多发性硬化患者外周血Annexin V结合T淋巴细胞凋亡和Fas的表达

目的 探讨多发性硬化(MS)患者外周血T淋巴细胞凋亡和Fas表达.方法 42例复发缓解型MS患者,根据其病程分为复发期组20例和缓解期组22例,另外选择20例健康人作为对照组,采用五色流式细胞术(FCM)检测以上3组外周血T淋巴细胞凋亡和Fas表达的情况.结果 3组间外周血T淋巴细胞Fas的表达无明显差别;复发期MS患者凋亡的CD4 T淋巴细胞(由AV染色标记)和Fas相关的CD4 T淋巴细胞凋亡(由AV CD95 /CD4 标记)明显低于缓解期MS患者和对照组(P＜0.05);虽然复发期MS患者和缓解期MS患者凋亡的CD8 T淋巴细胞(由AV染色标记)和Fas相关的CD8 T淋巴细胞凋亡(由AV CD95 /CD8 标记)都明显低于对照组(P＜0.05),但复发期MS患者和缓解期MS患者之间无明显差异(P＞0.05).结论 T淋巴细胞的凋亡和Fas的表达可能与复发缓解型MS患者的发病和病情有关.     

哮喘缓解期患者外周血T淋巴细胞亚群的增殖及其分子机制研究

目的 探讨哮喘缓解期患者外周血T淋巴细胞亚群增殖规律及其分子机制。方法 收集45例哮喘急性发作期患者（哮喘急发组）、哮喘缓解期患者（哮喘缓解组）和正常对照（对照组）的外周血标本（各15例）,体外分离获得并培养3组患者的外周血CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞,用流式细胞术检测细胞周期时相分布、细胞周期调节蛋白[P27^kipl、细胞周期素（Cyclin）D、E]、PI3K和STAT6的表达水平。结果 （1）3组CD4^＋T淋巴细胞的G0／G1期分布比例、S期分布比例,G2／M期和（S＋G2）／M期比例差异有统计学意义（Z值分别为12．35、8．05、9．16、12．80,均P〈0．05）,3组CD8^＋T淋巴细胞的G0／G1期分布比例、S期分布比例和（S＋G2）／M期比例差异有统计学意义（Z值分别为21．60、25．22和21．52,均P〈0．01）;（2）3组CD4^＋T淋巴细胞的P27^kipl、Cyclin D和Cyclin E表达水平差异有统计学意义（Z值分别为10．63、10．66和6．64,均P〈0．05）,3组CD8^＋T淋巴细胞的P27^kipl表达水平差异有统计学意义（Z值为9．30,P〈0．05）;（3）3组CD;T淋巴细胞的PI3K、STAT6蛋白表达水平差异有统计学意义（Z值分别为9．04和18．08,P值分别〈0．05和0．01）,哮喘缓解期患者处于增殖状态的CD;T细胞较正常对照者明显增多,与哮喘发作期患者相比处于增殖状态的CD4^＋、CD8^T细胞显著减少。PI3K信号转导途径可能通过上调CyclinD和／或CyclinE影响CD4^＋、CD8^＋细胞增殖活化,而JAK1-STAT6信号转导途径可能通过下调P27^kipl发挥作用。结论 哮喘缓解期患者体内CD4^＋T细胞存在过度增殖,可能与细胞周期蛋白和信号转导蛋白异常有密切关系。     

T淋巴细胞亚群异常与特发性血小板减少性紫癜的关系

目的 通过检测T淋巴细胞亚群及其凋亡，初步探讨T淋巴细胞亚群异常在特发性减少性紫癜（ITP）发病机制中的作用。方法 采用流式细胞术对ITP患者及正常对照组的外周血淋巴细胞亚群进行检测；DNA琼脂糖凝胶电泳检测T淋巴细胞的凋亡。结栗ITP患者CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋CD25^＋T细胞比例均显著低于正常对照组（P〈0．05或P〈0．01），而CD8^＋T细胞和CD4^＋T细胞表面Fas表达均较正常组增加（P〈0．01）；T淋巴细胞凋亡敏感性增加。结论 ITP患者外周血T淋巴细胞亚群异常，T细胞免疫调控亚群（CD4^＋CD25^＋）凋亡增多，对自身反应性T细胞亚群免疫下调作用降低，破坏自身免疫耐受，在ITP的发病中起重要作用。     

