MGr1抗体筛选文库获得胃癌耐药相关的新基因片段

目的制备胃癌多药耐药相关性单克隆抗体(mAb),并以该抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库,以获得肿瘤耐药相关的新基因片段.方法采用杂交瘤技术,以胃癌耐药细胞株SGC7901/ VCR为免疫原制备胃癌多药耐药相关性,mAbMGr1,并以MGr1作为探针对肿瘤耐药细胞表位文库反复进行筛选;对稳定阳性重组子所携带的cDNA片段进行正反向测序,并将测序结果输入GeneBank进行同源性分析;原位杂交与Northern blot检测阳性克隆在不同组织细胞中的表达.结果经过21次融合获得了26株培养上清能与SGC7901/ VCR结合的杂交瘤克隆,经免疫组化和单克隆抗体逆转耐药实验发现其中一株mAb在SGC7901/ VCR膜表面及胞内的表达显著高于其相应的药物敏感细胞SGC7901,并能部分逆转SGC7901/ VCR对ADR和5-FU的耐药性. Western blot表明该mAb对应的抗原Mr 800 000～110 000,与Pgp和MRP不同,该株mAb被命名为MGr1. 以MGr1筛选文库,获得了5个能与MGr1抗体结合的携带阳性重组子的菌落,经反复筛选后,证实有一个稳定的阳性克隆;正反向测序结果表明该阳性cDNA片段长度为310 bp,GeneBank检索显示该片段无任何同源性;原位杂交表明该基因在肝、食管、胃、大肠的正常组织均未见表达,Northern blot证实该基因在胃癌细胞SGC7901,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR,食管癌细胞EC109,肝癌细胞HCC7402中均有表达,但在SGC7901/ VCR中的表达量显著高于其他细胞.结论成功地制备了胃癌耐药相关性mAbMGr1. 以MGr1抗体筛选肿瘤耐药细胞表位文库获得了一个与胃癌耐药相关的新基因片段.     

转化生长因子β1与胃癌细胞BAX表达的关系

目的研究转化生长因子(TGF)β1对胃癌细胞原癌蛋白BAX表达的影响.方法TGF-β1作用于人胃癌细胞系SGC-7901,48h后收集细胞爬片,用SABC免疫组化法检测BAX在胃癌细胞中的表达并作图像分析以获得量化指标.结果胃癌细胞中BAX的表达在TGF-β1实验组较对照组增加,定量光密度值为实验组120.771±0.306,对照组110.346±0.178,两者有显著差异(P＜0.05).结论原癌蛋白BAX在TGF-β1抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的过程中起一定作用.     

药物诱导细胞凋亡与胃癌治疗

1细胞凋亡与胃肿瘤治疗 细胞凋亡(apoptosis)是细胞发育代谢,维持正常功能过程中的一种生理现象,是细胞衰老、死亡的主要形式之一.它与病理情况下的细胞坏死不同,典型的细胞凋亡形态学改变是:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成.胃细胞学检查证明,正常的胃粘膜存在细胞凋亡,从腺体的底部到表面,都能看到少量的凋亡小体.细胞分裂的周期中决定细胞生长速度和凋亡的关键是G1期[1].近年来,发现胃癌中不仅存在细胞过度增生,同时存在细胞的凋亡异常[2],细胞凋亡异常在肿瘤发生发展过程中具有重要的病理生理意义[2,3].     

金属蛋白酶抑制剂TIMP-2基因转染对胃癌细胞体内外生长侵袭与细胞外基质的相关性

目的探讨金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ２）基因转染后胃癌细胞的体内外侵袭能力的改变及胶原与胶原酶的变化规律．方法将人全长ＴＩＭＰ２ｃＤＮＡ基因构建于改构的逆转录病毒载体ｐＬＭＴ，经基因转染法导入人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，Ｇ４１８筛选获阳性细胞．利用裸鼠肾包膜下移植模型，采用免疫组化和原位杂交方法，观察肿瘤发展过程中的不同时期ＴＩＭＰｓ／ＭＭＰｓ（基质金属蛋白酶）ｍＲＮＡ，Ⅳ型胶原表达的情况．结果随着肿瘤移植后时间的延长，瘤细胞侵袭基底膜处Ⅳ型胶原缺失，瘤巢周围ＭＭＰｓ含量丰富．通过体外实验，观察到ＳＧＣ７９０１Ｔ２细胞ＴＩＭＰ２ｍＲＮＡ及蛋白活性均高于母系ＳＧＣ７９０１细胞，ＴＩＭＰ２可抑制基质金属蛋白酶的活性，减弱肿瘤细胞的侵袭体内外移动速度．结论ＭＭＰｓ的高表达是肿瘤细胞侵袭的关键因素，而ＴＩＭＰ２基因是恶性肿瘤侵袭和转移的负调控因子．     

