急性大剂量γ射线照射对小鼠外周血淋巴细胞损伤的作用及其机制

目的：已知射线能引起免疫系统损伤，为此观察急性大剂量γ射线照射后小鼠外周血淋巴细胞的凋亡机制及与免疫功能的关系。方法：用原位末端标记、原位杂交和碱磷酶免疫组化技术观察急性大剂量γ射线照射小鼠外周血淋巴细胞凋亡特征，bax，bcl-2和bcl-XL的表达及T细胞亚群的变化。结果：①照射后，白细胞数迅速下降。而淋巴细胞凋亡率持续升高，7d达到峰值，12个月仍未恢复到正常值。照后24h在6～12Gy范围内呈较好的剂量效应关系，≥15Gy照射后凋亡率降低。②6Gy照后24h，淋巴细胞Bax蛋白表达即出现升高，当剂量为12Gy时达到峰值，≥15Gy照射后出现降低；而Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达在照后24h明显下降，于12Gy照射后降至最低。Bax和Bcl-2 mRNA的表达显示出相似的变化趋势。③照后3d，随照射剂量的增加T细胞及其亚群急剧降低，呈较好的剂量效应关系。结论：≤12Gy照射后细胞凋亡是淋巴细胞的主要死亡方式。照射后Bax的上调及Bcl-XL的下调在急性大剂量照射引起的淋巴细胞凋亡和免疫调控中起重要作用。     

rhIL-3和GM-CSF对γ线照射猴外周血淋巴细胞损伤的防护作用研究

目的观察重组人白细胞介素-3(rhIL-3)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)单用与伍用对3.0 Gy γ线照射猴外周血淋巴细胞损伤的防护作用,为造血生长因子用于急性放射病的治疗提供依据.方法 30只恒河猴随机分为rhIL-3 (20和60 μg*kg-1*d-1)、GM-CSF(10 μg*kg-1*d-1)、IL-3+GM-CSF、照射对照及正常对照共6个组.γ线全身照射3.0 Gy连续给药21 d后,用碱磷酶免疫组织化学法检测T细胞亚群、Bax和Bcl-2蛋白,用原位末端标记方法检测淋巴细胞凋亡率.结果①照射后外周血淋巴细胞数、T细胞及其亚群均显著低于正常组,照射对照组T、TH和Ts淋巴细胞分别下降至正常对照组的42%、41%和57%.②单独给予GMCSF和GM-CSF+IL-3后,外周血淋巴细胞数量及T、TH细胞的降低均受到明显抑制,两组的淋巴细胞数均相当于照射对照组的1.48倍,GM-CSF组T、TH细胞分别为对照组的1.57和1.76倍,GM-CSF+IL-3组T、TH淋巴细胞分别为对照组的1.48和1.72倍.③照射后淋巴细胞出现大量凋亡;用GM-CSF和GM-CSF+IL-3后能明显抑制照射引起的淋巴细胞凋亡,两组淋巴细胞凋亡率分别降低到照射对照组的41%和48%.结论一定剂量的GM-CSF或GM-CSF+IL-3能明显抑制照射引起的淋巴细胞以及T和TH细胞的降低;上述造血因子抑制辐射引起的淋巴细胞下降和改善免疫功能的机制之一是通过抑制淋巴细胞凋亡途径实现.     

致死剂量γ射线照射小鼠脾淋巴细胞凋亡特征及与Bax和Bcl-XL表达的关系

目的观察致死剂量γ射线照射后小鼠脾淋巴细胞凋亡特征及其与Bax和Bcl—XL表达的关系。方法清洁级C57小鼠225只,随机分为0、6、9、12、15和20Gy6个组,经γ射线全身一次照射,于照射前和照射后6h～28d活杀取材,用原位末端标记法(TUNEL)和Annexin—V流式细胞术(FCM)检测淋巴细胞凋亡和坏死情况,用碱性磷酸酶免疫组化技术检测Bax和Bcl—XL蛋白的表达。结果①各剂量组小鼠外周血白细胞在照射后6h出现一过性升高,以后迅速下降。6Gy照射后7d降至最低,至照射后28d基本恢复到正常水平。②不同剂量照射后6h脾淋巴细胞凋亡率达高峰;照射后6～24h,≤12Gy照射后凋亡率随照射剂量的增加而升高,≥15Gy照射后凋亡率下降。③FCM检测结果证实,6～12Gy照射后6h,脾淋巴细胞凋亡率呈现出量-效关系,≥15Gy照射后凋亡率下降,而坏死率明显升高。DNA凝胶电泳图谱分析支持上述结果。④照射后6h,6Gy照射后脾淋巴细胞Bax蛋白表达增加,至12Gy达峰值,显示出量-效关系;≥15Gy未显示出量-效关系;Bcl—XL蛋白随照射剂量增加而持续降低,在6～12Gy也显示出较好的量-效关系。结论6～12Gy照射后脾淋巴细胞死亡方式以凋亡为主,≥15Gy照射后凋亡与坏死均为淋巴细胞的重要死亡途径。促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl—XL在致死剂量照射引起的淋巴细胞凋亡调控中起重要作用。     

