病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡与外周血淋巴细胞凋亡的研究

目的:研究心肌炎小鼠柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎模型外周血淋巴细胞凋亡与心肌细胞凋亡的关系。方法:采用AnnexinV/PI双参数法在流式细胞仪上定量检测CVB3心肌炎小鼠外周血淋巴细胞凋亡及心肌细胞凋亡百分率。结果:CVB3感染所致心肌炎小鼠外周血淋巴细胞凋亡以及心肌细胞凋亡均显著高于正常对照小鼠(P<0.001),且两者呈显著正相关(r=0.80,P<0.01);外周血淋巴细胞及心肌细胞凋亡百分率与心肌病理积分亦呈明显正相关(r=0.72,P<0.01;r=0.85,P<0.01)。结论:病毒性心肌炎外周血淋巴细胞凋亡可以反映心肌细胞凋亡情况,而且两者均与心肌炎病理损害程度密切相关。     

芪芍五味子复方制剂抗CVB3病毒抑制心肌细胞凋亡机制的研究

目的 研究中药芪芍五味子复方制剂抗柯萨奇B3病毒(CVB3)效果及抑制病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的机制.方法 采用细胞培养法观察细胞病变效应(CPE)与广谱抗病毒药物病毒唑对照,进行复方制剂体外抗病毒实验;BALB/c小鼠接种CVB3建立病毒性心肌炎动物模型,随机分为正常对照组、病毒对照组、复方制剂治疗组和维生素C与病毒唑联用组,观察各组心肌病理变化,Real-time定量PCR检测小鼠心肌CVB3RNA水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡和坏死率.结果 复方制剂体外最大无毒浓度为19.53g/L,预防给药、同时给药和治疗给药3种方式细胞培养所需有效药物浓度均低于病毒唑;与同期病毒对照组小鼠比较,复方制剂治疗组小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻,CVB3RNA拷贝数降低(P<0.05),心肌细胞凋亡和坏死率显著降低(P<0.05).结论 芪芍五味子复方制剂可有效抗病毒,抑制病毒诱导心肌细胞凋亡,对CVB3感染小鼠心肌有良好的保护作用.     

细胞凋亡与小鼠病毒性心肌炎的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用。方法 :采用光镜、电镜、原位末端标记法 (TUNEL)观察病毒性心肌炎 (viralmyocarditis ,VM)鼠不同时期病理改变及细胞凋亡情况。结果 :小鼠感染后 7d即见炎性细胞浸润及心肌坏死 ,10～ 14d病变最严重 ,2 1d以后心肌炎性细胞浸润及心肌坏死逐渐减轻 ,代之心肌纤维化 ,对照组无病变。实验组 7、10、14、2 1、2 8d均可见到凋亡细胞 ,且感染后 7～ 14d细胞凋亡数明显高于 2 1～ 2 8d(P <0 .0 5 ) ,对照组未见凋亡细胞。结论 :细胞凋亡在病毒性心肌炎中起着重要作用 ,它参与了病毒性心肌炎的发生、发展。     

病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡及心肌病变的电子显微镜观察

目的研究病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌超微结构改变及细胞凋亡的形态学变化。方法本实验在接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC动物模型的基础上,用光学显微镜及电子显微镜观察心肌细胞的病变及心肌细胞凋亡。结果研究发现实验组小鼠在接种病毒5d后光镜或电镜下可见心肌病变及炎细胞浸润,7-9天病变达高峰,35天时病变基本恢复。VMC小鼠在接种病毒后7-9天,电镜下可见心肌细胞呈凋亡样改变,并可见凋亡小体。结论实验组小鼠在接种CVB3后可引起VMC,VMC中存在异常的心肌细胞凋亡现象。     

益心饮对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠心肌组织病理及超微结构的保护作用

目的:观察益心饮对病毒性心肌炎小鼠心肌组织病理及超微结构的影响。方法:用CVB3感染Balb/c小鼠制造病毒性心肌炎动物模型,分别用生理盐水、黄芪注射液及益心饮口服液灌胃治疗,分别观察7d和14d的心肌组织病理变化,并于电镜下观察小鼠心肌组织的超微结构。结果:益心饮口服液及黄芪注射液能明显减轻心肌变性坏死及炎性细胞浸润。结论:益心饮口服液对感染CVB3引起的病毒性心肌炎心肌组织病理及超微结构有明显的保护作用。     

