肝纤维化相关因子及其作用

肝纤维化是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复的代偿反应,肝脏在受到外界因素刺激后, 肝组织中肝细胞与Kupffer细胞(KC)分泌可溶性的细胞因子,通过各自的信号转导途径,激活星状细胞(HSC)并使之处于持续激活状态, 激活的HSC分泌大量细胞外基质,使肝脏原有结构被破坏,形成肝纤维化．肝纤维化是可逆的,肝纤维化的治疗研究也是围绕着如何降低 HSC的活性,促进HSC凋亡,减少胶原的生成, 增加其降解,而这些过程均与细胞因子网络密切相关．     

生存素基因与肝纤维化

在急性和慢性肝损伤中,肝星状细胞(HSC)活化并转化为肌成纤维细胞样细胞是导致肝纤维化的关键.生存素(survivin)基因是近年发现的凋亡抑制蛋白家族成员之一,有研究报道survivin基因在活化的HSC中高表达,而抑制survivin基因可促进HSC凋亡,有望逆转肝纤维化.此文就survivin基因功能、作用机制及...     

生存素基因与肝纤维化

在急性和慢性肝损伤中,肝星状细胞（HSC）活化并转化为肌成纤维细胞样细胞是导致肝纤维化的关键。生存素（survivin）基因是近年发现的凋亡抑制蛋白家族成员之一,有研究报道survivin基因在活化的HSC中高表达,而抑制survivin基因可促进HSC凋亡,有望逆转肝纤维化。此文就survivin基因功能、作用机制及其与肝纤维化的关系等作一综述。     

肝星状细胞在肝纤维化中的作用

肝纤维化是肝硬化的早期阶段,其发生涉及肝内多种细胞,而肝星状细胞在肝纤维化的发生发展中具有重要作用,本文综合国内外最新研究,对肝星状细胞的形态及其在肝纤维化中的作用(活化、信号转导、凋亡等)进行了综述。     

四种中药单体的抗肝纤维化作用及其机制

目的 比较丹参素、黄芩甙、黄芪、三七总皂甙4种中药单体抗肝纤维化的疗效并探讨其作用机制.方法 以秋水仙碱为对照,将4种中药用于大鼠肝纤维化模型和大鼠肝星状细胞(HSC).观察肝组织形态变化;检测血清透明质酸、Ⅳ型胶原含量;检测肝组织羟脯氨酸、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子(TGF)β1的表达;观察HSC活化增殖周期、细胞凋亡及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 与模型组比较,中药处理组的肝组织形态显著改善,血清透明质酸、Ⅳ型胶原含量明显减少,肝组织MDA、羟脯氨酸含量及TIMP-1、TGF β1表达亦明显减少、SOD活性显著升高,丹参素组作用最强,黄芩甙组、黄芪组次之,各组比较,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).四种中药都能抑制HSC活化增殖、促进细胞凋亡、抑制HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达,丹参素、黄芩甙、黄芪作用较强.结论 四种中药均能减缓实验性肝纤维化的发生.丹参素作用最强,黄芩甙和黄芪强于三七总皂甙.机制可能是这些中药能通过下调TGF β1抑制HSC活化增殖、促进细胞凋亡而抑制HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达;降低肝组织MDA含量,增加SOD活性;下调TIMP-1/MMP-1比值从而促进细胞外基质降解,减少其沉积.     

肝纤维化的发病机制

1.肝纤维化的概念：1978年世界卫生组织专家组将纤维化定义为胶原的过度形成,因为当时认为胶原是纤维化肝脏最突出的结缔组织成分,经过20多年的研究,目前认为肝纤维化是指各种原因引起的动态创伤-愈合过程,在这个过程中,肝脏中的多种ECM成分含量不断增加。有研究表明,肝硬化时肝脏Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ型胶原分别为正常肝脏的8、4、14、8和10倍,[第一段]     

瘦素在肝纤维化中的作用及机制研究进展

瘦素(leptin)是由肥胖基因编码的、具有多种功能的多肽类激素,目前关于瘦素在慢性肝病中的作用研究较多,此文就瘦素与肝非实质细胞、细胞因子的关系及在肝纤维化发展机制中的作用研究进展作一综述。     

