地西泮、苯巴比妥、普萘洛尔、和西咪替丁对大鼠肝微粒体安定氧化代谢的影响

研究地西泮、苯巴比妥、普萘洛尔和西咪替丁对地西泮氧化代谢的影响及其药酶蛋白的初步分析，应用HPLC，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描测定地西泮及其代谢物，并对大鼠肝微粒体和酶蛋白进行分离和含量测定，结果表明地西泮，普萘洛尔和西咪替丁使肝微粒体中P－450含量明显降低，地西泮和普萘洛尔明显抑制地西泮C3－羟化活性，大剂量普萘洛尔尚能抑制地西泮N－脱甲基，苯巴比妥明显诱导P－450生成，增强地西泮N－脱甲基和C3－羟化酶活性及分子量为51，000和59，000的电泳蛋白带，而地西泮，普萘洛尔则呈抑制作用，并发现，地西泮N－脱甲基酶活性和分子量为59，000蛋白含量呈线性相关（P＜0．05），而C3－羟化酶活性则与51，000蛋白含量呈线性相关（P＜0．01），因此地西泮C3－羟化代谢可能与51，000的P－450酶蛋白有关，而N－脱甲基代谢则可能与59，000的P－450酶蛋白有关。     

DHDK肝微粒体代谢动力学研究

目的 研究抗肿瘤候选药物DHDK在人和大鼠肝微粒体的代谢动力学特征,比较种属差异,为临床前研究提供依据。方法 建立HPLC法测定DHDK在肝微粒体孵育体系中的含量,用于考察DHDK体外代谢稳定性和酶动力学,进而推算其在体内的肝清除率(CL_h)与肝提取率(ER)。结果 肝微粒体孵育试验表明DHDK在两个种属之间的体外代谢稳定性和酶动力学行为无显著性差异(P>0.05),但在人体内的肝清除率显著低于大鼠(P<0.05)。结论 DHDK体外代谢主要依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和肝微粒体酶,属于中等程度代谢消除。     

大鼠肝微粒体中芬氟拉明对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的建立大鼠肝微粒体孵育液中l-和d-芬氟拉明的对映体选择性测定的方法,并用于研究芬氟拉明Ⅰ相代谢的立体选择性。方法将dl-芬氟拉明与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法进行对映体的分离,测定时间反应曲线和酶动力学参数。结果单个对映体的线性范围是1~50μg/mL;l-和d-芬氟拉明的方法平均回收率分别为92.4%和95.5%,检测限和定量限分别为0.1μg/mL和1.0μg/mL,方法精密度为RSD<10%(n=6)。l-和d-芬氟拉明的Km,Vm ax,C lint值分别为(0.15±0.01)和(0.27±0.02)μmol.mL-1,(4.99±0.52)和(9.53±0.87)nmol.g-1.m in-1,(33.3±3.0)和(35.3±3.1)mL.m in-1.g(蛋白)-1。结论方法准确可靠,已用于l-和d-芬氟拉明在大鼠肝微粒体孵育液中的代谢及其动力学研究;结果表明,芬氟拉明在大鼠的Ⅰ相代谢具有对映体选择性。     

大鼠肝微粒体中芬氟拉明对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的建立大鼠肝微粒体孵育液中l-和d-芬氟拉明的对映体选择性测定的方法,并用于研究芬氟拉明Ⅰ相代谢的立体选择性。方法将dl-芬氟拉明与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法进行对映体的分离,测定时间反应曲线和酶动力学参数。结果单个对映体的线性范围是1～50μg/mL;l-和d-芬氟拉明的方法平均回收率分别为92.4%和95.5%,检测限和定量限分别为0.1μg/mL和1.0μg/mL,方法精密度为RSD<10%(n=6)。l-和d-芬氟拉明的K_m,V_max,Cl_int值分别为(0.15±0.01)和(0.27±0.02)μmol.mL^-1,(4.99±0.52)和(9.53±0.87)nmol.g^-1.min^-1,(33.3±3.0)和(35.3±3.1)mL.min^-1.g(蛋白)^-1。结论方法准确可靠,已用于l-和d-芬氟拉明在大鼠肝微粒体孵育液中的代谢及其动力学研究;结果表明,芬氟拉明在大鼠的Ⅰ相代谢具有对映体选择性。     

