83. 三氯乙烯药疹样皮炎患者的染色体检查

目的：自1988年以来,中国广东先后在三氯乙烯（Trichloroethylene）接触工人中发现以皮损（严重的药疹样皮炎）、发热、肝功能损害和浅淋巴结肿大为主要表现的病例过100例,死亡20例,且近几年每年都约有30例左右发病。因其发病特殊,后果严重,诊断不易,发病机制尚未完全清楚,病因尚未完全确定,现有防治措施效果不太理想,故进行了系列研究。这是患者染色体水平的初步研究结果。方法：染色体核型分析（G带）和脆性分析按中山医科大学遗传教研室的方法,染色体畸变分析和微核分析按广东省职业病防治院毒理研究室方法进行。对三氯乙烯药疹样皮炎患者12例（其中男性7例;皮炎分型为剥脱性皮炎7例,重症多形红斑2例,大疱性表皮坏死松解症1例和多形红斑2例）进行染色体核型、畸变分析及微核分析;对6例剥脱性皮炎进行染色体脆性分析。结果：染色体核型分析：男性7例均为46,XY,女性5例为46,XX,未发现明显异常,染色体畸变分析（％）：总畸变率为0.917（范围1～3）;染色体型畸变率为0.25（0～2）;染色单体型畸变率为0.75（0～2）;微核细胞率为1.23‰±0.42‰（范围0～3）,均在本实验室正常范围内;外周血淋巴细胞染色体脆性分析也均未见明显异常。结论：三氯乙烯药疹样皮炎患者外周血淋巴细胞染色体的核型、畸变、脆性分析和微核分析均未发现明显异常。在上述的检测条件下,未发现三氯乙烯药疹样皮炎患者有任何染色体水平的改变。     

miRNAs作为癌症预测和预后标志物的巨大潜能

"因为不同癌症疗法对不同亚型患者有效,所以急需新型预测和预后标志物来提高癌症患者的疗效." miRNAs作为细胞通路的重要调控因子,在癌变过程中起着关键作用.最近研究已鉴定出许多潜在癌症标志物的miRNAs,部分miRNAs起癌基因、抑癌基因或转移调节因子的作用.因为不同癌症疗法对不同亚型患者有效,所以急需新型预测和预后标志物来提高癌症患者的疗效[1].     

三氯乙烯药疹样皮炎病人外周血c-fos、c-myc、K-ras和p53 mRNA表达水平的研究

目的:探讨三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)药疹样皮炎病人外周血癌基因c-fos、c-myc、K-ras、p53 mRNA表达水平的变化情况。方法:分别抽取4例健康人(对照组)及4例三氯乙烯致变态反应病人(病例组)抗凝外周全血,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)技术检测外周血中c-fos、c-myc、K-ras和p53 mRNA的表达水平。结果:与健康对照者比较,三氯乙烯药疹样皮炎病人外周血c-fos mRNA表达水平升高352%,c-myc mRNA升高41%,K-ras mRNA升高136%,p53 mRNA升高64%,两组间上述基因mRNA表达水平的差异均有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论:三氯乙烯药疹样皮炎病人外周血癌基因表达水平增加,提示三氯乙烯可能有一定的致癌风险。     

萎缩性骨不连中miRNAs的异常表达与其靶基因的初步预测

目的筛选研究萎缩性骨不连断段修复组织中异常表达的microRNAs（miRNAs）,并对其可能的功能性靶基因进行预测分析。方法以萎缩性骨不连患者断端瘢痕组织（AN,3例）与正常骨折愈合后内固定钢板取出时钢板周围的骨痂组织（B组,3例）作为研究对象,采用Exiqon miRCURY^TM LNA microRNA芯片（11．0版）进行筛选分析,比较A组组织中是否存在异常表达的miRNAs,并采用浏览计算机预测数据库等生物信息学的方法预测其可能的靶基因,探寻miRNAs可能参与的萎缩性骨不连相关病理生理过程。结果A组相对B组有9种miRNAs发生1．5倍以上表达上调（hsa—miR-149,hsa—miR-221,hsa—miR-628—3p,hsa-miR-54—5p,以及5种hsa—miRPlus）,9种miRNAs发生1．5倍以上表达下调（hsa—let-7b＊,hsa—miR-220b,hsa—miR-513a-3p,hsa—miR-551a,hsa—miR-576-5p,hsa—miR-1236,kshv—miR—K12—6—5p,以及2种hsa—miRPlus）。生物信息学分析发现,表达异常的miRNAs与多数成骨基因存在作用靶点。结论萎缩性骨不连的断端修复组织存在miRNAs的异常表达,其靶基因包括BMP家族在内的众多成骨性基因。数种miRNAs,特别是4种上调的miRNAs（hsa-miR-149＊、hsa-miR-221、hsa-miR-628—3p和hsa—miR-654—5p）有可能在调控骨折向不愈合发展中具有重要作用。     

