脑出血患者血肿周围组织病理及超微结构变化的动态观察

目的观察脑出血患者血肿周围组织普通病理及超微结构的动态变化。方法对30例脑出血患者采取非功能区人颅直视手术，清除血肿前于血肿旁约1cm处取少许脑组织作为实验组，按发病到手术的时间分为6h以内组6例，6～12h组7例，12～24h组5例，24～48h组3例，48～72h组3例，3～4d组3例，5d组2例，8d组1例。从12h以内组中的7例患者于手术入颅路径上远离血肿处取少许脑组织作为对照组。应用光镜_硐J电镜观察脑组织普通病理及超微结构的动态变化。结果对照组脑组织形态和结构基本正常。实验组6h以内脑组织有轻微损伤。6h以后脑组织损伤逐渐加重。24～48h损伤达高峰，光镜显示脑细胞和纤维水肿明显，细胞形态不完整，核固缩，炎性细胞侵润明显；电镜显示神经元细胞核变空染色质聚集，线粒体肿胀，嵴变短或消失，核糖体减少，次级溶酶体增加，细胞变空，细胞膜不完整，胶质细胞核固缩。72h以后损伤逐渐好转，5d时损伤与6～12h组相似，8d时基本好转，与6h以内组基本接近。结论脑出血后血肿周围脑组织继发性损伤早期就有病理改变，损伤高峰在24～72h，与一般脑出血临床神经功能损害的变化规律基本一致。     

脑出血患者血肿周围组织细胞因子与细胞凋亡相关基因表达的动态观察

目的探讨脑出血患者血肿周围组织细胞因子表达和细胞凋亡的关系。方法对30例脑出血患者采取非功能区漏斗式入颅，从入颅路径过程中必须切除的脑组织里取靠近血肿旁约1cm脑组织作为实验组，按发病到手术的时间将实验组分为6h以内组6例、6～12h组7例、12～24h组5例、24～72h组6例、72h以上组6例；取7例远离血肿的脑组织作为对照组（6h以内6例，6～12h1例）。应用HE染色、免疫组化染色及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察组织病理，肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）等细胞因子和Tunel、促凋亡相关基因（Bax）、抑凋亡相关基因（Bcl-x）的表达情况。结果HE染色光镜观察显示：对照组、6h以内组血肿周嗣组织基本正常，6～12h组损伤较轻，12～24h组损伤较重，24～48h组损伤严重，以后逐渐好转。免疫组化显示：TNF-α蛋白和mRNA及IL-1β和IL-6mRNA表达于12～72h达高峰（P〈0．01），以后逐渐降低。Tunel、Bax蛋白和mRNA表达在12～72h达峰值（P〈0．05，P〈0．01）。Bcl-x蛋白及mRNA表达在12～72h有升高趋势，但无统计学差异。相关分析显示：TNF-α蛋白和mRNA、IL-1β及IL-6mRNA的表达与Tunel、Bax蛋白和mRNA的表达呈显著正相关（P〈0．01），与Bcl-x蛋白和mRNA表达无相关性（P〉0．05）。结论脑出血后血肿周围组织炎性细胞因子的表达与细胞凋亡密切相关，并与组织病理损伤程度相一致。     

高血压脑出血患者血肿周围血-脑屏障超微结构的观察

目的 动态观察高血压脑出血后不同时间血肿周围血-脑屏障（BBB）的超微结构。方法 选取10例基底节区高血压脑出血患者,通过CT导向脑立体定向仪在血肿周围取脑组织标本,电镜下观察BBB的超微结构。结果：脑出血12h后BBB胶质足板水肿,胞饮水泡增多,24h后内皮细胞线粒体肿胀,嵴断裂,48h后足板水肿明显,内皮细胞水肿,细胞核增大;72h胞质稀疏,基底膜断开;5d内皮细胞胞膜及核膜溶解,毛细血管塌陷。结论 脑出血早期预防BBB的损害是治疗脑出血的重要方面。     

脑出血后不同时间血肿周围病理及超微结构变化的研究

目的 研究高血压脑出血后不同时间血肿周围病理及超微结构变化.方法 按时间因素将手术的100例脑出血分为＜6h(A组)、6～23 h(B组)、24～71 h(C组)、≥72 h(D组)4组；按血肿量分为30～49 ml(Ⅰ组)、50 ～69 ml(Ⅱ组)、70～ 89 ml(Ⅲ组)、≥90 ml(Ⅳ组)4组,分别在光学和透射电镜下观察不同时间段血肿周边靠近皮层区的脑组织超微结构变化. 结果 光镜下可见血肿区与正常脑组织间细胞不同程度水肿,星形细胞肿胀；电镜下可见血肿周围组织在出血早期星形细胞胞体和周边足突肿胀；24 h星形细胞肿胀明显,部分变性、坏死,神经细胞轻度变性,血脑屏障破坏；72 h星形细胞高度肿胀,神经细胞变性.相关分析显示,病理和超微结构变化与时间呈显著正相关(x21=38.343、x22 =48.645,P＜0.001),而与血肿量无关(P＞0.05).结论 不同时间段血肿周围脑组织的损害程度不同,与出血时间呈线性趋势.     

