莪术醇对肝星状细胞-T6细胞基因表达的影响

[目的]研究莪术醇对肝星状细胞(HSC)-T6细胞基因表达的影响.[方法]从基因库中查询50种肝纤维化相关基因的mRNA序列,用寡核苷酸探针设计软件设计探针,在PE8909DNA合成仪上合成寡核苷酸,用OGR-04点样仪及醛基化玻片制备成基因芯片.以莪术醇不同浓度含药培养液培养HSC-T6细胞,根据细胞毒性实验,确定细胞存活率在50%以上的药物浓度作为实验所用浓度,每组设空白对照,分别按1、6、12、24 h 4个时间段收集细胞.按操作步骤提取细胞总RNA,经反转录荧光标记,杂交和洗涤,用Genepix 4000B扫描仪扫描芯片,ImaGene 4.2软件进行数据分析和归一化处理,使用看家基因和阳性对照对Cy3和Cy5扫描结果进行校正.[结果]莪术醇1.562 5 μg/ml作用HSC-T6细胞12 h,可使基因转化生长因子β1、细胞色素P450a表达下调2.3、2.1倍.[结论]从分子水平揭示了莪术有效成分莪术醇的抗肝纤维化机制.     

干扰素β对肝星状细胞活化调控机制的影响

以往的研究已经证实干扰素β（IFNβ）不仅具有抗肝炎病毒的作用，还具有抗肝纤维化的作用，但其作用机制尚不明确。本研究旨在探讨能否经过调控转化生长因子β1（TGFβ1）、Smad4、Smad7、血小板衍生生长因子（PDGF）-BB等细胞因子的表达而影响肝星状细胞（HSC）的激活。     

抗纤软肝颗粒对血小板源生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对血小板源生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的KXR温育HSC 24 h后,PDGF-BB(10 ng/ml)刺激24 h,再加入上述浓度的KXR 3 h后,又加入PDGF-BB(10 ng/ml)作用5 min,然后收集细胞.采用细胞计数法及流式细胞仪测定细胞增殖及细胞周期.结果:无血清培养显示该方对于PDGF诱导的细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.01).流式细胞术分析提示KXR能抑制PDGF诱导的HSC DNA合成期及合成后期和分裂期DNA百分含量,阻断细胞由静止期/DNA合成前期向DNA合成期转化,呈剂量依赖性(5 mg/ml组作用最显著,P<0.01).结论:KXR能抑制PDGF诱导的HSC增殖.     

抗纤软肝颗粒对PDGF诱导下HSC细胞周期及胞内Ca2+浓度的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞周期及胞内Ca~(2 )浓度的影响。方法:采用完全无血清培养,用流式细胞术分析抗纤软肝颗粒对PDGF诱导的HSC增殖的影响,应用Ca~(2 )荧光指示剂Fura-2/Am在荧光分光光度计上测定细胞内Ca~(2 )浓度。结果:与对照组相比,抗纤软肝颗粒处理组可显著地抑制PDGF诱导的HSC增殖及细胞内Ca~(2 )浓度的升高,尤以抗纤软肝颗粒5mg/ml组作用明显。结论:抗纤软肝颗粒能拮抗PDGF诱导的细胞内Ca~(2 )浓度的升高。     

抗纤软肝颗粒对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒(KXRG)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的影响。方法:传代培养的HSC-T6(肝星状细胞系)与KXRG(1.25mg/ml、2.5mg/ml、5mg/ml)及其药物血清(5%、10%、20%)共同培养72小时后,应用MTT法测定细胞增殖、流式细胞仪测定HSC细胞周期各时相的DNA含量。结果:KXRG及药物血清均能显著抑制HSC的增殖,使细胞周期阻滞于S期,且2.5mg/ml药物和10%药物血清作用最强(P0.01)。结论:KXRG通过抑制HSC的活化,阻滞其细胞周期的正常进行,进而抑制HSC增殖,从而起到抗肝纤维化的作用。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞凋亡的影响

探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞(HSC)凋亡的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测Bcl-2/Bax.结果:TUNEL法及流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物及含药血清均可诱导HSC凋亡(P＜0.05);并能下调凋亡抑制分子Bcl-2,上调促凋亡分子Bax(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒可下调Bcl-2/Bax比率,以增加细胞对凋亡的敏感性,从而促进HSC凋亡.     

