/L）抑制（P<0.01）。 结论 TGFβ2可诱导hfRPE细胞向肌纤维母细胞转化，并与其剂量成正相关，这种作用可被FN加强。TGFβ2和ECM的这种调节作用可能是通过PKC细胞内信号传导通路而发挥作用 。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 328-332)     

染料木黄酮对培养的人视网膜色素上皮细胞增生和凋亡的影响

目的 观察不同浓度染料木黄酮对培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)的增生和凋亡的影响。 方法 通过四唑溴盐(MTT)比色法和核仁嗜银蛋白(AgNORs)染色分析，观察不同浓度(5、10、25、50、75、100 mg·L^-1)染料木黄酮作用12、24、48、72 h后对RPE细胞增生的影响。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色与光学显微镜和透射电子显微镜的形态学观察，研究其对RPE细胞凋亡的诱导作用，并与正常培养的人RPE细胞对照比较。 结果 25、50、75、100 mg·L^-1浓度的染料木黄酮可抑制RPE的增生，抑制率为12.0%~64.6%,与正常RPE细胞相比，差异有显著性的意义(P＜0.05)；随药物剂量的增加和作用时间的延长细胞核内AgNORs数量减少。TUNEL染色结果显示，50 mg·L^-1染料木黄酮作用24、48和72 h后，RPE细胞的凋亡百分数的中位数分别为7.6%、9.8%和13.7%。当浓度为75、100 mg·L^-1时，以上3个时间点凋亡细胞百分数的中位数分别为10.3%、16.4%和23.4%；15.4%，21.2%和35.8%。透射电子显微镜观察结果显示，50 mg·L^-1染料木黄酮作用48h后，RPE细胞核内呈现凋亡特征。 结论 不同浓度的染料 木黄酮可以抑制RPE细胞的增生，有剂量效应关系和时间效应关系；当达到一定浓度时，染料木黄酮可以诱导RPE凋亡的发生。 （中华眼底病杂志，2004，20：241-244）     

细胞因子对培养的人视网膜色素上皮细胞胶原合成的影响

目的 观察转化生长因子β(transforming growth factor-beta,TGF-β)和干扰素γ(interferon-gamma,IFN-γ)对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPE)胶原合成的影响。 方法 用³Ｈ-脯氨酸掺入、免疫细胞化学及分子杂交技术观察TGF-β和IFN-γ分别及联合作用下培养的人RPE胶原合成活性。 结果 TGF-β在10 ng/ml浓度使RPE对³Ｈ-脯氨酸的摄取增加130.87％,并增强Ⅳ、Ⅰ和Ⅲ型胶原荧光染色和mRNA表达。IFN-γ在10 000 U/ml浓度抑制54.72％的脯氨酸摄取,并减弱Ⅳ型胶原染色和3种胶原的mRNA表达。 结论 TGF-β和IFN-γ对RPE的胶原合成分别具有正向及负向调控作用,IFN-γ可能用于抑制RPE胶原合成。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 245-248)     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞促进ＤＮＡ合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人ＲＰＥ细胞第６代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入试验及放射自显影检测ＥＧＦ、ｂＦＧＦ对ＲＰＥ细胞的促ＤＮＡ合成作用。结果ＥＧＦ、ｂＦＧＦ均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含２％血清的培养液中，ＥＧＦ、ｂＦＧＦ作用最佳浓度为１ｎｇ／ｍｌ，明显低于无血清培养液中ＥＧＦ、ｂＦＧＦ作用的最佳浓度（１０ｎｇ／ｍｌ）。联合应用１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ、１０ｎｇ／ｍｌｂＦＧＦ约提高ＲＰＥ细胞合成ＤＮＡ能力２．９６倍。结论ＥＧＦ、ｂＦＧＦ对培养的人ＲＰＥ细胞具有促进ＤＮＡ合成作用，且两者可产生协同效应。     

人玻璃体液对培养的视网膜色素上皮细胞形态及骨架蛋白表达的影响

目的 观察人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞体外培养时的形态及相关细胞骨架蛋白变化规律，进而研究人玻璃体液对RPE细胞形态及细胞骨架蛋白表达的影响，探讨玻璃体液在增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)中的调控作用。 方法 行人RPE细胞原代培养并传代扩增，采用Western blot法，分别检测角蛋白18(cytokeratin 18, CK18)、平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在第2、5、8代细胞中的表达情况。用1∶4玻璃体液培养RPE细胞6 d后，观察细胞形态及超微结构改变，采用免疫细胞化学及Western blot法，检测CK18、α-SMA表达变化。 结果 人RPE细胞在体外培养时，会逐渐丧失上皮样形态，向成纤维样转变，CK18在2代表达量中等，5代最高，而在8代明显下降，而α-SMA逐渐升高。与对照组相比，人玻璃体液促进RPE细胞在形态上向成纤维样细胞转变。同时细胞内CK18表达低于对照组，差异具有显著性的意义(P＜0.05)；α-SMA表达高于对照组，差异具有显著性的意义(P＜0.01)。 结论 人RPE细胞在玻璃体液与血清的作用下向具有收缩性能的间质细胞转变，同时细胞移行能力可能发生改变，结果提示玻璃体液可能促进RPE细胞参与的PVR的发展。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 289-292)     

生长因子诱导视网膜色素上皮细胞增殖的协同作用研究

目的从细胞水平探讨生长因子:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的协同调控作用。方法通过PPE细胞培养，采用氚标胸腺嘧啶核苷(3 H-thymidine,3 H-TdR)掺入测定三种生长因子单用和分别联用诱导RPE细胞DNA合成改变，细胞计数观察RPE细胞生长变化。结果三种生长因子单用均可明显促进RPE细胞DNA合成及细胞数目增加,TNF-α、IL-β和bFGF的3 H-TdR掺入每分钟计数值(counts per minute,cpm)分别是对照组的2.74、2.66和1.69倍(P<0.05)。两种生长因子联用较单用cpm明显提高,其中TNF-α+IL-βcpm是对照组的3.14倍(P<0.05)。三种生长因子联用时cpm是对照组的3.74倍(P<0.05)。结论三种生长因子间存在促RPE细胞增殖的协同作用,这可能是生长因子对RPE细胞增殖的重要调控机制之一。(中华眼底病杂志,1998,14:95-97)     

姜黄素对培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞增殖活性的影响

目的:研究姜黄素(curcumin,CUR)对培养人胚胎视网膜色素上皮(human fetal retinal pigmentepithelium,hfRPE)细胞增殖的影响。方法:用不同浓度CUR(2.5,5,10,20μg／ml)处理传代培养的hfRPE细胞24~48 h,采用MTT法和流式细胞术观察药物对hfRPE细胞增殖和细胞周期的影响。结果:CUR可明显抑制hfRPE细胞增殖,24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为14.27μg／ml和12.7μg／ml;流式细胞仪分析表明姜黄素将hfRPE细胞阻滞在G2／M期。结论:在一定浓度范围内,姜黄素通过改变hfRPE细胞的周期分布来抑制其增殖。