顺铂诱导人胃癌SGC-7901细胞

目的探讨顺铂对胃癌（ＳＧＣ７９０１）细胞凋亡的诱导作用，以揭示顺铂治疗胃癌的作用机制．方法选用不同剂量顺铂与人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１共同孵育不同时间后，应用光镜、电镜进行细胞形态学观察；细胞ＤＮＡ经特异性荧光染色后，用流式细胞仪分析细胞周期变化．结果细胞经顺铂处理后浓缩、深染、致密的染色质沿核膜下凝集、有凋亡小体形成．细胞周期分析Ｇ１期峰前出现典型的细胞凋亡峰，以２５ｍｇ／Ｌ顺铂作用２４ｈ，５０ｍｇ／Ｌ作用１６ｈ为例，定量分析凋亡细胞发生率分别为９３％和１４９％．结论顺铂可通过诱导人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１发生细胞凋亡达到消灭肿瘤细胞的目的．     

促胃液素及其受体拮抗剂丙谷胺对人胃癌细胞系生长的影响

目的观察和分析五肽促胃液素ＰＧ及其受体拮抗剂丙谷胺ＰＧＭ对人胃癌细胞系ＭＧＣ生长的影响,为临床应用促胃液素受体拮抗剂协助治疗胃癌提供依据．方法选用５ｍｇ／Ｌ,１０ｍｇ／Ｌ,１５ｍｇ／Ｌ,２０ｍｇ／Ｌ４种浓度的ＰＧ和３０ｍｇ／Ｌ的ＰＧＭ分别作用于体外培养的浓度为２５×１０８／Ｌ的ＭＧＣ,分别培养２４,４８,７２ｈ,于酶标仪上选用波长５４０ｎｍ测定吸光值Ａ,并对数据进行比较分析．结果４种浓度的ＰＧ作用于ＭＧＣ,ＭＧＣ连续３ｄ的生长状态与对照组无明显差异,而ＭＧＣ在ＰＧＭ作用下,其连续３ｄ的平均Ａ值分别为００２９,００４６和００８４,而未被ＰＧＭ作用的ＭＧＣ的平均Ａ值分别是０１０１,０１１５和０１８２,ＭＧＣ在ＰＧＭ作用下生长明显低于对照组（Ｐ＜００５）．结论外源性的ＰＧ对ＭＧＣ无营养促进作用,而ＰＧＭ能抑制ＭＧＣ的生长     

胃癌组织中P53及EGFR基因产物的表达

目的探索P53及EGFR基因产物表达与胃癌的关系及其相互关系．方法应用免疫组化技术对40例胃癌标本及对照组中的P53及EGFR基因产物的表达进行分析．结果P53及EGFR基因产物在胃良性病变中均为阴性，而在胃癌中的阳性率分别为52．5％和57．5％．p53基因及EGFR基因产物在高分化腺癌中的表达高于低分化癌（P＜0．05和P＜0．05）；在深度浸润性癌中高于浅表浸润性癌（P＜0．01和P＜0．001）；在伴转移的胃癌中高于无转移者（P＜0．01和P＜0．05）．P53及EGFR基因产物在胃癌中的表达高度相关（r＝0．7482）．结论P53及EGFR基因产物的表达是胃粘膜上皮恶变标志之一，p53基因突变与EGFR基因激活高度同步．     

