牙齿萌出过程中 RANKL mRNA 的表达与破骨细胞的关系

目的:探讨核因子κB受体活化剂配体 RANKL 在大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方组织中 mRNA 的表达及破骨细胞的分化情况.方法:运用原位杂交法检测大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方组织中 RANKL mRNA 的表达;TRAP 染色观察破骨细胞分化情况.结果:出生1、3、5、7 d大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方牙囊成纤维细胞、成釉细胞 RANKL mRNA的阳性表达强于对照组牙龈成纤维细胞(p<0.01).大鼠下颌第一磨牙牙胚冠方出生后1 d破骨细胞多为单核,3 d时多核破骨细胞增多.结论:RANKL mRNA 在大鼠出生后1、3、5、7 d下颌第一磨牙牙囊成纤维细胞、成釉细胞中有表达,可能通过促进破骨细胞的分化及成熟参与牙齿的萌出.     

小鼠牙胚发育过程中collagenⅠ/Ⅲ的表达分布

目的:探讨collagenⅠ、Ⅲ在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时间和空间分布特点,及两者在牙齿发育矿化中的作用。方法:用免疫组化方法检测小鼠牙胚发育各期collagenⅠ、Ⅲ的表达、分布。结果:collagenⅢ:出生前E13d小鼠牙胚蕾状期:口腔上皮细胞阳性表达( );E14~17d帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达弱阳性;E18~19d和出生后P1d钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性( );出生后P2~10d牙冠发育成熟期:成釉细胞、釉基质、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞、牙髓组织等均表达阳性( );P10~30d牙根发育成熟期:除上述细胞成分外,上皮根鞘、根周及根尖牙槽骨、牙骨质和牙周膜表达强阳性( )。collagenⅠ:在蕾状期无表达;帽状期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞表达阳性;钟状期与分化期:口腔上皮细胞、成釉器星网层细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性;牙冠和牙根发育期:其分布和表达类似于collagenⅢ。结论:鉴于collagenⅠ、Ⅲ的表达和分布,表明它们均参与了牙胚和牙体硬组织的发育形成,但似乎cllagenⅢ的作用比collagenⅠ更为广泛。     

Lumican蛋白多糖在正常SD大鼠牙胚发育中时间和空间的表达

目的:观察SD大鼠牙胚发育过程中Lumican蛋白多糖在时间和空间上的表达。方法:分别取妊娠17.5、19.5 d的胎鼠和出生后1.5、3.5、5.5 d新生鼠的下颌第一磨牙牙胚,采用免疫组化染色的方法观察Lumican蛋白多糖在大鼠牙胚中的定位和表达。结果:正常大鼠牙胚发育过程中,帽状期牙胚中(E17)牙囊、牙板、内、外釉上皮的细胞中Lumican均有较强表达;钟状早期牙胚各细胞中Lumican的表达呈阳性;分泌期成釉细胞、成牙本质细胞中Lumican表达呈阳性,随着发育的进行,成釉细胞和成牙本质细胞中的表达逐渐减弱(P<0.05)。结论:正常大鼠牙胚发育过程中Lumican的表达呈一定的时间和空间分布,随着发育的不同阶段而有所改变。     

P75NGFR在小鼠牙胚发育中的定位分布研究

目的：研究神经生长因子受体P75NGFR在小鼠牙胚发育过程中的定位分布。方法：采用免疫组化方法和图像分析技术观察P75NGFR在小鼠牙胚发育各期的表达与分布。结果：P75NGFR在小鼠牙胚发育各期均有不同程度的表达。胚胎E13d牙胚位于蕾状期：口腔上皮、成釉器上皮细胞阳性表达（＋）；在帽状期及钟状期口腔上皮、成釉器的星网层表达阳性（＋）；在P2～10d牙冠发育成熟期：成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质、牙乳头细胞、牙囊细胞表达阳性（＋）；P10—30d牙根发育期：除上述细胞成分外，上皮根鞘、牙槽骨表达强阳性（＋＋）。结论：P75NGFR参与牙胚及牙体硬组织的发育过程。     

ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达

目的:研究ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空分布。方法:采用免疫组织化学方法和图像分析技术观察ADAM28在小鼠牙胚发育各期的表达分布及差异。结果:ADAM28在牙胚发育各时期均有不同程度的表达。帽状期开始即在口腔上皮及成釉器星网层细胞、基底膜、牙乳头细胞和牙囊细胞表达强阳性,到钟状晚期,成釉细胞、釉基质、上皮根鞘和牙乳头细胞阳性表达;至冠根硬组织发育期,成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘、成牙骨质细胞、牙乳头细胞、牙囊细胞阳性表达。结论:ADAM28作为上皮和间充质间重要的信号分子,参与了从蕾状期到钟状晚期、从基质分泌到硬组织形成的牙冠、牙根形态发生过程,它可能在牙源性间充质细胞的早期形成、增殖与分化启动中发挥重要作用。     

氯离子通道CLC-3在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨CLC-3在BALB/c小鼠下颌第一磨牙牙胚不同发育时期的时空表达。方法:选取E13.5、E15.5、E18.5 d的BALB/c胎鼠和P1、P5 d的BALB/c小鼠,脱颈处死后取其头部,梯度乙醇脱水,石蜡包埋后连续切片,最后对石蜡切片行CLC-3免疫组化染色。结果:当胎鼠牙胚处于蕾状期时,CLC-3在牙胚的牙板上皮中可见表达;当牙胚发育为帽状期时,在牙乳头和牙囊细胞中表达;到钟状期时,CLC-3在牙乳头、牙囊、星网状层细胞和中间层细胞中广泛表达。出生后的小鼠CLC-3在牙乳头、牙囊、成釉细胞、成牙本质细胞、星网状层细胞、中间层细胞中均广泛表达。结论:CLC-3在小鼠牙胚发育的不同时期呈现不同的时空表达。     

牙囊在牙根发育中作用的实验研究

目的 研究牙囊在牙根发育中的作用。方法 8只出生5 d的Balb/c小鼠随机分为含牙囊组和去除牙囊组,取其双侧下颌第一磨牙牙胚分别异位移植到Balb/c成年裸鼠背部肌层中,移植后第7天和第14天分别取出植入的牙胚,常规制片,苏木精-伊红染色,观察牙胚发育情况。另取1只出生5 d的Balb/c小鼠的下颌第一磨牙牙胚作为对照。结果 肉眼观察发现移植后牙胚生长于肌肉浅层,组织相容性好,表面有丰富的毛细血管。组织学观察表明：移植后的两组牙胚牙冠均可部分继续发育并矿化,但含牙囊组牙胚比去除牙囊组发育更快,体积较大,钙化程度较高。虽然两组牙胚上皮根鞘根向延伸均不明显,但含牙囊组牙根有一定程度的发育,牙齿有根向生长的趋势,而去除牙囊组牙齿未见根向生长的趋势。移植后第7天两组牙胚均出现炎症反应,到移植后第14天则均未见明显的炎症。结论 牙囊在牙齿发育特别是牙根的形成中起重要作用,能够引导牙根向正常方向生长并形成牙根。     

过量氟对大鼠切牙骨涎蛋白表达的影响

目的:研究过量氟对牙硬组织发育过程中骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)时空表达的影响,从蛋白水平上探讨氟牙症的发病机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组(饮用蒸馏水)和实验组(100mg/LF-)2组。饲养8周后处死动物,通过免疫组织化学染色观察并比较BSP在对照组与实验组大鼠牙胚上皮中的表达,采用计算机图像分析系统对免疫组化染色阳性结果进行计算机图像分析,采用SASv6.12统计软件对2组图像分析结果进行t检验。结果:对照组,各期成釉细胞排列均匀整齐,细胞形态正常,成熟的成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞中BSP表达为阳性;实验组,大鼠切牙成釉细胞由原有的高柱状变矮,细胞排列成多层,釉基质形成混乱,大鼠牙胚上皮中BSP表达显著低于对照组,P<0.01。结论:氟化物能抑制大鼠牙胚上皮BSP的表达,提示氟可能通过抑制BSP在牙胚发育过程中的表达,从而抑制牙胚上皮细胞(成釉细胞、成牙本质细胞、成牙骨质细胞)的增殖分化及随后的基质合成与分泌,导致氟斑牙的形成。     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