肝纤维化中肝星状细胞内主要信号转导通路

肝纤维化是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时,以胶原为主的细胞外基质(ECM)在肝内大量沉积的病理过程.活化的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时产生ECM的主要细胞.细胞因子、氧化应激以及ECM的改变等外部因素通过一定的细胞内信号转导通路激活HSC.了解HSC活化的信号转导通路能从根本上为治疗肝纤维化提供更多更有效的思路和方法.目前研究较多的信号途径有TGF-β/Smad通路、MAPK通路、PI3K通路、JAK/STAT通路、NF-κB通路、过氧化物酶体增殖物激活受体通路等.本文简要综述了肝纤维化时HSC中主要的细胞内信号转导通路.     

肝细胞生长因子对大鼠原代肝星状细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)作用下大鼠原代肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及其机制.方法 分离培养大鼠HSC,传代后使用PDGF-BB处理HSC,HGF进行干预,采用AO/EB染色、TUNEL法和流式细胞仪观察HGF对PDGF-BB作用下大鼠原代HSC凋亡的影响,免疫细胞化学分析P65的表达,电泳迁移率分析检测核因子κB DNA-蛋白结合活性. 结果对照组、PDGF-BB+HGF处理组和HGF处理组AO/EB染色法检测细胞凋亡率分别为1.98%±0.42%,5.10%±0.56%和8.43%±0.40%;流式细胞仪观察凋亡率分别为1.64%、3.22%和6.66%;TUNEL法凋亡率分别为2.35%±0.47%、4.89%±0.36%和7.34%±0.51%,各组间比较,差异均有统计学意义(t值分别为3.65、2.46和2.13,P值均＜0.05).对照组、PDGF-BB+HGF处理组和HGF处理组P65的表达依次减少,吸光度值分别为0.250±0.038、0.180±0.025和0.130±0.028,差异有统计学意义(t=2.08,P＜0.05).核因子κB DNA-蛋白结合活性相应减弱,吸光度值分别为283.97±43.20、129.93±15.54和61.56±15.14,差异有统计学意义(t=2.77,P＜0.05).结论 HGF能够诱导大鼠原代HSC和PDGF-BB作用下大鼠原代HSC的凋亡,抑制P65的表达和核因子κ B DNA-蛋白结合活性是HGF促进HSC凋亡的重要机制.     

血小板源生长因子调控肝星状细胞增殖的机制

血小板源生长因子具有促进肝星状细胞增殖的作用,其详细机制不明,可能涉及到血小板源生长因子与其受体结合后进一步影响三磷酸肌醇激酶、钙通道、信号转导及转录活化蛋白、细胞外信号调节激酶、磷脂酶C-γ1及钠-氢交换等。     

Altered factor VII activating protease expression in murine hepatic fibrosis and its influence on hepatic stellate cells