大鼠肝微粒体中美西律对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的测定大鼠肝微粒体中R-(-)-和S-(+)-美西律体外氧化代谢的立体选择性。方法将(±)-美西律与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法测定了酶促反应的时间曲线及动力学参数Vm和Km值。结果在大鼠肝微粒体中,美西律的两个对映体的Vm和Km值均有显著性差异(P<0.01)。结论美西律在大鼠肝微粒体中的氧化代谢具有对映体选择性。     

安定身体依赖性小鼠肝微粒体酶水平和血浆安定浓度的研究

用掺食法递增安定剂量56 d致小白鼠身体依赖性,肝微粒体蛋白及细胞色素P_(450)含量均显著增加,高于进食安定7 d组,分别为313.0±s 30.56及261.17±s 23.04 mg·g~(-1)肝,P<0.05及3.96±s 0.07和2.60±s 0.52 nmol·mg~1蛋白,P<0.01。戒断后血浆安定浓度随戒断时间延长逐渐降低,而去甲基安定浓度急剧下降,于戒断后24 h达最低水平,以后逐渐回升。而进食安定7 d组的安定及去甲基安定浓度均逐渐下降,二者间无显著性差异。     

米氮平在鼠肝微粒体中的体外代谢研究

目的:通过不同诱导剂预处理鼠肝,研究米氮平在肝微粒体中的代谢主要受何种酶影响,同时研究米氮平对介导其自身代谢的P450酶亚型是否有影响,为米氮平的临床合理应用提供科学依据。方法:将米氮平与不同诱导剂诱导的鼠肝微粒体进行体外孵育代谢,以乙腈中止反应,样品用25%氨水碱化后以环己烷提取。用RPHPLC测定剩余的米氮平含量,流动相为甲醇水(含10mmol·L-1NH4AC,5mmol·L-1SDS,pH3.5)6238(VV),检测波长为307nm。结果:本文测定方法回收率高,日内和日间精密度均良好,符合生物样本检测要求。苯巴比妥诱导的鼠肝微粒体对米氮平的代谢具有明显的催化作用,利福平也有一定的催化能力,米氮平诱导的鼠肝微粒体与对照组对米氮平的代谢无明显差异。结论:由苯巴比妥诱导的P450酶亚型(主要为细胞色素P4503A4)和利福平诱导的P450酶亚型(主要为细胞色素P4502C92C19,同时也对P4503A4有一定的诱导作用)在米氮平的体外代谢中起着重要作用;而米氮平诱导组对于米氮平代谢无明显影响,预示米氮平对介导其自身代谢的P450酶亚型无明显的诱导或抑制作用。     

大鼠肝微粒体体外代谢奥美拉唑的研究

建立了大鼠肝微粒体体外孵育代谢奥美拉唑酶促反应及用反相HPLC法测定奥美拉唑两种主要代谢物——羟基奥美拉唑和奥美拉唑砜含量的方法.吉果表明,奥美拉唑主要通过羟化和S原子氧化反应进行代谢。其羟化反应的最大反应速率为2033nmol/(min·mgprotein),米氏常数为46.8umol·L^-1,而S原子氧化反应的最大反应速率为187.9nmol/(min·mgprotein),米氏常数为120.7Umol·L^-1。同时证明,美芬妥英、5种苯二氮类药物及罂粟碱对奥美拉唑的羟化代谢均有显著的抑制作用,其中罂粟碱的作用最强。     