无翅型MMTV整合位点家族成员5A/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2在大鼠牙囊细胞中的表达及其意义

目的 观察在牙齿正常萌出过程中无翅型MMTV整合位点家族成员5A（Wnt5A）/受体酪氨酸激酶样孤儿受体2（Ror2）信号在大鼠体内外牙囊细胞表达的特点,探讨其与成熟破骨细胞形成及牙齿萌出的相关性。方法 分离出生后1~13 d的SD大鼠下颌骨,苏木精-伊红染色观察牙囊及牙槽骨生长发育过程,免疫组织化学法观察在下颌第一磨牙萌出过程中Wnt5A和Ror2在牙囊细胞中的表达。体外培养出生后5~6 d的SD大鼠第一磨牙牙囊细胞,免疫组织化学法观察Wnt5A、Ror2在牙囊细胞中的表达。结果 SD大鼠出生后第2天牙囊开始分化为牙周组织,1~3 d牙槽骨变化不明显,第4天起,破骨细胞数量明显增多。Wnt5A在出生后第1~3天的大鼠牙囊组织内无明显表达,第4天开始出现阳性表达,并持续表达至第13天。Ror2在出生后第1~3天的大鼠牙囊组织表达呈强阳性,而在第4~13天呈弱阳性。结论 Wnt5A、Ror2在牙萌出过程中有特定的时间分布,提示其可能参与牙齿萌出的调控。     

牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：观察牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化，探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期组织标本，采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果：DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞，在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性，在成釉细胞中有一过性表达，即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达，但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论：观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞和成釉细胞的分化及牙本质形成过程。     

Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌第一磨牙胚胎发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌第一磨牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌第一磨牙自牙胚发育起始期至出生后2天不同发育阶段组织的Notch1分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌第一磨牙牙胚发育起始期和蕾状期牙板上皮上方或其包绕的口腔上皮中表达,在牙板上皮中没有表达。自帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中无表达。至牙釉质和牙本质分泌期,Notch1仍在颈环部位的中间层表达。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌第一磨牙发育过程中的牙上皮特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

Notch1蛋白在小鼠下颌切牙发育中的表达

目的探讨Notch1在小鼠下颌切牙牙胚发育过程中的组织学分布。方法制作ICR小鼠下颌切牙不同发育阶段的冰冻组织切片,对小鼠下颌切牙牙胚自牙胚发育起始期至钟状晚期不同发育阶段组织Notch1的分布情况进行免疫组织化学染色。结果 Notch1在小鼠下颌切牙发育蕾状期牙胚的口腔侧上皮中表达,而在和间充质相邻的牙胚上皮中没有表达。从帽状期至钟状期,Notch1在牙胚的中间层表达,而在内釉上皮中没有表达。钟状期的唇侧颈环部位星网状层和部分牙上皮细胞也表达Notch1。此外,Notch1还在牙胚发育不同时期的间充质、牙乳头和早期牙髓中表达。结论 Notch1可能在小鼠下颌切牙发育过程中的牙上皮,特别是内釉上皮的细胞分化,以及牙囊和牙乳头细胞分化及分化完成后的牙髓干细胞的稳定性方面有重要作用。     

Immunohistochemical localization of syndecan-1 in the dental follicle of postnatal mouse teeth

BACKGROUND: Syndecans are cell surface heparan sulfate proteoglycans that modulate the action of growth factors and extracellular matrix components. Syndecan-1 plays important roles during early tooth development, and it is expressed in the dental follicle of fetal tooth germ. However, no studies have followed its expression in the dental follicle during the postnatal period. We hypothesized that syndecan-1 protein expression in the dental follicle may be important for postnatal tooth development, and, thus, examined its expression patterns. METHODS: Syndecan-1 protein expression in the dental follicle of the lower first molar was investigated by immunohistochemistry using embryonic day (E) 18.5 to 21-day-old (d 21) mice. Immunoelectron microscopy was applied to the dental follicle and pulp cells to confirm its membrane localization in mesenchymal cells. RESULTS: Strong syndecan-1 immunostaining was maintained in the dental follicle and the adjacent dental pulp surrounded by the Hertwig's epithelial root sheath (HERS) from d 4 to d 14, but reduced staining was noted at d 21 with the near-completion of tooth eruption. Three dimensionally, syndecan-1-positive areas plugged the apical foramina surrounded by HERS. However, immunostaining was detected constantly in the dental follicle and the dental pulp of the lower incisor at d 21. In addition, membrane localization of syndecan-1 protein was confirmed for the first time in mesenchymal cells, including dental follicle and pulp cells, by immunoelectron microscopy. CONCLUSION: The spatial and temporal expression of syndecan-1 in the dental follicle suggests that this proteoglycan is important for the maintenance of proliferation and/or movement of cells in this region during tooth eruption.     

