阿仑膦酸盐促进体外培养鼠破骨细胞凋亡

目的：研究阿仑膦酸盐通过凋亡抑制破骨细胞性骨吸收的作用。方法：通过光镜,透射电子显微和原位末端标记显示形态学特征的方法确证阿仑膦酸盐可诱导体外培养破骨细胞凋亡。结果：破骨细胞和其前体细胞在阿化膦酸盐处理后呈现凋亡的形态学特征,结论：阿仑膦酸盐导致破骨细胞量的减少可能和细胞凋亡有关。     

二膦酸盐作用的细胞学研究进展

二膦酸盐(bisphosphonates,BPs)是焦磷酸盐(pyrophosphate,PPi)的稳定类似物,二膦酸盐能抑制各种药物引起的骨吸收,并对体内钙代谢有显著的作用,用于治疗与骨吸收增加有关的疾病:如Paget疾病、恶性高血钙、骨髓瘤和骨转移疾病,最近又用于治疗骨质疏松,二膦酸盐目前已成为研究的热点药物.有关二膦酸盐的作用机制,最初认为它能结合到羟磷灰石结晶上,并抑制其生长和溶解,但这种解释不足以说明它们的各种作用.有些作者根据二膦酸盐细胞内移生化作用研究二膦酸盐作用,根据其方式不同分成2类:与PPi最类似的二膦酸盐归于毒性的ATP类似物;而将活性更强的含氮二膦酸盐,能干扰甲戊二羟酸途径而产生凋亡的归于另一类.     

阿仑膦酸盐对绝经后骨质疏松症大鼠模型的防治及机理初探

[目的]观察阿仑膦酸盐对绝经后骨质疏松症的预防及治疗效果,并探讨其作用机制.[方法]将60只3月龄SD大鼠随机分为5组,除空白对照组外均切除双侧卵巢,1周后给药,3个月时处死所有动物,观察大鼠左胫骨近端的病理形态学变化和骨组织学参数,以及股骨远端骨质的细胞超微结构变化.[结果]实验对照组的大鼠左胫骨近端骨小梁面积百分数小于空白组(P＜0.05),显示绝经后骨质疏松症模型建立成功;阿仑膦酸盐高、低剂量组的骨小梁面积百分数高于实验对照组,差异呈显著统计学意义(P＜0.01,P＜0.05),高剂量组与尼尔雌醇治疗组(0.15 mg/100 g)相比差异无统计学意义(P＞0.05),显示阿仑膦酸盐具有防治原发性骨质疏松症的作用;电镜显示阿仑膦酸盐高剂量组可见到具凋亡形态学特征的破骨细胞及其前体细胞.[结论]阿仑膦酸盐对骨质疏松有治疗作用,高剂量组疗效与雌激素相当.阿仑膦酸盐在体内至少可部分通过诱导破骨细胞及其前体细胞凋亡而抑制骨吸收的作用.     

阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c-fos基因表达的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c-fos基因的作用机制。方法将不同浓度的阿仑膦酸钠作用于小鼠破骨细胞,采用Western blot检测小鼠破骨细胞分化中c-fos基因的表达情况。结果阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和c-fos基因的表达显著低于空白对照组;且加入10-4mol/L、10-6mol/L、10-8mol/L浓度阿仑膦酸钠后,c-fos表达受抑制程度依次增强;而在10-8mol/L、10-10mol/L、10-12mol/L浓度中,c-fos表达受抑制程度依次减弱。结论阿仑膦酸钠可使破骨细胞分化中的c-fos基因受到抑制,其抑制程度与阿仑膦酸钠的浓度有关,10-8mol/L浓度时抑制作用最强。     