脑出血患者血肿周围脑组织水通道蛋白-4的表达变化

目的：探讨脑出血血肿周围脑组织水通道蛋白-4（AQP4）的表达规律及其与脑水肿形成的关系。方法：32例行颅内血肿清除术患者，按发病至手术时间不同分为〈6h、6～24h、24～72h和〉72h组。取术中获得的脑组织做病理标本，检测AQP4的表达变化，并观察其组织病理及超微结构变化。结果：〈6h组脑组织轻微水肿，AQP4表达呈弱阳性，6h后水肿逐渐加重，AQP4表达开始增强，至24～72h达高峰。此后，AQP4表达下降，水肿减轻。结论：脑出血后AQP4表达呈动态变化与脑组织水肿程度一致，提示AQP4在脑出血患者脑水肿的发生、发展中起着重要作用。     

脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞间黏附分子的表达与脑水肿的关系

目的探讨脑出血后血肿周围脑组织炎性损伤的病理发展过程。方法健康Wistar大鼠48只随机分成脑出血组、对照组。分别于制模后3h、24h、72h、7d取血肿周围脑组织检测细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达,并对出血侧脑组织含水量进行测定。结果脑出血组各时相点出血周围组织均有ICAM-1阳性反应的血管和神经细胞,与对照组比差异有极显著性(P<0·01);与对照组比较,脑出血3h组血肿周围组织含水量即开始升高,24h明显增加(P<0·01),72h仍高于对照组,7d时接近对照组。结论ICAM-1在血肿周围的高表达可能是脑出血后血肿周围组织受损的主要原因之一,ICAM-1促进白细胞浸润,释放大量氧自由基,继而导致脂质过氧化加重脑组织损伤,并参与脑水肿的形成发展。     

高血压脑出血早期血肿周围脑组织细胞凋亡与凝血酶表达相关性的研究

目的探讨高血压脑出血(HICH)早期血肿周围脑组织细胞凋亡与凝血酶表达的关系。方法取36例高血压脑出血患者血肿周围脑组织作为实验组,按发病至手术的时间分为5组:<6h(7例)、6~12h(11例)、12~24h(8例)、24~48h(6例)、48~72h(4例)。另将侧脑室肿瘤患者经皮层入路取得的正常脑组织作为对照组。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测凝血酶表达。结果对照组脑组织基本无TUNEL阳性细胞(0.32±0.037);<6h组有轻微表达(7.19±2.53,P<0.05),发病6h后逐渐增高(15.11±3.69,P<0.01),12~24h增高显著(28.26±7.83,P<0.01),并于24~48h达高峰(53.79±6.35,P<0.01),48~72h组有所回落,但仍维持较高水平(38.23±3.29,P<0.01)。凝血酶表达变化与此一致。相关分析显示:细胞凋亡与凝血酶表达呈显著正相关(r=0.7451,P<0.05或P<0.01)。结论H ICH患者血肿周围脑组织中存在细胞凋亡,凝血酶表达是细胞凋亡过程中的一个关键事件     

脑出血后血脑屏障紧密连接蛋白occludin的表达变化

目的 探讨脑出血后血脑屏障微血管内皮细胞间紧密连接蛋白occludin的表达变化. 方法 将SD雄性大鼠按随机数字表法分为正常对照组和脑出血组,再按时间因素将脑出血组分为出血后6h、24h、48h、72h、7d、14d6个亚组.采用脑内注入自体血法制作脑出血模型.HE染色观察脑出血后血肿周围脑组织的形态学改变;透射电镜观察脑出血后血肿周围紧密连接的超微结构改变;免疫荧光染色检测脑出血后血肿周围紧密连接蛋白occludin的表达分布状况;定量RT-PCR检测脑出血后血肿周围脑组织中occludin mRNA的表达状况. 结果 与正常对照组相比,脑出血组血肿周围脑组织出现水肿,在48 h左右尤为明显,局部可见明显脑细胞坏死及炎细胞浸润.脑出血后血肿周围紧密连接发生明显破坏,内皮细胞间出现裂隙.免疫荧光染色结果显示:正常对照组紧密连接蛋白occludin呈强阳性表达.脑出血后6hoccludin的表达即开始下降,呈阳性表达;脑出血后24～72h occludin的表达维持在较低水平,呈弱阳性表达.定量RT-PCR结果显示:脑出血后血肿周围脑组织中occludin mRNA相对含量明显降低,在6～72 h持续维持在较低水平,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 脑出血发生后,紧密连接蛋白occludin 的表达下降,这可能是脑出血发生后血脑屏障破坏及脑水肿发生发展的重要分子基础之一.     

