应用聚合酶链反应快速诊断巨细胞病毒感染

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测学龄前儿童尿标本中的巨细胞病毒（ＨＣＭＶ），并和常规细胞培养（ＣＣＣ）、早期抗原检测（ＤＥＡ）两法进行了比较。结果表明，１０５份尿标本中有４１份ＣＣＣ出现ＨＣＭＶ特征性细胞病变（ＣＰＥ），其中３８份标本ＰＣＲ检测为阳性，敏感性为９２．７％；其余６４份ＣＣＣ阴性，有６份ＰＣＲ检测阳性，特异性为９０．６％。与ＤＥＡ相比，ＰＣＲ检测的特异性和敏感性分别为９３．６％，９５．２％；提示ＰＣＲ检测临床标本中ＨＣＭＶ，不仅敏感特异，而且与ＣＣＣ，ＤＥＡ两法相比快速简便。     

套式聚合酶链反应加限制酶谱分析检测母婴垂直传播巨细胞病毒

目的：克服一次性ＰＣＲ假阳性及非特异性条带干扰。方法：建立套式ＰＣＲ技术，对１０５份母－脐配对血进行套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ以及特异性ＩｇＡ测定。结果：母血ＨＣＭＶＤＮＡ阳性６份，脐血３份，母－脐传播率为３／６。３对被证实为母婴垂直传播ＨＣＭＶ的标本中，２对套式ＰＣＲ、病毒分离、特异性ＩｇＭ及ＩｇＡ均阳性，１对套式ＰＣＲ病毒分离，特异性ＩｇＡ阳性，但特异性ＩｇＭ阴性。结论：套式ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ的检测手段，适用于孕妇及胎儿ＨＣＭＶ感染的监测。     

孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的分子生物学诊断

目的 :建立套式聚合酶链反应 ( n PCR)检测人巨细胞病毒 ( HCMV)。方法 :建立套式 PCR检测 HCMV DNA,同时结合病毒分离检测临床标本。结果 :在 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及套式 PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但套式 PCR阳性。对 58例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,套式 PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论 :套式 PCR是一种临床检测HCMV的快速有效手段。     

聚合酶链反应检测患儿尿标本中的巨细胞病毒DNA

本文建立了聚合酶链反应(PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)方法,探讨了该方法的某些实验条件。用PCR检测24例临床患儿尿标本。证明PCR方法特异、敏感、简便而快速。同科不同属病毒如HSV、EBV等以及人源正常细胞均无假阳性结果:最小检出量可达0.1fg DNA,相当于6个基因拷贝;用水浴箱手控时间即可进行PCR循环,30次循环仅需97min30s;PCR和DNA杂交检测尿标本中HCMV阳性例数分别为20和14例。该结果证明HCMV感染儿童的广泛性和严重性,初步表明儿童肾病综合症与HCMV有关。     

生物素标记组合探针杂交检测患儿尿液以诊断巨细胞病毒感染

利用 HCMV AD 169株的克隆 DNA 片段制成生物素标记的组合探针进行临床标本的 HCMV DNA 的杂交检测,此探针特异性强,不与其它类 DNA 发生非特异性杂交,可检出25pg 同源 DNA,100～500个 HCMV 感染细胞或2.57LgTCID50 HCMV 病毒悬液.杂交法结果与病毒分离结果符合率极高.初步用于临床尿标本检测得出,先天畸型,乳儿肝炎及激素治疗三组患儿中,HCMV 的排毒率分别为100%(3/3),61%(11/18)和75%(3/4).提示 HCMV 可能是临床部分患儿的重要致病源.同时表明杂交法对 HCMV 感染的检测是快速、特异及敏感的.     

器官移植术后受者人巨细胞病毒的PCR检测

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３０例器官移植受者血、尿标本进行人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ检测。结果显示，１６例ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，阳性率５３．３％。提示ＰＣＲ是一种敏感特异、简便快速、能早期诊断ＨＣＭＶ感染的方法，适用于监视器官移植病人术后ＨＣＭＶ感染。     

用聚合酶链反应技术检测流产和死胎组织的巨细胞病毒与弓形虫

作者通过人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）分离、套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及限制酶切分析、弓形虫分离及一次性ＰＣＲ，对不明原因的流产、死胎组织进行ＨＣＭＶ与弓形虫检测。结果发现，２８份流产、死胎组织中，１例死胎肺组织ＨＣＭＶＤＮＡ阳性，但病毒分离阴性；１例胎儿心、肺、脑、肝、肾、眼组织弓形虫ＤＮＡ阳性，其脑、肺、眼、肝组织经动物接种后，在小白鼠腹水中找到弓形虫滋养体，但心、肾结果阴性。结果提示：临床上有些不明原因的流产、死胎可能是由于胎儿感染ＨＣＭＶ或弓形虫所致。ＰＣＲ技术较常规病原体分离敏感、快速，适合于ＨＣＭＶ／弓形虫感染所致流产、死胎的早期诊断。     