腺样囊性癌分子标志物研究新进展

腺样囊性癌主要好发于涎腺,约占头颈部肿瘤的1%左右,病程进展缓慢但侵蚀性很强,容易侵犯周围神经和脉管,有较高的复发率及远地转移率,临床治疗较难,预后很不理想。因此,探寻该疾病发生、发展、侵袭转移及预后判断的分子机制,并寻找基因治疗的靶点成为治疗思路。过去,有关腺样囊性癌的分子标志物包括Ki-67、EGFR-2、p53、Bcl-2等作为候选靶基因研究颇多,然而结果却令人大失所望,治疗效果仍差强人意。近几年随着分子生物学技术的快速发展,探寻腺样囊性癌新的分子生物学标志物重新提到日程。本文就近年来该方面的研究新进展作一综述。     

乳腺癌患者血清差异表达蛋白分析

目的:检测乳腺癌（breast cancer,BC）患者的血清蛋白多肽图谱,分析乳腺癌患者与正常对照人群的蛋白表达差异,筛查其可作为潜在标记物的差异表达蛋白多肽。方法:采用液体芯片磁柱分离系统结合基质辅助激光解析电离化/飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization/time of flight MS,MALDI-TOF MS）技术对50例病理确诊的早期乳腺癌患者和50例正常对照人群进行血清蛋白组分析。采用Clin Pro Tools软件进行蛋白多肽的组间差异对比。结果:在分子量范围1000-10000Da 共检测到78个蛋白多肽峰图,其中11个蛋白多肽峰图具有极显著差异（P<0.001）,它们中有5个蛋白多肽在乳腺癌患者中表达下调,其余6个蛋白多肽在乳腺癌患者中表达上调。其中,质核比（m/z）为: 4957.03 以及4600.01,在乳腺癌患者组与正常对照人群血清中为最大差异表达的蛋白多肽。结论:利用液体芯片－飞行时间质谱技术以及Clin Prot系统可捕获到丰富且稳定的乳腺癌患者血清蛋白多肽图谱并能筛选出多个组间显著差异表达的蛋白多肽,可作为乳腺癌临床辅助诊断的潜在疾病标志物。     

胃癌患者血清中DKK1的表达及其意义

目的 探讨DKK1在胃癌患者血清中的表达情况及其临床意义。方法 选取170例胃癌患者（胃癌组）和同期170例非胃癌者（对照组）,通过ELISA试验盒检测血清DKK1浓度,采用ROC曲线评价诊断效能,并分析其水平变化与胃癌患者的年龄、性别、胃癌家族史、吸烟、饮酒、肿瘤大小、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移、肝脏转移、血管浸润和嗜神经侵袭的关系。结果 胃癌患者血清DDK1水平高于对照组（P<0.0001）。ROC曲线结果提示胃癌血清DKK1最佳临界值为167.8 pg/ml,AUC为0.908,敏感度为80.59%,特异性为84.71%。血清DKK1水平与胃癌患者的年龄、性别、胃癌家族史、吸烟、饮酒、肿瘤大小、肝脏转移、血管浸润和远处转移均无明显相关性（均P>0.05）,但与肿瘤TNM分期、浸润深度、淋巴结转移和嗜神经侵袭明显相关（均P<0.05）。结论 DKK1在非胃癌者血清中低表达,在胃癌患者血清中高表达,并且与病变严重程度相关,可能是一种潜在的胃癌筛查生物标志物。     

血浆外泌体miR-423-5p在前列腺癌骨转移患者中的差异表达分析

目的:研究血浆外泌体来源microRNA（miRNA）,作为前列腺癌骨转移的潜在标志物。方法:选取3例初诊为前列腺癌骨转移患者和3例局限性前列腺癌患者,收集患者外周静脉血10 mL,使用超速离心法及透射电子显微镜对血浆外泌体提取和鉴定。应用高通量测序分析血浆外泌体miRNA的差异表达谱。通过基因数据库GEO和已发表文章对差异miRNA筛选,选取测序结果中差异表达miRNAs,对7例局限性前列腺癌患者和10例前列腺癌骨转移患者的血浆外泌体进行qRT-PCR验证,同时结合GEO数据库样本进行验证。结果:高通量测序结果显示,从患者外周血浆外泌体中平均检测到740种miRNAs,通过R软件计算差异miRNA,得出61种差异miRNA;与对照组相比,hsa-miR-885-5p、hsa-miR-1255a、hsa-miR-122-5p、hsa-miR-141-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-1224-5p等在骨转移组中差异表达,通过靶基因功能及数据库表达选取miRNA进行PCR验证,发现hsa-miR-423-5p表达差异具有统计学意义（P=0.033）。通过数据库对60例局限性前列腺癌患者和40例骨转移患者统计发现,hsa-miR-423-5p在前列腺癌骨转移中显著下调（P=0.001<0.05）。结论:血浆外泌体来源miR-423-5p在前列腺癌骨转移中显著下调,有望成为前列腺癌骨转移患者中新的标志物。     

