人巨细胞病毒感染对脐血淋巴系祖细胞增殖的影响

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血淋巴系祖细胞(CFU-TL)集落增殖能力的影响。方法采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落,不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL,观察计数CFU-TL集落数、抑制率、集落峰值时间及集落维持时间;用MTT法测量HCMV对宿主细胞增殖活性的影响;用流式细胞仪测定相应表面抗原阳性T-淋巴细胞百分率;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果HCMV感染组CFU-TL集落数明显低于对照组(P<0.01),抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;HCMV感染组CFU-TL集落维持时间明显缩短,而各组集落出现时间及集落维持时间无明显差异;HCMV感染组48h、72h宿主细胞增殖指数分别1.59、1.28,感染96h、120h的增殖指数分别为0.58、0.32.;CD3+细胞较培养前明显提高,占集落组成细胞的(90.4±5.6)%,表明集落组成细胞中绝大部分细胞为T淋巴细胞;通过PCR,在HCMV感染组CFU-TL集落细胞内检测到HCMV-AD169存在。结论HCMV在体外试验中能抑制CFU-TL的分化和增殖;淋巴系祖细胞是HCMV的宿主细胞之一,HCMV-AD169能直接感染淋巴系祖细胞。此作用可能是HCMV感染所致的免疫功能低下的主要原因之一。提示HCMV感染引起的细胞免疫功能紊乱与CFU-TL受该病毒抑制有关。     

更昔洛韦抗人巨细胞病毒感染所致粒-单祖细胞增殖抑制的实验研究

目的 :探讨更昔洛韦对人巨细胞病毒 (HCMV)感染的粒 -单祖细胞 (CFU -GM)体外增殖的影响。方法 :采用造血祖细胞体外培养技术 ,用更昔洛韦干预HCMV感染的CFU -GM ,观察计数CFU -GM的产率 ,大小 ,峰期及维持时间。结果 :①更昔洛韦组集落产率明显高于病毒组 (P <0 .0 1)。②更昔洛韦组大集落所占比例明显高于病毒组 (P <0 .0 1)。③更昔洛韦组集落维持时间较病毒组延长。结论 :在体外更昔洛韦有抗HCMV作用 ,能促进受HCMV感染的CFU -GM增殖     

人类巨细胞病毒对粒系祖细胞分化过程中HOXA9基因表达的影响

目的 探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中HOXA9基因表达情况,并且用人类巨细胞病毒(HCMV)进行干扰,探讨HCMV对HOXA9基因的影响.方法 体外定向培养CFU-G,经MTT法检测后,HCMV-AD169滴度为106蚀斑形成单位(PFU)/mL,按0.1 mL 105 PFU/mL接种培养体系.采用RT-PCR技术测定HOXA9基因表达.结果 随时间推移,HOXA9基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;HOXA9基因受HCMV影响下调(P＜0.05).结论 HOXA9基因在脐血粒系祖细胞发育过程中呈规律表达,提示HOXA9基因与粒系造血活动有相关性;HCMV下调HOXA9表达的同时,HCMV干扰细胞集落生成较正常组差,提示HCMV可能通过调控HOXA9基因表达异常引起HSPC增殖分化异常.     

人巨细胞病毒对人脐血巨核系祖细胞生长的影响及作用机制研究

[目的]探讨人巨细胞病毒(HCMV)对巨核系祖细胞生长的影响及其机制.[方法]采用造血祖细胞体外半固体培养技术,用HCMVAD169株分别感染去除T细胞和未去除T细胞的脐血单个核细胞.观察CFU-MK集落数;用原位聚合酶链反应(IS-PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA.[结果]2个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,分别为29.5%和48.6%(P<0.05),未去除T细胞组CFU-MK集落数减少比去除T细胞组明显(P<0.05),经IS-PCR检测发现各病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMVDNA存在.[结论]HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,HCMV感染引起的血小板减少可能与该病毒对巨核系祖细胞的直接抑制以及免疫因素有关.     

