孕激素对小鼠脾细胞淋球菌感染模型NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响

目的：研究孕激素对小鼠脾细胞淋球菌（Neisseria gonorrhoeae,Ng）感染模型中NLRP3炎性体表达及Th17/Treg分化的影响。方法：体外分离、培养小鼠脾细胞后,分为如下5组：空白对照组、Ng组、Ng+1×10-9 mol/L孕酮组、Ng+1×10-8 mol/L孕酮组、Ng+1×10-7 mol/L孕酮组。培养3 d后收集细胞,采用流式细胞术检测Th17/Treg细胞比例,利用实时荧光定量PCR检测各组细胞NLRP3、Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞NLRP3、Caspase?1p20、RORγt、Foxp3蛋白表达。ELISA法检测脾细胞培养上清中白细胞介素（interleukin,IL）?1β及Th17/Treg相关细胞因子IL?17、转化生长因子（transforming growth facfor,TGF）?β、IL?10水平。结果：脾细胞在淋球菌的刺激下,Th17细胞和Treg细胞比例增多,细胞内NLRP3、Th17/Treg特异性转录因子RORγt、Foxp3 mRNA和蛋白表达水平升高,Caspase?1p20蛋白表达水平升高,细胞培养上清中IL?1β、IL?17、TGF?β、IL?10含量增高（P < 0.01）;加入孕酮预处理后,随着孕酮作用浓度的增高,Th17细胞比例、细胞内NLRP3和RORγt的mRNA和蛋白表达水平、Caspase?1p20蛋白表达水平、细胞培养上清中IL?1β和IL?17含量均明显降低,Treg细胞比例、细胞内Foxp3 mRNA和蛋白表达、细胞培养上清中TGF?β和IL?10含量均明显增高,与Ng组比较差异有统计学意义（P < 0.01）。结论：孕激素可抑制Ng感染诱导的小鼠脾细胞NLRP3表达及Th17细胞分化,促进Ng感染诱导的Treg细胞分化。     

淫羊藿苷对白介素-1β诱导软骨细胞退变的保护作用

目的观察不同浓度淫羊藿苷（icariin, ICA）对IL-1β诱导软骨细胞退变的保护作用。方法原代分离培养新生24h大鼠四肢长骨干骺端透明软骨的软骨细胞,取P1代细胞,以4×103/孔接种96孔培养板,加入终浓度分别为1×10-7、1×10-6和1×10-5mol/L的ICA,MTT法分别测定12、24、36、48、60、72h后软骨细胞增殖情况。以1.2×105/孔接种6孔培养板,分别设置空白对照组（N组）、炎症刺激组（M组,加入10ng/mL IL-1β诱导软骨细胞退变）和淫羊藿苷低、高剂量组（ICA-L组和ICA-H组,炎症刺激组基础上加入ICA,终浓度分别为1×10-7、1×10-6mol/L）,连续干预72h。ELISA法测定培养上清液中Ⅱ型胶原（collagen-Ⅱ, Col-Ⅱ）和糖胺多糖（glycosaminoglycan, GAG）含量,RT-PCR法检测细胞Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶13（matrix metaloproteinase13, MMP13）、蛋白聚糖（aggrecan, Acan）和Sox9 mRNA表达情况。结果1×10-5mol/L ICA早期（24h）表现为抑制软骨细胞增殖（P<0.01）,72h后促进软骨细胞增殖（P<0.01）;1×10-7mol/L和1×10-6mol/L ICA干预36~72h后促进软骨细胞增殖（P<0.05）,但其中1×10-7mol/L在60h与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）。ICA干预72h后,与M组比较,ICA-L和ICA-H组,GAG浓度均显著升高（P<0.05）,而Col-Ⅱ含量于ICA-L组降低、ICA-H组升高,但差异均无统计学意义（P>0.05）。ICA-L组Acan/Sox9 mRNA表达升高（P<0.01）,ICA-H组Col-ⅡmRNA水平升高而MMP13 mRNA表达降低（P<0.01）。结论淫羊藿苷能影响软骨细胞基质微环境,促进软骨细胞表型基因表达,抑制MMP13 mRNA表达,进而拮抗IL-1β诱导的软骨细胞退变。     