慢性阻塞性肺疾病患者外周血T淋巴细胞的表达及其与肺功能的关系

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（ COPD）患者外周血 T 淋巴细胞的表达及与肺功能的关系。方法检测COPD缓解期患者60例（COPD缓解期组）、慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）患者60例（AECOPD组）和体检健康者50例（对照组）的外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋及 CD4＋／CD8＋T淋巴细胞水平。 COPD 缓解期组在治疗前进行肺功能检查。结果 AECOPD组及COPD缓解期组血清CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋T淋巴细胞水平均低于对照组（P＜0．05）,CD8＋T淋巴细胞水平高于对照组（P＜0．05）。 COPD缓解期组血清CD3＋、CD4＋、CD4＋／CD8＋T淋巴细胞水平高于 AECOPD组, CD8＋T淋巴细胞水平低于 AECOPD 组（ P ＜0．05）。 COPD 缓解期组患者 CD4＋T淋巴细胞水平与第一秒用力呼气容积（FEV1）及用力肺活量（FVC）呈显著正相关（P＜0．05）,CD4＋／CD8＋T淋巴细胞水平与FEV1及FVC呈正相关（P＜0．05）, CD8＋T淋巴细胞水平与FEV1及FVC呈负相关（P＜0．05）,CD3＋T淋巴细胞水平与FEV1和FVC无统计学相关性（P＞0．05）。结论 COPD患者存在细胞免疫功能障碍,且随着病情的加重和肺功能的降低其免疫功能呈进行性减退。     

乙型肝炎外周血T淋巴细胞上CD28分子表达与病毒载量的关系

目的：分析HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者、HBeAg阳性乙肝病毒携带者外周血T淋巴细胞上CD28表达情况及其与HBV病毒载量的关系。方法采集健康人、HBeAg阳性乙肝病毒携带者、HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的外周血,抗体标记,采用流式细胞技术检测CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^＋T淋巴细胞,同时检测肝功能HBV DNA。结果慢性乙型肝炎组、乙肝病毒携带组CD4^＋CD28^＋T细胞、CD8^＋CD28^＋T细胞百分率明显低于健康对照组（P〈0.05）;HBV DNA≥107组CD8^＋CD28^＋T细胞百分率低于HBV DNA＜107组（P〈0.05）。结论乙型肝炎病毒感染者CD8^＋T细胞上CD28的低表达与高病毒载量有关。     