bcl-2反义寡核苷酸联合三氧化二砷对膀胱癌细胞生长的抑制作用

目的观察bcl-2反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）与三氧化二砷（As2O3）对膀胱癌细胞生长的抑制作用，比较联合或单独用药的抑制效果。方法人工合成包含bcl-2翻译起始位点的ASODN及无义核酸（NSODN），以质脂体（Lipofectamine）作为载体转染T-24膀胱癌细胞株。分为对照组（加PBS）、反义组（ASODN 1μmoL/L）、无义组（NSODN 1μmoL/L）、As2O3组（2μmoL／L）、As2O3＋反义组（联合用药组：As2O3 1μmol／L，ASODN0．5μmol／L）。采用肿瘤细胞生长曲线、四氮唑蓝（MTT）实验和集落形成实验，观察药物对肿瘤细胞生长的抑制作用，流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果从细胞生长曲线看出，与对照组相比，联合用药组肿瘤细胞数减少了62．09％，反义组减少了31．04％，As2O3组减少了39．08％，无义组减少了21．84％。MTT实验，肿瘤细胞抑制率联合用药组为（86．11±7．35）％，As2O3组为（67．21±8．99）％，反义组为（50．23±5.46）％，无义组为（8．22±0．33）％，组间比较差异有统计学意义（F=180．2，P〈0．01）。半数抑制浓度（IC50）联合用药组为（0．98±0．12）μmol／L，As2O3组为（1．53±0．32）μmol／L。反义组的为（1．96±0．22）μmol／L，无义组为（4．33±0．33）μmol／L，组间比较差异有统计学意义（F=354.0，P〈0．01）。肿瘤细胞集落生存率联合用药组为53．76％，反义组为76．32％，As2O3组为75．25％，无义组为90．33％。肿瘤细胞凋亡率联合用药组为（22．66±1．66）％，组间比较均差异有统计学意义（F=232．15，P〈0．01）。结论Bcl-2反义寡核苷酸与As2O3联合应用可明显提高对膀胱癌细胞生长的抑制作用。     

C-erbB-2癌蛋白与性激素受体在胃癌中的对比研究

ＣｅｒｂＢ２癌蛋白与性激素受体在胃癌中的对比研究孙荣超陈瑛吴光斌江苏省无锡市第一人民医院病理科２１４００２Ｓｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓｓｔｏｍａｃｈｎｅｏｐｌａｓｍｓ／ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅｐｒｏｔｅｉｎｓＣｅ...     

Transduction of Fas gene or Bcl-2 antisense RNA sensitizes cultured drug resistant gastric cancer cells to chemotherapeutic drugs

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍａｊｏｒｍｅｔｈｏｄｓｉｎｔｕｍｏｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ,ｂｕｔｉｔｏｆｔｅｎｄｏｅｓｎｏｔｗｏｒｋｄｕｅｔｏｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（ＭＤＲ）．Ｒｅｃｅｎｔｓｔｕｄｉ...     

干扰素联用药物对胃癌细胞的抑制作用

目的研究不同剂量、不同的用药顺序等配伍方式，探讨干扰素与化疗药物体外联合应用，对人胃癌细胞株的抑制作用．方法以人胃癌细胞株ＦＧＣ８５作为靶细胞，用肿瘤细胞集落形成法进行药敏实验．分析了干扰素α２ｂ（ＩＦＮα２ｂ）与氟脲嘧啶、顺铂联合应用时，不同的配伍方式对人胃癌细胞株增殖的抑制作用．实验分组为：①化疗药物；②ＩＦＮα２ｂ；③化疗药物和ＩＦＮα２ｂ同时作用；④化疗药物继以ＩＦＮα２ｂ；⑤ＩＦＮα２ｂ继以化疗药物．结果ＩＦＮα２ｂ与氟脲嘧啶或顺铂联合应用对ＦＧＣ８５细胞增殖的抑制作用明显强于各单独应用，各组抑制率之间均有显著差异（Ｐ＜００１）；ＩＦＮα２ｂ降低氟脲嘧啶、顺铂的ＩＣ５０，并且有显著差异（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）；加药顺序不同，抑制效果亦不同，以化疗药物继以ＩＦＮα２ｂ组最佳，ＩＦＮα２ｂ继以药物组最差，二者间有显著差异（Ｐ＜００１）．结论ＩＦＮα２ｂ与氟脲嘧啶、顺铂联合应用，可提高药物的抑瘤作用．     

Stable transfection of extrinsic Smac gene enhances apoptosis-inducing effects of chemotherapeutic drugs on gastric cancer cells