丹参素对大鼠肝星状细胞氨基末端蛋白激酶信号转导的影响

目的 探讨丹参素抗肝纤维化作用的机制. 方法分离大鼠原代肝星状细胞(HSC),用0.0312、0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.0000 mmol/I.不同浓度丹参素作用于HSC,四甲基偶氮唑黼法检测丹参素对HSC生长增殖的抑制作用;应用免疫细胞化学法观察Ⅰ型胶原合成,酶联免疫吸附法观察Ⅰ型胶原分泌.Western blot法观察丹参索对白细胞介素-1 β(IL-1 β)刺激的HSC内氨基末端蛋白激酶(JNK)蛋白及其磷酸化表达的影响.采用随机设计的方差分析,SNK-q进行统计学处理. 结果与0 mmol/L组比较,丹参素其他浓度组明显抑制了HSC增殖,并旱剂量依赖性.丹参素(0.0625～0.2500 mmol/L)对IL-1 β引起的HSC增殖具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性.0.25 mmol/L丹参素对正常培养的和经IL-1 β刺激的HSC作用24 h能下调Ⅰ型胶原的合成和分泌.IL-1 β能刺激ttSC中p-JNK的明显表达,丹参素能下凋亡IL-1 β诱导的ItSC中P-JNK的表达,但其对JNK表达水平没有明显影响. 结论丹参索可抑制正常传代培养的和经IL-1 β刺激的人鼠HSC增殖、Ⅰ型胶原合成与分泌,其机制可能与抑制JNK信号转导通路有关.     

Micro-RNAs在肝纤维化发生中的作用

1993年Lee et al在秀丽新小杆线虫中发现编码形成可抑制LIN-14蛋白合成,大小为22 nt的小分子RNA基因lin-4,当时并未引起注意.直到2000年,Reinhart et al又在此线虫中发现第二种类似的基因let-7,此后不到一年间又相继发现了数百种类似的小分子RNA,被称为micro-RNAs(miRNAs).近年来,miRNAs的研究突飞猛进.miRNAs与肿瘤发生发展的关系及其潜在的诊断价值是目前研究的热点之一,且在非肿瘤疾病中,miRNAs的研究方兴未艾.现将与肝纤维化发生有关的miRNAs研究作一简介.     

Effects of interleukin-10 on activation and apoptosis of hepatic stellate cells in fibrotic rat liver

AIM:To study the effects of interleukin-10(IL-10)on the expression of α-smooth muscle actin(α-SMA),nuclear factor-κB(NF-κB)and Fas/Fas ligand(FasL)inhepatic stellate cells of experimental rats with hepaticfibrosis.METHODS:Sixty clean SD rats were randomly dividedinto control group(group N),liver fibrotic group(groupC)and IL-10 treatment group(group I).Control groupreceived intraperitoneal injection of saline(2ml·kg~(-1)),twicea week.Fibrotic group was injected intraperitoneallywith 50% carbon tetrachloride(CCl_4)(2 ml·kg~(-1)),twicea week.IL-10 treatment group was given IL-10 at adose of 4 μg·kg~(-1)20 minutes before CCl_4 administrationfrom the third week.Hepatic stellate cells(HSCs)wereisolated from these rats at the seventh and eleventhweeks during the course of liver fibrosis,respectively.The expression of α-SMA and NF-κB in HSCs wasmeasured by S-P immunohistochemistry.The expressionof Fas and FasL mRNA was measured by RT-PCR.Furthermore,liver tissues were harvested from threegroups at the same time.RESULTS:The CCl_4- induced experimental rat hepaticfibrosis model was established successfully.The purityof extracted hepatic stellate cells was about 95% andthe yield of hepatic stellate cells was 1.2-2.3×10~6/g livertissue averagely.The positive expression of α-SMA andNF-κB was 36.5% and 28.5% respectively in group N.The positive levels of α-SMA and NF-κB were increasedsignificantly in group C compared to group N(P<0.01).The positive signals decreased significantly(P<0.05)ingroup I.In the 11~(th)week,the HSCs of group I becameround with visible pyknotic nuclei.The expression ofNF-μB in group C was significantly increased in a time-dependentmanner(P<0.01),but there was no difference in the α-SMA expression(P>0.05).The mRNA of Fasand FasL in group C was significantly increased in a time-dependent manner compared to that in control group.After treated with IL-10,the expression level of Fas andFasL was higher in group I than in group C.CONCLUSION:The positive expression of α-SMA andNF-κB in hepatic stellate cells is decreased by ectogenicIL-10 in liver fibrosis induced by CCl_4.The expression ofFas and FasL is increased in the course of liver fibrosis,and is further increased by IL-10.IL-10 could inhibitthe activation of HSCs and cause apoptosis of activatedHSCs.     