大鼠肝微粒体中美西律对映体氧化代谢的立体选择性研究

目的测定大鼠肝微粒体中R-(-)-和S-(+)-美西律体外氧化代谢的立体选择性。方法将(±)-美西律与大鼠肝微粒体孵育后,采用柱前衍生化毛细管气相色谱-氢火焰离子化检测法测定了酶促反应的时间曲线及动力学参数V_m和K_m值。结果在大鼠肝微粒体中,美西律的两个对映体的V_m和K_m值均有显著性差异(P<0.01)。结论美西律在大鼠肝微粒体中的氧化代谢具有对映体选择性。     

六氯对二甲苯对豚鼠肝微粒体药物代谢酶的抑制特性

<正> 前文报道抗华支睾吸虫病药六氯对二甲苯(hexachloro—p—xylene,HCX)对豚鼠肝药酶的抑制作用,HCX能明显延长戊巴比妥催眠时间和血浆戊巴比妥t_(1/2β),并抑制肝匀浆中戊巴比妥侧链羟化酶(pentobarbital side—chain hydroxylase,PSCH)和氨基比林N—脱甲基酶(aminopyrine N—demethylase,ADM)活性。本文在肝微粒体和S9水平,进一步研究了HCX对肝微粒体药物代谢酶的作用,同时对其抑制特性进行了探讨。     

1和3—硝基苯并[a]芘混合物在大鼠肝微粒体中代谢产物的探讨

本文研究用3-甲基胆蒽诱导大鼠肝微粒体与等量1-和3-硝基苯并[a]芘混合物在体外有氧条件下进行培培养,分析代谢产物和代谢速率,并同单纯的1-硝基苯并[a]芘和3-硝基苯[a]芘的代谢产物进行比较。结果表明,1-和3-硝基苯并[a]芘混合物的代谢产物与单纯的1-硝基苯并[a]和3-硝基苯并[a]芘的代谢产物是相同的,两者按摩尔比等量混合后的代谢速度也是一致的;需要把高压液相色谱仪的反相柱和正相柱结合起来使用,才能把1-和3-硝基苯并[a]芘混合物的代谢产物完全分开。     

吡喹酮在大环内酯类抗生素和糖皮质激素诱导的大鼠肝微粒体中的代谢

我们的结果表明，只有经细胞色素P－450ⅢA1同功酶特异的诱导剂（红霉素和地塞米松）处置过的大鼠肝微粒体能显著地代谢吡喹酮（PQT），高铁氧化钾能破坏细胞色素P－450Fe(Ⅱ）－代谢物的复合物，使细胞色素P－450ⅢA1同功酶的活性恢复。因此，当微粒体和PQT的温孵体系中加入高铁氰化钾时，PQT在经多剂红霉素处置后的微粒体中的代谢速率进一步增加，而乙酰螺旋霉素诱导的细胞色素P－450并不形成复合物，因此，高铁氰化钾不影响PQT在经乙酰螺旋霉素处置后的微粒体中的代谢。三乙酰竹桃霉素作为细胞色素P－450ⅢA1的特异抑制剂，能抑制PQT在地塞米松处置过的肝微粒体内的代谢速率53％，以上结果表明，大鼠肝细胞色素P－450ⅢA1同功酶参与PQT在大鼠肝微粒体内的代谢。     

双环醇在大鼠和人肝微粒体的代谢

目的研究参与双环醇代谢的主要药物代谢酶及代谢动力学参数，分离鉴定双环醇代谢产物。方法双环醇与大鼠和人肝微粒体进行温孵，以高效液相色谱、质谱、核磁共振技术检测并分离鉴定双环醇及其代谢产物。结果双环醇在地塞米松诱导大鼠肝微粒体中的代谢速率显著高于正常大鼠肝微粒体，酮康唑可显著抑制双环醇的代谢。双环醇主要代谢产物为:4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯。结论双环醇在大鼠和人肝微粒体的主要代谢产物为4-羟基-4′-甲氧基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯和4-甲氧基-4′-羟基-6-羟甲基-6′-甲氧羰基-2，3，2′，3′-双亚甲二氧基联苯，细胞色素P450 3A主要参与双环醇代谢。     