AIM: To explore the feasibility of enhancing apoptosis-inducing effects of chemotherapeutic drugs on human gastric cancer cells by stable transfection of extrinsic Smac gene. METHODS: After Smac gene was transferred into gastric cancer cell line MKN-45, subclone cells were obtained by persistent G_(418) selection. Cellular Smac gene expression was determined by RT-PCR and Western blotting. After treatment with mitomycin (MMC) as an apoptotic inducer, in vitro cell growth activities were investigated by trypan blue-staining method and MTT colorimetry. Cell apoptosis and its rates were determined by electronic microscopy, annexin V-FTTC and propidium iodide staining flow cytometry. Cellular caspase-3 protein expression and its activities were assayed by Western blotting and colorimetry. RESULTS: When compared with MKN-45 cells, the selected subclone cell line MKN-45/Smac had significantly higher Smac mRNA (3.12±0.21 vs 0.82±0.14, t=7.52, P＜0.01) and protein levels (4.02±0.24 vs0.98±0.11, t=8.32, P＜0.01). After treatment with 10 μg/mL MMC for 6-24 h, growth inhibition rate of MKN-45/Smac (15.8±1.2-54.8±2.9%) was significantly higher than that of MKN-45 (5.8±0.4-24.0±1.5%, t=6.42, P＜0.01). Partial MKN-45/Smac cancer cells presented characteristic morphological changes of apoptosis under the electronic microscope with an apoptosis rate of 36.4±2.1%, which was significantly higher than that of MKN-45 (15.2±0.8%, t=9.25, P＜0.01). Compared with MKN-45, caspase-3 expression levels in MKN-45/Smac were improved significantly (3.39±0.42 vs0.96±0.14, t=8.63, P＜0.01), while its activities were 3.25 times as many as those of MKN-45 (0.364±0.010 vs0.112±0.007, t=6.34, P＜0.01). CONCLUSION: Stable transfection of extrinsic Smac gene and its over-expression in gastric cancer cell line can significantly enhance cellular caspase-3 expression and activities, ameliorate apoptosis-inducing effects of mitomycin C on cancer cells, which is a novel strategy to improve chemotherapeutic effects on gastric cancer.     

反义Survivin核酸诱导凋亡及逆转胃癌耐药机制的实验研究

目的:探讨反义Survivin核酸(anti-pcDNA3-svv)对胃癌细胞系SGC7901的凋亡诱导、对泰索帝的化疗增敏作用及对化疗耐药的逆转作用.方法:采用脂质体转染法转染胃癌细胞系SGC7901,并筛选阳性克隆,以Westernblot检测Survivin蛋白的表达,RT-PCR检测MDR-1mRNA的表达,用透射电镜及TUNEL法观察并检测转染后SGC7901的凋亡变化,采用MTT法检测转染细胞对泰索帝的敏感性.结果:转染anti-pcDNA3-svv的SGC7901细胞系(SGC7901-SVVanti)其Survivin蛋白比未转染者明显降低,仅为其29.9%(P<0.01);透射电镜下可见转染组细胞呈凋亡晚期变化,TUNEL显示转染组与未转染组AI分别为0.241和0.083(P<0.01);转染组MDR-1mRNA较未转染组明显降低,转染组与未转染组MDR指数分别为:0.196±0.013和3.126±0.019(P<0.01);转染组对泰索帝的IC50值为16.7±1.98μg/L,而未转染组为55.7±1.89μg/L,差异具有显著的统计学意义(P<0.01).结论:反义Survivin核酸可诱导SGC7901细胞凋亡,增强泰索帝化疗敏感性,逆转耐药.     

白血病细胞p53和bcl-2表达与化疗药物诱导凋亡的关系

目的　探索p5 3和bcl 2表达及化疗药物体外诱导白血病细胞凋亡与患者化疗疗效的关系。方法　用免疫组化法测定 42例急性白血病患者骨髓细胞p5 3和bcl 2表达水平 ;用TdT介导的脱氧核苷酸切口和末端标记法 (Tunel法 )、Wright Giemsa染色及超微结构观察等方法检测化疗药物诱导的白血病细胞凋亡。结果　 42例急性白血病患者p5 3和bcl 2总体表达水平显著高于对照组。2 7例随访组患者完全缓解 (CR) 16例 ,未缓解 (NR) 11例。CR者表现以p5 3和bcl 2共同阴性及化疗诱导高凋亡为主 ,NR者以p5 3和bcl 2共同阳性及化疗诱导低凋亡占优势。形态学观察可见典型细胞凋亡特征。结论　检测急性白血病患者p5 3和bcl 2表达水平及体外化疗药物诱导白血病细胞凋亡的敏感性有助于预测患者的化疗效果。