三氧化二砷和四乙铵对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a增殖和凋亡影响的研究

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)和四乙铵(tetraethylammonium,TEA)对人肺腺癌细胞AG-ZY-83-a增殖和凋亡的影响,探讨As2O3诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法体外细胞培养人肺腺癌AGZY-83-a细胞株,采用MTT法检测As2O3和TEA对细胞增殖的影响。透射电镜(TEM)、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况。比色法检测细胞内Caspase-3活性改变。结果As2O3和TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01)。As2O3组对AGZY-83-a细胞增殖抑制率低于TEA+As2O3组(P<0.05)。As2O3和TEA使AGZY-83-a细胞凋亡率,Caspase-3增加,单用As2O3组的细胞凋亡率、Caspase-3活性分别高于TEA+As2O3组(P<0.05)。结论应用TEA部分抑制了As2O3诱导AGZY-83-a细胞凋亡;As2O3诱导AGZY-83-a细胞凋亡可能和As2O3对细胞膜不同的钾离子通道作用有关系。     

银杏内酯、4-AP和TEA对AGZY-83-a细胞的作用研究

目的研究中药银杏内酯A、B及钾离子通道阻滞剂4．氨基吡啶（4-AP）和四乙胺（TEA）对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的抑制作用。方法应用体外培养的人肺腺癌细胞株AGZY-83-a,首先采用MTT法测定不同剂量银杏内酯A、B和4-AP、TEA对肿瘤细胞生长的抑制作用,于酶标仪测OD值（λ=490nm）,计算其抑制率;同时进一步绘制药物作用7天的生长曲线以观察其抗肿瘤作用。结果应用不同剂量银杏内酯A和B48h后测得的OD值与正常对照组无显著差异,1μmol／L银杏内酯A和B对肿瘤细胞增殖的抑制率分别为5．05％和2．52％（n=6,P〉0．05）;不同剂量4-AP、TEA对人肺腺癌细胞有明显的抑制作用,呈浓度依赖关系。1mmol／L4-AP和5mmol／LTEA对肿瘤细胞增殖的抑制率分别为15．40％和30．69％（n=6,P〈0．001）。不同作用时间的银杏内酯A、B对人肺腺癌细胞生长亦无抑制作用;不同作用时间的4-AP和TEA对人肺腺癌细胞有抑制作用。结论银杏内酯A、B对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的生长无抑制作用。4-AP和TEA对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a有明显的抑制作用,与药物浓度正相关。     

电压门控性钾通道在急性髓系白血病细胞增殖及凋亡中的作用

目的：研究电压门控性钾通道在急性髓系白血病（ acute myelocytic leukemia ,AML）细胞增殖及凋亡中的作用。方法通过台盼蓝拒染法检测AML细胞株THP-1生存活力;应用Annexin V／PI双标法和DAPI荧光染色法检测细胞凋亡;应用流式细胞术检测[ Ca2＋] i变化。结果电压门控性钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-aminopyrine,4-AP）作用72 h后,THP-1细胞生存活力明显下降,IC50为3.68 mmol／L。药物作用72 h 后, DAPI 荧光染色示4-AP 2 mmol／L 组、4 mmol／L 组细胞凋亡率分别为（14.38±1.82）％、（32.91±3.47）％,与对照组（6.35±0.29）％比较差异显著（P＜0.05）;Annexin V／PI双标记法示4-AP 2 mmol／L组、4 mmol／L组细胞凋亡率分别为（16.89±2.49）％、（38.26±4.03）％,与对照组（6.06±0.32）％比较差异均显著（P＜0.05）。2及4 mmol／L 4-AP作用1 min后,THP-1细胞内Fluo-3／AM荧光强度分别为（378.36±10.84）、（391.31±24.78）,与对照组（57.24±7.18）相比具有显著性差异（ P＜0.05）。结论电压门控性钾通道阻滞剂4-AP抑制AML细胞生存活力并可诱导其凋亡,提示电压门控性钾通道可能是AML治疗的潜在靶点。     

钾通道阻滞剂对缺血/再灌注室性心律失常的影响

钾离子通道是广泛存在于心肌中的最为复杂的一大类离子通道。其在心肌静息电位的产生、复极化形成以及自律性的调节上起重要作用。本实验使用钾通道阻滞剂四乙铵（ｔｅｔｒａｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ，ＴＥＡ）和优降糖（ｇｌｉｂｅｎ ｃｌａｍｉｄｅ），观察钙敏感性...     

