超声破坏微泡造影剂促进心肌梗死大鼠血管新生的实验研究

目的 探讨超声破坏微泡造影剂刺激大鼠心肌血管内皮生长因子(VEGF)分泌、促进新血管生成的作用.方法 建立大鼠心肌梗死模型,随机分为4组.A组行超声破坏微泡治疗,B组行单纯超声治疗,C组单纯注射微泡,D组注射生理盐水作为对照,每组均处理3次.4周后取材,免疫组化检测心肌组织中VEGF、CD34表达,ELISA及Western blot检测VEGF表达.结果 A组心肌组织中见大量VEGF和CD34表达,新生血管较多;B组有较少VEGF和CD34表达,新生血管较少;C组和D组仅有极少量VEGF和CD34表达,未见明显新生血管.ELISA检测显示,A组VEGF表达量明显增高[(8.194±1.129)Pg/g],与其他三组[B组(4.339±0.753)Pg/g,C组(2.304±0.762)Pg/g,D组(2.411士0.801)Pg/g]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测显示A组有一条约21 kD的明显的蛋白质条带表达.结论 超声破坏微泡可刺激心肌内源性 VEGF 分泌,促进血管新生.     

超声破坏微泡联合粒细胞集落刺激因子促进大鼠心肌血管新生的实验研究

目的 探讨超声破坏微泡联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)促进大鼠心肌血管新生的有效性.方法 40只健康成年Wistar大鼠随机分为4组.A组在超声微泡治疗前一天行G-CSF皮下注射预处理;B组仅行超声微泡治疗;C组仅行G-CSF皮下注射;D组为对照.于治疗后2周取材,HE染色光镜观察心肌结构变化,免疫组化法检测心肌组织中VEGF及CD34表达,评定心肌血管新生疗效.结果 A组心肌中有大量VEGF和CD34表达,新生血管较多;B组心肌中有部分VEGF和CD34表达,新生血管相对较少;C组及D组仅有极少量VEGF和CD34表达,未见明显新生血管.结论 超声微泡可刺激心肌内源性VEGF分泌,促进心肌血管新生,G-CSF能明显增强其血管新生作用.     

超声破坏微泡促进骨骼肌血管新生的时间-效应关系研究

目的 探讨超声破坏微泡促进大鼠骨骼肌血管新生的时间-效应关系.方法 将48只SD大鼠随机分为4组(超声破坏微泡组、单纯超声组、单纯微泡组、对照组),超声破坏微泡组经尾静脉输入自制的脂质全氟丙烷微泡造影剂0.5 ml,同时用1.0 MHz、2.0 W/cm2的超声在其大腿骨骼肌局部作用3min;单纯超声组仅在骨骼肌局部用同等的超声能量作用;单纯微泡组仅由尾静脉输入脂质全氟丙烷微泡造影剂0.5 ml;对照组不作任何处理.实验结束后的第3、7、10、14、21、28 d,各组分别取两只大鼠处死,取局部骨骼肌行石蜡切片HE染色观察显微结构的变化,CD34免疫组化计数微血管密度(MVD),酶联免疫吸附试验(ELISA)定量评价血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 超声破微泡组有较多的血管新生;单纯超声组新生血管较少;单纯微泡组和对照组几乎无血管新生.随着时间的变化,超声破坏微泡组的MVD值和VEGF表达在第10 d达到高峰;单纯超声组的高峰出现在第14 d.结论 超声破坏微泡可刺激骨骼肌中内源性VEGF较快、较多地分泌,从而更好地促进新生血管生成.     

