p53腺病毒重组体转染对p53缺失肿瘤细胞辐射敏感性的影响

目的观察p53腺病毒重组体（AdCMV-p53）转染对p53缺失肿瘤细胞辐射敏感性的影响。方法用腺病毒重组体（AdCMV—p53／GFP）转染经0、0．25、0．5、1．0、1．5、2．0Gyγ射线辐射的H1299（nullp53）和PC-3（nullp53）细胞，用流式细胞分析法检测外源性p53表达，用克隆形成法检测肿瘤细胞增殖能力。结果辐射联合AdCMV-p53转染组p53阳性细胞所占比例均明显高于单纯辐射组、单纯AdCMV—p53转染组和辐射联合AdCMV—GFP转染组同种细胞p53阳性率（P〈0．05）；AdCMV—p53转染不仅明显提高肿瘤细胞辐射敏感性，而且与肿瘤细胞组织来源有关。结论p53腺病毒重组体转染对p53基因缺失肿瘤细胞低剂量辐射敏感性的增强作用与肿瘤细胞来源的组织器官和细胞类型有关。     

p53基因功能与肿瘤细胞辐射敏感性及其凋亡效应的研究

目的：探讨^60Coγ射线对不同p53基因功能状态的人淋巴性恶性肿瘤细胞株8226和Raji凋亡相关基因Bcl-x,Bax的作用及其分子机理。方法：分别运用流式细胞仪技术（FACS）、DNA片释放法RT－PCR和MTT法,分析了8226、Raji中Bcl-xL,Bax转录用相对表达与辐照诱导的细胞凋亡率抑制细胞增殖的关系,结果：8226和Raji在照射后Bcl-xL,Bax转录表达均迅速上升,于4－8h达到高峰,而后开始下降,于24－48h恢复至辐照前水平,8226中Bcl-xL转录较Raji持续时间为长;且Bcl-xL/Bax的经率影响靶细胞辐照后的细胞凋亡和抑制细胞增殖。结论：肿瘤细胞株P53基因状态与辐射敏感性相关,两个等位基因突变的细胞株8226比一个等位基因突变的细胞株Raji更具辐射抗性,这种辐射抗性的不同与肿瘤细胞Bcl-xL,Bax的表达及二者比率有关。     

抗癌基因p53与辐射致癌

ｐ５３是一种抗癌基因，可能参与细胞生长的负调控，它的失活与肿瘤发生有关。辐射是一种尚缺乏深入了解的致癌因子，它可以引起肿瘤。现将辐射致癌分子机理尤其是与ｐ５３的关系根据文献报道作一简要综述。     

小鼠乳腺癌辐射敏感细胞SX-9的ku基因突变与辐射敏感性研究

目的　研究辐射敏感小鼠乳腺癌细胞SX 9的ku70、ku80基因型 ,初步探讨ku基因突变对其辐射敏感性的影响。方法　RT PCR克隆并鉴定ku70 /ku80全长基因 ,并对其全长进行全自动测序。脂质体转染正常人全长ku80cDNA至SX 9细胞 ,克隆形成比较转染了正常ku80基因的SX 9与SX 9以及SR 1细胞存活率。结果　SX 9细胞ku70基因正常 ,而其ku80存在基因突变 ,转染了正常人全长ku80cDNA的SX 9细胞能部分重建其对γ射线的存活率。结论　SX 9细胞ku基因发生突变 ,这可能是其DNA损伤修复缺陷并导致对辐射敏感的分子基础     

喉癌放疗敏感性与 p53和Bcl-2基因综合表达的关系

目的 根据喉癌细胞自身生物学特性,探讨Ｂｃｌ－２和Ｐ５３基因综合表达与放射治疗敏感性的相互关系。方法 应用抗Ｂｃｌ－２和Ｐ５３基因蛋白单克隆抗体,采用ＤＡＣＯ ＣＳＡ Ｓｙｓｔｅｍ法染色技术,对两组共７０例喉鳞癌组织标本进行了免疫组织化学染色分析,将Ｂｃｌ－２和Ｐ５３基因表达分子个级别,诮Ｇｒａｍｅｒ修正）列胶系数（Ｃ）进行检验,探讨各自及综合表达强度与喉癌放疗敏感性的基因表达强度与放射敏感性之间     