成人破骨细胞的体外培养

目的 建立成人破骨细胞体外培养的方法，观察成骨细胞对破骨细胞分化、增殖和功能的影响，为进一步研究补肾中药防治骨溶解和骨质疏松症提供基础。材料和方法 从成人骨髓中提取单核细胞，以1，25—(OH)2D3作为刺激因子，分3组培养：单核细胞与成骨细胞共同培养，单核细胞单独培养，单核细胞与成骨细胞条件培养液培养。生物显微镜下观察细胞的分化过程，HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色方法作组织化学观察，扫描电镜(SEM)观察骨吸收功能。结果 在单核细胞与成骨细胞共同培养组，可见单核细胞逐步融合成多核细胞；HE染色和Trap染色可见阳性多核细胞；扫描电镜观察可见骨片上有骨吸收陷窝形成。其他两组则未得到上述结果。结论 成人骨髓单核细胞在一定培养条件下能分化成熟为具有典型的破骨细胞表型的多核细胞：Trap染色阳性，具有骨吸收功能。与成骨细胞的直接接触是破骨细胞分化、增殖和发挥功能的必不可少的条件。     

破骨细胞体外培养与形态观察

破骨细胞体外培养与形态观察于明香，金慰芳，王洪复，关本博，林光义（上海医科大学放射医学研究所２０００３２；日本国金泽医科大学老年病学教室９２０─０２）骨质疏松症的发生与骨形成、骨吸收两者失平衡有关，破骨细胞（ＯＣ）在骨吸收过程中起主要作用，但有关破骨...     

体外破骨细胞性骨吸收陷窝的动态观察

动态观察破骨细胞的功能及药物的作用。采用体外破骨细胞培养法、显微摄影、显微光密度仪及图像分析等技术。结果表明，破骨细胞具有不规则的移行性，在一定时间范围内，随着培养时间的延长，破骨细胞性骨吸收陷窝不断增多与增大，并呈不规则形状。国产帕屈磷酸钠（ＡＰＤ）可直接抑制骨吸收陷窝的数目及表面积。提示动态观察体外破骨细胞性骨吸收陷窝形态变化的方法是一种直观、简便、稳定和能反映药物作用的方法。     

人破骨细胞的体外分离培养及与骨髓瘤细胞的相互作用

目的研究体外分离培养人破骨细胞的可行性及与骨髓瘤细胞的相互作用。方法分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）体外培养形成破骨细胞（osteoclasts,OC）,PBMC-OC与骨髓瘤（multiple myeloma,MM）细胞进行共培养。结果 PBMC在完全OC培养基中培养4 d后形成定型的破骨细胞前体（osteoclast precursor cell,pOC）;8226细胞可诱导pOC迁移并促进其向成熟的OC分化;pOC经完全OC培养基继续培养6～10 d后形成OC,在无OC培养基条件下,MM细胞仍可促进OC存活;OC明显促进MM细胞增生,抑制去血清培养诱导的MM细胞死亡。结论体外培养正常人PBMC-OC具有可行性,MM细胞促进OC成熟,OC促进骨髓瘤细胞生长与存活。     

阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c—fos基因表达的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c—fos基因的作用机制。方法将不同浓度的阿仑膦酸钠作用于小鼠破骨细胞,采用Western blot检测小鼠破骨细胞分化中c—fos基因的表达情况。结果阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和c—fbs基因的表达显著低于空白对照组;且加入10^-4mol／L、10^-6mol／L、10^-8mol／L浓度阿仑膦酸钠后,c—fos表达受抑制程度依次增强;而在10^-8mol／L、10^-10mol／L、10^-12mol／L浓度中,c—fos表达受抑制程度依次减弱。结论阿仑膦酸钠可使破骨细胞分化中的c—fos基因受到抑制,其抑制程度与阿仑膦酸钠的浓度有关,10^-8mol／L浓度时抑制作用最强。     

紫杉醇抗人脑多形性胶质母细胞瘤BT325株实验研究

目的：通过体外实验探讨紫杉醇有否抗人脑恶性胶质瘤作用。方法：首先用ＭＴＴ法检测紫杉醇对胶质母细胞瘤ＢＴ３２５株具有明显的细胞毒作用。进一步通过形态学观察及流式细胞仪来证实紫杉醇可诱导ＢＴ３２５细胞凋亡。结果：ＢＴ３２５细胞在紫杉醇作用下,细胞生长被明显抑制;细胞分裂阻滞在Ｇ０／Ｇ１期,出现凋亡峰;具有典型的凋亡细胞形态学特征。结论：紫杉醇具有明显的抗人脑胶质瘤作用,其作用机制与诱导细胞凋亡有关。     