超声破坏微泡促进骨骼肌血管新生的实验研究

目的　探讨超声破坏微泡引起的微血管破裂促进大鼠骨骼肌血管新生的有效性。方法　将 30只 Wistatr大鼠随机分为 3组 ,1组经静脉输入自制的白蛋白微泡造影剂 0 .5 ml,同时用 1MHz,2 .0 W/cm2 的超声在其骨骼肌局部间歇作用 2 min;1组仅在骨骼肌局部用同等的超声能量作用 ;第 3组作为对照组。实验结束后 ,各组分别取 1只做石蜡切片观察显微结构的变化。各组剩余的大鼠于 2周后处死 ,免疫组化观察骨骼肌中血管内皮生长因子 (VEGF)和血管内皮细胞 因子的表达。结果　超声破坏微泡组大鼠骨骼肌中可见 VEGF和 因子的表达较多 ,有较多的新生血管生成 ;而单纯超声作用组 VEGF和 因子表达较少 ,血管新生不明显 ;对照组中无 VEGF和 因子表达 ,无新生血管。结论　超声破坏微泡引起的微血管破裂可刺激骨骼肌中内源性 VEGF的分泌 ,促进血管生成。     

超声微泡造影剂介导VEGF基因治疗大鼠心肌缺血的实验性研究

目的：探讨超声微泡造影剂介导血管内皮生长因子（VEGF）基因转染大鼠缺血心肌的有效性。方法：将15只急性心肌梗塞3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只，第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式将pcD2VEGF121基因转染大鼠心肌约6分钟；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD2VEGF121基因的造影剂；第三组为对照。2周后，分别行免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白及毛细血管内皮细胞，结果：采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强VEGF基因在大鼠心肌组织内的表达，并可促进缺血心肌组织新生血管，结论：超声微泡造影剂介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

超声介导微泡靶向传输基因促血管新生的实验研究

目的探讨超声介导微泡靶向传输血管内皮生长因子VEGF165促心肌血管新生即心肌“分子搭桥”的新途径。方法利用分子生物学方法构建人血管内皮生长因子真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165;制备载VEGF165基因脂质体微泡,分析其理化性质和功能,在超声场利用超声辐射向大鼠梗死心肌靶向传输VEGF165;2周后取材,逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)评价大鼠心肌中人源VEGF165mRNA表达,蛋白印迹杂交(WesternBlot)观察大鼠心肌VEGF165的蛋白表达,CD34免疫组化微血管密度(MVD)计数半定量法评价超声介导微泡靶向传输VEGF165促梗死心肌血管新生效果。结果①成功构建、克隆血管内皮生长基因VEGF165重组真核表达质粒pcDNA3.1-/VEGF165,测序分析、酶切鉴定准确无误;②研制的脂质体微泡超微结构显示可粘附或包载DNA,粒度分析显示平均粒径<5μm;③在超声介导下该脂质体载基因微泡可靶向传输VEGF165至大鼠梗死心肌,超声介导靶向传输组VEGF165的mRNA、蛋白表达及促血管新生作用(MVD表示)仅次于VEGF165基因心肌注射组。结论超声介导微泡可向大鼠心肌靶向传输VEGF165基因并产生促血管新生效应。     

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的 探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性。方法 18只健康雄性Wistar大鼠，取3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂，观察对心肌组织显微结构的影响。将另15只急性心肌梗死3天后的雄性Wistar大鼠分为3组，每组5只。第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式，将pcDzVEGFm基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影(约6min)；第二组尾静脉输入同等剂量携pcD。VEGF。基因的造影剂；第三组为对照。2周后，取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色，观察心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血，产生大量空泡，并有部分心肌细胞坏死。采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染，能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达。结论 超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应，其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法。     

超声微泡介导VEGF基因治疗下肢血管闭塞

目的探讨用超声微泡造影剂促进VEGF基因治疗兔下肢缺血的可行性.方法将30只大白兔左股动脉结扎后随机分为3组: A组采用局部注射VEGF质粒DNA; B组采用局部注射VEGF质粒与超声微泡造影剂的混合物;C组作为对照.于治疗后4周进行数字减影血管造影(DSA)和免疫组织化学方法检测侧支循环建立和血管新生.结果 DSA可见用超声破坏微泡后促进侧支循环建立较好,新生血管较多;单纯局部注射质粒可促进部分血管新生,而对照组的侧支循环和新生血管较少.各组免疫组化所测血管计数均有显著性差异.结论用超声微泡介导的VEGF基因转染,可促进缺血骨骼肌的血管新生和侧支循环建立,为下肢缺血性疾病的基因治疗提供了一种新途径.     