辐射联合外源性野生型p53基因对不同p53状态的黑色素瘤细胞系的生物学效应

目的研究辐射结合腺病毒（Ad CMV）载体介导的p53基因转导对不同p53状态的人黑色素瘤细胞系基因转移效率、凋亡和辐射敏感性的影响。方法用复制缺陷的重组腺病毒载体（AdCMV-p53）介导入p53基因转导1Gy X射线预照射的黑色素瘤细胞系A375（wt p53）和WM983a（mu p53），RT-PCR检测mRNA水平，流式细胞仪测定细胞周期阻滞及外源性P53蛋白表达情况，Tunel法检测细胞凋亡，克隆形成率测定辐射后细胞存活率。用携带报道基因的复制缺陷重组腺病毒载体AdCMV-GFP作为对照。结果1Gy X射线照射可较高地增加AdCMV-p53对A375和WM983a细胞系的基因转导效率，转导的外源性野生型p53可在两种细胞中高效表达，并诱导细胞周期G1期阻滞；单纯转导p53对A375（wt p53）细胞无明显诱导凋亡和生长抑制效应，但可部分诱导WM983a（mu p53）细胞凋亡；而转导p53基因48h后给予X射线辐射，两种细胞的克隆存活率较其对照组均明显减低，外源性p53基因对WM983a（mu p53）细胞的辐射增敏作用较A375（wt p53）细胞明显。结论外源性野生型p53基因过表达可增加黑色素瘤细胞系A375和WM983a的辐射敏感性，但对WM983a细胞系的辐射增敏作用高于A375细胞系。表明p53是基因治疗黑色素瘤较好的候选基因。     

HT1080R细胞的辐射抗性与细胞周期关系初步研究

目的 研究ＨＴ１０８０Ｒ的辐射抗性及其辐射前后细胞周期分布,探讨其辐射抗性的分子机理。方法 克隆形成比较ＨＴ１０８０与ＨＴ１０８０Ｒ照射后细胞存活率,流式细胞术研究细胞周期分布,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ｅｓｔｅｒｎ杂交测定ｐ５３外显子的基因状态及其表达状况．     

辐射增强启动子调控的p53基因联合照射对肿瘤细胞的作用

目的 研究辐射增强启动子调控的野生型-p53抑癌基因系统联合照射对人肿瘤细胞系HeLa和A549细胞的特异性杀伤作用。方法 构建辐射增强启动子pE6（TATA）-p53,Western blot检测不同射线剂量诱导下人肺腺癌A549细胞系和人宫颈癌HeLa细胞系中P53蛋白的表达水平,筛选出最适的照射剂量;AnnexinV-FITC试剂盒检测肿瘤细胞系早期凋亡率;利用克隆形成实验检测此系统对肿瘤细胞放射敏感性的影响。结果 在HeLa和A549细胞中,P53蛋白表达均受放射线诱导增高,且在6 Gy时辐射诱导活性最高;实验组质粒的细胞早期凋亡率与转染对照组质粒的细胞早期凋亡率相比有明显提高（F=11.018、10.736,P<0.05）。HeLa细胞和A549细胞的放射增敏比（SER）分别为2.56和2.36。结论 辐射增强启动子调控的p53基因系统具有显著的诱导肿瘤细胞凋亡的作用,可以提高肿瘤细胞的辐射敏感性,对肿瘤的治疗提供了新思路。     

食管反流大鼠肿瘤诱发过程中p53基因突变的研究

通过动物实验研究不同反流状态下食管肿瘤诱发过程中 p5 3基因的突变情况。选用SD大鼠进行不同手术 ,制作单纯胃食管反流 (G组 )、单纯十二指肠食管反流 (D组 )、胃十二指肠混合液食管反流 (DG组 )及无反流对照 (C组 )模型 ,于术后 4周开始注射食管致癌剂甲基戊基亚硝胺 (MANA) ,共 15周 ,于术后 2 0、2 6、40周分批取得食管组织 ,进行基因组DNA抽提 ,合成 p5 3基因的第 5、6、7、8外显子的 4对引物 ,进行PCR扩增。扩增产物变性后进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PCR SSCP) ,电泳后凝胶以硝酸银染色。结果显示PCR扩增未见 p5 3基因缺失。 2 0周时D组及DG组各有 1只 (10 % )标本检测出p5 3突变。此后随时间延长各组突变增加 ,40周时D组 (31 6 % )、DG组 (33 3 % )的突变率显著高于C组 (15 4% )和G组 (11 7% ) ,P均 <0 0 5 ,后两者差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。提示十二指肠内容物食管反流可导致食管粘膜上皮p5 3基因的突变率增加 ,这可能是它促进食管肿瘤发生的机制之一。而单纯胃液反流不增加食管的 p5 3基因突变     