人巨细胞病毒对巨核细胞生长的影响及其反义寡核苷酸的抗病毒活性

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞的抑制作用及其机制,初步研究HCMV反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒感染作用。方法采用体外悬浮培养巨核系细胞,观察HCMV AD169株对巨核系祖细胞生长的影响。用流式细胞术检测HCMV感染巨核系细胞上HCMV pp65抗原的表达。用HCMV感染经ASON预处理的巨核细胞,计数存活巨核细胞数,用FACS检测巨核细胞上HCMV pp65蛋白表达,并用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果HCMV AD169株在体外能明显抑制巨核系祖细胞的增殖,悬浮培养第12天,与对照组相比,HCMV感染组的巨核细胞数减少了67.86%(P<0.05)。HCMV感染的巨核系细胞有HCMV pp65抗原的表达,其表达率为(24.5±3.1)%。0.08μmol/L的UL36反义寡核苷酸(UL36Anti)能对抗HCMV的作用,使巨核细胞数保持在未被感染时的水平,与HCMV感染组巨核细胞数比较有显著差异(P<0.05)。UL36Anti组巨核细胞上几乎无HCMV pp65蛋白的表达。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为90μmol/L。结论HCMV感染引起的血小板减少与其抑制巨核系祖细胞增殖有关。特异的ASON有一定的抗HCMV活性,有可能作为一种新的手段用于HCMV感染引起的血小板减少症的防治。     

人巨细胞病毒对红系祖细胞的影响

【目的】探讨人巨细胞病毒 (HCMV)对红系祖细胞 (CFU E)的分化和增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。【方法】取 15例脐血标本 ,用红系祖细胞单向半固体培养技术 ,观察 3种不同浓度的HCMVAD16 9株对CFU E集落形成的影响 ,用PCR和RT PCR检测集落中的HCMVDNA与latemRNA。【结果】 3个感染组的CFU E均减少 ,与正常对照组比较 ,分别为 11 46 %、2 1 88%、34 45 % (P <0 0 5 ) ,显示CFU E集落数与HCMV感染浓度有关 ,病毒感染浓度越高 ,抑制程度越大。CFU E集落细胞中的HCMVDNA均为阳性 ,而latemRNA为阴性。【结论】HCMVAD16 9株可直接感染红系祖细胞 ,并抑制其分化与增殖 ,该抑制作用可出现于仅有病毒潜伏的细胞。     

巨细胞病毒诱导体外人血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的探讨HCMV感染对体外培养人血管内皮细胞凋亡的影响。方法建立HCMV-AD169株感染体外培养人脐静脉血管内皮细胞模型,应用AV/PI双染法检测HCMV感染后ECs的凋亡变化。结果体外情况下HCMV感染后不同时相点(12、24、48、72h),ECs的凋亡率分别为(10.6±4.6)%,(23.8±6.9)%,(39.4±8.9)%,(31.4±7.8)%,明显高于对照组细胞。结论HCMV感染诱导ECs凋亡的异常改变可能参与了动脉粥样硬化的发生发展。     

54例白血病和骨髓异常增生症CFU-Mix生成的研究

作者采用极限稀释培养法进行人类多向造血祖细胞(CFU-Mix)培养,对54例白血病和骨髓异常增生症(MDS)进行了CFU-Mix生成的研究。结果:大多数急性粒细胞白血病与慢性粒细胞白血病和MDS一样,为多能造血干细胞阶段发病。光镜、扫描与透射电镜均证实白血病培养所形成的集落大多数由白血病细胞组成。~3H-TdR和~(35 59)Fe同位素显示,白血病细胞集落增殖方式和正常人明显不同。~3H-TdR掺入试     

两种方法转染EGFP基因对脐血造血干/祖细胞体外生长影响的比较

目的 探讨两种非病毒载体介导增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染方式对脐血干/祖细胞体外生长的影响.方法 免疫磁珠分选CD34 脐血干/祖细胞,平均分为3组,即未转染EGFP组、阳离子聚合物转染EGFP组和电穿孔转染EGFP组,将各组脐血CD34 细胞接种于人骨髓间充质干细胞(MSCs)构建的二维培养体系中在无外源性细胞因子情况下进行体外培养,7 d后进行集落形成单位(CFU)实验和高增殖潜能集落形成单位(HPP-CFU)实验.并利用荧光显微镜观察转染EGFP的CD34 细胞集落形成,Wright-Giemsa 染色了解其分化情况.结果 阳离子聚合物转染和电穿孔转染都可减少造血干/祖细胞集落形成的数目,且集落的大小也较未转染组小(P＜0.05).电穿孔转染组荧光集落形成的数目多于阳离子聚合物转染组,且所形成的荧光集落更大更亮(P＜0.05).两种转染方式的脐血造血干/祖细胞在体外培养后仍具有多向分化能力.结论 这两种非病毒载体介导EGFP基因转染方式均可造成脐血造血干/祖细胞生物学特性不同程度的损害.但电穿孔转染方式对于造血干/祖细胞体外生长损害较阳离子聚合物转染要小,且转染效率更高,转染基因表达更稳定.     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者骨髓多向祖细胞的特点