钾通道阻断剂四氨基吡啶增加宫颈癌细胞对中子照射的敏感性

目的 研究钾通道阻断剂四氨基吡啶(4-amino-pynidine,4-AP)对宫颈癌HeLa细胞中子照射的影响.方法 宫颈癌HeLa细胞分别设小同浓度(0、1、5、10、20 mmol/L)4-AP组,0.67 Gy 252Cf中子照射后48 h,用MTT法和流式细胞仪检测各组细胞活性、凋亡率.0、20 mmol/L 4-AP组自照射后24、48、72 h分别用RT-PCR法、Western blot法检测HIF-1α mRNA及蛋白表达情况.结果 在中子照射48 h后,4-AP浓度为0、1、5、10、20 mmol/L时,对HeLa细胞增殖的抑制率分别为0、(38.81±3.45)%、(46.63±3.88)%、(63.58±6.19)%、(77.51±8.87)%,凋亡率(%)分别为(3.15 ±0.85)%、(8.01±1.19)%、(16.00±1.58)%、(47.20±3.18)%、(62.56±4.27)%,差异有统计学意义(P＜0.05).说明4-AP能抑制HeLa细胞的增殖,诱导凋亡,并呈现明显的剂量依赖性.当4-AP浓度大于5 mmol/L时,其作用明显(P＜0.01).0.67 Gy 252Cf中子照射0、24、48、72 h后,4-AP浓度为0 mmol/L组,HIF-1α mRNA/β-actin值分别为(0.423±0.116)、(0.464±0.111)、(0.487±0.121)、(0.415±0.099),Western blot灰度扫描结果HIF-1α/β-actin分别为(0.723±0.116)、(0.664±0.111)、(0.617±0.121)、(0.515±0.099),HIF-1α mRNA及蛋白表达均无明显降低,差异均无统计学意义(P＞0.05).4-AP浓度为20 mmol/L组,HIF-1α nRNA/β-actin值分别为(0.401 ±0.121)、(0.364±0.142)、(0.257±0.137)、(0.165±0.099),Western blot灰度扫描结果HIF-1α mRNA/β-actin分别为(0.879±0.117)、(0.645±0.115)、(0.312±0.114)、(0.130±0.118),HIF-1α mRNA及蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 钾通道阻断剂4-AP能降低中子放射治疗后缺氧诱导因子(HIF-1α)表达,降低HeLa细胞增殖,促进凋亡,提高HeLa细胞中子射线的敏感性.     

钾通道阻断剂抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)对多西紫杉醇(DOC)抗人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖、凋亡、周期的影响。方法通过MTT比色法分析DOC、4-AP以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法和PI单染法检测2种药物对MDA-MB-435S凋亡和周期的影响。结果0.04～50μmol/LDOC可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖;4-AP(5mmol/L)本身具有抑制MDA-MB-435S细胞的增殖作用,并可使DOC(25μmol/L)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S达最大抑制率的时间明显提前,DOC和4-AP对MDA-MB-435S细胞的增殖抑制有相加或协同作用,并呈剂量和时间依赖性。DOC(2μmol/L)单用24h时促进MDA-MB-435S细胞凋亡的作用并不明显,当与4-AP(5mmol/L)联合应用后能明显增加细胞早期凋亡的发生率;单用DOC可使MDA-MB-435S细胞阻断在G2/M期,单用4-AP可使MDA-MB-435S细胞阻断在G0/G1期,两药联合应用可使细胞阻断在G2/M期。结论DOC和4-AP分别在G2/M期和G0/G1期抑制MDA-MB-435S细胞增殖,4-AP通过促进DOC诱导MDA-MB-435S细胞凋亡从而抑制其增殖作用。     