用多聚酶链反应方法检测IUD诱发出血的子宫内膜人巨细胞病毒感染的研究

用聚含酶链反应(PCR)技术检测73份置宫内节育器(IUD)诱发出血人群及50例置IUD后月经周期正常人群的子宫内膜病毒分离培养物中的HCMV—DNA,有9份为HCMV—DNA 阳性,其中8份是病毒分离阳性,用细胞学鉴定及单克隆抗体鉴定为HCMV,有1份为病毒分离阴性,而PCR检测为阳性.     

丁型肝炎病毒RNA巢式逆转录PCR检测

为了提高丁型肝炎病毒的实验室诊断水平，建立一个高敏感性和特异性的丁型肝炎病毒的检测方法。根据ＧＥＮＢＡＮＫ中ＨＤＶ的核酸序列设计出巢式引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ方法对４０例肝炎患者进行检测。结果：２０例丁型肝炎病毒抗原阳性的ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，１０例丁型肝炎病毒抗体阳性中ＨＤＶＲＮＡ阳性６例，１０例单纯ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性的均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论：巢式逆转录ＰＣＲ可以作为丁型肝炎病毒临床检测的一种方法     

荧光定量聚合酶链反应与免疫印迹法检测人巨细胞病毒

目的比较荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒效果。方法分别应用FQ-PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMV DNA和血清HCMV IgM。结果 42例疑似人巨细胞病毒感染小儿尿HCMV DNA阳性检出率为57.14%,血HCMV IgM阳性检出率为35.71%。前者的诊断阳性率高于后者,差异有统计学意义（χ^2=3.88,P〈0.05）;42例成人尿HCMV DNA阳性检出率为14.29%,血HCMV IgM阳性检出率为71.43%。后者的诊断阳性率显著高于前者,差异有统计学意义（χ^2=28,P〈0.005）;84例患者尿HCMV DNA阳性检出率38.10%,血HCMV IgM阳性检出率48.81%。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ^2=1.96,P〉0.1）。结论 FQ-PCR检测HCMV DNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

聚合酶链反应检测无菌性体液中真菌

目的：评价聚合酶链反应（PCR）直接检测无菌性体液中真菌结果可靠性。方法：采用真菌通用引物，通过PCR对96份临床无菌性体液扩增菌DNA，同时对这些标本进行细菌、真菌培养。结果：PCR诊断无菌性体液真菌感染与培养法完全一致，培养出细菌的标本PCR检测真菌PCR检测真菌DNA均阴性。结论：PCR直接检测无菌性体液中真菌敏感、特异、快速、准确，但不能代替培养法。     

Detection and amplification of Helicobacter pylori urease gene A in gastric biopsies by using nested polymerase (?)hain reaction

A nested polymerase chain reaction(N-PCR)for the spegific detection of Helicobacterpylori(H.pylori)was developed with two primer pairs(nested primers)derived from ureasegene A of H.pylori.The N-PCR was used to detect 21 different samples of H.pylori including20 clinical isolates and 1 reference strain NCTC 14126,but it was negative for other bacterialspecies,showing the N-PCR assay to be 100% specific.Tenfold serial dilution experiments re-vealed the detection of as little as 0.1 fg of H.pylori DNA by N-PCR.To evaluate the PCR as-say for clinical samples,gastric biopsies were tested with N-PCR,and the results were comparedwith those of culture,urease test and histologic examination(reference standard,RS).In 30biopsy specimens,H.pylori DNA sequences were detected by PCR in all of 20(100%)positivetissue and none of the 10 negative tissues.PCR is a specific and sensitive method that can detectthe presence of H.pylori without the need for culture and would have significant importance di-agnostically and epidemiologically.     

对献血者巨细胞病毒感染的研究

目的 了解献血中巨细胞病毒(HCMV)感染状况，并探索一种比较简便的检测方法。方法 用PCR法和DNA杂交法检测同一献血的白细胞及血清中的HCMV—DNA，并用ELISA法检测血清中的HCMV-IgM、IgG(测4个滴度)，连续2a共检测白细胞和血清样本各200人份。结果 PCR法检测白细胞中的HCMV-DNA阳性率分别为63％和70％，DNA杂交法检测的阳性率分别为42％和50％；PCR法检测血清中的HCMV-DNA的阳性率分别为49％和53％，DNA杂交法检测的阳性率分别为33％和39％；HCMV-IgM阳性率2a均为5％；HCMV-IgG阳性率分别为54％和58％。结论 HCMV-IgG抗体可作为HCMV感染的指标。     