脑出血大鼠脑组织ICAM-1的表达与脑含水量的变化及药物对其影响

目的探讨脑出血后血肿周围脑组织炎性损伤的病理发展过程。方法健康Wister大鼠72只随机分成脑出血模型组、假手术组、麝香组,分别于3h、24h、72h、7d取血肿周围脑组织检测细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的表达及出血侧脑组织含水量的测定。结果与假手术组比较,脑出血组ICAM-1从3h起即有表达,72h达高峰,持续7d仍有表达(P<0.05)。脑含水量在24h后明显增加(P<0.01),7d时与假手术组无显著性差异。结论ICAM-1在血肿周围的高表达推测是脑出血后水肿形成和缺血性损伤的主要原因之一。减少ICAM-1的表达和脑含水量推测是复方麝香注射液的药理机制。     

急性脑出血患者血肿周围组织IL-17与NF-κB p65的表达

目的分析急性脑出血患者血肿周围组织中IL-17和NF-κB p65表达水平,探讨IL-17/NF-κB信号通路的生物学意义。方法将赤壁市人民医院2014-03—2015-09收治的48例急性脑出血患者依照手术取材时间不同分为4组(6h组,6~24h组,24~72h组,72h组),6例远离血肿病灶区的脑组织作对照组;检测IL-17mRNA及NF-κB p65核蛋白水平。结果对照组与6h组IL-17mRNA表达水平比较无明显差异(P0.05),其余三实验组IL-17 mRNA表达水平显著高于对照组(P0.05);24~72h组血肿周围组织中IL-17 mRNA水平最高,差异均有统计学意义(P0.05);实验组血肿周围组织中NF-κB p65水平均显著高于对照组(P0.05);24~72h组血肿周围组织中NF-κB p65水平最高(P0.05)。结论急性脑出血患者血肿周围组织通过上调IL-17及NF-κB p65的表达加重炎性反应,诱发细胞损伤,造成病情恶化。     

脑出血血肿灶周缺血再灌注时磁共振灌注成像变化与核因子-kB表达的相关性研究

目的 探讨脑出血后血肿灶周脑血流量动态变化与核因子-κB（NF-κB）表达的相天性。方法 将健康家犬27只随机分为对照组（3只）和脑出血组（24只）,分别在3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d、15d共8个时间点进行以下检测：（1）磁共振（MR1）灌注加权成像（PWI）扫描,动态观察血肿灶周局部脑血流量（rCBF）变化;（2）采用免疫组化SP法检测血肿灶周NF-κB表达,以细胞胞浆和胞核呈棕黄色着色为阳性细胞,并以NF-κB阳性颗粒从胞浆移至胞核为NF-κB活化的标志。结果 （1）PWI显示血肿灶剧12h之内rCBF明显降低,呈低灌注状念,12～24h rCBF回升,出现血流再灌注,或高灌注现象,48h以后接近对侧,呈持续稍低灌注状态。（2）NF-κB3～6h出现表达,主要在血肿灶周区;12-48h显著增多,72h～7d开始减少,15d极微量。在12～48h的高峰期,大量的神经元、神经胶质细胞表达NF-κB,且可看到活化状态的NF-κB。结论 脑出血后血肿灶剧缺血再灌注能够引起NF-κB表达增高且活化,进一步产生的炎性和免疫反应是导致血肿灶周缺血再灌注损伤的主要原因。     