四乙胺对肝星状细胞钾通道及细胞增殖的影响

目的 探讨肝星状细胞钾通道对肝星状细胞增殖的影响,观察钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)对肝星状细胞增殖和钾离子电流的作用.方法 以TEA作用于传代培养的肝星状细胞,通过MTT法、流式细胞术及单通道细胞膜片钳技术,分别检测TEA对肝星状细胞的增殖、细胞周期及细胞膜钾通道的影响.结果 TEA对肝星状细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,使细胞周期阻滞于G0/G1期.单通道细胞膜片钳发现肝星状细胞上有大电导离子通道存在,其电导值为(210.86±5.49)ps(n=7).TEA可明显减少外向该离子通道开放概率,TEA 0.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0mmol/L组的开放概率为(0.327±4.80)、(0.316±4.38)、(0.279±1.72)、(0.245±1.21)、(0.194±1.13)和(0.118±1.62)(F=22.561,其中10.0、20.0和40.0mmol/L组分别与0.0mmol/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝星状细胞上有大电导钾通道存在,阻断钾通道可抑制肝星状细胞增殖,钾通道对细胞增殖可能具有调控作用.     

钾通道阻滞剂对多发性硬化患者CD4+T细胞CCR7及CD45RA表达的影响

目的 研究Kv1.3钾通道阻滞剂海葵毒素(SHK)阻滞多发性硬化(Ms)患者急性期髓鞘反应性CIM+T淋巴细胞上的Kv1.3钾通道后,细胞表型CCR7、CD45RA表达的变化与疾病的关系.方法 对15例急性期MS患者、15例INF-B-1b治疗缓解期MS患者和15名健康对照的不同状态下的CD4+T淋巴细胞进行CD3、CIM、CCR7、CD45RA的荧光抗体及同型对照标记,用四标流式细胞仪检测3组不同状态下细胞表型CCR7、CD45RA表达的变化.结果 MS急性期组CIM+T细胞以CCR7-CIM5RA-(TEM)表型为主,其变化与病情有明显相关性,髓鞘抗原刺激后此型所占比例明显增高(P＜0.05),初始细胞表型CCR7+CD45RA+减少(P＜0.05),钾通道阻滞剂SHK对Ms急件期患者髓鞘反应性CD4+TEM表型有明显抑制作用(P＜0.05).结论 检测CI4+TEM细胞表型可能对判断病情有一定临床意义,Kv1.3钾通道可能成为治疗MS的新靶点.     

黄芩素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄芩素对人体瘢痕疙瘩成纤维细胞在增殖、凋亡的影响,为临床瘢痕疙瘩的治疗提供实验基础。方法 MTT法测定黄芩素干预后瘢痕疙瘩成纤维细胞的活力和乳酸脱氢酶的含量;Annexin V-FITC分析成纤维细胞在干预后的细胞凋亡率;蛋白印迹实验检测凋亡蛋白表达水平的变化。结果黄芩素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有抑制作用(P0.01),抑制效应呈剂量依赖性,作用24 h后,黄芩素50μM组抑制率为65%,IC50值为(31.34±0.29)μM;黄芩素还可诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,黄芩素25μM组凋亡率达22.7%,和对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);但不影响乳酸脱氢酶的含量。黄芩素作用后明显降低线粒体膜电位,上调凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3和裂解半胱天冬酶9的表达,裂解半胱天冬酶8的表达不受影响。结论黄芩素通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡来抑制瘢痕疙瘩生长。     

羧基-D-氨基葡萄糖对人食管癌Eca-109细胞caspase-3活化及bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养Eca-109细胞;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞内半胱氨酸酶3(caspase-3)活化程度及bcl-2蛋白表达的变化;Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞凋亡率.结果 COPADG作用显著增加Eca-109细胞凋亡率,且Eca-109细胞内caspase-3活性和bcl-2表达平均荧光强度明显增高.结论 COPADG能显著诱导Eca-109细胞凋亡发生,并使Eca-109细胞内caspase-3显著活化以及bcl-2蛋白表达下调,并可能通过该机制诱导细胞凋亡的发生.     

