目的 研究MicroRNA-219-5p（miR-219-5p）靶向E-钙黏蛋白（E-Cadherin）调控上皮间质转化（EMT）抑制肝癌细胞侵袭转移的分子机制。方法 首先通过生物信息学方法,寻找与E-Cadherin结合特异性最好、稳定性强的miRNAs。在30例肝癌组织和20例癌旁肝组织中,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测E-Cadherin的表达水平;实时荧光定量PCR检测（qRT-PCR）miR-219-5p表达,分析两者之间的相关性。在高转移和低转移的肝癌细胞株中,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin表达。采用Lipofectamine 2000将miR-219-5p 模拟子（mimic）、抑制子（inhibitor）、阴性对照组（negative contral）转染到肝癌HepG2细胞系,qRT-PCR检测miR-219-5p表达,Western blot检测E-Cadherin、N-cadherin的表达;Transwell方法检测miR-219-5p表达改变对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。结果 生物信息学发现miR-219-5p与E-Cadherin结合最稳定,且特异性最好。肝癌组织中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达,而癌旁组织中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达。高转移细胞株中miR-219-5p高表达、E-Cadherin低表达而N-cadherin高表达,在低转移细胞株中miR-219-5p低表达、E-Cadherin高表达而N-cadherin低表达（P <0.05）。miR-219-5p水平表达增高,引起E-Cadherin表达下调,N-cadherin高表达;miR-219-5p表达下调,可引起E-Cadherin表达上调,N-cadherin低表达（P <0.05）;HepG2-miR-219-5p 模拟子细胞株中侵袭细胞计数为（24±3）个/高倍镜视野,明显低于对照组细胞株（P <0.05）。结论 miRNA-219-5p可通过靶向结合E-Cadherin,调控EMT信号通路,抑制肝癌细胞的侵袭转移。
相似文献目的 探讨microRNA-132（miR-132）对结肠癌细胞系LOVO生物学功能的作用。方法 通过体外转染miR-132 mimic的方式进行获得性功能实验。以细胞计数检测（CCK-8）、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测以及划痕实验分析miR-132过表达对LOVO细胞增殖与侵袭的影响。结果 LOVO细胞中，外源性过表达miR-132能够抑制其生长，且抑制率呈时间、浓度依赖性，50 nmol/L miR-132 mimic处理72 h后，抑制率达30%。流式细胞凋亡检测发现miR-132过表达诱导细胞凋亡。miR-132过表达可以抑制LOVO细胞体内的外克隆形成能力。体外平板克隆形成实验显示，miR-132过表达使LOVO细胞克隆形成率从21%降至7%。划痕修复实验结果显示，高表达miR-132各组细胞的迁移能力降低。结论 miR-132过表达能显著抑制结肠癌细胞LOVO发生细胞凋亡及增殖，还能削弱结肠癌细胞LOVO的克隆形成能力。
相似文献目的 探讨中期因子（MDK）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及对肿瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 选取2015年1月-2016年10月该院收治的50例肝癌患者组织标本，免疫组织化学染色分析组织中MDK的表达。利用沉默核糖核酸（siRNA）沉默人肝细胞癌HepG2细胞内MDK表达，分别采用CCK-8、流式细胞仪及插入式细胞培养皿、穿透小室（Transwell）检测沉默MDK后HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力变化。结果 肝癌组织中MDK蛋白的表达水平较癌旁组织提高（χ2=19.643，P =0.000）；在HepG2细胞中，沉默MDK的表达可抑制HepG2细胞增殖（F =22.204，P =0.037）和侵袭（t =5.611，P =0.008）能力，并提高HepG2细胞的凋亡比例（t =5.702，P =0.006）。结论 MDK在肝癌中表达升高，沉默肝癌HepG2细胞内MDK表达能够抑制肝癌细胞生长和侵袭。
相似文献目的 观察microRNA-539（miR-539）的表达对甲状腺癌细胞侵袭与迁移的影响,探究miR-539与膜相关的鸟苷酸激酶蛋白1（CARMA1）在甲状腺癌中相互作用的机制。方法 构建miR-539与CARMA1高表达及低表达的细胞模型后通过transwell及MTT法检测两种不同的甲状腺癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力。Western blot及RT-PCR检测细胞中蛋白及mRNA表达。结果 miR-539抑制甲状腺癌细胞的侵袭与迁移。通过荧光素酶报告检测发现miR-539通过靶向CARMA1的3’-UTR端从而起到抑制甲状腺癌中CARMA1的作用。进一步的研究证实,CARMA1可显著促进甲状腺癌细胞的侵袭与迁移。而调节CARMA1的表达,miR-539随之变化。研究还发现,与对照组比较,甲状腺癌中miR-539的表达量降低而CARMA1的表达量增加。结论 miR-539靶向CARMA1抑制甲状腺癌细胞的侵袭与迁移。