去甲肾上腺素对大鼠肝星状细胞作用的实验研究

目的 探讨交感神经系统在肝纤维化发生和发展中的作用. 方法采用免疫荧光和RT-PCR检测体外培养的肝星状细胞(HSC)中α1、β2-肾上腺素能受体的表达;用四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的去甲肾上腺素(NE)对HSC增殖活性的影响.同时用RT-PCR检测受NE作用后HSC的活化指标胶原蛋白-1、转化生长因子β(TGF β)及α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达.用高效液相色谱-电化学法测定活化的HSC中交感神经递质NE的水平. 结果α1和β2-肾上腺素能受体表达于HSC的胞膜和胞质内;NE可呈剂量依赖性地促进HSC增殖,在浓度为100μmol/L时达到最大效应,F=140.464,P<0.05,差异有统计学意义.以NE 100 μmol/L作用细胞24h后,可显著促进反应HSC活化的指标上升,胶原蛋白-1表达为0.3022±0.0610,TGF β表达为2.2080±0.2151,α-SMA mRNA表达为0.5469±0.0108,与对照组胶原蛋白-1(0.1040±0.0556)、TGF β(1.1190±0.0070)、α-SMA mRNA表达(0.0759±0.0449)比较,t值分别为-4.160、-8.763和-17.651,P值均<0.05,差异均有统计学意义.HSC可以合成并释放NE,且受血小板衍生生长因子(10ng/ml)刺激后HSC中NE含量为(14.24±0.21)ng/ml,对照组为(11.34±0.15)ng/ml,两组比较,t=-32.907,P<0.05,差异有统计意义.结论 抑制交感神经系统使HSC活性降低对临床上治疗肝纤维化有一定的指导意义.     

铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制研究

目的探讨铁沉积对大鼠肝纤维化影响的机制。方法随机将39只SD大鼠分为模型组和空白对照组,采用二甲基亚硝胺(DMN,10μL·kg-1)腹腔注射,制作大鼠肝纤维化模型。造模大鼠在注射DMN 1 w后,再将模型大鼠随机分为模型组(15只)和去铁铵组(12只)。两组大鼠分别自第3 w开始腹腔注射生理盐水或100 mg·kg-1去铁铵,3次/w,2 w后处死动物。取肝组织分别行HE染色、Masson染色、普鲁士蓝染色;采用免疫组化法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;采用火焰原子吸收光谱法(FAAS)测定大鼠肝组织铁浓度(HIC);采用ELISA法检测大鼠血清铁蛋白、转铁蛋白;使用全自动生化分析仪检测肝功能、血清铁水平;采用PCR法检测肝组织转化生长因子(TGF)-β1 m RNA水平。结果肝组织病理学检查显示,伴随着胶原纤维的沉积、肝细胞变性坏死和肝星状细胞(HSC)大量活化,模型组大鼠铁负载显著增加;铁沿纤维间隔分布,主要沉积于库普弗细胞(KC)和HSC;模型组肝组织铁浓度为(0.778±0.098)mg/g,空白对照组为(0.436±0.043)mg/g,两组差别有统计学意义(LSD-t=5.15,P0.01);去铁铵组为(0.595±0.146)mg/g,显著低于模型组(LSD-t=-2.76,P0.05);模型组血清铁蛋白和转铁蛋白分别为(47.657±27.851)ng/m L和(0.322±0.099)mg/m L,空白对照组分别为(24.166±27.626)ng/m L和(0.653±0.170)mg/m L,去铁铵组分别为(10.261±12.466)ng/m L和(0.584±0.180)mg/m L,说明模型组铁蛋白明显增加,血清转铁蛋白明显减少,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(LSD-t=2.21和-4.78,P0.05和P0.01);去铁铵能明显降低血清铁蛋白水平,增加血清转铁蛋白水平,与模型组比较差异有统计学意义(LSD-t=-3.52和3.77,P0.05和P=0.01);模型组肝组织TGF-β1m RNA水平为(11.896±0.63),空白对照组为(2.292±0.222),两组差别有统计学意义(LSD-t=25.95,P0.01),去铁铵组为(7.481±0.745),显著低于模型组(LSD-t=-11.95,P0.01)。结论铁沉积对肝纤维化的发生发展起到重要作用,其机制可能与铁沉积于KC和HSC并促进HSC活化有关。     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对活化肝星状细胞凋亡的影响