小细胞肺癌患者血清差异表达蛋白分析

目的:检测小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者的血清蛋白多肽指纹图谱,分析SCLC患者与正常对照人群的蛋白表达差异,筛查其可作为潜在标记物的差异表达蛋白多肽.方法:应用液体蛋白芯片结合飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对14例病理确诊的SCLC患者和32例正常对照人群进行血清蛋白组分析.采用Clin Pro Tools软件进行蛋白多肽的组间差异对比.结果:共获得57个蛋白多肽峰,其中18个蛋白多肽峰具有极显著差异(P＜0.001),其中9个蛋白多肽在SCLC患者中表达下调,其余9个蛋白多肽在SCLC患者中表达上调.两组数据中最大差异的两个蛋白多肽峰分别是m/z:1451.43和m/z:4643.31.结论:利用液体芯片-飞行时间质谱技术可以从SCLC患者的血清中获得稳定丰富的蛋白多肽谱,且能够筛选出多个组间显著差异表达的蛋白多肽,可作为SCLC临床辅助诊断的潜在疾病标志物.     

黄曲霉毒素B1诱导的恶性转化肝细胞miRNA表达谱的变化

目的：检测黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）诱导的恶性转化肝L02细胞（L02T）的miRNA表达谱,寻找差异表达的miRNA。方法：以含有AFB1的培养液多次间歇性染毒L02细胞获得转化细胞L02T,通过miRNA芯片技术检测和分析对照L02和转化L02T细胞的miRNA表达谱;用实时荧光定量PCR方法对芯片结果加以验证;采用TargetScan软件预测miRNA可能调控的靶基因。结果：获得2组细胞856个miRNA的表达谱,在25个表达差异显著的miRNA中,15个表达上调,10个表达下调;用定量RT-PCR对芯片结果中表达差异的miR-320a、miR-638和miR-98进行验证,并对其中上调显著的miR-638进行生物信息学分析,预测到4个与肝癌相关的潜在靶基因。结论：在AFB1诱导的恶性转化肝L02细胞中筛查出25个表达差异显著的miRNA,差异表达的miRNA可能在细胞恶性转化过程中起重要作用。     

The current state of molecular testing in the treatment of patients with solid tumors, 2019

The world of molecular profiling has undergone revolutionary changes over the last few years as knowledge, technology, and even standard clinical practice have evolved. Broad molecular profiling is now nearly essential for all patients with metastatic solid tumors. New agents have been approved based on molecular testing instead of tumor site of origin. Molecular profiling methodologies have likewise changed such that tests that were performed on patients a few years ago are no longer complete and possibly inaccurate today. As with all rapid change, medical providers can quickly fall behind or struggle to find up-to-date sources to ensure he or she provides optimum care. In this review, the authors provide the current state of the art for molecular profiling/precision medicine, practice standards, and a view into the future ahead.     

Stereotactic radiotherapy for hepatocellular carcinoma induced by hepatitis C and the relationships of changes in carbohydrate antigen 19-9 with AFP and PIVKA-II

PurposeAssessing the therapeutic effects of stereotactic body radiotherapy (SBRT) for hepatocellular carcinoma (HCC) takes time. Purpose of our study was to explore the relationships of changes in carbohydrate antigen 19-9 (CA 19-9) with those in the existing markers alpha-fetoprotein (AFP) and protein induced by vitamin K absence or antagonist-II (PIVKA-II).Patients and methodsThe subjects were 16 patients who underwent SBRT for solitary HCC ≤ 3 cm induced by hepatitis C between June 2016 and July 2019. Observation periods ranged from 8–43 (median: 28) months, ages from 59–85 (median: 65) years.ResultsChanges in CA 19-9 levels after SBRT were categorised into three patterns: 1) a transient elevation followed by a decline (75%); 2) a transient decline followed by an elevation (18.8%); and 3) no change (6.3%). Among patients showing a transient CA 19-9 elevation followed by a decline, which was the most frequent pattern, 75% showed these changes in synchronisation with AFP and preceded the changes in PIVKA-II, while in the other 25%, CA 19-9 changes were in synchronisation with PIVKA-II and preceded those in AFP. At the time of recurrence, 62.5% showed a continuous CA 19-9 elevation, either in synchronisation with other markers or by itself.ConclusionsThis is the first investigation of changes in CA 19-9 levels after SBRT for HCC induced by hepatitis C. Characteristic changes in CA 19-9, AFP, and PIVKA-II levels were observed as responses after treatment. As for its correlations with tumour markers, the acute responses of PIVKA-II tended to be slower than those of CA 19-9 and AFP. Although the sample size was small, our findings raise the possibility that measuring these 3 biomarkers after SBRT may be useful for monitoring patients for HCC recurrence.