青紫薯色素抑制~（60）Co辐射小鼠胸腺淋巴细胞凋亡机制

目的探讨青紫薯色素对60Co辐射的小鼠胸腺淋巴细胞活性氧（ROS）及凋亡蛋白Bcl-2、Bax的影响及其机制。方法建立雄性昆明小鼠胸腺淋巴细胞60Co单次辐射（3Gy）病理损伤模型,随机分为6组：对照组（不作任何处理）、60Co单纯照射组、60Co＋0.625g/L青紫薯色素组、60Co＋1.250g/L青紫薯色素组、60Co＋2.500g/L青紫薯色素组和60Co＋1g/LVitC组。酶生化法测定各组小鼠胸腺淋巴细胞胞浆超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）活性、ROS含量,免疫细胞化学法检测各组Bcl-2、Bax的表达。结果与60Co单纯照射组比较,不同剂量（0.625、1.250、2.500g/L）青紫薯色素组及对照组小鼠胸腺淋巴细胞ROS含量降低,GSH-px、SOD活性升高（F=46.75、13.47、17.32,q=4.04～16.22,P〈0.05、0.01）;Bcl-2蛋白表达增强,Bax蛋白表达减弱（F=33.30、163.11,q=3.53～29.68,P〈0.01）。结论青紫薯色素能够有效抑制60Co辐射引起的小鼠胸腺淋巴细胞凋亡,其机制与抑制ROS及调节凋亡因子Bcl-2与Bax之间的平衡有关。     

藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。     

单次大剂量X线照射对大鼠胰腺的损伤作用

目的观察单次大剂量X线照射后,胰腺放射性损伤随照射时间的改变情况,为大分割放疗正常组织的保护提供实验依据。方法以6 MV-X线12 Gy照射大鼠腹部,在不同时间观察胰腺形态学改变,免疫组织化学方法测定Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果照射后7 d腺细胞萎缩,个别坏死,14 d腺细胞间纤维增生,42 d腺细胞增生。照射后21 d胰岛细胞间出现纤维增生。随照射时间延长,腺细胞中Bcl-2蛋白表达阳性率升高,各实验组与对照组比较差异有显著性（t=7.44~148.40,P〈0.001）,随照射时间延长Bax蛋白表达由可疑阳性变为阴性,仅照射后2 d时与对照组相比差异有显著性（t=4.43,P〈0.001）。随照射时间延长,胰岛细胞中Bcl-2蛋白表达阳性率升高,Bax表达阳性率降低,与对照组相比差异有显著性（t=7.11~85.80,P〈0.001）。结论单次大剂量照射后,胰岛细胞间仅发生纤维增生;腺细胞初始有一过性急性损伤,然后出现代偿性修复,机制可能与随照射时间延长抗凋亡基因bcl-2表达渐增高,凋亡基因bax表达降低有关。     

蛇床子素后处理对大鼠心肌急性缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响及其可能机制

目的观察蛇床子素后处理对大鼠心肌急性缺血/再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响,并对其可能的作用机制进行探讨。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min后,松开结扎线再灌注120 min制备急性心肌缺血/再灌注损伤模型;将30只Wistar大鼠随机分为以下3组:对照(Sham)组、缺血/再灌注(I/R)组、I/R+蛇床子素后处理(Ost)组。采用TUNEL法原位标记缺血区凋亡心肌细胞并计算凋亡指数,采用Western blot法检测心肌组织中Caspase-3、Bcl-2及Bax三种蛋白的表达。结果与Sham组相比,I/R组心肌细胞凋亡指数、心肌组织Caspase-3蛋白、Bcl-2蛋白和Bax蛋白含量明显增高(均P<0.05);与I/R组相比,Ost组心肌细胞凋亡指数(P<0.05)、心肌组织Caspase-3蛋白(P<0.01)及Bax蛋白表达水平均降低(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论蛇床子素后处理能抑制急性心肌缺血/再灌注损伤所致的大鼠心肌细胞凋亡,同时上调心肌组织中Bcl-2蛋白的表达及下调心肌组织中Bax蛋白的表达,提示上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白、进而上调Bcl-2/Bax比值可能是其发挥抗心肌细胞凋亡作用的机制。     