三氧化二砷对人肺腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

目的 研究三氧化二砷(As_2O_3)对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的抑制作用,探讨As_2O_3诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制.方法 采用MTT法、透射电镜及激光扫描共聚焦(LSCM)等方法 观察As_2O_3对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的影响.结果 As_2O_3能抑制人肺腺癌细胞株AGZY-83-a的生长,呈剂量依赖关系(P<0.01),IC_(50)=9.38μmoL/L;在光学显微镜及电镜下,可见As_2O_3,作用后的人肺腺癌细胞株AGZY-83-a呈现早期凋亡的变化特征:表面绒毛脱火,染色质块状散于核内;LSCM显示,As_2O_3,作用后人肺腺癌细胞株AGZY-83-a细胞内游离钙浓度([Ca~(2+)]_i)显著升高(P<0.01),呈剂量时间依赖关系.结论 As_2O_3能明显抑制人肺腺癌细胞株AGZY-83-a细胞的生长,并诱导人肺腺癌细胞株AGZY-83-a细胞凋亡,细胞内[Ca~(2+)]升高可能是诱导细胞凋亡的机制之一.     

钾、氯离子通道阻断剂对staurosporine诱导心肌细胞凋亡的调节作用

目的 :探讨钾、氯离子通道在心肌细胞凋亡过程中的调节作用与Caspase 3激活的关系 .方法 :在staurosporine诱导原代培养鼠心肌细胞凋亡模型中 ,观察钾、氯离子通道阻断剂 (Quinine ,BaCl2 ,DIDS和NPPB)对心肌细胞的存活率、DNA片断、Caspase 3活性及细胞膜完整性的影响 .实验分为阴性对照组 (无药物处理 )、阳性对照组 (staurosporine处理 )与药物干预组 (staurosporine加离子通道阻断剂 ) .结果 :①钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制staurosporine诱导的心肌细胞凋亡 .与阳性对照组 (2 9.8% )相比细胞的成活率在奎宁、氯化钡、DIDS和NPPB组分别是 5 9.7% ,4 7.2 % ,5 8.6 %和 6 0 .7% ,均有显著的增加 (P <0 .0 1 ) .相对应的DNA片断电泳显示 :Qui nine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组均有显著的抑制DNA的降解 .②钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3活性的激活 ,与阳性对照组 (6 0 0 .4 % )相比细胞的Caspase 3活性在Quinine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组分别是 1 84 .2 % ,2 1 6 .3% ,1 75 .6 %和2 2 1 .4 % ,均有显著的抑制 (P <0 .0 1 ) .③细胞膜完整性实验乳酸脱氢酶水平显示各组中细胞的坏死性死亡小于 1 0 % .结论 :在staurosporine诱导的心肌细胞凋亡模型中 ,钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3     

Effect of trichostatin A and paclitaxel on the proliferation and apoptosis of lung adenocarcinoma cells

Background Histone deacetylase inhibitors can regulate gene expression through modulation of the degree of acetylation of histone and non-histone,thus affecting cell proliferation,survival and chemosen...     

白藜芦醇对人宫颈癌SiHa细胞增殖与凋亡作用的影响

目的：探讨白藜芦醇（Res）诱导宫颈癌SiHa细胞凋亡的作用及可能的机制．方法：MTT法检测不同浓度（0,12．5,25,50,100,200,300,400和600μmol／L）Res处理24,48和72h对SiHa细胞的抑制率;流式细胞仪采用AnnexinV和PI双染检测细胞的凋亡率．荧光显微镜观测SiHa细胞的形态学改变．分光光度法检测Caspase-3活性．结果：Res在一定浓度范围内,以浓度和时间依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞的生长（P〈0．05）．以0,200和300μmol／L Res处理细胞48h,SiHa细胞早期凋亡率分别为1．1％,8．9％和11．1％,晚期凋亡比例为3．1％,15．0％和14．0％．荧光显微镜下细胞呈现典型的凋亡性改变．200μmol／L Res处理8h后,Caspase-3活性增加,24h达高峰,后逐渐下降,经50,100和200μmol／L Res处理24h后,Caspase-3活性与对照组相比,分别增加了1．92倍,2．51倍和4．53倍（P〈0．05）．结论：白藜芦醇通过诱导Caspase-3活性增加以时间依赖和浓度依赖的方式抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,诱导细胞凋亡．     

