采用PCR检测淋巴结细胞IgH和TCRγ基因重排对淋巴增殖病的诊断意义

采用PCR体外基因扩增技术研究10例活检淋巴结细胞IgH和TCRγ基因重排,并与组织病理和免疫表型分析进行了对比研究。结果表明:6例病理诊断为非何杰金淋巴瘤(NHL)者中,4例发生相应的IgH或TCR_γ基因克隆性重排,与免疫表型分析一致,另2例同时发生了IgH和TCR_γ基因双重重排。2例病理诊断为坏死性淋巴结炎者,免疫表型分析起源于B细胞,均检测到IgH基因克隆性重排,证明系克隆性恶性B淋巴细胞增殖。表明用PCR检测IgH和TCR_γ基因重排,对恶性淋巴细胞增殖病诊断的敏感性和特异性高于组织病理学和免疫表型分析,具有重要临床应用价值。     

非霍奇金淋巴瘤与基因重排

研究非霍奇金淋巴瘤与基因重排的关系,用PCR技术检测免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体γ基因(TCRγ)的克隆性重排。结果:①211例非霍奇金淋巴瘤患者中,IgH阳性108例,TCRγ阳性45例,双阳性12例,阴性46例;②系统观察10例患者,发现临床完全缓解时仍有5/10患者呈克隆性基因重排。结论提示,基因克隆性重排的PCR分析在非霍奇金淋巴瘤的早期诊断及评估治疗有效性方面是有用的。     

血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排在非霍奇金淋巴瘤患者微小残留病中的应用及临床意义

目的检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排,并探讨其在监测微小残留病变(MRD)中的临床意义。方法提取63例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法检测IgH(VH FR3-JH)和TCRγ(Vγ-Jγ)克隆性基因重排,与病理组织学检查进行比较。并随访患者以监测和检测MRD。结果 63例中有49例[30例B细胞NHL(B-NHL)和19例T细胞NHL(T-NHL)]初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功。30例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性27例(90%),19例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性14例(74%);其病理活检标本基因重排结果分别为87%和74%(P0.05)。另14例(9例B-NHL,5例T-NHL)临床缓解患者中,仅1例(B-NHL)提取出血浆游离DNA并检测到IgH基因单克隆重排。随访治疗缓解的患者共56例,其中24例患者血浆游离DNA基因重排持续阴性,2年存活率达83%;27例患者血浆游离DNA基因重排缓解时呈阴性随后转阳,5例患者缓解后始终能检测到血浆游离DNA基因重排,其2年存活率分别为26%和20%(P0.05)。结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便,与病理活检标本检测具有相同的临床意义。在MRD的监测中,利用血浆游离DNA检测单克隆性重排具有一定的早期预测复发的作用。     

非霍奇金淋巴瘤患者血浆游离DNA IgH和TCRγ基因重排的检测及临床意义

目的 检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者外周血血浆游离DNA免疫球蛋白重链(IgH)基因和T细胞受体γ(TCRγ)基因克隆性重排并探讨其临床意义.方法 提取74例NHL患者血浆游离DNA并以Globin基因确定其存在,通过PCR方法 检测IgH(FR3A/VLJH)和TCRγ(TVG/TJX)克隆性基因重排,并分别与外周血单个核细胞DNA、病理组织学检查进行比较.结果 74例患者中有58例(35例B-NHL和23例T-NHL)初诊、难治或复发的患者血浆游离DNA提取成功,另16例临床缓解患者未提取出血浆游离DNA.35例确诊的B-NHL患者中IgH基因单克隆重排阳性31例(88.6%),无一例出现TCRγ基因单克隆重排,23例确诊的T-NHL患者中TCRγ基因单克隆重排阳性8例(34.8%),其中2例同时出现IgH基因单克隆重排.在50例同时获得病理活检标本基因重排结果 的病例中,30例B-NHL患者血浆DNA IgH基因重排阳性26例(86.7%),病理活检标本阳性24例(80.0%)(P＞0.05);20例T-NHL患者血浆DNA TCRγ基因重排阳性7例(35%),病理活检标本阳性6例(30%)(P＞0.05).结论 NHL患者血浆中可以检测出肿瘤源性的血浆游离DNA;NHL患者血浆游离DNA IgH、TCRγ基因重排的检测简单、方便、相对无创,与病理活检标本的检测具有相同的临床意义.     