柯萨奇病毒B3感染小鼠早期TNF-α的表达与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)感染小鼠肿瘤坏死因子的表达与细胞凋亡的关系。方法:用CVB3感染小鼠建立病毒性心肌炎感染模型,测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,同时采用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,CVB3感染小鼠血清中TNF-α的含量明显升高,感染后5d,心肌细胞凋亡率与对照组比较差异显著(P<0.0001)。TNF-α与细胞凋亡之间有关联性(r=0.8276,P<0.05)。结论:在CVB3感染中心肌细胞凋亡与TNF-α明显升高有关,两者在病毒性心肌炎发病的早期起到了重要作用。     

心肌康对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的保护作用

目的 观察心肌康对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞的保护作用.方法 对清洁级Balb/c小鼠采用柯萨奇病毒(CVB3)腹腔注射染毒,制成慢性病毒性心肌炎动物模型,按照随机数字表法分为三组:A组为病毒性心肌炎(VMC)组、B组为心肌康组、C组氯沙坦组.另设20只腹腔接种不含病毒的Eagle's液小鼠为正常对照组,观察心肌康对模型鼠的生存率的影响及对CVB3 RNA表达、Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的影响.结果 心肌康组、氯沙坦组小鼠的生存率明显高于病毒对照组,心肌康对CVB3感染鼠有保护作用,心肌康组对感染鼠的治疗作用要优于氯沙坦组.结论 心肌康可通过下调CVB3 RNA表达、抑制胶原增生而对心肌细胞产生保护作用.     

西洋参对小鼠病毒性心肌炎的疗效及机制

目的:探讨西洋参(Panax quinquefolium)对BALB/C小鼠Coxsackie B_3病毒性心肌炎的治疗作用。方法:雄性4周龄BALB/C小鼠腹腔接种CVB_3病毒液,建立VMC模型,接种30min后用西洋参煎剂灌胃每日1次,持续最长至4周。观察小鼠存活率、心肌病理改变、心肌内病毒滴度、心肌细胞凋亡坏死率、外周血T细胞亚群及抗心肌抗体的改变。结果:西洋参治疗组比病毒感染组存活率提高,心肌组织病理改变恢复加快,心肌细胞凋亡坏死率减低及外周血T细胞亚群比例改善,自身抗体减少(P<0.05)。结论:西洋参对CVB小鼠有较好的治疗作用。晚期效果好于黄芪。     

小鼠柯萨奇B_3病毒性心肌炎急性期心肌收缩力的改变及芪芩号对其影响

目的:观察小鼠柯萨奇B3(CVB3)病毒性心肌炎(VM C)急性期心肌收缩力的改变、采用并观察芪芩Ⅰ号(Q iq inⅠ)对CVB3-VM C小鼠心脏泵功能的改善。方法:采用BALB/C鼠建立CVB3病毒性心肌炎的动物模型,分为治疗组、病毒组和正常组,观察对比各组病变小鼠的一般情况、心脏收缩力指标LVP和LV dp/dtm ax变化、光镜下病理积分及电镜下心肌超微结构的改变。结果:病毒组第5、7天LVP和LV dp/dtm ax两指标均明显下降,与正常组比较有极显著性差异(P<0.01)。治疗组至第7天两指标均开始下降,低于正常组;与病毒组相比较,其LVP在第5、7天升高(P<0.05),LV dp/dtm ax在各时间点均有增高(P<0.01)。光镜下治疗组的心肌病理积分在第3~7天均低于病毒组(P<0.01)。电镜下可见病毒组小鼠心肌细胞线粒体肿胀、嵴断裂,肌丝溶解,肌浆网扩张,并在其中发现有病毒样颗粒;治疗组病变程度轻。结论:在急性期CVB3-VM C小鼠的心肌收缩力明显下降,与病毒直接损伤心肌,线粒体受损、大量心肌炎症坏死有关。芪芩Ⅰ号能明显减轻心肌的病理损害,提高CVB3-VM C小鼠的心肌收缩力。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎细胞凋亡作用的研究

目的　研究黄芪甲甙对病毒性心肌炎的细胞凋亡作用。方法　Balb/c小鼠腹腔接种CVB3建立病毒性心肌炎模型 ,随机分为黄芪甲甙治疗组及生理盐水对照组 ,心肌HE染色观察心肌病理改变 ,原位末端标记法与流式细胞仪方法观察细胞凋亡指数。结果　黄芪甲甙治疗组心肌病理积分明显低于对照组 (P <0 .0 1 ) ,细胞凋亡指数 [( 7.6± 3.2 ) %vs ( 1 2 .3± 3.6) % ,t=3.2 6,P <0 .0 5 ]及凋亡率[( 9.5± 5 .3) %vs ( 2 7.8± 9.2 ) % ,t=6.5 8,P <0 .0 1 ]均明显低于对照组。结论　黄芪甲甙对Balb/c小鼠CVB3病毒性心肌炎有显著的抗细胞凋亡的作用。     