低剂量γ射线照射对小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的研究低剂量γ射线照射对多巴胺能神经元可能的保护作用。方法在小鼠MPTP损伤模型中,进行低剂量γ射线全身照射,高效液相色谱测定纹状体内DA及代谢产物含量变化,免疫组化计数多巴胺能神经元,活化小胶质细胞和星形胶质细胞。结果3．5Gy照射组与未照射组比较,MPTP造成的DA及其代谢产物损失明显减轻。结论低剂量γ射线照射对多巴胺能神经元有一定保护作用。     

bcl-2基因与淋巴细胞发育

bcl—2基因是一种重要的抑制凋亡的原癌基因,它在淋巴细咆发育过程中的正负选择(成熟与凋亡)中起着主要作用,而它的易位和异常表达也影响了淋巴瘤的发生。本文就bcl-2基因的分子基础、抑制凋亡机制及其在正常淋巴细胞发育中的作用等作一综述。     

电针人中穴对大脑中动脉阻塞大鼠脑神经细胞凋亡及其相关基因表达的干预

目的：观察针刺人中穴对脑缺血半暗带区脑神经细胞凋亡及其相关因子Bcl-2，Bax表达的影响。方法：实验于2003-07在湖南中医药大学动物实验基地完成。选取清洁级34月龄SD大鼠40只，随机数字表法分为4组：正常对照组、模型对照组、模型＋针刺人中穴组、模型＋针刺照海穴组，10只／组。①除正常对照组外，各组均采用改良Longa线栓法建立鼠大脑中动脉阻塞脑缺血模型。②造模后根据动物穴位图谱，模型＋针刺人中穴组针刺人中穴，模型＋针刺照海穴组针刺照海穴，分别于造模后12，24，48，72h各时相点进行30min电针干预，针刺深度2mm，以医用15mm、28号毫针刺入相应穴位，于针柄处接G6805-Ⅰ型电针治疗仪。刺激参数：疏波4Hz，密波20Hz，脉冲宽度0．5ms；输出电压24V，输出电流4-6mA，强度以鼠尾轻颤为度。极性固定，负极接右侧人中穴或照海穴，正极接鼠尾。正常对照组与模型对照组均不给予任何刺激。④造模后72h时各组动物断头取脑，进行脑神经细胞凋亡检测，观察凋亡相关因子Bcl-2，Bax表达的变化。结果：实验选取清洁级SD大鼠40只，全部进入结果分析。①与正常对照组比较，模型对照组大鼠脑细胞凋亡指数明显升高，模型＋针刺人中穴组显著降低[（6．4&;#177;2．7）％，（14．5&;#177;3．4）％，（9．1&;#177;3．5）％，P〈0．01]，模型＋针刺照海穴组脑细胞凋亡指数亦减小，但无明显差异（P〉0．05）。②造模后72h各组大鼠脑细胞凋亡相关基因的表达：模型＋针刺人中穴组Bcl-2的表达、Bel-2／Bax的变化均明显高于正常对照组、模型对照组（P〈0．01）；Bax的表达显著低于模型对照组（P〈0．01），与正常对照组基本相似（P〉0．05）。与模型＋针刺照海穴组比较，模型＋针刺人中穴组Bcl-2表达、Bcl-2／Bax均升高，Bax表达降低，差异均有显著性意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论：针刺人中穴可以有效抑制缺血侧半暗带脑神经细胞凋亡，促进半暗带区抑凋亡因子Bcl-2的表达，抑制促凋亡因子Bax的表达，从而减轻脑缺血时神经功能障碍，防止缺血梗死区向缺血半暗区进一步扩散。     