17β雌二醇对卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力及Snail表达的影响

目的研究雌激素对体外培养的卵巢透明细胞癌细胞系ES2增殖、侵袭力的影响和对MTA3、Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)表达的调节作用,以探讨雌激素作用对ES2细胞系的影响。方法体外培养卵巢透明细胞癌ES2细胞系,去激素培养7d后加入17β雌二醇(E2)1×10-7、1×10-8、1×10-9mol/L,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期,改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化,RTPCR检测MTA3、Snail、MMP2mRNA表达,免疫组化法检测Snail、MMP2表达,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。结果RTPCR、WesternBlot结果示ES2细胞系为ERα阴性表达,ERβ阳性表达,Ecad为阴性表达。17βE21×10-7、1×10-8、1×10-9mol/L均可促进细胞增殖;E21×10-8mol/L可使G0～G1期细胞减少,S期细胞增加,但对细胞凋亡无影响;17βE21×10-8mol/L可显著增强ES2细胞的侵袭力和趋向运动能力,并可降低MTA3mRNA表达,增加Snail、MMP2mRNA及蛋白表达。结论17βE2可显著促进ES2细胞的侵袭能力,此作用可能是通过17βE2对MTA3表达下调和对Snail、MMP2表达的上调实现的。     

不同雌激素水平对大鼠血管内皮细胞功能及血管内皮细胞粘附分子1表达的作用

目的研究雌激素对雌鼠肺血管内皮细胞功能及血管内皮细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达的调节。方法（1）雌性SD大鼠24只分为假手术组、去势组、治疗组,采用放射免疫法检测血清中内皮素、前列环素的含量,铜-镉还原法测定血清中一氧化氮的产量。放射配体结合法检测肺血管内皮细胞中雌激素受体含量。（2）正常雌鼠肺培养的第2代血管内皮细胞,按不同浓度17-β雌二醇(17-βE2)分为A组（对照）、B组（3×10-8mol/L17-βE2）、C组（3×10-7mol/L17-βE2）;D组（3×10-6mol/L17-βE2）、E组（3×10-6mol/L17-βE2+3×10-6mol/L他莫西芬）处理48h,白细胞介素-1β作用后流式细胞仪分别检测各组VCAM-1表达量。结果(1)去势组雌鼠血中一氧化氮（18μmol/L±8μmol/L）、前列环素（8.5pg/ml±2.5pg/ml）均降低,治疗组二者水平明显升高（31μmol/L±7μmol/L,P<0.05;10.9pg/ml±3.4pg/ml）,而内皮素含量变化则相反（170pg/ml±39pg/ml;100pg/ml±32pg/ml,P<0.05）。(2)去势组雌鼠血管内皮细胞中雌激素受体含量(fmol/106cell）显著降低（6.7±0.5),治疗组雌激素受体含量维持在高水平（17.6±1.2,P<0.01）。(3)白细胞介素-1β作用后A组表达VCAM-1细胞百分率明显增高（17.5%±1.5%）,B、C、D组表达VCAM-1细胞百分率显著降低（15.4%±1.42%、12.4%±0.34%、8.7%±0.27%,P<0.01）。结论雌激素水平可明显影响雌鼠血管内皮细胞内皮素、一氧化氮、前列环素的分泌,并可影响雌鼠血管内皮细胞中雌激素受体含量。雌二醇均可降低白细胞介素-1β诱发的雌鼠血管内皮细胞VCAM-1表达增高。     

雷公藤甲素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

探讨雷公藤甲素对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12 细胞损伤的保护作用及其机制。方法通过噻唑蓝（MTT）法确立Aβ25-35诱导PC12 细胞损伤模型的工作浓度;同时利用MTT 法检测1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L雷公藤甲素对细胞活性的影响,以及雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞后对细胞活性的影响。PC12细胞随机分为3组：对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35和雷公藤甲素处理组。细胞处理24 h后,利用免疫荧光法检测细胞中活化Caspase-3的表达,同时采用逆转录聚合酶链反应检测凋亡相关基因-2 和的表达水平。结果Aβ25-35在10 μmol/L工作浓度下可诱导PC12 细胞复制阿尔茨海默病体外细胞损伤模型,其细胞存活率为（58±6）%;单纯雷公藤甲素在1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L浓度下处理细胞对细胞活性无显著影响。Aβ25-35处理细胞后,细胞活性降低,活化Caspase-3在细胞中表达升高,同时Bax mRNA表达升高,而Bcl-2 mRNA 的表达下降。然而,雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞时,前者能够降低Aβ25-35对PC12 细胞的毒性损伤,且细胞活性随雷公藤甲素浓度的增加而升高;同时活化Caspase-3在细胞中的表达,Bcl-2 和Bax mRNA 表达水平也受抑制。结论雷公藤甲素可能通过调节-3、及-2 基因的表达以抑制细胞凋亡,从而对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤发挥保护作用。     

