黄芩茎叶总黄酮抑制大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡的研究

目的:观察黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria baiculensis stem-leaf total flavonoid,SSTF)抑制大鼠心肌缺血再灌注时细胞凋亡及可能机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组(sham operation group,SHAM组)、缺血再灌注组(Ischemia reperfusion group,IR组)、SSTF 3个剂量组。SSTF组于术前1周ig不同剂量的SSTF(17.5,35,70 mg.kg-1.d-1),另2组ig给等量生理盐水。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30 min,再灌注2 h后,采用Annexinv/PI双染,流式细胞仪检测心肌细胞的凋亡情况,RT-PCR检测caspase-3基因mRNA的表达,采用蛋白印记法定量检测心肌细胞caspase-3基因的表达情况。结果:与SHAM组相比,IR组的心肌细胞的凋亡率明显增加(P0.01),并且caspase-3基因的mRNA和蛋白表达均增加(P0.01);与IR组相比,SSTF可明显降低心肌细胞的凋亡率(P0.05,P0.01);降低caspase-3基因的mRNA和蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:SSTF抑制心肌细胞凋亡可能与降低caspase-3基因的mRNA和蛋白表达有关。     

黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注损伤大鼠心肌P-STAT蛋白表达的影响

目的观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对缺血再灌注大鼠心肌信号转导及转录激活因子P-STAT1,P-STAT3蛋白表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、SSTF 3个剂量组。SSTF组于术前1周灌服不同剂量的SSTF(17.5,35,70 mg·kg-1.d-1),另两组给等量生理盐水。结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。缺血30 min、再灌注2 h后,采用电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构的变化,Western blot-ting技术检测心肌细胞P-STAT1,P-STAT3蛋白表达的变化。结果与sham组相比,IR组的心肌细胞超微结构损伤明显,P-STAT1蛋白表达增加(P<0.01),P-STAT3蛋白表达减少(P<0.01);与IR组相比,SSTF组细胞超微结构损伤减轻,心肌细胞的P-STAT1蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01);P-STAT3蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论 SSTF可以减轻心肌细胞结构损伤,其机制可能与降低P-STAT1蛋白表达,增加P-STAT3蛋白表达有关。     

黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的 观察黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria Baiculensis Stem-leaf Total Flavonoid,SSTF)对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min,然后松开再灌注2 h的方法,复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.实验分为假手术组、缺血再灌注组(IR),SSTF不同剂量治疗组.采用原位缺口末端标记法(TUNEL)及免疫组化法,检测心肌细胞凋亡指数(AI),Bax和Bcl-2基因蛋白表达.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组AI增加,Bax阳性表达增强,Bcl-2阳性表达减弱(P＜0.01);与缺血再灌注组比较,SSTF组AI、Bax阳性表达下降(P＜0.05或P＜0.01).Bcl-2阳性表达上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 SSTF能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与下调Bax蛋白表达和上调Bcl-2蛋白表达,提高Bcl-2/Bax比值有一定关系.     

SSTF预处理对缺血再灌注心肌超微结构及细胞凋亡的保护作用

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)预处理对缺血再灌注大鼠心肌超微结构的影响及其作用机制。方法:40只Wistar大鼠分为SSTF预处理组(SSTF组)、缺血再灌注组(IR组)和假手术组。SSTF组于术前1周灌服SSTF(50mg、100mg、200mg.kg-1.d-1),另2组给等量PBS。制备IR模型,光、电镜观察各组大鼠心肌超微结构变化和心肌细胞凋亡指数(AI)。结果:SSTF各组均较IR组心肌细胞超微结构尤其是线粒体损伤程度减轻,且呈一定剂量依赖效应,心肌凋亡细胞减少。结论:SSTF预处理对缺血再灌注的心肌细胞具有保护作用,其机制可能是通过SSTF稳定心肌细胞膜和线粒体,ATP的生成增多,拮抗Ca2 和清除氧自由基来实现的。     

苓桂术甘汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的:观察苓桂术甘汤在大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)时对心肌细胞凋亡的影响。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组,模型组,辛伐他汀组,苓桂术甘汤组。辛伐他汀组药量为20 mg·kg-1·d-1,苓桂术甘汤组药量为50 g·kg-1·d-1,另2组给生理盐水1.0 mL·kg-1。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型。缺血30 min、再灌注2 h后,采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,采用免疫组化技术检测心肌细胞Smad3,Smad7蛋白表达的变化。结果:与假手术组相比,模型组心肌细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),并且Smad3蛋白表达增加(P<0.01),Smad7蛋白表达减少(P<0.01);与模型组相比,苓桂术甘汤和辛伐他汀可明显降低心肌细胞的凋亡率(P<0.01);心肌细胞Smad3蛋白表达减少(P<0.05);Smad7蛋白表达增加(P<0.05)。结论:苓桂术甘汤可以抑制大鼠缺血再灌注损伤时心肌细胞凋亡,上调Smad7蛋白表达,下调Smad3蛋白表达,可能是其保护MIRI的作用机制之一。     