上皮性卵巢肿瘤患者外周血和腹水T淋巴细胞凋亡和Fas表达特点及其与CA125关系的研究

目的了解卵巢肿瘤患者外周血和腹水T淋巴细胞凋亡和Fas（CD95）表达特点及其与CA125的关系。方法应用流式细胞术测定18例Ⅲ～Ⅳ期卵巢癌患者（Ⅲ～Ⅳ期组）,15例Ⅰ～Ⅱ期卵巢癌患者（Ⅰ～Ⅱ期组）,Ⅲ～Ⅳ期组患者手术加化疗后（治疗后组）,18例良性上皮性卵巢肿瘤患者（良性组）,6例库肯勃氏瘤患者（库肯勃氏瘤组）及20例正常体检女性（正常组）的外周血T淋巴细胞凋亡和Fas表达,并测定上述治疗前的卵巢癌患者和库肯勃氏瘤患者的腹水T淋巴细胞以及良性组中10例患者（良性盆腔积液组）的盆腔积液T淋巴细胞的凋亡和Fas表达。同时测定卵巢癌患者外周血CA125的水平。结果Ⅲ～Ⅳ期组患者的外周血T淋巴细胞凋亡阳性率为5．55（3．57～9．62）％,明显高于正常组、良性组、Ⅰ～Ⅱ期组（P＜0．01）和治疗后组（P＜0．05）,Ⅲ～Ⅳ期组患者外周血T淋巴细胞的Fas表达强度为51±10,明显高于正常组（P＜0．05）。Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组患者腹水T淋巴细胞的凋亡阳性率,T淋巴细胞的Fas阳性率,Fas表达强度分别为17．41（7．06～24．56）％,（57±16）％,（55±11）％和34．06（17．03～44．65）％。（66±12）％,（70±24）％,均高于良性盆腔积液组的0．78（0．67～I．44）％,（37±6）％,（43±6）％（P＜0．01）。Ⅲ～Ⅳ期组的凋亡阳性率和Fas阳性率均明显高于库肯勃氏瘤组（P＜0．01）。Ⅰ～Ⅱ期组患者腹水T淋巴细胞凋亡与血清CA125水平呈正相关（r=0．77,P=0．009）。血清CA125＞500KU／L的卵巢癌患者腹水T淋巴细胞的凋亡高于CA125≤500KU／L的患者（P=0．009）。结论（1）T淋巴细胞凋亡上调出现于较早期卵巢癌患者的腹腔局部和晚期患者的外周血,而且晚期卵巢癌腹水T淋巴细胞凋亡和Fas表达高于库肯勃氏瘤患者,反映了原发卵巢癌腹腔局部免疫缺陷的特殊性。（2）有效的治疗可以降低卵巢癌患者外周血T淋巴细胞的凋亡。（3）卵巢癌腹水T淋巴细胞的Fas表达显著上调,是卵巢肿瘤免疫治疗的重要靶点。（4）CA125能间接反映卵巢癌腹腔局部的免疫状况。     

CD69在慢性乙肝患者CD4+、CD8+T淋巴细胞的表达

目的：观测慢性乙肝患者外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞早期激活标志CD69的表达.方法：静脉采集慢性乙肝患者普通肝素抗凝血2 ml,在植物血凝素（PHA）20μg/ml条件下进行全血培养,4 h后用双色免疫荧光标记流式细胞术检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达。结果：正常人外周血只有很少量CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,经PHA刺激后CD4^＋与CD8^＋T淋巴细胞CD69的表达率明显升高,较刺激前有统计学差异（P＜0.01）。同样,慢性乙肝患者在激活前后也有统计学差异（P＜0.01）;慢性乙肝患者在PHA刺激前有一部分CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞表达CD69分子,明显高于对照组（P＜0.01）。结论：本研究结果可能与乙肝患者体内病毒免疫紊乱有关系。     

孟鲁司特对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的作用及其机制

目的：观察孟鲁司特（MK）对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的影响并探讨其分子机制。方法：40只大鼠随机分为正常组、哮喘组、MK和地塞米松（DXM）组。采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏并反复雾化吸入刺激建立大鼠哮喘模型，药物干预组管喂MK或腹腔注射DXM。采用双标记双染色的方法先标记CD4^ /CD8^ T淋巴细胞，然后用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，采用免疫组化的方法检测淋巴细胞Fas的表达。结果：哮喘大鼠外周血及肺组织中T淋巴细胞的凋亡率低于正常组大鼠，MK、DXM处理后，CD4^ /CD8^ T淋巴细胞凋亡率均明显升高，与哮喘组及正常组比较差异均具显著性（P＜0．01）。体外培养时MK呈剂量和时间依赖性促进OVA抗原刺激的外周血淋巴细胞Fas表达水平及凋亡，其中以CD4^ T淋巴细胞凋亡率和Fas表达的增加更为明显，与CD8^ T淋巴细胞比较差异具显著性（P＜0．05）。10^-6mol/L的MK可明显促进10^-4mol/L DXM对淋巴细胞凋亡的诱导作用。结论：MK可促进哮喘大鼠外周血及肺组织中CD4^ T淋巴细胞凋亡，该作用可能通过Fas途径介导。MK对DXM促淋巴细胞凋亡具有协同作用。     