抗原受体基因重排克隆性检测在淋巴瘤诊断中的应用

本研究旨在探讨抗原受体基因重排克隆性检测在淋巴瘤诊断中的意义。收集分析了31例淋巴瘤组织,石蜡包埋切片,HE染色后观察形态,免疫组织化学分析免疫表型。采用BIOMED-2标准化试剂盒检测抗原受体基因重排克隆性。结果表明,31例病例中形态学及免疫组织化学分析疑似T细胞淋巴瘤12例,T细胞反应性增生1例,B细胞淋巴瘤16例,B细胞反应性增生2例。基因重排克隆性检测免疫球蛋白(Ig)阳性率94.44%(17/18),T细胞抗原受体(TCR)阳性率92.31%(12/13),2例阴性。最终12例确诊为T细胞淋巴瘤,B细胞淋巴瘤17例,反应性增生2例,阳性检出率为93%。结论:抗原受体重排基因克隆性分析是诊断淋巴瘤的一种有效辅助手段。     

IgH基因克隆性重排检测在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的建立B-NHL临床诊断中IgH基因克隆性重排检测基本方法.方法应用PCR方法,采用IgH FR3A引物,检测了7例B-NHL及4例反应性增生的淋巴结石蜡样本中IgH基因重排情况.结果黏膜相关型边缘区B细胞淋巴瘤（MALT）3例中有2例（2/3）,弥漫大B细胞淋巴瘤2例中2例（2/2）,滤泡淋巴瘤1例中0例（0/1）,套细胞淋巴瘤1例中1例（1/1）检测到IgH基因的克隆性重排.总检测率为5/7（71%）,4例淋巴结反应性增生病例病例均为IgH基因的多克隆性重排.结论PCR-FR3A在鉴别淋巴组织肿瘤性或反应性增生和最终确诊B-NHL上是一项有效的辅助方法.     

BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P0.001;75.8%vs 16.1%(P0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。     

BIOMED-2标准化的IG/TCR基因重排克隆性分析系统及其应用研究

目的 探讨BIOMED-2标准化的IG/TCR基因重排克隆性分析系统在疑难淋巴组织增牛性病变中的应用.方法 对67例难以从形态上区分良、恶性的淋巴组织增生性病变,采用BIOMED-2系统引物,提取标本中的DNA,进行抗原受体分子PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行IG/TCR基因重排的克隆性分析.结果 67例淋巴组织增生性病变中,33例进行了IG和TCR克隆性分析,19例进行了IG和15例进行了TCR克隆性分析.共有25例检测到克隆性重排,从而确诊为淋巴瘤,其中IG克隆性重排有15例为B细胞性淋巴瘤;TCR克隆性重排有8例为T细胞件淋巴瘤;同时存在IG和TCR克隆性苇排2例,为复合性T细胞和B细胞性淋巴瘤;其余42例旱多克隆性,为淋巴组织反应性增生.结论 BIOMED-2系统是一种全面优化设计的IG/TCR基因重排克隆性分析系统,是疑难淋巴组织增牛性病变中鉴别淋巴瘤与反应性增生的客观性手段.     

非霍奇金淋巴瘤bcl-2／IgH基因重排及微小残留病变的检测

探索bcl-2基因重排在非霍奇金淋巴瘤(NHL)的发生及演变中的作用,以bcl-2/IgH重排为克隆标志,建立敏感的检测淋巴瘤微小残留病变的方法。用多聚酶链反应(PCR)检测bcl-2/IgH基因重排,用系列稀释试验检测该方法的灵敏度。经检测9种恶性淋巴瘤细胞系中Su-DHL-4和Su-DHL-6有bcl-2/IgH基因重排,用系列稀释试验检测该方法的灵敏度为1:10~5。29例NHL石蜡包埋的组织标本中,共检出6例有bcl-2基因重排,其中滤泡型NHL(F-NHL)4例(36.4％),弥漫型NHL(D-NHL)2例(18.2％),全部在B细胞性NHL中检出。16例F-NHL患者中,4例外周血和骨髓中同时检出bcl-2(MBR)/IgH基因重排,化疗达CR后依然存在。结论提示,bcl-2基因重排主要与低度恶性的B细胞性淋巴瘤有关,重排方式以bcl-2(MBR)/IgH为主。bcl-2基因重排的检测为对滤泡性淋巴瘤微小残留病变的检测提供了一个快速、敏感、特异的方法,对该疾病的分期、疗效和预后的评估有一定的临床价值。     

BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基因重排在淋巴增殖性疾病诊断中的应用

目的 建立敏感而有效的检测免疫球蛋白(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排的方法,并探讨在淋巴增殖性疾病诊断和鉴别中的作用.方法 采用BIOMED-2多重聚合酶链反应,检测来自54例淋巴增殖性疾病患者的58份淋巴组织标本,分析抗原受体基凶重排状况及其克隆来源.结果 在88.0%(25份标本中22份)B细胞淋巴瘤/白血病和53.3%(15份标本中8份)T细胞淋巴瘤中检出Ig/TCR呈单克隆重排;在17例淋巴组织非恶性增殖患者的病理活检标本中,14例(82.4%)呈多克隆重排;在合格的57份标本中有44份(77.2%)的结果与最终诊断相符.联合检测Igλ和TCRδ并未提高Ig/TCR单克隆重排的检出率,但可能有助于Igλ和TCRδ+淋巴瘤的诊断.结论 对于分析淋巴增殖性疾病,尤其是不典型病例的克隆来源状况,BIOMED-2多重聚合酶链反应检测抗原受体基凶重排是迅速、敏感而可靠的方法.     

The clinical significance of Ig heavy chain and TCRgamma gene rearrangement detected in free DNA in plasma in patients with non-Hodgkin lymphoma

OBJECTIVE: To evaluate the clinical significance of IgH and TCRgamma gene rearrangement in plasma free DNA in patients with non-Hodgkin Lymphoma (NHL). METHODS: Plasma free DNA in 74 patients with NHL were extracted and identified by Globin gene. IgH (FR3A/VLJH), TCRgamma (TVG/TJX) clonal rearrangements were amplified by PCR and compared with results of mononuclear cell DNA and pathological biopsy sample DNA. RESULTS: Plasma free DNAs were successfully obtained from 58 cases (35 B-NHL and 23 T-NHL) of newly diagnostic, refractory and relapsed NHL out of total 74 patients (78.4%), but not found in the rest 16 patients in remission. Of 35 B-NHL cases, 31 showed IgH rearrangement (88.6%), and none with TCRgamma rearrangement; of 23 T-NHL cases, 8 showed TCRgamma rearrangement (34.8%), and 2 with IgH gene rearrangement synchronously. In comparation with the results of IgH and TCRgamma gene rearrangement in biopsy samples in 30 B-NHL cases, 26 cases in plasma free DNA (86.7%) and 24 in biopsy samples (80%) were positive (P > 0.05). In 20 T-NHL patients, 7 cases in plasma cell-free DNA (35%) and 6 cases in biopsy samples (30%) were positive (P >0.05). CONCLUSIONS: Tumor-derived DNA could be detected in plasma from underlying cancer patients. For NHL patients, detecting IgH and TCRgamma gene rearrangement in plasma free DNA has the same clinical significance as in biopsy samples.     

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测

本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义。分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化。结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05)。所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05)。然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性。结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高。     

IgH基因重排PCR分析在淋巴组织细针穿刺中的辅助诊断价值

目的 探讨Ign基因重排检测在细针穿刺诊断淋巴组织病变中的价值.方法 收集淋巴组织细针穿刺病例159例,应用半巢式PCR检测IgH基因重排.将基因重排检测结果与细胞学诊断及组织学随访结果进行比较.结果 穿刺标本中,IgH基因重排检测B-NHL阳性率为72.22%,RH阳性率仅为3.92%.本法敏感性为72.22%,特异性达到96.08%.结论 IgH基因重排检测对辅助淋巴组织细针穿刺标本的良、恶性判断具有一定价值,并且单克隆性结果更有意义.但在淋巴瘤和转移性非淋巴细胞恶性肿瘤的鉴别上不建议应用.     

Enhanced sensitivity with a novel TCRgamma PCR assay for clonality studies in 569 formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) cases.