超声破坏微泡对大鼠皮肤创面愈合影响的实验研究

目的 探讨超声破坏微泡(声诺维)对大鼠皮肤创面愈合的影响.方法 96只SD大鼠建立皮肤创面模型后随机分成4组:超声破坏微泡组、单纯微泡组、单纯超声组和对照组.超声破坏微泡组经鼠尾静脉注射微泡造影剂0.5 ml,同时用声强度1 MHz、2.0 W/cm2超声辐照3 min单纯微泡组经鼠尾静脉注射微泡造影剂0.5 ml;单纯超声组经鼠尾静脉注射生理盐水0.5 ml,同样条件超声辐照3 min对照组经鼠尾静脉注射生理盐水0.5 ml.于创伤后第1、3、5、7、14、21 d利用HE染色和免疫组化方法 观察各组创面肉芽组织生长及血管内皮生长因子(VEGF)表达的情况.结果 HE染色:伤后第7 d,超声破坏微泡组肉芽组织明显比其他3组厚,新生毛细血管均垂直于创面生长,其他3组毛细血管排列紊乱.免疫组化观察VEGF表达变化:超声破坏微泡组在第3 d形成表达高峰,其他3组表达高峰在第5～7 d.结论 超声破坏微泡可以提高大鼠背部皮肤的创面愈合质量;新生肉芽组织成熟早,创面愈合加速.超声破坏微泡时产生的高温、高压及某些化学效应可以刺激内源性VEGF分泌,促进血管生成,从而促进创面愈合.

Abstract：

Objective To investigate the effect of microbubble(Sono Vue) destruction with ultrasound on wound healing in rats. Methods Total 96 SD rats were accepted one rounded whole-layer skin incision on back each other and randomly divided into four groups:microbubble destruction with ultrasound(US + MB),microbubble(MB), ultrasound(US) and control group. Rats in US + MB group were injected with 0.5 ml microbubble contrast agent via tail vein,and then ultrasound irradiated for 3 minutes immediately. MB group were injected with 0.5 ml microbubble contrast agent. US group were injected with 0.5 ml physiological saline,and then ultrasound irradiated for 3 minutes immediately under the same condition. Control group were injected with 0.5 ml physiological saline. Feed each rat in single cage. On day 1,3,5,7,14 and 21 after wound creation,the excised wound tissues were analyzed by histology and VEGF expression in wounds by immunohistochemistry. Results HE staining: On day 7, wounds of US + MB group displayed the most accumulation of granulation tissue and all new capillaries were perpendicular to the wound surface, but the new capillaries of other 3 groups were disordered. Immunohistochemical examination of VEGF expression:the peak expression appeared on day 3 in US + MB group, other 3 groups were on day 5 to day 7.Conclusions US + MB treatment could improve the quality of wound healing and granulation tissues were maturated earlier than MB, US treatment and control group, which could accelerate wound healing. High temperature,high pressure and some kind of chemistry effecs induced by microbubble destruction with ultrasound can stimulate the secretion of endogenous VEGF, which may be the mechanism of promoting angiogenesis and wound healing.     

超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及介导VEGF基因转染大鼠心肌的实验研究

目的探讨超声微泡造影剂对心肌组织的生物学效应及其介导VEGF基因转染大鼠心肌的有效性. 方法 18只健康雄性Wistar大鼠,取3只采用超声波在鼠胸壁破坏微泡造影剂,观察对心肌组织显微结构的影响.将另15只急性心肌梗死3天后的雄性Wistar大鼠分为3组,每组5只.第一组采用超声破坏微泡造影剂的方式,将pcD2VEGF121基因转染大鼠心肌至造影剂不再显影(约6min);第二组尾静脉输入同等剂量携pcD2VEGF121基因的造影剂;第三组为对照.2周后,取缺血心肌组织行VEGF免疫组织化学染色,观察心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况.结果超声波破坏微泡造影剂能使心肌组织充血,产生大量空泡,并有部分心肌细胞坏死.采用超声微泡造影剂介导的VEGF基因转染,能明显增强大鼠心肌组织VEGF蛋白的表达.结论超声微泡造影剂能明显增强对组织的空化效应,其介导的VEGF基因治疗是一种无创、新型、高效的基因转移方法.     