大鼠脑出血后基质金属蛋白酶的动态表达及七叶皂苷钠对其表达的影响

目的 观察大鼠脑出血(ICH)后基质金属蛋白酶-2( MMP-2)、MMP-9蛋白动态表达及其与血肿周围脑组织含水量的关系,以及观察七叶皂苷钠对MMP-2、MMP-9表达的影响.方法 Wistar大鼠250只随机分为4组:正常对照组10只、假手术组、ICH组和七叶皂苷钠治疗组各80只,于制模后6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、120 h、7 d、15 d 8个时间点,测定各组血肿周围脑组织含水量、MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果 治疗组神经功能缺损较ICH组明显改善,尤以6 h～7 d时明显(P<0.01～0.05);6～120 h各治疗组血肿周围脑组织含水量较ICH组明显减少(P<0.01～0.05);ICH后MMP-2蛋白表达在6 h达到高峰,12 h时下降,与正常对照组相比具有统计学意义 (均P<0.01),治疗组MMP-2蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少(均P<0.01);ICH后MMP-9蛋白表达在6 h开始上升,24～48 h达高峰,72 h时下降,与正常对照组相比,具有统计学意义(均P<0.01),其表达水平与血肿周围脑组织含水量呈正相关 (r=0.949, P<0.05);治疗组MMP-9蛋白表达在各时间点较ICH组明显减少(均P<0.01).结论 大鼠ICH后MMP-2、MMP-9蛋白的表达是ICH后早、中期脑水肿形成主要因素,七叶皂苷钠能降低MMP-2、MMP-9蛋白表达和脑组织含水量,对ICH具有保护作用.     

黄芪注射液对脑出血大鼠细胞凋亡影响的研究

目的 研究脑出血大鼠细胞凋亡的规律及黄芪注射液对出血后脑组织含水量和血肿周围区细胞凋亡的影响.方法 采用肝素化Ⅶ型胶原酶脑内注入法制作大鼠(160只)脑出血模型.制模后根据药物干预的时间随机分成4个治疗组(手术同时组,术后6 h组、12 h组、24 h组,每组32只)和出血对照组(共32只).各治疗组每日经腹腔给予黄芪注射液1次,各组分别于第4 d及第7 d处死.再从上述5组中各选取12只大鼠用于脑组织含水量测定(干湿法),观察不同时间开始治疗对大鼠脑组织含水量、血肿周围区细胞凋亡(脑组织切片TUNEL荧光染色)的影响.结果 治疗组[出血同时组(第4 d)、6 h组(第4 d、7 d)、12 h组(第4 d)]脑组织含水量较出血对照组明显减少(均P<0.01);脑出血后6 h血肿周围凋亡细胞开始出现,3 d达高峰,7 d后明显减少;各治疗组血肿周围细胞凋亡均明显降低,出血同时治疗组和6 h治疗组比24 h治疗组细胞凋亡率明显降低(均P<0.01);脑出血后存在血管内皮细胞凋亡.结论 脑出血后血肿周围神经细胞凋亡是脑出血后继发性神经损伤机制之一;黄芪注射液治疗脑出血,具有减轻脑水肿和神经细胞凋亡作用,以早期用药疗效更好.     

实验性脑出血血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达及其与脑水肿的关系

目的探讨实验性脑出血(ICH)血肿周围脑组织基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达及其与脑水肿的关系。方法采用自体血注入法建立大鼠ICH模型,制模后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h、72h、7d共9个时间点分别用干湿重法测血肿周围脑组织含水量,伊文思蓝(EB)检测血-脑屏障(BBB)通透性,Western Blot方法检测血肿周围组织的TIMP-1的表达;分析三者间的关系,并与假手术组相比较。结果与假手术组比较,ICH后各时间点血肿周围脑组织含水量和EB含量均明显增加(P<0.05～0.01),均于ICH48h达到高峰,且二者呈正相关(r=0.940,P<0.01);TIMP-1在ICH12～36h表达明显减低,ICH1～24h TIMP-1表达量与脑组织含水量以及EB含量呈负相关(r=-0.922,-0.950,均P<0.05)。结论大鼠ICH后血肿周围脑组织TIMP-1表达下调,可能促进了ICH早期的脑水肿形成。     

脑出血患者血肿周围组织中NF-κB的病理学观察

目的 探讨脑出血患者脑组织中NF-κB(nuclear factor-kappaB)的表达特征及意义.方法 筛选临床脑出血患者死亡病例21例,按出血时间(发病至死亡时间)分为6组:0～6h、6～12h、12～24h、24～48h、48～72h、72～96h.自出血灶边缘13cm处、海马和大脑皮层及出血灶对侧相应部位的脑组织取材,出血灶对侧设为对照组.采用免疫组织化学染色观察NF-κB在脑组织中的表达.结果 脑出血后6h时出血灶周围即有NF-κB蛋白表达(5.27±0.12),6～12h表达增加(8.52±0.66),24～48h时达高峰(34.47±2.81),72～96h表达减少(19.50±2.69),与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),但与0～6h组比较差异有统计学意义(P<0.05).NF-κB蛋白还表达于两侧海马和大脑皮层.结论 脑出血后脑组织中NF-κB表达增加,对脑水肿的形成可能有一定的促进作用.