p53基因cDNA突变及其蛋白高表达与大肠癌预后关系

１００份大肠癌组织，用ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变；ＰＡｂ１８０１单抗免疫组化检测Ｐ５３基因蛋白搞表达并对大肠癌术对后病人作５年生存随访，比较上述２结果与大肠癌预后的关系，１００例大肠癌中，ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ显示５１例大肠癌Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变，ＰＡｂ１８０１阳性率６２％，Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变和Ｐ５３基因蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ分期无关，Ｐ５３基因ＣＤＮＡ突变与Ｐ５３基因     

PCR-SSCP技术检测辐射诱发的恶转细胞p53突变

目的确定α粒子诱发的恶性转化大鼠气管上皮（ｒａｔｔｒａｃｈｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ，ＲＴＥ）细胞中是否存在ｐ５３基因突变。方法根据大鼠ｐ５３ｃＤＮＡ序列，合成４对引物分别覆盖大鼠ｐ５３基因外显子５，６，７和８，利用聚合酶链反应－单链构象多态方法分析转化细胞中的ｐ５３突变情况。结果在转化细胞，ｐ５３基因外显子８的单链条带与正常细胞相比出现泳动变位，经测序证实为２６５密码子Ｇ→Ｃ突变，使其编码氨基酸由精氨酸→脯氨酸。结论在α粒子诱发的恶性转化ＲＴＥ细胞中存在ｐ５３基因突变，提示ｐ５３基因变异在辐射致癌过程中可能起重要作用     

p16基因转染对胰腺癌细胞生长及辐射敏感性的研究

目的 探索p16基因转染对胰腺癌细胞生长辐射敏感性的作用。方法 将外源野生型p16基因连接到pCDNA3.1^＋载体构建pCDNA3.16＋ -p16重组质粒,利用Lipofectamine^TM介导转染胰腺癌JF305细胞,筛选阳性克隆。照射后,RT-PCR检测p16基因表达,Western blot检测蛋白表达;用MTT法测定细胞生长曲线和肿瘤细胞杀伤率。结果 转染p16基因的JF305细胞有外源p16基因的整合及表达,生长速度明显减少,对辐射的敏感性增强。结论 导入外源野生型p16基因可抑制胰腺癌细胞恶性增殖,提高胰腺癌细胞对辐射的敏感性。     

p53基因与原发性肝癌放疗关系研究进展

近年来随着对肝癌的照射方法和范围的改进,由全肝照射-局部照射-全肝移动放照射-手术定位局部照射和超分割照射等,使肝癌放疗效果明显提高,副作用显著降低。但是单独的放疗在肝癌的治疗中依然存在重要缺陷,联合基因治疗的综合治疗有着良好前景。     

抑癌基因p53与肺癌关系的研究进展

肿瘤抑制基因p53是目前研究最为广泛和系统的抑癌基因之一。野生型p53参与了DNA损伤修复、细胞周期调控、细胞凋亡及抑制血管生成等过程。p53基因的点突变、缺失及灭活在肺癌的发生和进展过程中起着关键性的作用。现综述目前p53基因与肺癌关系的研究进展。     

p53调控的能量代谢对辐射效应的影响

p53基因一直是肿瘤病因学、放射生物学的研究热点,但受其调控的能量代谢在辐射生物效应中的作用还存在许多未知因素.了解p53基因调控的能量代谢对探讨肿瘤放射治疗疗效、辐射损伤、辐射致癌的早期筛选生物指标和分子流行病学调查均有着极其重要的意义.该文概述了此方面的研究进展.     