次声对人外周血淋巴细胞的影响

目的探讨次声对人外周血淋巴细胞的影响。方法健康志愿者18人（n=18）空腹抽血并分离其淋巴细胞，按照实验处理方法分为次声组（次声处理，n=18）、对照组（处理同次声组但次声治疗仪处于关闭状态，n=18）、空白组（淋巴细胞分离后一直置于5％CO2饱和湿度的培养箱内培养，n=18）；实验处理15，30，60，90，120min，每时间段依次取样后放入5％CO2饱和湿度的培养箱内进行培养。培养24，48h，检测相关指标，包括台盼蓝染色法、噻唑蓝染色法（MTT法）、流式细胞术以及扫描电镜的检测。结果分离后的淋巴细胞存活率达到95％以上，采用MTT法检测的结果显示，实验处理后培养24，48h，次声组的OD值与对照组之间的差异均无统计学意义（P〉0．05）；但次声组OD值随处理时间呈依次增大趋势，而对照组这种趋势不明显。流式细胞仪检测结果显示，各次声处理组与相应的对照组比较，凋亡细胞以及其他各类细胞的比率，差异均无统计学意义（P〉0．05）。扫描电镜下结果显示：次声处理作用120min且培养48h的细胞大小、形状、表面微绒毛疏密程度与空白组差异不大；而对照组细胞却有细胞表面微绒毛减少、异形细胞增加等变化。结论本研究采用的次声治疗剂量对健康人外周血淋巴细胞的细胞活性可能有一定促进作用，但对其凋亡率影响不大；次声处理可能会引起细胞膜的超微结构变化。     

枸杞多糖对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响

目的:研究枸杞多糖(lycium bararum polysaccharides,LBPs)对正常人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响.方法:无菌分离人外周血淋巴细胞,加入植物凝集素(PHA)和不同质量浓度的LBPs,MTT法检测其对淋巴细胞增殖的影响:RT-PCR法检测LBP对γ-干扰素(INF-γ)mRNA表达的影响;ELISA法检测LBPs作用后淋巴细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)分泌的变化.结果:50～100 μg/mL LBPs能明显增强PHA活化的人外周血淋巴细胞的增殖(P＜0.01);80、100 μg/mL的LBPs能使淋巴细胞IFN-γ mRNA的表达水平明显升高(P＜0.01);LBPs能促进淋巴细胞产生IL-2和TNF-α,并呈现浓度依赖性(P＜0.01).结论:LBPs能增强人外周血淋巴细胞的免疫功能从而加强抗肿瘤作用.     

DNA 氧化损伤对人外周血淋巴细胞微核率的影响

目的：探讨 H2 O2诱导淋巴细胞氧化损伤对其微核率的影响。方法采用10、50、100、1000μmol/L H2 O2诱导静息期淋巴细胞 DNA 损伤;体外培养淋巴细胞,有丝分裂原刺激其进入细胞周期,于培养不同时间点加入1000μmol/L H2 O2诱导DNA 损伤,常规培养法检测微核率的变化。结果各实验组微核率并无明显变化。结论 H2 O2可以诱导淋巴细胞 DNA 损伤,但对微核的形成无影响,可能与 DNA 损伤类型及快速修复有关。     

应用鼠神经生长因子修复周围神经损伤对骨质疏松的影响

背景：神经损伤后骨质疏松症发生机制与其他原因造成的失用性骨质疏松症不完全相同,在其发生发展过程中可能蕴含着更为复杂的因素,除了失去应力刺激外,细胞因子异常、神经功能的异常、激素水平的改变均参与了神经损伤后骨质疏松的发生。目的：通过活体动物实验探讨神经损伤后和骨质疏松的相互关系。方法：雄性SD大鼠随机分为正常对照组和失神经组,失神经组大鼠切断股骨神经造成失神经支配模型,然后分为模型对照组和失神经支配注射鼠神经生长因子组（神经生长因子组）。神经生长因子组在两侧下肢腓肠肌处部位注射鼠神经生长因子0.2 mL,频率1次/d,失神经支配对照组注射同等量生理盐水,正常对照组不做处置。30 d后称质量、取血、处死动物,取股骨进行骨组织计量学检查。结果与结论：失神经支配大鼠注射鼠神经生长因子后,体质量、骨小梁量与模型对照组相比具有明显增加,提示局部予以鼠神经生长因子治疗可明显减轻失神经支配后大鼠骨质疏松的程度,并可减弱因失神经导致的体质量减轻,而各组的血钙磷浓度无明显改变。说明神经性骨质疏松的发生并非源自钙磷流失,而是由骨小梁的结构改变所致,同时外源性鼠神经生长因子在神经性瘫痪后骨质疏松的恢复中具有积极意义。     