Background: Platelet‐derived growth factor‐BB (PDGF‐BB) is a profibrotic factor in liver fibrosis through its ability to stimulate hepatic stellate cells (HSC). The liver‐derived serine protease factor VII activating protease (FSAP) regulates the activities of PDGF‐BB in a cell‐specific manner. Aims: Our aim was to determine the influence of FSAP on the activation of HSC and to analyse the regulation of FSAP in hepatic fibrogenesis. Methods: The effect of FSAP on PDGF‐stimulated p42/p44 mitogen‐activated protein kinase (MAPK) activation in primary rat HSC was determined by Western blotting. Migration and proliferation of HSC was evaluated in Boyden chamber experiments and ³H‐thymidine incorporation assays respectively. Expression of FSAP was analysed in a CCl₄ mouse model of liver fibrosis by Western blot, quantitative real‐time polymerase chain reaction and immunohistochemistry. Results: FSAP inhibited PDGF‐BB‐stimulated p42/p44 MAPK phosphorylation, proliferation and migration of HSC. FSAP mRNA expression level was increased 3 h after CCl₄ application and decreased after 18 h and, in established fibrosis, after chronic CCl₄ administration. In parallel, there was a decrease in the circulating FSAP protein in chronic fibrosis. Concurrently, the homogenous hepatic expression pattern of FSAP was disturbed. Immunohistochemistry revealed a decrease of FSAP in hepatocytes in inflammatory and fibrotic lesions. Conclusions: Our results demonstrate an inhibitory effect of FSAP on PDGF‐mediated activation of HSC. In addition, FSAP expression is transiently increased in acute‐phase reaction but decreased during chronic fibrogenesis, which in turn may influence PDGF‐BB availability and myofibroblast activity.     

应用Alarma blue测定法评价软肝煎药物血清对HSC/T6增殖的影响

目的：应用Alarma blue测定法评价中药复方软肝煎对HSC／T6增殖的影响，方法：实验分为小牛血清，大鼠血清及药物血清3组，各组再分为5％，10％及20％3个浓度组，每组4只大鼠，利用中药血清药理学，通过MTT法和Alarma blue测定法测定软肝煎药物血清影响HSC／T6增殖的情况。结果：在MTT测定法中，与小牛血清组相比，大鼠血清组的5％浓度差异有显著性意义（P＜0．05），10％，20％浓度差异有非常显著性意义（P＜0．01），药物血清组各浓度差异均有非常显著性意义（P＜0．01），与大鼠血清组相比，药物血清组的5％，10％浓度差异有显著性意义（P＜0．05），20％浓度差异有非常显著性意义（P＜0．01），在Alarma blue测定法中，24h时，与小牛血清组比较，大鼠血清组与药物血清组的10％浓度差异均有非常显著性意义（P＜0．01），与大鼠血清组相比，药物血清组的10％浓度差异有显著性意义（P＜0．05，）30h时，与小牛血清组比较，大鼠血清组的10％浓度及药物血清组的10％学差异均有显著性意义（P＜0．05，P＜0．01），与大鼠血清组相比，药物血清组的10％浓度差异有非常显著性意义（P＜0．01），结论：软肝煎能抑制HSC／T6的增殖，具有抗肝纤维化作用；Alarma blue测定法是一种可靠的方法，不同动物种属的血清对肝星状细胞增殖影响不同，在培养系中使用单一的血清为好。     

慢性乙型肝炎患者血清内毒素和PDGF水平的变化及意义

目的观察和分析慢性乙型肝炎患者血浆内毒素和血小板衍生生长因子（PDGF）水平的变化、二者的相关性及与血清肝纤维化指标的关系。方法采用鲎试验、双抗体夹心ELISA法、RIA分别检测40例慢性乙型肝炎患者的血清内毒素、PDGF、HA、LN、PⅢNP和CⅣ的水平,并分析其意义,对照组为40例健康人。结果慢性乙型肝炎患者内毒素、PDGF及肝纤维化指标的水平明显高于对照组（P〈0．05）;内毒素与PDGF及二者与肝纤维化指标的水平正相关（P〈0．01）。结论内毒素可促进慢性乙型肝炎患者PDGF的分泌,二者均可能促进其肝纤维化的发生和发展。     