采用造血祖细胞体外培养技术,研究阵发性睡眠性血蛋白尿（ＰＮＨ）患者骨髓多向祖细胞（ＣＦＵ－Ｍｉｘ）的增殖能力;骨髓细胞经酸化ＡＢ血清处理后ＣＦＵ－Ｍｉｘ的增殖能力。发现ＰＮＨ患者骨髓ＣＦＵ－Ｍｉｘ的集落数明显低于正常;骨髓细胞顷新鲜酸化ＡＢ血清处理后的ＣＦＵ－Ｍｉｘ集落数,明显低于经热酸化ＡＢ血清处理后培养的集落数。     

人巨细胞病毒感染对小鼠脑组织同源盒基因表达的影响

目的研究小鼠脑组织同源盒基因（homeobox gene，Hox）的表达状态及人类巨细胞病毒（human cytomegalovims，HCMV）感染对小鼠脑组织Hox基因表达的影响，以探讨HCMV致畸的分子机制。方法昆明系小鼠48只，随机分为实验对照组（16只）和病毒感染组（32只），病毒感染为脑内注射。在感染后7、15、30、60d分别以病理学方法观察病理损伤，以免疫组化方法检查HCMV—LA（1ateantigen），PCR检测小鼠脑组织中HCMV—DNA。在建立HCMV脑部感染的小鼠模型基础上，用RT-PCR测定Hox基因在病毒感染组和实验对照组小鼠脑组织中的表达,并用同位素标记的cDNA探针进行Northern-blot检测相应的表达状况。结果（1）接种HCMVAD169株的小鼠脑组织发生了病理改变，免疫组化和PCR方法在神经细胞内查到了HCMV-LA和DNA；（2）RT-PCR和Northern-blot发现：对照组的小鼠脑组织表达Hox-A9、Hox-A11、Hox-A12和Hox-A13，但不表达Hox-B13；HCMV感染后，小鼠脑组织被诱导表达Hox-B13，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01），且于感染后的30d达到高峰，而Hox—A9、Hox—A11的表达下调（P〈0.05）；Hox—A10和Hox—A13的表达增强。结论HCMVAD169株可感染小鼠神经系统。HCMV感染可诱导小鼠神经系统发育基因Hox表达改变，这对研究HCMV感染致畸的分子机制提供了有价值的理论依据。     

解脲支原体、沙眼衣原体和巨细胞病毒感染与输卵管妊娠的相关性研究

目的 探讨解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）及人巨细胞病毒（HCMV）感染情况与输卵管妊娠（TP）的关系.方法 应用PCR技术检测62例TP患者（病例组）和48例非TP患者（对照组）的宫颈分泌物和输卵管中的CT、UU、HCMV的DNA.结果 （1）病例组中输卵管标本的CT、UU、HCMV单项检出率、CT＋UU及UU＋HCMV合并感染率均高于对照组,两者比较有显著性差异（P＜0.05）; （2）病例组中宫颈分泌物标本的CT、UU、HCMV单项检出率、CT＋UU及CT＋UU＋HCMV合并感染率均高于对照组,二者比较有显著性差异（P＜0.05）; （3）两次以上TP患者输卵管标本及宫颈分泌物标本的CT、UU、HCMV单项检出率高于仅有一次TP患者,二者比较有显著性差异（P＜0.05）.结论 （1） TP与CT、UU及HCMV感染有一定关系,可作为TP发生的可能性的检测指标; （2）两次以上TP患者的CT、UU、HCMV检出率明显增高,TP患者在排除其他因素的同时应考虑病原体感染的可能,积极治疗及预防感染,以免再次TP的发生; （3）聚合酶链反应（PCR）具有简单、快捷、准确性高的特点,可以作为临床早期病原学诊断依据.     

Expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV-infected placenta] villi at early pregnant stage

Objective:To study the expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV intrauterine infected placental villi at early pregnant stage. Methods:PCR (polymerase chain reaction) was used to screen the peripheral blood for HCMV-DNA in 462 women who had willingly undergone induced abortion. Then immunohistochemistry was also used to detect expressions of mouse anti-HCMV early antigen (HCMV-EA) and mouse anti-HLA-G in HCMV-DNA positive cases' placental villi. The difference of HLA-G expressions between the intrauterine infection group (HCMV-EA positives), the intrauterine infection-free group(HCMV-EA negatives) and the normal control group (SO cases of healthy early placental villi) was compared. Results: Of the 78 cases, which were detected HCMV-DNA positive, 11 (14. 10%) were HCMV-EA positive. Compared with the other two groups, HLA-G expressions in the intrauterine infection group were both obviously decreased (both P<0. 001). HLA-G expression positions in all three groups were mainly located in the cytotrophoblast. Conclusion:Intrauterine HCMV infection at early pregnant stage is closely related to HLA-G expression at the maternal-fetal interface. The virogenetic products may affect the expression of HLA-G at the maternal-fetal interface and that of its immunological function, thus leading to different clinical outcomes.     