FQ—PCR法与IBT法在人巨细胞病毒检测中的价值比较

目的对荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）方法与免疫印迹法（IBT）检测人巨细胞病毒进行比较分析。方法分别应用FQ—PCR和IBT检测疑似人巨细胞病毒（HCMV）感染小儿和成人各42例尿HCMVDNA和血清HCMV IgM。结果42例小儿尿HCMVDNA阳性检出率为57．14％,血HCMV IgM阳性检出率为35．71％。前者的诊断阳性率高于后者（χ2=3．88,P〈0．05）,有统计学差异;42例成人尿HCMVDNA阳性检出率为14．29％,血HCMVIsM阳性检出率为71．43％。后者的诊断阳性率显著高于前者（χ2=28,P〈0．005）,有统计学差异;84例患者尿HCMVDNA阳性检出率为38．10％,血HCMVIgM阳性检出率为48．81％。2种方法检测HCMV活动性感染的差异无统计学意义（χ2=1．96,P〉0．1）。结论FQ—PCR检测HCMVDNA是早期诊断小儿HCMV感染的有效的方法;免疫印迹法检测血清HCMV IgM水平对于判断成人HCMV活动性感染具有一定意义;做人群HCMV普查时,免疫印迹法有较好的应用价值。     

Establishment and analysis of specific DNA patterns in 16S-23S rRNA gene spac er regions for differentiating different bacteria

Objective To establish the specific 16S-23S rRNA gene spacer regions in different bacteri a using polymerase chain reaction (PCR), restriction fragment length polymorphis m (RFLP), DNA cloning and sequences analysis. Methods A pair of primers were selected from highly conserved sequences adjacent to the 16S-23S rRNA spacer region. Bacterial DNA from sixty-one strains of standard bacteria and corresponding clinical isolates representative of 20 genera and 26 species was amplified by PCR, and further analyzed by RFLP, DNA cloning and se quences analysis. Furthermore, all specimens were examined by bacterial cultur ing and PCR-RFLP analysis. The evaluation of these assays in practical clinic practice was also discussed. Results Restriction enzyme analysis revealed one, two or three bands or more observed am ong the 26 different standard strains. The sensitivity of PCR reached 2.5 colony-forming unit (CFU), and there was no cross reaction with human genomic DNA, fungus or virus. Fourt ee n species could be distinguished immediately by PCR, while another 10 species we re further identified by Hinf Ⅰ or Alu Ⅰ digestion. The only difference betwe en K.pneumoniae and E.durans was located at the site of the 779th nucleot ide according to the sequence analysis and only XmaⅢ digestion could distingui sh one from another. Of 42 specimens from septicemic neonates, 15 were identifi e d as positive by blood culture at a rate of 35.7%. However, 27 specimens ident ified as positive by PCR, with a rate of 64.2%, a method significantly more eff ective than blood culture (P＜0.01). Of 6 cerebrospinal fluid (CSF) specim ens, one tested positi ve for S.epidermidis was also positive by PCR, two culture negative were po sitive by PCR and diagnosed as S.epidermidis according to the DNA pattern. One positive for C.neoformans was negative by PCR. The other two specimen s were negative by both PCR and culture. Conclusions The method of detecting bacterial 16S-23S rRNA spacer regions using PCR-RFLP t echniques was specific, sensitive, rapid and accurate in providing a new techniq ue for detecting pathogens in clinical bacterial infections.     

2403份不同类型标本中人巨细胞病毒DNA的检出情况及临床分析

目的 探讨孕妇和婴儿不同类型标本中人巨细胞病毒（HCMV）DNA的检出情况,并进行临床分析。方法 2021年5月至2021年10月收集到在昆明市妇幼保健院检验科采用荧光定量PCR法进行HCMV-DNA检测的临床标本共2 403份,对不同标本来源人群、不同类型标本的HCMV-DNA检出率进行回顾性分析。结果 2 403份不同类型的标本中,乳汁的HCMV-DNA检出率为31.70%,尿液为0.85%,血清为0%。2个年龄段（0～28 d和28 d至6个月）母亲乳汁、尿液标本的检出率随婴儿年龄增加而增高,且差异均有统计学意义（P <0.001）。同时进行了尿液及其母亲乳汁HCMV-DNA检测的221例婴儿中,检出率：乳汁22.62%,尿液0.45%,乳汁的检出率高于尿液。当母亲乳汁标本HCMV-DNA阴性,患儿自身尿液标本为阳性的占0.58%,阴性占99.42%;母亲乳汁标本HCMV-DNA阳性时,患儿自身尿液标本全为阴性。结论 孕妇及其婴儿的各类标本中,乳汁标本的HCMV-DNA检出率明显高于其他类型标本,对于疑似HCMV感染的孕妇或婴儿,建议首先采集母亲乳汁标本进行检测。然而母亲乳...     