BACKGROUND: Clonal rearrangement of genes encoding the immunoglobulins (Ig) and T-cell antigen receptors (TCR) are considered to be useful markers for the diagnosis of lymphoma and for determining the clonal origins of B- and T-cell populations in lymphoid neoplasms. METHODS AND RESULTS: Polymerase chain reaction-based clonality assays for TCRgamma, TCRbeta, and immunoglobulin (Ig) heavy chain (IgH) gene rearrangements were evaluated for diagnostic sensitivity and specificity in 569 formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE) tissues. Combined TCRbeta and TCRgamma assays enhanced the routine detection of TCR clonality to 90% of all peripheral T-cell lymphoma (PTCL) cases. IgH clonality was detected in 59% of 241 peripheral B-cell lymphoma (BCL) cases and 6% of 169 PTCL cases. Of 452 lymphomas, 5% could not be classified phenotypically as B or T lineage after immunohistochemical and clonality studies. Of all BCL cases analyzed, 24% had detectable TCRbeta and/or TCRgamma clonality. Of these BCL with biclonal results, 47% were extranodal lymphomas from skin and various tissues. CONCLUSIONS: Clonality assays were useful for distinguishing reactive or benign lymph nodes from neoplastic lymphoid infiltrates in most cases. The inclusion of TCRb and TCRg assays in the assessment of lymphomas results in a significant increase in the sensitivity of clonality detection, but is of limited utility in assessing the T- or B-cell phenotype of the tumor.     

53例非霍奇金淋巴瘤患者临床及实验资料分析

目的 分析多种因素对恶性淋巴瘤（ＭＬ）预后的影响,并探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排在协助Ｔ、Ｂ分型的临床意义。方法 通过ＳＡＢＣ法进行免疫分型、ＰＣＲ方法检测ＩｇＨ（ＦＲ２Ａ,３Ａ）和ＴＣＲ（β,γ）基因重排。结果 非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）发病年龄分布呈递增趋势,危险比率每年剃守１．０３９＾ｎ;Ｂ－ＮＨＬ发病率为６６．７％,Ｔ－ＮＨＬ为３１．１     

非霍奇金淋巴瘤患者免疫球蛋白及T细胞受体基因重排研究

目的 研究非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓或外周血免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因单克隆重排特点及其临床意义.方法 以BIOMED-2引物系统及多重PCR方法对139例NHL患者骨髓或外周血标本进行Ig及TCR基因重排检测.结果 在B系NHL(B-NHL)中,82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中有70例(85.4％)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH、IgK、IgL单克隆重排阳性率分别为46.3％(38例)、62.2％(51例)和1.2％(1例).其他类型的B-NHL患者有39.4％(33例中有13例)检出Ig基因单克隆重排,其中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为33.3％(11例)和39.4％(13例),未检测到IgL基因单克隆重排.T系NHL(T-NHL)患者中有50.0％(24例中有12例)检出TCR基因单克隆重排,其中TCRB和TCRG单克隆重排阳性率分别为8.3％(2例)和45.8％(11例),TCRB和TCRG双重基因重排阳性率为4.2％(1例),未检测到TCRD单克隆重排.11例早期(Ann Arbor Ⅰ、Ⅱ期)与46例晚期(Ⅲ、Ⅳ期)患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为36.4％和45.6％;10例惰性患者和47例侵袭性患者的Ig/TCR基因单克隆重排阳性率分别为40.0％和44.7％,差异均无统计学意义(P值均＞0.05).除外CLL的57例NHL患者骨髓涂片检测骨髓侵犯阳性率为12.3％,明显低于骨髓基因重排检测阳性率(43.9％),两者差异有统计学意义(P＜0.05).敏感性试验表明多重PCR检测恶性克隆的敏感性为3.12％～6.25％.结论 NHL的临床分期和恶性程度不同,其Ig/TCR基因单克隆重排阳性率有差异,但未能证实其相关性.联合应用BIOMED-2多重引物可提高PCR检测骨髓和(或)外周血Ig/TCR基因单克隆重排的敏感性.多重PCR对NHL患者骨髓侵犯检测的敏感性优于骨髓涂片检查,有助于早期发现骨髓侵犯及预防复发.     

非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B－NHL）和T细胞性非霍奇金淋巴瘤（T－NHL）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况，利用RT－PCR分别扩增4例B－NHL和2例T－NHL病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3，了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，以了解T细胞克隆性。结果显示，6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达6－12个Vβ亚家族，全部病人均选择了表达Vβ，Vβ8，Vβ13和Vβ19，5例病人表达Vβ2和Vβ16，而全部病人均未能检测到Vβ4－6，Vβ10－12，Vβ15，Vβ17－18，Vβ20，Vβ22－23。基因扫描发现2例B－NHL和1例T－NHL病人的1－3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示，B－NHL和T－NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点，部分病人存在与肿瘤细胞抗原相关的克隆性增殖的T细胞。