腺病毒介导p53基因转染增加人胃癌细胞的放射敏感性

目的评价腺病毒介导p53基因(Adp53)转染对人胃癌细胞的凋亡效应和放射增敏作用。方法以重组腺病毒介导p53基因感染4种不同p53状况的人胃癌细胞，用免疫组织化学法和Western blot法检测P53蛋白在胃癌细胞中的表达；用细胞集落形成法检测细胞存活率；用TUNEL法检测细胞凋亡。胃癌细胞感染Adp53后照射4Gy，用流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡；胃癌细胞种植肿瘤内注射Adp53后照射6Gy，以肿瘤相对体积增长曲线观察肿瘤抑制情况。结果1：100效靶比(MOI)Adp53产生细胞高转染率，以及p53基因在4种胃癌细胞中均高表达，并产生G2/M期阻滞、凋亡增加和细胞增殖抑制。如果以凋亡评价放射效应，Adp53转染对4Gy照射4种细胞的凋亡率比值为：W细胞3．0，M细胞3．6，neo细胞2．2，823细胞2．5。体内实验结果显示，Adp53对w细胞肿瘤6Gy照射的抑瘤率比值为1．41，而对M细胞肿瘤为1．91。结论腺病毒介导p53基因转染产生细胞凋亡并提高人胃癌细胞的放射敏感性，这种作用不依赖于细胞内在的p53状况。     

p53基因治疗肿瘤的研究进展

ｐ5 3被称为“基因组卫士” ,在机体组织细胞的生长发育分化等过程中起重要作用。其主要生物学功能是维持细胞基因组的稳定 ,负调节细胞生长 ,诱导细胞凋亡。研究发现人类恶性肿瘤中至少有 5 0 %发生了ｐ5 3基因改变 ,因此以ｐ5 3基因治疗肿瘤的研究发展非常迅速。最近 ,有学者引入介入技术经肿瘤供血动脉直接灌注重组ｐ5 3,为ｐ5 3基因治疗肿瘤开辟了一条新途径。笔者就肿瘤中ｐ5 3基因突变情况以及ｐ5 3基因治疗的研究进展予以综述。一、ｐ5 3基因及其产物的结构和特性ｐ5 3是一种重要的抑癌基因 ,是目前抑癌基因研究中最令人瞩目者。人类…     

重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞的作用及辐射敏感性的影响

目的 探讨重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞的抑制作用及其辐射增敏性。方法 利用四氮唑盐(MTT)比色法分析重组人p53腺病毒注射液、放射治疗以及两者联合应用对人淋巴瘤细胞Raji 和Daudi的抑制作用;通过蛋白质的Western印迹分析法(Western blotting)分析淋巴瘤细胞内P53蛋白的表达;应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测淋巴瘤细胞内p53基因的mRNA表达。结果 MTT结果显示重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞具有一定的抑制作用,但抑制作用不显著,Raji 及Daudi 细胞最大剂量的抑制率分别为27.5%±4.1%和28.1%±1.6%,也未见明显的辐射增敏效应。Western blotting和RT-PCR结果表明,外源性P53蛋白和p53基因的mRNA均有所表达,但未见高效表达和明显的辐射增敏性。结论 重组人p53腺病毒注射液对人淋巴瘤细胞的抑制作用及辐射增敏性不显著。     

p16基因与肿瘤放射敏感性关系的研究进展

放射治疗是肿瘤治疗的主要手段之一,而肿瘤细胞的放射敏感性是决定放疗疗效的关键因素之一,大量的研究表明细胞周期调控是影响细胞辐射敏感性的重要因素之一,p16基因与细胞周期调控有关,人类75％的癌细胞株有p16基因的缺失或突变,其低表达与肿瘤细胞增殖、辐射抵抗密切相关。随着分子生物学技术的发展,对癌基因和抑癌基因研究日益深入,为从基因水平上治疗肿瘤和增加放射敏感性提供了新的希望。现将p16基因其在肿瘤放射敏感性方面的研究进展综述如下。     

p53 p16与进展期NSCLC化疗的关系

目的：探讨p53、p16改变对进展期非小细胞肺癌（NSCLC）化疗疗效的影响。方法：检测一组进展期NSCLCp53、p16蛋白表达，分析其与常规化疗的关系。结果：NSCLC病例126例，Ⅲ期58例，Ⅳ期68例；p53阳性64例（51．0％），p16阴性74例（59．0％）。p53阳性患者化疗有效率为25．0％，p53阴性化疗有效率为57．0％，两者相差显著（p=0．004）。结论：探讨了联合化疗治疗进展期NSCLC与p53表达的关系，对晚期肺癌的综合治疗有一定指导意义。