特发性血小板减少性紫癜Fas—FasL表达与中医辨证分型的关系

目的：探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血T淋巴细胞亚群（简称T亚群）表面凋亡调控因子Fas／FasL表达及其与中医辨证分型的关系．方法：按中医辨证分型将80例ITP患者分为4组,每组20例．以流式细胞术检测ITP患者外周血T亚群表面凋亡调控因子Fas／FasL的表达率并与对照组（正常健康志愿者20例）相同指标进行比较．结果：CD4^＋及CD8^＋外周血T亚群表面凋亡调控因子Fas／Fasl表达率ITP瘀血阻络组、血热妄行组治疗前与对照组相比较显著增加（P〈0．05）,血热妄行组治疗后显著下降,瘀血阻络组略有上升,但差异无显著性．CD4^＋及CD8^＋外周血T亚群表面凋亡调控因子Fas／Fasl表达率ITP阴虚火旺组、气虚不摄组治疗前与对照组相比较有所增加,治疗后略有上升,但差异均无显著性．结论：ITP患者中医辨证分型与Fas／FasL表达存在相关性．ITP患者较高的T亚群表面凋亡调控因子Fas,Fasl值,提示好的预后．     

胃癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞检测的临床意义

目的：探讨胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性检测的临床意义。方法：采用流式细胞仪测定胃癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的活性,以正常人作对照分析。结果：胃癌患者外周血CD3^＋、CD4^＋、NK细胞数量及CD4^＋／CD8^＋比值较正常对照组均明显下降（P〈0．05）,而CD8^＋细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞业群和NK细胞数量的改变与胃癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3^＋、CD4^＋及NK细胞数量CD4^＋／CD8^＋细胞比值越低,CD8^＋细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异（P〈0．05）。结论：检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于胃癌患者的免疫状态监测。     

再生障碍性贫血造血细胞Fas抗原表达与T淋巴细胞功能的研究

目的 研究造血细胞凋亡与T淋巴细胞免疫在再生障碍性贫血(再障，Aplastic anemia，AA)发病机制中的作用及两者相关性。方法 采用流式细胞仪测定40例AA患者和15例非血液、免疫系统疾病对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)的总CD34^ 、CD34^ Fas^ 、CD34^ Fas^-、CD3^ 、CD8^ 、CD3^ 、CD3^ CD25^ 标记值。结果 (1)与对照组比较，AA组总CD34^ 细胞％明显减少而其Fas表达率(以占总CD34^ 细胞％为计)明显增高。(2)AA组CD34^ 细胞％数与其Fas抗原表达率无明显负相关。(3)AA组T细胞％明显增多，且以CD8^ 细胞和CD3^ CD25^ 细胞增多为主。(4)AA组CD34^ 细胞％数与其T细胞活化状态无显著负相关。(5)AA组CD34^ 细胞Fas表达率与其T细胞活化状态无显著正相关。结论 AA骨髓存在着造血细胞数量减少和T淋巴细胞亚群数量、功能的异常，造血细胞数量减少还可能与Fas以外途径诱导的凋亡过度有关。骨髓造血细胞凋亡过度可能有活化T淋巴细胞免疫以外的途径诱导Fas途径或活化T淋巴细胞可以通过Fas之外的途径诱导造血细胞凋亡。     

HIV感染对记忆型和处女型CD4+T细胞上CD95的影响

目的：了解CD95在HIV感染者记忆型和处女型CD4^-T细胞表面的表达情况，探讨Fas／CD95在HIV感染中的作用。方法：采用流式细胞检测仅(FACS)对HIV感染者外周血CD4^ T细胞表面CD95、CD45RA、CD45RO的表达进行分析，用ENSA检测血清中Fas水平。结果：HIV感染后，血清Fas水平随疾病的进展而逐渐升高，同时伴有处女型T细胞表面CD95表达增高以及记忆型T细胞CD95表达逐渐下降。结论：Fas参与了HIV的感染过程。研究Fas和CD95、CD45RA、CD45RO之间的关系，可以加深对HIV致病机制的认识，并可了解疾病的进展情况和指导治疗。     