抗FasL抗体在小鼠病毒性心肌炎治疗中的作用

目的：探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇B3（CVB3）病毒性心肌炎心肌细胞凋亡及病毒滴度的调节作用。方法：随机将80只Balb／c小鼠分为空白对照组、病毒对照组、IgG对照组及抗FasL抗体治疗组,于感染后第10天每组处死8只并取其心脏,光镜检查的心肌病理变化,原位末端标记法（TUNEL）检测小鼠心肌组织的细胞凋亡,用空斑形成技术（PFU法）测定心肌病毒滴度。结果：抗FasL抗体治疗组小鼠死亡率、心肌病变积分、心肌细胞凋亡率、心肌病毒滴度均明显低于病毒对照组及IgG对照组（P均〈0．01）。结论：抗FasL抗体可降低小鼠CVB,病毒性心肌炎心肌内病毒滴度、减少心肌细胞凋亡和心肌损伤．     

静注免疫球蛋白对病毒性心肌炎小鼠的疗效及机理研究

目的:探讨静注免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)对病毒性心肌炎的疗效及其机理。方法:320只5周龄雄性BALB/c小鼠随机分为8组,感染组腹腔接种柯萨奇B3病毒(CVB3)制成心肌炎动物模型,在接种病毒后3、7 d分别腹腔注射IVIG(500 mg/kg.d-1)5 d和10 d,流式细胞仪定量检测心肌细胞凋亡率和坏死率,与心肌病理组织学积分和病毒滴度进行相关分析,并与中药黄芪疗效对比。结果:静注免疫球蛋白治疗组小鼠心肌内病毒滴度、心肌病理积分和心肌细胞凋亡率与坏死率明显低于病毒对照组和黄芪治疗组,以早期(感染后3 d)长程(10 d)治疗组效果最好。结论:静注免疫球蛋白通过抑制柯萨奇B3病毒,降低心肌细胞凋亡率和坏死率对病毒性心肌炎发挥疗效,其疗效高于传统中药黄芪。     

胰岛素样生长因子-1对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白p53的表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌凋亡蛋白p53的影响。方法:将60只Balb/c雄性小鼠随机分为3组,正常对照组、柯萨奇病毒(CVB3)感染组(感染组)和病毒感染加IGF-1干预组(治疗组)。在实验第10天处死动物,留取心肌标本。免疫组织化学法检测心肌组织p53的变化。结果:治疗组心肌p53为123.5±11.2,明显低于感染组(167.9±15.6,P<0.01),故IGF-1能显著降低VMC小鼠心肌凋亡蛋白p53的表达。结论:IGF-1对VMC小鼠的心肌细胞有保护作用。     

柯萨奇病毒B3感染致小鼠心肌细胞凋亡的研究

目的探讨柯萨奇病毒B3感染与心肌细胞凋亡的关系。方法将 10 0TCID50 柯萨奇病毒B3腹腔注射BALB/c小鼠 ,于接种后 3、5、7、9和 14天各处死 5只 ,取心脏 ,将右半心脏匀浆 ,冻融 3次后离心取上清 ,用HeLa细胞分离病毒并滴定其效价 ;左半心脏进行组织病理学检查和用TUNEL方法检测凋亡细胞。结果接种病毒后第 3天和第 5天光镜观察可见心肌纤维崩解、断裂 ;第 9天和 14天间质纤维增生 ,填充坏死心肌吸收后的间隙。接种后 3～ 9天心肌内可分离到病毒 ,第 7天病毒效价达高峰 ,第 9天下降 ,第 14天分离不到病毒 ;接种后 3～ 14天在心肌内检测到凋亡细胞 ,凋亡细胞数量呈逐渐增加趋势。结论柯萨奇病毒B3型感染BALB/c小鼠可以引发心肌细胞凋亡 ,心肌细胞凋亡是病毒性心肌炎的致病机理之一     