高原低氧环境对驻训人员外周血血细胞的影响

目的研究高原低氧环境驻训人员外周血血细胞的变化,分析高原低氧环境对血细胞的影响。方法通过比较驻训人员在平原(平原组)、进驻高原(高原组)6个月后及久居高原人员的血细胞,分析高原低氧环境对血细胞的影响。结果进驻高原6个月后白细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积、平均红细胞血红蛋白浓度都明显高于平原组和久居高原组(P0.05),而平均红细胞容积明显低于平原组和久居高原组(P0.05);高原组白细胞总数和淋巴细胞绝对值也明显高于平原组(P0.05),与久居高原组差异无统计学意义(P0.05)。高原组血小板总数和血小板分布宽度、平均血小板体积、血小板压积也明显高于平原组(P0.05)。结论高原低氧环境驻训人员血细胞指标明显升高,且血细胞变化与进驻高原海拔高度及进驻时间密切相关。     

血必净注射液减轻脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤的作用及机制

目的 研究血必净注射液调控自噬对脓毒症诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的影响及机制.方法 将80只BALB/c雄性小鼠随机分为对照组、模型组、血必净组、血必净+3-甲基腺苷(3-methyladenosine,3-MA)组,每组各20只.对照组进行假手术,后3组采用盲肠穿孔术建立脓毒症ALI模型,血必净组给予10 mL/kg血必净注射液腹腔注射,血必净+3-MA组给予10 mL/kg血必净注射液及10 mg/kg自噬抑制剂3-MA腹腔注射.观察4组小鼠造模后72h的累积生存率并检测肺组织病理改变、肺湿重/干重比、炎症因子[肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18]含量、自噬小体数目、自噬基因[微管相关蛋白轻链3 (microtubule-associated protein light chain3,LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1]的蛋白表达水平.结果 对照组72 h累积生存率为100％,肺湿重/干重比为3.89±0.85,TNF-α、IL-1β、IL-18含量分别为(0.83±0.14) ng/mg、 (0.74±0.15) ng/mg、 (84.51±13.25) pg/mg,自噬小体数目为(0.41±0.09)个/视野,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1分别为0.20±0.04、0.17±0.03.模型组小鼠肺组织出现典型的ALI病理改变,72 h累积生存率(50％)低于对照组(P＜0.0S),肺湿重/干重比(6.77±0.94),TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(3.15±0.76)ng/mg、(2.88±0.62) ng/mg、 (274.62±45.58) pg/mg],自噬小体数目[(3.14±0.55)个/视野],以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.69±0.09、0.35±0.06)均高于对照组(P＜0.05).血必净组小鼠肺组织ALI病理改变减轻,72 h累积生存率(75％)高于模型组(P＜0.05),自噬小体数目[(5.77±0.75)个/视野]及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.98±0.13、0.62±0.08)高于模型组(P＜0.05),肺湿重/干重比(4.23±0.76)及TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(1.52±0.32) ng/mg、 (1.29±0.30) ng/mg、 (121.36±26.51) pg/mg]低于模型组(P＜0.05).血必净+3-MA组小鼠肺组织ALI病理改变加重,72 h累积生存率(55％)低于血必净组(P＜0.05),自噬小体数目[(0.78±0.16)个/视野]及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平(0.37±0.05、0.32±0.05)低于血必净组(P＜0.05),肺湿重/干重比(6.31±0.91)及TNF-α、IL-1β、IL-18含量[(2.88±0.56) ng/mg、 (2.41±0.58) ng/mg、 (252.35±37.65) pg/mg]高于血必净组(P＜0.05).结论 血必净注射液能够减轻脓毒症诱导的小鼠ALI,激活自噬是与之相关的分子机制.     

Effect of anergy on in vitro sensitization with keyhole limpet hemocyanin of peripheral blood lymphocytes

To investigate the cellular mechanisms underlying clinical anergy, studies were done to determine whether the T cells of anergic patients could be sensitized in vitro. Ten normal males and 20 male patients with peripheral vascular disease were skin-tested with seven antigens and their peripheral blood mononuclear leukocytes (PBL) isolated. The mononuclear cells were stimulated in vitro with keyhole limpet hemocyanin (KLH) for 10 days in serum-free medium (primary culture) and then restimulated with KLH for three days (secondary culture). None of the controls or patients had been sensitized previously with this antigen. Of the 30 different cell preparations we tried to sensitize, 21 responded with a stimulation index (S.I.) of 1.5 or greater after being stimulated with KLH in the secondary cultures. There was no correlation between the concentration of KLH in the primary culture, the concentration of KLH in the secondary culture, and the S.I. at the end of the secondary culture. Cell preparations from all subjects were stimulated by PHA in both the primary and secondary cultures. Whether or not a subject's PBL could be sensitized in vitro did not correlate with either the subject's response to the intradermal injection of antigens or whether the subject was a control or a patient.