靶向超声介导抗细胞间黏附因子-1单克隆抗体对大鼠心肌缺血再灌注损伤的实验性研究

目的探讨靶向超声能否提高抗细胞间黏附因子-1单克隆抗体对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法将60只心肌缺血的雄性SD大鼠分为3组,第1组为超声介导抗细胞间黏附因子-1单克隆抗体定向于受损心肌组,第2组为单纯抗细胞间黏附因子-1单克隆抗体组;第3组为对照组。每组又分为24h后处死组和14d后处死质量分数组,每小组为10只。处死后分别行坏死区中性粒细胞记数,梗死区质量分数测定,免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白表达,缺血心肌区域毛细血管记数,观察用药前后心电图ST段改变。结果24h处死组超声介导组坏死区中性粒细胞平均记数少于单纯用药组,超声介导组梗死区面积明显小于单纯用药组。14d后处死组超声介导组梗死区重量比明显小于单纯用药组,且有大量VEGF蛋白阳性反应的棕褐色颗粒。结论超声介导微泡造影剂携带抗细胞间黏附因子-1单克隆抗体能提高局部药物浓度,减少中性粒细胞在缺血心肌的浸润,减少组织再损伤,促进缺血区毛细血管再生,减少心肌梗死面积。     

Experimental research on therapeutic angiogenesis induced by hepatocyte growth factor directed by ultrasound-targeted microbubble destruction in rats.

OBJECTIVE: The purpose of this study was to explore the feasibility of therapeutic angiogenesis in myocardial infarction induced by hepatocyte growth factor (HGF) mediated by ultrasound-targeted microbubble destruction. METHODS: Forty Wistar rats were divided into 4 groups after the models of myocardial infarction were prepared: (1) HGF, ultrasound, and microbubbles (HGF+US/MB), (2) HGF and ultrasound, (3) HGF and microbubbles, and (4) surgery alone. Destruction of ultrasound-targeted microbubbles loaded with the HGF gene with an electrocardiographic trigger mode was performed in the HGF+US/MB group. All the rats were killed after being transfected for 14 days. Enhanced green fluorescent protein expression was examined in the myocardium, liver, and kidney in all groups by fluorescence microscopy; CD34 expression was detected by immunohistochemistry, and microvessel density (MVD) was counted in the high-power field on microscopy. Hepatocyte growth factor expression in the myocardium was detected by western blotting and an enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Enhanced green fluorescent protein expression was detected in the myocardium of the HGF+US/MB group, but a few areas of HGF expression were detected only in small vessels and the capillary endothelium, and no expression was found in the surgery-alone and HGF and microbubbles groups. The results of MVD counting by microscopy showed that the MVD in the myocardium of the HGF+US/MB group was the highest among all the groups. The results of western blotting and the enzyme-linked immunosorbent assay showed that the amount of HGF in the myocardium was highest in the HGF+US/MB group. CONCLUSIONS: Ultrasound-targeted microbubble destruction could deliver HGF into the infracted myocardium and produce an angiogenesis effect, which could provide a novel strategy for gene therapy of myocardial infarction.     

经多功能心腔内超声导管超声辐照破坏微泡对犬心肌组织的生物学效应

目的观察经多功能心腔内超声(ICE)导管超声辐照破坏微泡对动物心肌产生的生物学效应,探索基因治疗缺血性心脏病的新方法。方法 15只犬随机分为US+MB组、US组、对照组3组,每组5只。以介入法将多功能ICE导管送入犬心室。对US+MB在ICE监控下向左心室游离壁注射0.5ml微泡,并以1 W/cm2的声能对注射部位辐照1min;对US组以相同条件行左心室壁辐照,但不注射微泡;对照组在插入导管后不进行任何处理。术后3天处死动物,观察心肌组织大体改变,并行HE染色观察细微结构变化。结果ICE能对注射针的进针深度、微泡注射及辐照过程进行实时监控。观察期内所有动物均正常存活。US+MB组心肌辐照部位出现充血、心肌细胞间隙增宽、少量炎性细胞浸润等改变,US组心肌组织仅出现轻微充血;对照组动物心肌无异常变化。结论经ICE导管超声辐照破坏微泡能在靶区域产生相应生物学效应,内置ICE可对心肌内微泡注射、超声辐照过程进行实时监控。此款新型多功能导管可能为基因治疗缺血性心脏病提供新的、更加安全有效的途径。     