HSC的活化是肝纤维化的中心环节,参与HSC活化的多种因素如生长因子、细胞因子、氧化应激产物等,需通过HSC细胞内的信号转导才能发挥作用。Wnt／β-catenin信号通路是调控细胞生长、增殖和凋亡的关键通路,在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用。近年来发现该信号通路与肺及肾纤维化的形成密切相关。     

转化生长因子β信号传导阻断对鼠肝星状细胞培养激活的影响

目的 研究转化生长因子β(TGF-β)信号传导通路的阻断,对鼠肝星状细胞(HSC)培养激活的影响。 方法 利用腺病毒AdT β-ExR的表达产物阻断HSCs中TGF-β信号传导。用酶联免疫吸附试验,Western blot及免疫组织化学等方法检测HSCs中Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及细胞增殖。 结果 感染AdT β—ExR与感染AdLacZ的HSCs相比,Ⅰ型胶原蛋白的表达量为对照组的42.99％(q=9.100,,P<0.001),α-SMA的表达明显被抑制,而细胞增殖指标5-溴脱氧尿苷的参入量,后者为前者的49.24％(q=7.835,.P<0.001)。 结论 阻断TGF-β信号传导能显著地抑制HSCs的培养激活,但促进HSCs的分裂。通过腺病毒AdT β-ExR的表达产物阻断TGF-β信号传导作为抑制肝纤维化的方法,还需深入一步的研究。     

异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞增殖和氧应激的影响

目的探讨异甘草酸镁对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖和氧应激的影响。方法通过绘制细胞生长曲线和四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度的异甘草酸镁对原代HSC和HSC株增殖的影响,并同时观察其形态变化。通过检测次氮基三乙酸铁(Fe-NTA)作用于以不同浓度异甘草酸镁培养的HSC:24 h后上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,观察异甘草酸镁对HSC氧应激的影响。结果同对照组比较,一定浓度范围的异甘草酸镁对HSC的增殖具有显著的抑制作用。在Fe-NTA诱导的氧应激中,一定浓度范围的异甘草酸镁可有效提高HSC的 SOD活性和降低MDA含量。结论异甘草酸镁对HSC的增殖具有明显的抑制作用,并且对Fe-NTA诱导的氧应激具有保护作用。     

肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子表达及对胶原合成的影响

目的探讨中药肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响及其对胶原合成的调节作用。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型,应用肝复康干预;测定各组大鼠血清白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量;采用免疫组织化学法检测肝组织PDGF表达;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平的变化。结果治疗组与模型组相比,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和球蛋白水平均降低,白蛋白及白/球比例则升高(P<0.01);模型组肝组织PDGF的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调(P<0.01);模型组肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01)。结论肝复康通过降低PDGF的表达,抑制Ⅰ型胶原的合成,对肝纤维化具有一定的防治作用。     

Smad4特异性小干扰RNA对活化的肝星状细胞作用的实验研究

转化生长因子β(TGF β)信号转导途径在肝脏纤维化中发挥重要作用.Smad4在信号传输途径中处于中枢地位,Smad4与活化的R-Smads结合成寡聚物,将TGF β的信号传递到核内,调节靶基因的转录并诱导下游基因的表达 [1].我们针对Smad4基因设计RNAi的真核表达载体,特异性干扰Smad4的基因的表达,以确定其能否对活化肝星状细胞(HSC)产生作用.