狼疮性肾炎不同中医证型Fas表达与凋亡的关系

目的探讨狼疮性肾炎（LN）不同中医证型肾组织、外周血淋巴细胞Fas表达与凋亡的关系。方法选择LN患者86例，行Fas、Bax、PCNA免疫组化检查，根据肾组织病变程度分为LNI～Ⅱ型和Ⅲ～Ⅳ型2组，ELISA检测sFas，流式细胞仪检测PBMC凋亡率、CD3^＋CD4^＋Fas等指标。结果①2组间PCNA、Fas在肾小球中表达有显著性差异，但Bax表达无显著差异；（多LN患者热毒炽盛型外周血PBMC凋亡率增高（P〈0．01）；2个证型组外周血CD3^＋CD4^＋，表达较正常组显著增多（P〈0．01）。结论LN患者热毒炽盛型肾小球内系膜细胞同时存在增生与凋亡2种状态,由于热毒炽盛型外周血sFas表达增多，抑制了Fas／sFas介导的凋亡，使肾小球内系膜细胞增生大于凋亡。     

类风湿关节炎患者B细胞上Fas受体表达与疾病活动度相关性研究

目的 测定类风湿关节炎（RA）患者B淋巴细胞表面Fas及可溶性Fas/FasL（sFas/sFasL）的表达,研究B淋巴细胞Fas受体在RA发病中的作用。方法 流式细胞术检测CD20⁺标记的B淋巴细胞及Fas的表达,酶联免疫吸附试验检测sFas/sFasL的水平。结果 RA组血清及关节液sFas/sFasL水平均高于对照组（P<0.01）,RA组外周血Fas表达率高于对照组（P<0.01）,CD20⁺B淋巴细胞表面受体Fas表达率低于对照组（P<0.01）。结论 RA中sFas、sFasL表达升高,可能通过抑制致病淋巴细胞凋亡,促进RA发病;RA发病中T/B淋巴细胞比例紊乱,外周血淋巴细胞Fas升高而B淋巴细胞Fas表达降低,可能是由sFas/sFasL升高引起。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-10与T细胞凋亡的关系研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清IL-10与T细胞凋亡的关系.方法:采用ABC-ELISA法检测SLE患者血清IL-10含量;三色荧光流式细胞术检测患者外周血中CD3 、CD4 、CD8 T细胞亚群及其Fas、FasL的表达和早期凋亡,并分析其与血清IL-10水平的相关性.结果:SLE患者血清IL-10水平明显升高,并与SLE活动指数(SLEDAI)和血清中抗ds-DNA抗体呈正相关;外周血中T细胞CD4 亚群比例下降、CD4 /CD8 的比值降低,CD3 、CD4 、CD8 T细胞Fas、FasL的表达均增高,T细胞尤其是CD4 亚群凋亡增加,以上变化以活动性SLE更为显著;SLE患者血清IL-10水平与CD4 /CD8 细胞比值呈负相关,与T细胞FasL表达异常增加和CD4 T细胞亚群凋亡显著增多呈正相关.结论:SLE异常增高的IL-10促使T细胞高表达FasL,诱导CD4 T细胞凋亡,参与了SLE的病理进程.     

终末期肾病患者外周血T细胞凋亡及Bcl-2、Fas表达的研究

目的研究终末期肾病(ESRD)患者外周血T细胞的凋亡、Fas、Bcl-2的表达以及不同透析膜对其的影响。方法应用流式细胞术检测10例ESRD未透析(ND)患者、45例维持性血液透析患者分别采用醋酸纤维素膜(CA)、低通聚砜膜(PS-LF)、高通聚砜膜(PS-HF)、以及8例健康对照组(HC)的外周血T细胞经植物血球凝集素刺激培养24h后的凋亡率,免疫组化检测T细胞Bcl-2、Fas的表达。结果ESRD患者各组T细胞的凋亡率高于HC组(P<0.01),各透析组以CA组最高,PS-HF组最低(P<0.05);ESRD患者各组T细胞Bcl-2的表达低于HC组(P<0.01),各透析组以PS-HF组最高,CA组最低(P<0.01),Bcl-2与T细胞凋亡呈负相关(r=-0.83,P<0.01);ESRD患者各组T细胞Fas的表达高于HC组(P<0.01),各透析组以CA组最高,PS-HF组最低(P<0.01),Fas与T细胞凋亡呈正相关(r=0.81,P<0.01)。结论ESRD患者存在外周血T细胞凋亡加速,凋亡途径与Fas表达上调、Bcl-2表达下调有关。维持性血液透析患者T细胞凋亡不仅与透析膜的生物相容性有关,还与透析膜的通透性有关。     