钾通道阻断剂和一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞钾电流的作用

目的：研究钾通道阻断剂、一氧化氮（NO）对继代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）钾电流（IK）的作用。方法：使用全细胞膜片钳技术观察继代培养大鼠PASMC IK及钾通道阻断剂格列本脲（Gli），四乙胺（TEA），4－氨基吡啶（4－AP）和NO供体S－亚硝基乙酰青霉素胺（SNAP）对其的作用。结果：继代培养大鼠PASMC较急性分离者之IK明显降低。4－AP和高浓度TEA显著降低继代培养大鼠PASMC之IK，SNAP显著增加继代培养大鼠PASMC之IK。结论：继代培养大鼠PASMC钾通道特性发生改变，但通道阻断剂和NO仍能显著改变其活性。     

比那地尔与肺动脉平滑肌细胞的增殖和凋亡

目的:研究钾通道开放剂比那地尔(Pin)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡的作用.方法:通过非核素标记细胞增殖检测、3H-TdR掺入、形态学、流式细胞术等方法研究Pin对大鼠PASMC增殖和凋亡的作用.结果:25～500 μmol/L的Pin呈剂量依赖性地减少大鼠PASMC的细胞数和DNA合成,500 μmol/L的Pin显著减少S期和G2/M期的细胞比例,增加G0/G1期细胞的比例.50～500 μmol/L的Pin呈剂量依赖性地增加大鼠PASMC的凋亡率.结论:钾通道开放剂抑制大鼠PASMC增殖并促进其凋亡.钾通道开放剂可能成为今后预防和控制低氧性肺动脉高压血管重建的有效药物.     

钾通道与肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡关系中钙通道所起作用的研究

目的:观察钾通道与肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡关系中钙通道所起的作用.方法:将PASMC分为对照、钾通道阻断剂四乙胺TEA (开放剂比那地尔Pin)、钾通道阻断剂(开放剂) 钙通道阻断剂硝苯地平Nif(开放剂Bay K8644)组,采用非核素增殖试剂盒、3H-TdR掺入测定细胞增殖.将PASMC分为对照、钾通道开放剂、钾通道开放剂 钙通道开放剂组,采用细胞凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡.结果:与对照组相比,10～20 mmol/L的钾通道阻断剂TEA显著增加PASMC细胞数(P<0.01),15～30 mmol/L TEA显著增加DNA合成(P<0.05, P<0.01).TEA 5 μmol/L Nif组中只有20 mmol/L TEA使DNA合成增加(P<0.05),其余浓度组与对照组均无统计学差异.TEA Nif组与TEA组相比,TEA浓度在10～25 mmol/L时2组细胞数相差显著(P<0.01),15～30 mmol/L TEA时2组DNA合成相差显著(P<0.05,P<0.01).与对照组相比,25～500 μmol/L Pin显著减少PASMC细胞数和DNA合成(P<0.01).Pin 1 μmol/L Bay组与Pin组相比,当Pin浓度为25～500 μmol/L时2组PASMC细胞数相差显著(P<0.01),当Pin浓度在50～500 μmol/L时DNA合成相差显著(P<0.01).Pin Bay组与对照组相比,50～500 μmol/L的Pin仍能显著减少PASMC细胞数(P<0.01), 25～500 μmol/L的Pin显著减少DNA合成(P<0.01).与对照组相比,50～500 μmol/L的Pin显著增加PASMC凋亡率(P<0.05,P<0.01).Pin 1 μmol/L Bay组与Pin组相比,细胞凋亡率无显著差异.结论:钙通道在钾通道与PASMC增殖关系中起重要作用,但在钾通道与PASMC凋亡关系中无明显作用.