相似文献目的 检测锌指蛋白217（ZNF217）在结肠癌中的表达,分析ZNF217的表达水平与结肠癌患者临床病理特征及结肠癌患者生存与预后的相关性。方法 利用免疫组织化学方法检测84例结肠癌患者组织标本及相应癌旁组织中ZNF217的表达水平,并利用Spearman秩相关、K-M曲线及Cox比例风险回归模型等统计方法分析ZNF217在结肠癌中的临床相关性。结果 免疫组化结果发现结肠癌组织中ZNF217阳性表达率高于癌旁组织。Spearman秩相关显示ZNF217的表达水平与结肠癌患者TNM分期和淋巴转移情况呈正相关,且与其他结肠癌患者临床病理特征无相关性。K-M曲线显示ZNF217表达水平与结肠癌患者术后总体生存率及无进展生存率呈负相关。Cox风险比例模型显示ZNF217可作为判断结肠癌预后独立的预测指标。结论 ZNF217在结肠癌组织中表达升高,且可作为判断结肠癌患者生存及预后的独立的潜在分子指标。
相似文献目的 探讨循环型microRNA-92a（miR-92a）在先天性巨结肠（HD）中的表达，以及通过上调尾侧型同源转录因子-2（CDX2）基因抑制肠神经干细胞（ENSCs）增殖的可能机制。方法 选取2013年1月-2015年12月在山东省临沂市沂水中心医院行先天性巨结肠根治术16例HD患儿的术前血清标本。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血清miR-92a mRNA的表达。提取孕15 d胎鼠肠管ENSCs，通过免疫学方法鉴定ENSCs；免疫磁珠法分选Nestin+ENSCs，脂质体转染使Nestin+ENSCs内过表达miR-92a，噻唑蓝法检测细胞的增殖活性，qRT-PCR、Western blot检测CDX2基因的表达。结果 HD患儿血清中miR-92a mRNA的相对表达量为（23.5±4.66），高于对照组（t =12.661，P =0.000）；ENSCs细胞培养早期Nestin染色阳性，具有向Tuj-1阳性、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞分化的潜能；ENSCs过表达miR-92a后，CDX2 mRNA的相对表达为（13.024±3.882），高于对照组（F =47.212，P =0.000），CDX2蛋白表达为（0.436±0.0828），高于对照组（F =48.793，P =0.000），细胞的增殖活性在转染后24、48和72 h明显受抑制。结论 miR-92a通过上调CDX2基因的表达，抑制ENSCs的增殖，可能促进HD发生、发展。
相似文献目的 检测姜黄素对结肠癌细胞中微小RNA 211（microRNA 211,miR-211）表达的影响并探讨miR-211调控结肠癌细胞增殖和凋亡的可能机制。方法 使用MTT法和流式细胞术检测不同浓度姜黄素在不同时间点对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响;使用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测不同浓度姜黄素对结肠癌细胞中miR-211表达的影响;使用生物信息学预测miR-211下游靶基因TP53INP1并使用荧光素酶报告基因法验证其结合;用miR-211模拟物（miR-211 mimics）检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖的影响,同时使用Western blot法检测其对TP53INP1蛋白表达的影响;用TP53INP1小干扰RNA检测其对姜黄素处理的结肠癌细胞增殖和凋亡的影响。结果 相较于未处理组,姜黄素在10～50 μmol/L浓度可抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡（P <0.05）。姜黄素可抑制肿瘤细胞中miR-211的表达,并具有时间和剂量依赖性（P <0.05）;此外,miR-211下游靶基因TP53INP1蛋白表达量上调（P <0.05）。用miR-211转染结肠癌细胞可逆转姜黄素对其增殖的抑制作用,并且TP53INP1表达下调（P <0.05）;用TP53INP1小干扰RNA可逆转姜黄素对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响（P <0.05）。结论 姜黄素可通过下调miR-211抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡,并且TP53INP1是miR-211下游调控蛋白之一。