人巨细胞病毒感染与染色体着丝粒点变异关系研究

目的：研究孕妇ＨＣＭＶ感染对胚胎染色体着线粒点（Ｃｄ）变异的影响,探讨ＨＣＭＶ感染引起出生缺陷的原因和机制。方法：用我入良的Ｃｄ－ＮＯＲ同步银染技术对１５例ＨＣＭＶ感染和２５例非感染孕妇的胚胎或绒毛组织ＣＤ消失、ＣＤ变进行比较分析。结果：前者ＣＤ消失、ＣＤ变异频率较后者有显著和极显著的增高。结论：染色体ＣＤ的变化可能是ＨＣＭＶ感染引起胚胎发育的重要原因之一。对ＨＣＭＶ感染孕妇的胚胎或绒毛杂色体ＣＤ     

用聚合酶链反应法检测172例孕妇尿中巨细胞病毒－DNA

本文对１７２例孕妇的尿用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）进行巨细胞病毒－ＤＮＡ检测（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓＨＣＭＶ－ＤＮＡ），结果显示非正常孕妇（以前有自然流产、死胎、畸胎、不育症等）１２１人尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者４３例，阳性率为３５．５％，而５１例正常孕妇中阳性者仅２例，阳性率为３．９％，表明活动性人巨细胞病毒感染是非正常孕妇的重要原因之一。２０例孕妇尿中ＮＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者用干扰素、转移因子等治疗后，１４例转阴。用ＰＣＲ法检测活动性人巨细胞病毒感染是一个比较准确、敏感、快速的方法，并是保证优生优育的重要手段之一。     

聚合酶链反应检测患儿尿标本中的巨细胞病毒DNA

本文建立了聚合酶链反应(PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)方法,探讨了该方法的某些实验条件。用PCR检测24例临床患儿尿标本。证明PCR方法特异、敏感、简便而快速。同科不同属病毒如HSV、EBV等以及人源正常细胞均无假阳性结果:最小检出量可达0.1fg DNA,相当于6个基因拷贝;用水浴箱手控时间即可进行PCR循环,30次循环仅需97min30s;PCR和DNA杂交检测尿标本中HCMV阳性例数分别为20和14例。该结果证明HCMV感染儿童的广泛性和严重性,初步表明儿童肾病综合症与HCMV有关。     

用聚合酶链反应法检测172例孕妇尿中巨细胞病毒－DNA

本文对１７２例孕妇的尿用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）进行巨细胞病毒－ＤＮＡ检测（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓＨＣＭＶ－ＤＮＡ），结果显示非正常孕妇（以前有自然流产、死胎、畸胎、不育症等）１２１人尿中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者４３例，阳性率为３５．５％，而５１例正常孕妇中阳性者仅２例，阳性率为３．９％，表明活动性人巨细胞病毒感染是非正常孕妇的重要原因之一。２０例孕妇尿中ＮＣＭＶ－ＤＮＡ阳性者用干扰素、转移因子等治疗后，１４例转阴。用ＰＣＲ法检测活动性人巨细胞病毒感染是一个比较准确、敏感、快速的方法，并是保证优生优育的重要手段之一。     

Expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV-infected placental villi at early pregnant stage

Objective：To study the expression and its clinical significance of HLA-G in HCMV intrauterine infected placental villi at early pregnant stage. Methods：PCR （polymerase chain reaction） was used to screen the peripheral blood for HCMV-DNA in 462 women who had willingly undergone induced abortion. Then immunohistochemistry was also used to detect expressions of mouse anti-HCMV early antigen （HCMV-EA） and mouse anti-HLA-G in HCMV-DNA positive cases＇ placental villi. The difference of HLA-G expressions between the intrauterine infection group（HCMV-EA positives）, the intrauterine infection-free group（HCMV-EA negatives） and the normal control group （50 cases of healthy early placental villi） was compared. Results： Of the 78 cases, which were detected HCMV-DNA positive, 11 （14.10%） were HCMV-EA positive. Compared with the other two groups, HLA-G expressions in the intrauterine infection group were both obviously decreased（both P〈0. 001）. HLA-G expression positions in all three groups were mainly located in the cytotrophoblast. Conclusion：Intrauterine HCMV infection at early pregnant stage is closely related to HLA-G expression at the maternal-fetal interface. The virogenetic products may affect the expression of HLA-G at the maternal-fetal interface and that of its immunological function, thus leading to different clinical outcomes.