超声破坏微泡对心肌细胞膜通透性影响的研究

目的探讨超声破坏微泡造影剂对心肌细胞膜通透性的影响。方法将15只昆明小白鼠随机分为3组,一组采用尾静脉输入白蛋白微泡造影剂,胸壁用频率为1MHz,强度为1.5W/cm2的超声进行辐照1min;一组单纯采用同等超声辐照相同时间;一组作为对照。作用后即刻取心肌组织用硝酸镧(La)示踪法做透射电镜观察心肌细胞膜通透性的变化。结果采用超声破坏微泡后可见部分镧颗粒分布于心肌细胞胞浆内,部分分布于线粒体外、细胞核外;单纯超声作用组心肌细胞胞浆中可有少量的镧颗粒分布,而大部分镧颗粒分布于细胞膜外;而对照组镧颗粒分布于心肌细胞膜外。结论超声破坏微泡可提高心肌细胞膜通透性,可能是超声微泡造影剂增强组织中基因转染的机制之一。     

超声造影剂介导血管内皮生长因子基因治疗心肌缺血的实验研究

目的探讨超声破坏造影剂微泡介导血管内皮生长因子(VEGF)基因转染兔缺血心肌的有效性。方法新西兰白兔48只，结扎兔冠状动脉左旋支，建立急性心肌梗死模型。术后3d，经胸超声检查左室壁运动情况，明确心肌缺血区域，然后将VEGF真核表达质粒与新型超声造影剂JD-95混合后，经耳缘静脉输入兔体内，同时进行超声实时造影成像，照射心脏缺血区。其他对照组包括超声和造影剂组、单独基因组、基因和超声组、基因和造影剂组以及空白对照组。术后17d处死动物，取动物缺血心肌、肝、肾及下肢骨骼肌组织，用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达。结果在超声破坏造影剂微泡介导基因转染的实验组中5只兔的缺血心肌中VEGF蛋白的表达，2只兔肾有VEGF表达。而其他对照组中无VEGF蛋白表达。结论超声破坏造影剂微气泡的方法是将体外生物活性物质传递至心肌中的一种有效途径。     

靶向超声介导VEGF_(165) cDNA基因及抗ICAM-1单克隆抗体治疗大鼠心肌缺血的对比性研究

目的 探讨靶向超声介导VEGF_(165) cDNA、抗ICAM-1单克隆抗体及两者协同作用于受损心肌的有效性及可行性.方法 将80只心肌缺血的雄性SD大鼠随机分为四组:第一组采用超声击破微泡造影剂的方法将VEGF_(165) cDNA基因及抗ICAM-1单克隆抗体混合物定向于受损心肌;第二组采用超声击破微泡造影剂的方法将VEGF_(165) cDNA基因定向于受损心肌;第三组采用超声击破微泡造影剂的方法将抗ICAM-1单克隆抗体定向于受损心肌;第四组为对照组只注射生理盐水1 ml,不采用超声波照射.每组分别于24 h和14 d后处死10只.处死后分别行坏死区中性粒细胞记数,梗死区测定,免疫组织化学检测缺血心肌中的VEGF蛋白表达,缺血坏死心肌区域毛细血管记数.结果 第一组大鼠心肌缺血治疗效果较第二、第三组效果显著,第一组中性粒细胞浸润以及心肌梗死区域均明显低于其他各组,VEGF蛋白表达以及毛细血管记数明显高于其他三组.结论 采用超声触发破坏含靶基因及抗体的微泡造影剂的方式,可明显对抗心肌再损伤,促进缺血心肌的新生血管再生,改善心肌缺血,且两者协同作用比单独作用效果更佳.