一种快速诊断呼吸道合胞病毒感染的方法

应用引物设计原则，选择呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）基因组中高度保守的Ｆ基因作为扩增靶序列，独立设计合成了两对引物，建立了一个逆转录套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＲＳＶＲＮＡ的方法。结果：对引物进行敏感度实验，其检测敏感度为每ｍｌ１０ＴＣＩＤ５０ｓ（５０％ｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｉｎｆｅｃｔｉｖｅｄｏｓｅ）的病毒量；用副流感病毒１型、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新城疫病毒、腮腺炎病毒和腺病毒２型作对照，均无预期扩增产物出现，证实了设计引物的特异性；用建立的逆转套式ＰＣＲ方法对５例急性下呼吸道感染患儿的鼻咽部分泌物标本进行检测，发现３例阳性，２例阴性；同时用病毒培养法检测，结果完全相同。提示：该方法具有快速、敏感、特异和观察结果客观等优点。     

婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较

目的:探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测,其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果:血和尿HCMV DNA同时检测,尿检出率明显高于血;血和尿HCMVDNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论:两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本,采用尿标本更方便,且阳性率高。     

TTV 部分传播途径的初步研究及西安地区TTV部分片段测序分析

目的研究输血传播肝炎病毒(TTV)有否直接垂直传播途径及尿液传播的可能性,初步了解西安地区TTV结构部分特点.方法参照文献[1]在TTV DNA ORF1区设计一套套式PCR引物,建立TTV DNA套式PCR检测方法,对16例血清检测TTV DNA阳性的患者尿液做了TTV DNA检测,对52 例正常顺产孕妇血清及其婴儿脐带血同时检测TTV DNA; 并且对西安地区1例原因不明而TTV阳性肝炎患者的TTV套式PCR扩增终产物纯化直接测序.结果 16例血清检测TTV DNA阳性的患者尿液TTV DNA检测未发现1例阳性; 在52例顺产妇外周血中,9例TTV DNA阳性TTV基因检测阳性率为17.3%(9/52);而新生儿脐带血TTV基因检测阳性率为7.7%(4/52); 其中,母子同时TTV DNA阳性2 例,单纯母亲血TTV DNA 阳性7例; 单纯婴儿脐带血TTV DNA 阳性2例.直接测序法测序,测得的143bp序列用DNAsis分析软件中国1株(BDH1)序列比较,二者同源性为65.0%,差异率为35.0%(>30%).结论 TTV可能不能通过尿液传播,但能经胎盘直接垂直传播, 西安地区TTV流行毒株可能存在新的TTV基因型.     

人巨细胞病毒DNA检测在小儿人巨细胞病毒感染诊断中的应用

目的 探讨小儿血液、尿液及其母亲母乳的人巨细胞病毒DNA检测结果在人巨细胞病毒感染的诊断价值。 方法 选取2017年—2018年期间在浙江大学丽水医院就诊的疑似人巨细胞病毒感染的患儿328例为研究对象。收集患儿血液、尿液和对应母乳标本,进行实时荧光定量PCR,检测人巨细胞病毒DNA载量;再将患儿血清用化学发光法检测HCMV-IgM,比较不同标本不同检测方法的阳性率。针对阳性患儿,对不同临床症状分布构成进行分析。 结果 328例患儿检测总阳性率为71.04%,男性患儿和女性患儿阳性率分别为71.02%和69.74%,差异无统计学意义(χ2=0.065,P=0.799)。血液、尿液和乳汁的人巨细胞病毒阳性率分别为49.09%、70.43%和58.23%,尿液阳性率最高,差异有统计学意义(χ2=31.147,P<0.001)。新生儿组的乳汁阳性率最高,为72.41%,28 d到1岁之间和1岁以上患儿尿液阳性率最高,各年龄组之间阳性率差异有统计学意义(P<0.05);血人巨细胞病毒DNA和血清HCMV-IgM阳性率检出率分别为49.09%(161/328)和16.16%(53/328),2种方法联合检测的阳性检出率为49.69%,对比单一血DNA检测方法,两者差异无统计学意义(P>0.05)。临床症状小于1岁患儿主要以黄疸,腹泻为主,大于1岁的患儿主要以肝损害和肺炎为主。 结论 在小儿血液、尿液及其母亲母乳HCMV-DNA的检测中,尿液HCMV-DNA对诊断患儿人巨细胞病毒有更好的临床应用价值。且尿标本留取方便、无创,易为家长和小儿接受,所以采用FQ-PCR方法对小儿尿标本进行检测能起到快速、简洁、灵敏的作用,对提高HCMV感染的诊断率有实际的临床意义,对于小月龄患儿临床应推广尿液HCMV-DNA检测。