血管内皮生长因子对关节软骨细胞mmP-1及mmP-3表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)对关节软骨细胞mmP-1及mmP-3表达的影响。方法:原代培养SD乳鼠的关节软骨细胞。实验分为4组,每组加入不同因素:A组(对照组)不加任何处理因素;B组:10ng/ml VEGF;C组:10ng/ml IL-1β;D组:10ng/mlVEGF+10ng/ml IL-1β,应用定量PCR方法检测软骨细胞中mmP-1及mmP-3mRNA的表达水平。结果:mmP-1 mRNA表达水平:与A组比较,B、C、D组明显升高,B、C组明显低于D组。mmP-3 mRNA表达水平:与A组(对照组)比较,B、C、D组mRNA表达明显升高。D组明显高于B、C组。结论:VEGF能够明显上调软骨细胞mmP-1、-3的mRNA表达。     

不同浓度雌激素对卵巢癌细胞VEGF-C和TGF-β_1表达的影响

目的观察在不同浓度的雌激素作用下,卵巢癌细胞转化生长因子-β1（TGF-β1）、血管内皮细胞生长因子C（VEGF-C）表达的变化。方法在体外不同浓度（10-11、10-10、10-9、10-8mol/L 17β-E2）的17-β雌二醇（E2）作用下,用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及ELISA方法,检测卵巢癌SKOV3细胞株VEGF-CmRNA的表达及TGF-β1分泌量水平的变化。结果 SKOV3细胞在E2的作用下,TGF-β1的分泌量呈剂量浓度反应,随着10-11~10-8mol/L17-βE2浓度的增加,TGF-β1的分泌量明显增加;随着雌激素浓度的增加,SKOV3细胞VEGF-C mRNA的PCR产物表达也呈递增趋势。10-11、10-10、10-9和10-8mol/L 17β-E2组与对照组比较,VEGF-C,TGF-β1的表达有显著性差异（P〈0.05）。结论雌激素可上调SKOV3细胞的VEGF-C mRNA表达、TGF-β1分泌水平,两者均呈浓度递增趋势。     

大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性与炎症因子表达的变化

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (lipopolysaccharide,LPS)重复刺激的耐受性与炎症因子IL -1β,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达变化 ,研究二者之间的联系。 方法　将从 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,随机等分为正常对照组 (A) ,LPS单次刺激组 (B)和LPS二次重复刺激组 (C)。运用ELISA和RT -PCR方法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF -α及IL - 1β ,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达的变化。 结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF -α分泌和IL - 1β ,TNF -α ,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达A组分别为 :(0 . 4 5± 0. 0 1) ,(0 . 91±0 . 0 5 ) ,(0 6 0± 0 . 0 7) ,(0 . 80± 0. 0 6 ) ,(0 . 75± 0. 0 5 ) μg/L;B组分别为 :(0 .76± 0 . 0 3) ,(1 .4 2± 0 . 11) ,(1. 2 3± 0. 0 8) ,(1 .77± 0 . 15 ) ,(1 .2 2± 0 . 12 ) μg/L,B组与A组比较显著增加 (P <0 .0 1) ;C组分别为 :(0 .4 9± 0 . 0 5 ) ,(0 . 84.± 0 0 6 ) ,(0 . 70± 0 . 0 5 ) ,(0 . 95± 0 .16 ) ,(0 . 87± 0. 0 5 ) μg/L,C组与B组比较 ,明显减少 (P <0 . 0 5 ,或 <0. 0 1)。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与IL - 1β,TNF -α,IL - 10 ,IL - 18mRNA表达下降相关     