相似文献目的 观察肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2在人肝细胞癌细胞中的表达及下调后对增殖生存的影响并探讨其机制。方法 以蛋白免疫印迹法（Western blot）及实时定量逆转录聚合酶链反应法（qRT-PCR）检测肝细胞癌细胞株中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达，并采用小干扰RNA转染Hep3B细胞株对肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达进行下调，Western blot和qRT-PCR检测转染效率、增殖凋亡相关基因表达；甲基噻唑基四唑检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2蛋白及mRNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、HepG2、MHCC97H中均有表达，在Hep3B细胞株中表达量最高（F=5.742，P <0.01；F=3.452，P <0.05）；与空白对照（siNC）组比较，si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2组中P-P21及磷酸化的蛋白激酶B蛋白表达下调（t =8.462，P <0.01；t =9.742，P <0.01），P21、蛋白激酶B及Cleaved Capase-9蛋白表达上调（t =12.247，P < 0.001；t =6.452，P <0.01；t =11.634，P <0.001；t =12.273，P < 0.001）；与siNC组比较，在72 h和96 h，si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达下调后Hep3B细胞增殖能力下降（t =8.176，P <0.01；t =2.246，P <0.05），Hep3B停留在G1期比例增高，G2及S期比例减少（t =4.23，P <0.05；t =2.13，P <0.05；t =5.72，P <0.05），凋亡率升高（t =8.633，P <0.01）。结论 下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达通过P21磷酸化及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制肝细胞癌细胞增值及生存，可作为肝细胞癌治疗的靶向候选基因。
相似文献摘要：目的 识别可以作为肝癌根治性切除术患者预后标志物的microRNA（miRNA）分子。方法 利用miRNA微阵列方法对2例原发性肝癌及对应的肺转移性肝癌进行miRNA表达分析。将原发性和转移性肝癌中表达量有2倍差异的miRNAs作为候选miRNAs分子。在miRNA验证过程中，运用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分析37例肝癌及相应癌旁非肿瘤组织中候选miRNAs分子的表达，并将其与患者的临床病理特征及生存情况进行相关性分析。结果 最终选取8种miRNAs（miR-27b、122、142-5p、196a、223、590-5p、630及944）作为候选miRNA。只有miR-223表达水平与肿瘤分期、有丝分裂指数相关。将肝癌患者分为miR-223高表达组（25例）和miR-223低表达组（12例）后发现，miR-223高表达与较高T分期、淋巴结转移、较高丝分裂指数及较高Ki-67阳性指数相关。此外，miR-223高表达还与总体生存率和无病存活率下降相关（P <0.05），中位随访时间37.9个月[疾病复发危险比为16.267（95%CI：1.732，153.789）P =0.015]。结论 肝癌组织中miR-223异常表达与肝癌患者治疗结束后发生复发转移，以及无病生存时间和总生存率有关，通过检测肿瘤组织中miR-223 qRT-PCR反应有可能预测患者预后。
相似文献目的 探讨microRNA-93（miR-93）在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法 收集2014年1月-2014年7月中南大学湘雅医院有完整病历资料的41例宫颈癌患者组织标本及对应癌旁组织,实时荧光定量-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测宫颈癌组织中miR-93表达水平;采用脂质体转染法将miR-93模拟片段（mimic）转染入宫颈癌Hela细胞,恢复细胞内miR-93表达;活细胞计数试剂盒（CCK-8）和流式细胞术检测miR-93对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响;Transwell小室法检测其对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot检测Hela细胞中上皮生长因子受体（EGFR）及其下游蛋白的表达量变化。结果 41例宫颈癌患者肿瘤组织中miR-93表达量（0.048±0.013）低于癌旁组织（0.113±0.025）,差异有统计学意义（P =0.026）;转染miR-93模拟片段后,宫颈癌Hela细胞中miR-93表达恢复;与对照组和空白组比较,实验组宫颈癌细胞增殖能力下降（P =0.004）,早期凋亡比例增加（P =0.032）,侵袭（P =0.003）和迁移能力下降（P =0.003）;过表达miR-93的Hela细胞EGFR及下游的p-AKT表达下降（P =0.005）,而总AKT蛋白无明显变化（P =0.372）。结论 miR-93在宫颈癌组织中的表达量下降,恢复其在宫颈癌细胞中的表达能够明显抑制其细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制部分与miR-93抑制宫颈癌细胞EGFR/AKT信号通路活性有关。
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