艾迪注射液对晚期肺癌患者外周血淋巴细胞凋亡及Treg细胞的影响研究

目的:观测艾迪注射液对晚期肺癌患者外周血淋巴细胞凋亡及Treg细胞的动态变化,探讨其对晚期肺癌患者免疫功能的影响。方法:收集2004年7月～2011年9月晚期肺癌患者86例,随机分为艾迪治疗组52例,非艾迪治疗组34例,并以健康志愿者作为对照组。以流式细胞术动态检测各试验组在使用艾迪15 d、30 d、60 d的外周血单个核细胞(PBMC)中淋巴细胞凋亡率及Treg细胞(CD4+CD25+T cell)数量的变化。结果:肺癌患者外周血中淋巴细胞凋亡率明显高于对照组及艾迪治疗组。经艾迪治疗后的肺癌患者淋巴细胞凋亡率明显下调。肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞的数量明显高于对照组及艾迪治疗组,艾迪注射液治疗后肺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞的数量可明显下调。结论:艾迪注射液能降低晚期肺癌患者外周血淋巴细胞凋亡率。下调CD4+CD25+T细胞的数量,可能有改善晚期肺癌患者免疫状态的作用。     

SIVmac239病毒经不同途径感染恒河猴急性期CD4+T细胞数量与其细胞表面CD95表达量的变化关系

目的研究SIVmac239病毒分别通过直肠(rectal infection:IR)及静脉(intravenous infection:IV)感染恒河猴,在感染急性期外周血CD4+T细胞数量与其细胞表面的死亡受体(CD95)表达量之间的变化关系。方法将SIVmac239经直肠及静脉途径各感染14只恒河猴。监测病毒载量、CD4+T淋巴细胞数量及CD4+/CD8+比值的变化,从而明确感染。同时,在感染急性期内9个时间点采集静脉血,并利用流式细胞术分析CD4+T细胞表面CD95的表达量。结果静脉组恒河猴CD95表达量于第2天开始升高,第7天达到最高,同时CD4+T淋巴细胞数降到最低。直肠组恒河猴也于感染后第2天开始升高,但第10天才达到最高值,CD4+T淋巴细胞数于第17天降到最低。同静脉组相比,直肠组CD95表达量增高及CD4+T细胞数降低均较晚出现,且其CD4+T细胞数量降至最低晚于CD95表达量达到峰值一周后出现。结论 SIVmac239经直肠及静脉感染恒河猴后,伴随CD4+T细胞表面CD95表达的升高,CD4+T细胞数量逐渐下降。但不同感染途径对CD4+T细胞表面CD95的表达量与CD4+T淋巴细胞数的变化不尽相同,这可能由于不同感染途径造成CD95在感染急性期CD4+T细胞数量降低中发挥的作用不同。     

共信号分子CD28、ICOS在慢性乙型肝炎病人外周血T淋巴细胞表面的表达及意义

目的:观察慢性乙型病毒性肝炎病人外周血T淋巴细胞表面共信号分子CD28、ICOS的表达水平,探讨CD28、ICOS在乙型肝炎病毒慢性感染中的意义.方法:选取慢性乙型病毒性肝炎病人56例作为观察组,纳入同期20名健康体检者作为对照组.流式细胞术检测受试者外周血T淋巴细胞表面CD28、ICOS的表达水平.结果:2组外周血C...