Abstract：

Objective To study the expression and significance of NF-κB in human brain after intracerebral hemorrhage. Method 21 human clinical fatal cases with ICH were divided into 6 groups according to different onset time :0 6h,6 12h, 12 24h,24 48h,48 72h and 72 96h group. The brain tissues were removed frome 1 3cm away from the margin of the hemorrhagic lesion, hippocampus and cerebral cortex of the side of hematoma, as well as tissues from the corresponding areas of other side were taken as controls. NF-κB expression was detected by immunohistochemistry. Result There was little expression of NF-κB at 6h after ICH (5.27±0.12). The expression of NF-κB begun to increase at 6～12h (8.52±0.66), reached the peak at 24～48h (34.47±2.81 ), and gradually decreased at 72～96h ( 19.5±2.69). There had no significant difference compared with normal contralateral regions (P > 0. 05 ), but had significant difference compared with 0 -6h group (P < 0.05). There was expression of NF-κB in hippocampus and cortex. Conclusion The increased expression of NF-κB after intracerebral hemorrhage is probably correlated with the brain edema formation in the brain tissues around the hematoma.     

红细胞致脑出血后血肿周围脑组织HO-1的表达

目的　观察红细胞致脑出血后血肿周围脑组织 HO- 1的表达、脑组织含水量的变化。方法　采用立体定向法将自体浓缩红细胞注入大鼠脑基底节区制作实验动物模型 ,通过免疫组化、干湿重法 ,观察血肿周围脑组织 HO- 1的表达及脑组织含水量。结果　血肿周围脑组织 HO- 1在 6 h即开始表达 ,2 4 h明显增多 ,2 4～ 4 8h达高峰 ,脑组织含水量在 2 4 h无明显变化 ,4 8h有所增加 ,72 h显著增加并达到高峰 ,随后逐步下降。二者成正相关 ( r=0 .773,P<0 .0 5 )。结论　 HO- 1的表达在红细胞致脑水肿的形成过程中起着重要的作用     

脑出血24h后不同蛋白酶激活受体表达的初步筛查

目的初步探讨脑出血后血肿周围组织的不同蛋白酶激活受体（PARs）的表达情况。方法Wistar大鼠20只,随机分为脑出血组（采用2次注血/2次退针法建立脑出血大鼠模型,右侧尾状核注入自体血50μL）和对照组（右侧尾状核注人生理盐水50μL）。术后24h将大鼠处死取脑,制作冰冻切片,采用免疫荧光染色（间接法）检测血肿周围组织PAR-1、PAR-2、PAR-3、PAR-4阳性细胞的表达情况。结果①脑出血组,出血后24h血肿周围组织PAR-1表达明显增多,与对照组比较P〈0．01。②恼出血组,出血后24hPAR-2主要在血管内皮细胞表达,与对照组比较无明显差异。③脑出血组,出血后24h无PAR-3、PAR-4荧光表达,与对照组比较无明显差异。结论脑出血24h后血肿周围组织PAR-l表达增加。     

大鼠脑出血后脑组织蛋白酶连接素-1、凝血酶和蛋白酶激活受体-1表达变化的实验研究

目的 研究大鼠实验性脑出血后脑组织内蛋白酶连接素-1(PN-1)、凝血酶及蛋白酶激活受体-1(PAR-1)的表达及变化规律. 方法采用自体血注入法制备大鼠脑出血模型,Westernblot方法检测假手术组及脑出m模型组不同时程(3 h、6 h、10 h、12 h、24 h、48 h、120 h)PN-1、凝血酶和PAR-1蛋白的表达水平. 结果假手术组可以检测到少量PN-1、凝血酶和PAR-1蛋白的表达;PN-1于脑出血后3 h开始增加,此后持续上升,10 h达高峰,后逐渐回降;凝血酶于脑出血后12h显著增加,48 h达高峰;PAR-1于脑出血后3 h即显著增加,48 h达高峰,120 h仍处于较高水平.脑出血后各时间点PN-1、凝血酶和PAR-1蛋白的表达量与假手术组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05).PN-1与PAR-1在脑出血后10h时呈负相关(r=-0.900,P<0.05),PN-1与凝血酶在脑出血后12h、120h时呈负相关(r=-0.900,P<0.05:r=-0.895,P<0.05). 结论脑出血后增多的凝血酶通过不断激活PAR-1从而介导了脑出血后的神经损伤过程,与此同时凝血酶抑制剂PN-1也大量表达,一定程度上抑制凝血酶过表达所引起的毒性效应:脑出血后三种蛋白的表达增加可能与脑出血后神经损伤的发病机制有关.