三氧化二砷体外诱导口腔鳞癌细胞凋亡的研究

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对口腔鳞癌细胞的体外生物学作用及机制。方法 采用形态学、MTT、克隆形成试验、DNA梯度降解试验、原位末端标记及流式细胞仪等方法，对As2O3在Tca8113细胞系中的作用进行体外研究。结果 As2O3对Tca8113细胞产生明显的生长抑制作用，MTT显示生长抑制率为76.3%。DNA梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示As2O3诱导了Tca8113细胞凋亡。流式细胞仪显示As2O3的Tca8113细胞凋亡与细胞周期阻滞有关。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

紫杉醇诱导人胰腺癌细胞Bxpc-3细胞凋亡的实验研究

目的 观察紫杉醇(PA)对体外培养的Bxpc-3细胞凋亡的影响. 方法 体外培养Bxpc-3人胰腺癌细胞,采用MTT法检测不同浓度PA对Bxpc-3细胞的抑制情况,采用流式细胞术检测Bxpc-3细胞的周期及凋亡率.加入正常的培养液作为对照. 结果 与对照相比,不同浓度PA(100,50,25mg/ml)作用24 h可使Bxpc-3细胞生长明显抑制,抑制率呈浓度依赖关系;Bxpc-3细胞在PA 100,50 mg/ml作用下,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例和增殖指数(PI)下降;PA 100,50 mg/ml作用48 h后凋亡指数(AI)增高,AI/PI比例分别是对照组的6倍和2.5倍. 结论 PA对Bxpc-3细胞生长有抑制作用,可诱导人胰腺癌细胞Bxpc-3细胞凋亡.     

阿仑膦酸钠对人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成的影响

目的:观察二磷酸盐类药物阿仑膦酸钠对人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成的影响,探讨二磷酸盐防治人工关节无菌性松动的可能机制.方法:体外用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导小鼠骨髓造血干细胞分化为破骨前体细胞(osteoclast precursors,OCPs),然后用核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和M-CSF两种细胞因子协同诱导OCPs向成熟破骨细胞分化,同时在培养体系中加入高分子聚乙烯微粒(103/ml)和不同浓度的阿仑膦酸钠(0.4、2.0、10.0、50.0 μg/ml),对获得的各组破骨细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数阳性破骨细胞(核≥3)的数目;提取总RNA用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRAP mRNA的表达.结果:高分子聚乙烯微粒组TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达显著高于空白对照组(P＜0.05);阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达均显著低于高分子聚乙烯组(P＜0.05),且随着阿仑膦酸钠浓度增高TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:阿仑膦酸钠可以抑制人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成.     

巨噬细胞集落刺激因子对破骨细胞生物作用的实验研究

目的　探讨在实验条件下巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)在骨代谢过程中对破骨细胞的生物作用。方法　用不同浓度的M CSF和活化核因子κB的受体配体 (RANKL)与鼠骨髓细胞培养 ,在加入或不加入牛骨片的情况下诱导产生破骨细胞。分别用抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色法和骨小坑染色法检测TRAP阳性的破骨细胞量及破骨细胞功能。结果　在一定范围内 ,M CSF在RANKL存在的条件下诱导TRAP阳性破骨细胞成熟 ,并随M CSF剂量的增加TRAP阳性细胞数明显增加 (r =0 .75 0 4,P <0 .0 1) ;且骨小坑数量也与M CSF剂量呈明显正相关 (r=0 .93 65 ,P≤ 0 .0 0 0 1)。缺乏M CSF或RANKL均不能诱导TRAP阳性的破骨细胞产生 (P =0 .0 191)。结论　破骨细胞的增殖、分化及成熟是由M CSF和RANKL共同调节的。M CSF是破骨细胞代谢过程中的关键因子 ,具有促进破骨细胞对骨吸收的作用。M CSF对骨代谢的主要作用之一是上调破骨系统。     