小鼠牙囊细胞的体外培养及表型特征

目的　建立小鼠牙囊细胞(DFC)的体外分离培养方法,研究牙囊细胞的表型特征。方法　用1%的胰蛋白酶消化分离9 d龄Balb/c小鼠的下颌第一磨牙牙胚的牙囊组织进行体外培养,倒置显微镜下观察细胞的形态,扫描电镜观察细胞的表面形貌,SP免疫组化法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨桥蛋白(OPN)的表达。结果　分离培养的细胞有3种类型:立方形或多角形;长梭形;非常细长的细胞形状。扫描电镜下细胞具有多形性,有大量的线状胞浆突和微绒毛;根据细胞表面有无纤维细丝覆盖,可将细胞分为有纤维细丝、无纤维细丝两个亚群。免疫组化染色显示部分牙囊细胞的ALP、BSP、OPN的表达阳性。结论　牙囊细胞具有多种细胞的表型特征, 有分化为成牙骨质细胞、牙周膜细胞和成骨细胞的潜能。     

The effect of mechanical trauma on the tooth germ of rat molars at various developmental stages: a histopathological study

Abstract— Intrusive trauma was experimentally applied to the tooth germ at different developmental stages in the rat first molar. The tooth germ at the earliest (postnatal day 1, initiating stage of enamel matrix formation) and the latest (postnatal day 10, calcifying stage of preformed enamcl matrix) developmental stages studied showed localized enamel hypoplasia as a direct sequela of trauma. Thc tooth germs in which enamel matrix was rapidly thickening (postnatal days 3, 5, 7) and had not yet started to calcify showed the most intense and extensive injuries to the formation and structural organization of both enamel and dentin. As for indirect effects secondary to trauma, tooth germ dislocation was observed chiefly in tooth germs at the same developmental stages, frequently resulting in ankylosis. The present experimental model may be helpful for clarifying thc histogenesis of traumatic changes in the developing tooth germ.     

巨噬细胞集落刺激因子对体外培养人牙囊细胞破骨细胞分化因子表达的影响

目的：研究巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的人牙囊细胞破骨细胞分化因子（RANKL）mRNA表达的影响。方法：原代培养人牙囊细胞，传至第3代，制备细胞爬片，进行RANKL免疫组化染色；选取生长状态良好的第3-6代人牙囊细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，培养基中分别加入25ng／mL的巨噬细胞集落刺激因子，共同孵育0．5、1、3、6、12h，提取总RNA进行RT-PCR，灰度值半定量分析RANKL mRNA的变化。结果：正常人牙囊细胞RANKL蛋白表达阳性；25ng／mL的巨噬细胞集落刺激因子可升高人牙囊细胞RANKL的表达；共同孵育3h，RANKL表达最高。结论：巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的人牙囊细胞表达RANKL，具有正向调节作用。     

bFGF对体外培养人牙囊细胞VEGF表达的影响

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：选取生长状态良好的人牙囊细胞,与10ng／mlbFGF孵育不同时间后,采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测人牙囊细胞VEGFmRNA表达及上清液中VEGF蛋白分泌变化。结果：bFGF作用1、3、6、12h后人牙囊细胞VEGFmRNA表达均较0h组显著增强（p〈0．01）,其中bFGF作用6h后VEGFmRNA表达最强;细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌量随时间延长逐渐增加,但bFGF处理组VEGF蛋白分泌量高于对照组（p〈0．01）。结论：bFGF能够促进体外培养人牙囊细胞VEGF的表达。