绞股蓝总皂苷对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的防治作用

目的:观察绞股蓝总皂苷对四氯化碳( CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的防治作用.方法:采用CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,分为正常组(Z,n=6)、模型组(M,n=8)、绞股蓝总皂苷组(J,n=8)、秋水仙碱(Q,n=8).造模6周末开始给药(股蓝总皂苷200mg/kg体重、秋水仙碱0.1mg/kg体重),给药3周.观察:①大鼠体重、肝脾比值的变化;②血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)活性、白蛋白( Alb)、总胆红素(TBil)含量、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量;③肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;④肝组织病理及胶原沉积情况.结果:①M组大鼠血清ALT、AST、GGT、TBil显著升高,Alb显著降低;J和Q组大鼠血清ALT、AST、GGT、TBil显著下降,Alb显著升高;②M组大鼠肝组织Hyp含量显著升高,J组及Q组大鼠肝组织Hyp含量显著下降;③肝组织HE染色显示:M组大鼠肝细胞脂肪变性,大量纤维结缔组织增生,假小叶形成.J组及Q组大鼠肝细胞脂肪变性减轻,纤维增生减少,少见完整假小叶结构.天狼星红染色显示:M组大鼠肝窦周胶原沉积明显,形成较厚汇管区和中央静脉间的纤维间隔,J组和Q组大鼠肝脏汇管区胶原纤维染较M组明显减轻;④M组大鼠肝组织SOD活性及GSH含量明显降低,MDA含量显著升高.J组大鼠肝组织SOD活性显著提高.结论:绞股蓝总皂苷具有显著抗CCl4诱导的大鼠肝纤维化及氧化损伤的作用.     

丹红软肝胶囊对肝纤维化患者血小板生长因子的影响

目的:研究丹红软肝胶囊对肝纤维化患者血小板生长因子(PDGF)的影响.方法:以108例慢性乙型肝炎肝纤维化患者为观察对象,随机分为两组,治疗组56例采用丹红软肝胶囊治疗,对照组52例服用复方鳖甲软肝片,均治疗6个月,观察治疗前后患者血清肝功能、肝纤维化指标及PDGF含量的变化.结果:治疗6个月时,治疗组患者肝纤维化血清指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)和Ⅲ型前胶原( PCⅢ)水平较治疗前均显著降低(P＜0.05);肝功能丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)与治疗前比较均显著改善(P＜0.05);PDGF含量较治疗前明显降低(P＜0.05).上述指标与对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论:丹红软肝胶囊可能通过抑制PDGF的分泌来抑制肝纤维化的发生发展.     

脾切除对猪血清致大鼠肝纤维化的影响

[目的]研究脾切除对猪血清致大鼠肝纤维化的影响.[方法]雄性Wistar大鼠37只,随机分为正常组、模型组、切脾组和假手术组.采用猪血清腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型,观察大鼠肝脏病理与胶原染色,检测大鼠肝功能和肝脏羟脯氨酸(Hyp)水平.[结果]猪血清腹腔注射12周后,模型组、切脾组和假手术组大鼠肝脏有纤细至较粗的完整的纤维间隔形成.与正常组大鼠相比,模型组、切脾组和假手术组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性明显升高[(46.79±4.76)、(52.50±4.49)、(51.90±3.47)U/L,P＜0.05],白蛋白明显下降[(28.03±1.41)、(27.86±1.66)、(28.82±1.37)g/L,P＜0.01,＜0.05],Hyp明显升高[(303.77±32.59)、(332.62±54.06)、(300.17 ±48.05)μg/g湿肝重,P＜0.01],而总蛋白和总胆红素无明显变化.与模型组相比,切脾组ALT活性明显高于模型组(P＜0.05),Hyp与模型组相比有增高的趋势.[结论]切除脾脏不能阻止猪血清致大鼠肝纤维化模型的形成.     