降钙素对成骨细胞作用机制的体外实验研究

目的　观察降钙素 (calcitonin ,CT)对体外培养成骨细胞功能及其细胞因子表达的影响 ,初步探讨其作用机制。方法　采用酶消化法培养新生SD大鼠的成骨细胞 (osteoblast,OB) ,加入不同浓度 (1× 10 -12 ～ 1× 10 -8mol/L)的CT ,观察OB的增殖、分化功能和矿化功能。采用RT PCR方法观察胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF Ⅰ )、碱性磷酸酶 (ALP)的表达。结果　增殖率测定CT组自 1× 10 -12 mol/L起 ,吸光度 (A值 )均较对照组增加 ,且呈剂量依赖关系 ,CT≥ 1× 10 -9mol/L时差异有显著性 (P =0 .0 39) ;ALP活性自 1× 10 -12 mol/L起均较对照组增加 ,也呈剂量依赖关系。CT≥ 1× 10 -10 mol/L时差异有显著性 (P =0 .0 32 ) ;矿化结节面积 /孔 :CT=1× 10 -12 mol/L组为对照组的 1.6 72倍 (P =0 .0 2 4 ) ,1× 10 -8mol/L组为对照组的 2 .92 4倍 (P =0 .0 0 6 )。CT组细胞因子IGF Ⅰ、ALPmRNA表达较对照组显著升高 (P <0 .0 5 )。结论　适当浓度的CT对体外培养的OB增殖、分化、矿化均具有促进作用。部分机制与CT可以刺激IGF Ⅰ表达增加有关。     

大鼠系膜细胞醛固酮的合成及其对细胞外基质生成的影响

目的　证明肾脏系膜细胞能够自身合成醛固酮 ,并探讨醛固酮对系膜细胞细胞外基质生成的影响。方法　用RT PCR法检测大鼠系膜细胞醛固酮合成酶CYP11B2mRNA表达 ,PCR产物存化后直接测序 ;放免法测定系膜细胞培养上清液中醛固酮的浓度。用RT PCR半定量法比较 (3 磷酸甘油醛脱氢酶theenzymeglyceraldehyde 3 phosphatedehydrogenase ,GAPDH为内参照 )经 10 -10 ～ 10 -6mol/LAngⅡ或 7mmol/L、9mmol/LKCl干预 4 8h ,系膜细胞CYP11B2mRNA的表达量。大鼠系膜细胞醛固酮特异性受体 (mineralocorticoidreceptor,MR)和保护其配体特异性的 11β -羟类固醇脱氢酶 2 (11β -HSD2 )的mRNA和蛋白质表达分别用RT PCR法和细胞免疫化学法检测。以ELISA和Western印迹方法检测经 10 -7mol/L醛固酮干预 2 4h ,细胞培养上清液中层黏蛋白 (FN)和Ⅳ型胶原的浓度。结果　大鼠系膜细胞能表达CYP11B2mRNA ,且细胞培养上清液中检测到醛固酮 ,浓度为 1 0 6 5pg/ 10 6个细胞。 10 -8、10 -7mol/LAngⅡ (10 -8mol/L :2 15± 0 10 ,10 -7mol/L :1 16± 0 0 4vs非干预组 0 77± 0 0 3,P <0 0 0 1;)和 9mmol/L的KCl (1 2 7± 0 11vs非干预组 0 89± 0 12 ,P <0 0 5 )均能显著提高CYP11B2mRNA的表达。大鼠系膜细胞有MR和 11β -H     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

人体寄生虫学多媒体教学效果的初步评估

通过分析多媒体辅助教学方法与传统教学方法在人体寄生虫学教学中的应用,指出多媒体辅助教学对于提高教学质量效果显著,受到了绝大部分同学的赞同和欢迎.     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

头孢他啶用于胸外科感染的疗效分析

目的 观察和评价头孢他啶（泰得欣）应用于普通胸外手术的临床疗效和安全性。方法 采用对比试验，观察2005年8-10月96例普胸手术预防和治疗的疗效和不良反应。结果 泰得欣在预防和治疗术后感染中总有效率95．9％，不良反应发生率为5．2％。结论 泰得欣临床效果满意，使用安全，值得在普胸手术中选用。