抗肿瘤药LS-177在大鼠和人肝微粒体中的代谢产物研究

目的：推测LS-177在大鼠和人肝微粒体中代谢产物的结构及其可能的体外代谢途径。方法：体外孵育大鼠和人肝微粒体代谢模型,采用超高效液相质谱联用（LC-MSⁿ）法,推测LS-177的体外代谢产物的结构。结果：通过质谱数据、保留时间和碎片离子,在肝微粒体中共检测到5个代谢产物,初步推测LS-1177在肝微粒体中可能的代谢途径。结论：建立LC-MSⁿ方法,初步推测LS-177在大鼠和人肝微粒体中代谢产物的结构,为其体内外代谢的进一步研究以及化学结构类似物的体外代谢研究提供一定的参考依据。     

羟氯喹在人肝微粒体CYP酶中的代谢研究

目的：探讨羟氯喹在人肝微粒体中的主要代谢酶及其代谢特点和参数。方法：建立高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FLD）测定孵育液中羟氯喹的方法,观察9种CYP酶特异性抑制剂对羟氯喹代谢的影响,计算羟氯喹的酶促动力学参数如米氏常数（Km）、最大反应速度（Vmax）和药物的内在清除率（CLint）。结果：9种酶抑制剂中孟鲁司特（CYP2CB抑制剂）、酮康唑（CYP3A4抑制剂）、噻氯匹定（CYP2B6抑制剂）能够显著抑制羟氯喹的代谢（P ＜ 0.05）。羟氯喹在人肝微粒体中Vmax为233.6 ng·mL-1·h-1·mgprotein-1,Km为14.5 ng·mL-1,CLint为16.2 h-1·mgprotein-1。结论：羟氯喹主要通过CYP2C8、CYP3A4和CYP2B6代谢,药物在体内清除速率慢,药物相互作用和蓄积是发生不良反应的重要因素。     

雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢及酶促反应动力学研究

目的:研究雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢及酶促反应动力学。方法:将雷公藤甲素与5种不同诱导剂(地塞米松(DEX)、苯巴比妥(PB)、β-萘黄酮(β-NF)、吡啶(PD))诱导的大鼠肝微粒体进行体外共孵育;并与8种选择性CYP酶抑制剂(酮康唑、醋竹桃霉素、磺胺苯吡唑、二乙基二硫代氨基甲酸酯(盐)、奎尼丁、呋拉茶碱、毛果芸香碱、奥芬那君)在空白肝微粒体中共孵育。采用液相色谱-质谱联用技术测定孵育后剩余雷公藤甲素的含量。结果:酮康唑和醋竹桃霉素能明显抑制雷公藤甲素的代谢;磺胺苯吡唑和奥芬那君对其代谢也有一定抑制作用,但不及酮康唑和醋竹桃霉素。结论:雷公藤甲素在大鼠肝微粒体中代谢主要由CYP3A介导,其次由CYP2C和CYP2B介导。     

右旋黄皮酰胺在大鼠肝微粒体中的代谢转化

目的：研究黄皮酰胺的主要代谢途径,为进一步研究黄皮酰胺代谢的立体选择性打下基础。方法：用大鼠肝微粒体体外温孵法对右旋黄皮酰胺((+)-clausenamide)进行温孵,用硅胶柱色谱、制备TLC分离纯化代谢产物并通过光谱分析鉴定其结构。结果：分离得到5个代谢产物CM1,CM3,CM4,CM5及CM6,其结构分别鉴定为6-羟基,4-羟基,4,6-二羟基,4-苯环邻位羟基,4,7-苯环间位-二羟基黄皮酰胺。结论：黄皮酰胺的代谢主要发生羟化或双羟化,CM3是其主要代谢产物,量较少的CM4,CM6为其进一步代谢产生的双羟基代谢产物;另2个代谢产物CM1,CM5产生的量也较少;CM2未分离得到,但通过HPLC分析知其为右旋黄皮酰胺的微量代谢产物。