血清血小板衍生生长因子叉头型基因3和基质金属蛋白酶9在支气管哮喘气道重塑中的意义

近来研究发现,部分支气管哮喘(简称哮喘)的不可逆性气流阻塞和持续性气道高反应性,与气道重塑有关[1]。虽然哮喘气道重塑发生机制复杂,可能与上皮间质的相互作用导致胶原增多这一中心环节有关。其中基质金属蛋白     

Effect of Chinese medicine Qinggan Huoxuefang on inducing HSC apoptosis in alcoholic liver fibrosis rats

AIM: To investigate the effect of Qinggan Huoxuefang (QGHXF) on improvement of liver function and pathology in rats, and to analyze the mechanism. METHODS: Wistar rats were divided into three groups at random: normal control group (12), micro-amount carbon tetrachloride group (CCl4)(12) and model group A (60). The model group A was ingested with the mixture (500 mL/L alcohol, 8 mL/kg per day; corn oil, 2 mL/kg per day; pyrazole, 24 mg/kg per day) once a day and intraperitoneal injections of 0.25 mL/kg of a 250 mL/L solution of CCl4 in olive oil twice a week for 12 wk. The CCl4 group received intraperitoneal injections only. At the end of 8 wk the model group A (60) was divided into 5 subgroups: model group, Xiaochaihu Chongji (XCH) group, QGHXF high dose group, moderate dose group and low dose group, and were given the drugs respectively. At the end of 12 wk, all the rats were killed and blood samples collected, as well as liver tissue. Blood samples were used for evaluation of alanine transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP), gamma-glutamyltransferase (γ-GT). Liver specimens were obtained for routine HE, apoptosis gene array and flow cytometry analysis. RESULTS: A liver fibrosis animal model was successfully established. Fibrosis was obviously reduced in QGHXF high dose group, and no fibrosis formed in CCl4 group. Compared with model group the QGHXF group and XCH group could obviously decrease the level of ALT, AST, ALP, and GGT (P<0.05). QGHXF high dose group was better than XCH group in ALT (615±190 vs 867±115), and AST(1972±366 vs 2777±608). Moreover, QGHXF could reduce liver inflammation, fibrosis-induced hepatic stellate cell (HSC) apoptosis and regulate apoptosis gene expression. The HSC apoptosis rates of QGHXF groups were 22.4±3.13, 13.79±2.26 and 10.07±1.14, higher than model group, 6.58±1.04 (P< 0.05). Compared to model group, 39 genes were up-regulated, 11 solely expressed and 17 down-regulated in high dose group. CONCLUSION: QGHXF can improve liver fibrosis and induce HSC apoptosis.     

肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子表达及对胶原合成的影响

目的探讨中药肝复康对大鼠肝组织血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响及其对胶原合成的调节作用。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型,应用肝复康干预;测定各组大鼠血清白蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的含量;采用免疫组织化学法检测肝组织PDGF表达;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平的变化。结果治疗组与模型组相比,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和球蛋白水平均降低,白蛋白及白/球比例则升高(P<0.01);模型组肝组织PDGF的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调(P<0.01);模型组肝组织及HSC-T6细胞Ⅰ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01)。结论肝复康通过降低PDGF的表达,抑制Ⅰ型胶原的合成,对肝纤维化具有一定的防治作用。     

柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝组织HSC、MMP-2免疫组化的影响

目的:观察柔肝抑纤饮抗肝纤维化的疗效及优势,并探讨其抗肝纤维化机制.方法:用CCl4制备大鼠实验性肝纤维化模型,采用免疫组化技术半定量观察各组动物肝纤维化形成过程中肝组织表达HSC、MMP-2的变化,并相应检测血清肝功能、脂质过氧化指标等.结果:与模型组比较,柔肝抑纤饮可明显抑制肝纤维化形成过程中肝组织HSC、MMP-2的表达,半定量统计两者均降低,并能使血清ALT、MDA降低,SOD升高,经统计差异具有显著性意义(P＜0.05、P＜0.01).结论:柔肝抑纤饮具有抗脂质过氧化、降低HSC增殖活化、减少MMP-2分泌的作用,从而发挥了良好的抗肝纤维化作用.