诱导型一氧化氮合酶在实验性病毒性心肌炎心肌内的表达及其与心肌损害的关系

目的 探讨诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）在急性病毒性心肌炎心肌内的表达及其与心肌损害的关系。方法 ６～８周龄ＢＡＬＢ／Ｃ雄性小鼠２４只,随机分两组：感染组１６只以柯萨奇病毒Ｂ３ｍ（ＣＶＢ３ｍ）腹腔内注射,另８只为正常对照组。采用免疫组化法检测两组小鼠心肌组织内ｉＮＯＳ表达,并将其半定量与心肌病理变化程度进行相关分析,用比色法测定了血清中ＮＯ间接含量。结果 ①感染组小鼠心肌标本病理组织学检查均有不同     

黄龙口服液对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠白介素12水平及自然杀伤细胞活性的影响

目的 :探讨黄龙口服液干预柯萨奇B3 (CVB3 )病毒性心肌炎小鼠动物模型血清IL 12水平和NK细胞活性的影响。方法 :CVB3 诱导Balb/c小鼠心肌炎为研究对象 ,给予黄龙口服液进行干预 ,分别于用药后第 3,7和 14d测定小鼠血清IL 12水平和NK细胞活性。同时测定心脏组织中病毒滴度 ,进行心肌病理学检查。结果 :黄龙组小鼠血清IL 12水平明显升高 ,NK细胞活性增强 ,早期小鼠心脏组织中病毒滴度下降 ,心肌损害较轻。结论 :黄龙口服液干预病毒性心肌炎小鼠在免疫损伤中起到一定的保护作用 ,早期提高宿主对病毒免疫应答能力 ,能有效提高CVB3 感染小鼠血清IL 12水平和提高NK细胞活性 ,从而在早期降低心脏组织中病毒滴度 ,减轻心脏损伤程度 ,有效改善预后。     

CD4+T淋巴细胞在小鼠病毒性心肌炎发生发展中的作用

目的探讨CD4⁺ T淋巴细胞（CD4⁺ T细胞）在小鼠柯萨奇病毒B₃(coxsackievirus, CVB₃)所致病毒性心肌炎发生发展中的作用。方法随机将70只BALB/c健康雄性小鼠分为正常对照组(n=15)和病毒感染组(n=55)，正常对照组小鼠腹腔接种不含病毒的eagle氏液0.15mL，病毒感染组小鼠腹腔接种0.15mL TCID50 为109/mL的CVB₃ Nancy株病毒液。分别于接种病毒后第7、10、14、21、28d随机取正常对照组小鼠3只、病毒感染组小鼠8只断髓处死，无菌条件下取心脏，光镜下观察心肌组织的病理变化并计算心肌病理组织学积分，应用免疫组化方法检测CD4⁺ T细胞在心肌中的表达，并与心肌病理组织学积分作相关性分析。结果病毒感染组小鼠心肌可见CD4⁺ T细胞的表达，且与心肌病理组织学积分成显著正相关（r=0.98，P＜0.01），不同时期CD4⁺ T细胞表达强弱不同，以第10～14d最强（P＜0.01)。结论CD4⁺ T细胞在小鼠病毒性心肌炎发病过程中，清除病毒的同时还引起了自身心肌损伤。     

硒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制

目的: 探讨硒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,阐明其对PI3K-Akt信号传导通路中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游靶基因编码的Bax和Bcl-2蛋白的作用机制。 方法: 60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组和硒干预组(n=20)。正常对照组小鼠连续3 d腹腔注射不含病毒的培养液200 μL;病毒对照组小鼠腹腔注射100半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)柯萨奇病毒B组病毒(CVB3)液200μL,连续3d;硒干预组小鼠在病毒对照组同样的处理后灌胃给予100 μg·kg^-1亚硒酸钠,每日1次,连续处理14d。接种CVB3的第15天处死小鼠,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,光镜下观察心肌病理变化,Western blotting法检测心肌细胞中Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。 结果: 与病毒对照组比较,硒干预组小鼠生存率明显升高(P<0.01)。硒干预组小鼠的心肌病理改变较病毒对照组减轻。硒干预组小鼠心肌细胞凋亡率低于病毒对照组(P<0.01)。与病毒对照组比较,硒干预组小鼠心肌细胞中p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平增加,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bax/Bcl-2蛋白比值下降(均P<0.01)。 结论: 硒对CVB3感染导致的VMC小鼠心肌细胞有保护作用,其作用机制与硒通过活化心肌细胞的PI3K-Akt信号通路、调控其下游Bcl-2和Bax蛋白表达和抑制心肌细胞凋亡有关。