The Study on Intramyocardial Calcium Overload and Apoptosis Induced by Cosackievirus B3

Cosackievirus B3( CVB3) is a major pathogenfor viral myocarditis. About 65 % of the patientswith acute myocarditis have the short- term infectionof CVB3.In this study,a murine model of the cul-tured cardiacmyocytesinfected by CVB3in vitro wasestablished to investigate the CVB3infection- inducedmyocyte apoptosis and intracellular Ca2 i imbalancein order to explore the mechanism of cardiac myocyteinjury induced by CVB3infection.1　MATERIALSAND METHODS1 .1　 MaterialsRenal cells …     

雄黄体外诱导C6胶质瘤细胞凋亡的特点及分析

目的 观察雄黄对体外培养的C6胶质瘤细胞的生长抑制作用,探讨雄黄诱导的细胞凋亡特点和可能机制.方法 以雄黄溶液对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞进行诱导,通过MTT法观察浓度和时间对细胞存活率的影响,通过光镜、电镜观察细胞的抑制情况;采用Annexin V-FITC-PI双染流式细胞术观察药物引起的细胞凋亡情况,采用RT-PCR法观察诱导过程中Bcl-2、Bax和c-myc 3个基因的表达情况.结果 MTT结果显示,不同浓度的雄黄溶液可引起细胞不同程度的抑制;光镜及透射电镜下可现察到药物引起的细胞凋亡变化.Annexin V-FITC-PI双染显示,细胞在25 mg/L雄黄作用24、48h后的凋亡率分别为(10.134±3.14)%、(41.04±17.44)%,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR观察到Bax基因表达的升高和Bcl-2、c-myc基因表达降低.结论 雄黄对C6细胞的抑制具有时间和浓度依赖性,浓度越高,越明显,此抑制与雄黄引起的凋亡有关,凋亡过程中伴有Bax基因表达的增加和Bcl-2、c-myc的降低.     

胡桃醌诱导细胞凋亡机制的研究进展

恶性肿瘤一直是威胁人类健康的一大主要因素,现如今肿瘤治疗技术日益进步,但开发与研究新型有效的抗肿瘤药物一直是生物医药研究领域的重要任务.近年来,胡桃楸提取物胡桃醌抗肿瘤的作用机制已不断被现代医学研究所揭示.胡桃醌主要通过诱导细胞凋亡而发挥出对肿瘤细胞的抗癌活性,在临床肿瘤的治疗中很有望成为预防药物.本文通过对胡桃醌诱导细胞凋亡的机制、凋亡相关基因p53、Bcl-2参与的基因调控、Caspase的活化等凋亡过程中关键步骤的研究进展进行阐述,对将来进一步探究胡桃醌机理的实验研究和临床应用给予理论支持.     

实验性糖尿病诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

目的：探讨糖尿病诱导大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化,从而了解其引起胸腺萎缩的可能机制。方法：采用四氧嘧啶诱导复制的大鼠实验性糖尿病动物模型,在电镜下观察了糖尿病大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化。结果：在糖尿病大鼠胸腺皮质中发现了大量凋亡的胸腺细胞,主要表现为细胞皱缩变小,表面形成许多皱突,似发泡状,细胞质浓缩,电子密度增强,线粒体肿胀,嵴减少与紊乱,空泡化细胞核染色质固缩边聚,核变成花瓣状,黑环状与黑洞状,核与细胞发生裂解形成凋亡小体,被巨噬细胞和上皮细胞吞噬清除。此外,在凋亡细胞与小体的周围还聚着许多浆细胞,结论：实验性糖尿病可诱导大鼠脑腺细胞发生大量凋亡,这可能是导致胸腺细胞大量减少及胸腺萎缩的主要机制之一。