灯盏花素抑制缺氧/复氧大鼠心肌细胞JAK2的表达

目的 观察灯盏花素对缺氧/复氧大鼠心肌细胞凋亡相关基因Janus激酶(JA K2) mRNA及其蛋白表达的影响,试图在细胞水平上为临床应用灯盏花素减轻心肌缺血再灌注损伤提供理论依据.方法 取原代培养的乳鼠心肌细胞,随机分为4组:正常对照组,模型组,灯盏花素2个剂量组(25 mg/L,50 mg/L),其中模型组和灯盏花素2个剂量组进行缺氧2h,再复氧,并于复氧4h后,分别采用RT-PCR和Western blot检测大鼠心肌细胞JAK2基因mRNA及其蛋白的表达.结果 模型组大鼠心肌细胞JAK2基因mRNA和蛋白条带平均光密度值均较正常对照组增加(P＜0.01);与模型组相比,灯盏花素2个剂量组大鼠心肌细胞JAK2基因的mRNA和蛋白条带平均光密度值均降低(P ＜0.05,0.01).结论 灯盏花素可抑制缺氧/复氧大鼠心肌细胞凋亡相关基因JAK2 mRNA,进而抑制了JAK2蛋白表达,从而抑制缺氧/复氧引起的大鼠心肌细胞凋亡的作用.     

黄芩茎叶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验研究

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(Scutellaria Baicalensis stem-leaf Total Flavonoid,SSTF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、SSTF组。SSTF组大鼠于术前1周灌胃不同剂量的SSTF(17.5mg/kg/d、35mg/kg/d、70mg/kg/d),模型组及假手术组给予等体积生理盐水。采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法制备心肌缺血再灌注(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)模型,缺血30min再灌注2h,应用流式细胞仪观察心肌细胞凋亡情况,同时检测血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、心肌组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehydebis,MDA)含量。结果:SSTF可以抑制损伤大鼠心肌细胞凋亡的发生,并显著降低MDA含量,使乳酸脱氢酶释放减少,提高SOD的活性,上述指标与缺血再灌注组相比均有显著性差异。结论:SSTF对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、增强抗氧化酶活性、抑制心肌细胞凋亡有关。     

牡荆素对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响

目的 探讨牡荆素(vitexin)对大鼠缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组:对照(CON)组,缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,牡荆素3个剂量组(VT,100、50、25 μmol/L)及葛根素阳性对照组(120μmol/L).应用Langendorff灌注技术,给予心脏30 min缺血/60 min再灌注,通过TUNEL检测和电镜观察细胞超微结构研究细胞凋亡以及免疫组化技术检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 与CON组相比,I/R组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量、凋亡率明显增加;与I/R组相比,VT(100、50、25 μmol/L)组心肌缺血/再灌注后心肌凋亡细胞(TUNEL染色)数量明显减少(P＜0.01);I/R组心肌Bax蛋白表达明显高于VT组心肌(P＜0.01),VT组心肌Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显高于I/R组心肌(P＜0.05).结论 牡荆素可通过增加Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达而减少I/R诱导的大鼠心肌细胞凋亡.     

家兔缺血预适应对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因的影响

目的:研究缺血预适应对家兔缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡和凋亡抑制基因Bcl-2mRNA、凋亡刺激基因FasmRNA表达的影响.方法:采用TUNEL法和原位杂交法测定家兔缺血再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2mRNA及FasmRNA的表达.结果:缺血预适应组的心肌细胞凋亡率比缺血再灌注损伤组明显减少(P＜0.01);缺血预适应组心肌细胞Bcl-2 mRNA的阳性表达明显增强,与缺血再灌注组相比差异显著(P＜0.05);缺血预适应组心肌细胞Fas mRNA的阳性表达明显低于缺血再灌注组(P＜0.05).结论:缺血预适应可以减轻缺血-再灌注损伤后的心肌细胞凋亡的程度;缺血预适应可以明显上调凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA的表达,下调凋亡刺激基因Fas mRNA的表达,可能是减少心肌细胞凋亡的机制之一.     

痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤过程中自噬与凋亡相关基因调节作用研究

目的:观察痰瘀同治方对心肌缺血再灌注损伤(IR)不同阶段自噬与凋亡相关基因的调控作用。方法:将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、痰瘀同治方组(43 g·kg~(-1)ig)及3-MA干预组(13.5 mg·kg~(-1)iv)。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min,再灌注2 h复制心肌缺血(MI)及IR模型,利用全自动生化仪检测血清肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用RT-PCR法检测各组大鼠心肌自噬基因Beclin-1,心肌微管相关蛋白轻链3蛋白(LC3)及抗凋亡蛋白Bcl-2表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠在缺血及再灌注阶段血清CK,LDH含量及心肌Beclin-1,LC3 mRNA表达均显著增强,且Bcl-2 mRNA表达减弱(P0.01);与模型组比较,痰瘀同治组能降低缺血期血清CK及再灌注期CK,LDH含量(P0.05),抑制缺血期Beclin-1 mRNA及再灌注期Beclin-1,LC3 mRNA表达,上调缺血期及再灌注期Bcl-2 mRNA表达(P0.05,P0.01);与假手术组,3-MA组比较,痰瘀同治组在缺血期可上调Beclin-1,LC3 mRNA表达(P0.01)。经相关性检验,缺血期及再灌注期Beclin-1与Bcl-2均呈负相关表达(P0.01)。结论:痰瘀同治方通过促进缺血期自噬发生及抑制再灌注期自噬过表达,同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达而发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。