MALDI-TOF MS技术在临床微生物检验领域的应用进展分析

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtimeofflightmassspectrometry,MALDI-TOFMS)是近年来开始应用于临床微生物检验领域的一种新技术.本文将系统综述MALDI-TOFMS技术的检测原理及特点,在临床微生物鉴定、细菌分型、同源性分析和细菌耐药检测中的应用.MALDI-TOFMS技术的采用不仅明显缩短了临床微生物检验的TAT时间,更好地服务于感染性疾病的诊断与抗菌药物合理使用,同时也为临床微生物检验的自动化打下了基础.     

环介导等温核酸扩增法在基因检测中的应用

环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种操作简单、快速、灵敏度高,而且特异性强的DNA扩增技术,已广泛应用于临床诊断,胚胎性别鉴定,以及细菌和病毒等病原微生物的检测.本文简述了环介导等温核酸扩增技术的原理、特点和在基因检测中的应用,分析了该技术存在的问题,并对该技术未来的发展进行了展望.     

电子鼻技术在医学中的应用

目的:探讨电子鼻技术方法及其在医学中的应用。方法:电子鼻是利用气体传感器阵列的响应图案来识别气味的电子系统,通常由气味取样器、气体传感器阵列和信号处理系统三部分组成。介绍了电子鼻的发展状况、论述了通用电子鼻的组成、原理及所用的传感器(金属氧化物传感器、导电型聚合物传感器、压电型传感器等)的特性及其医学检测中的应用。结果:电子鼻可用于检测肺部疾病(肺癌、肺结核)、糖尿病、尿毒症和细菌感染(厌氧菌、耳鼻喉感染细菌、不同类型的金黄葡萄球菌、伤口微生物感染)。结论:电子鼻作为一种无创的、快速诊断技术在疾病的早期诊断筛查及微生物感染的快速检测方面具有重要的临床应用价值。     

焦磷酸测序技术及应用

焦磷酸测序(pyrosequencing)技术是一种新的DNA序列分析技术,其特点是操作简便、大通量、自动化,适合大量样本的快速检测,无须进行电泳、DNA序列无须荧光标记等,是一个理想的遗传分析技术平台.文章对焦磷酸测序技术原理及近年来在单核苷酸多态性研究、微生物鉴定分型和DNA甲基化等方面的应用作一简要综述.     

环境污染菌快速检测生物电化学方法研究

细菌耗氧能使基质资化而生成代谢物质。运用生物电池盒,设计了一种能快速检测环境污染细菌的电子测试装置。以鲜牛奶中的污染杂菌和啤酒生产发酵过程中的酵母菌为研究样品,通过向试样样品中添加适量的生物催化剂和离子激励剂进行微生物的检测。并分析研究了细菌代谢和电子发生的过程,包括各测量电极与辅酶的氧化还原反应,以及溶液中各反应物的电化学过程。实验结论表明,该方法能有效的测定牛奶中的污染微生物含量,它相对于传统活菌落检测方法相比,具有快速、简便、实时检测等优点。     

基于滤膜上细菌直接计数法的细菌总数快速检测

细菌总数快速检测在质量监测中具有重要的意义,目前除了经典的平板培养法以外,还有微菌落法、阻抗法等快速检测方法,这些方法或者需要较长的检测时间,或者需要较高的检测成本.本研究提出一种不需要培养而在滤膜上直接计数的细菌总数的快速检测方法,它主要分为过滤、染色、显微镜计数和计算四个步骤.计算细菌总数时,根据细菌在滤膜上的分布特点,对传统公式进行改进,提出按区域计算细菌总数的计算方法,提高了检测精度.研究结果表明,该方法与传统的平板培养法无显著性差异(t=0.847,P=0.436＞0.05),是一种低成本、快速的细菌总数检测方法.     

细胞培养中细菌类微生物污染的快速检测

目的 检测细胞培养中细菌类(包括支原体)微生物的污染情况。方法 用细胞培养中常见的培养物人为污染He-La细胞，设计细菌类微生物16S rRNA基因序列通用引物，PCR扩增16SrRNA基因序列片断，建立PCR检测培养细胞污染的方法，并用该方法检测本室保存的细胞株的污染情况。结果 人为污染绿脓杆菌、大肠杆菌、白色葡萄球菌和支原体M.fernentans的Hela细胞的培养上清中均扩增出大小的片段，与目的片段相符。本室所收藏的15个细胞株有3株的培养上清中扩增出大小的片段。结论 本实验建立了：16SrRNA基因序列通用引物PCR法，可用于快速检测培养细胞中细菌类微生物的污染。     

中国医学分子微生物学的现状与展望

21世纪是以分子生物学为代表的生命科学的世纪,它将推动生物学由细胞水平向分子水平、基因水平发展。在分子微生物学基础研究方面,目前已搞清大肠杆菌基因约40%,已查明噬菌体的全部基因顺序,大约60%的基因亦已搞清。对某些细菌和病毒的复制、基因克隆、核苷酸序列,编码基因、增强子、启动子的结构与功能进行了深入的研究。在病原微生物检测技术方面,已由过去第一代的微生物常规分离培养技术,第二代的生化等快速诊断技术,第三代的单克隆抗体技术进入目前正在兴起的第四代基因诊断(基因探针和PCR)技术。前三代诊断技术都是以疾病的表型改变为依据,而表型改变在     

肺功能检查专用呼吸过滤器细菌过滤效率检测方法的建立及其可行性评价

目的 探讨肺功能检查专用呼吸过滤器细菌过滤效率的检测方法,并评价其可行性.方法 采用射流雾化器产生带有枯草芽孢杆菌黑色变种标准菌种细菌悬液(浓度为1.5×108 cfu/ml)的气溶胶,分别通过3种不同品牌的呼吸过滤器,然后采集过滤器末端的气流进行细菌培养和菌落计数,计算出呼吸过滤器的细菌过滤效率和微生物穿透值.结果 Promed、Microgard和Cosmed 3种过滤器的细菌过滤效率均大于99.99%,各组间差异无统计学意义(P＞0.05).微生物穿透值分别为(17±9)、(23±12)和(13±8),3组间及Promed与其余2组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 通过雾化细菌悬液检测肺功能检查专用呼吸过滤器细菌过滤效率的方法可行.国内产品(Promed)与国内常用进口产品(Microgard和Cosmed)的过滤性能相当,达到呼吸保护装置的过滤要求,适于临床上应用.     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在临床病原微生物鉴定中的应用进展

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrixassisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)是近年来发展起来的一种新型软电离质谱技术,现今其在微生物快速检测方面的应用得到广泛关注.相对于微生物实验室现有的传统鉴定方法和分子生物学方法,MALDITOF MS具有快速、准确、灵敏、分辨率好和高质量检测范围等优点,虽不能完全替代传统方法,但丰富了微生物检验方法的选择,克服传统方法操作繁琐、耗时的缺点,大大提高了微生物鉴定在临床中的参考价值.本文就MALDI-TOF MS在微生物鉴定中的应用及其进展作一综述.     

环介导等温扩增技术用于细菌检测的研究现状

细菌是一种常见病原体。环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新的核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性强和简便快速等优点,可用于细菌的快速诊断。本文拟就LAMP检测细菌的研究现状进行综述。     

环介导等温扩增技术及其在病原微生物检测中的应用

 环介导等温扩增(LAMP)技术是近年发展起来的一项新的快速核酸恒温扩增技术,具有高效、快速、特异、易检测、易操作等特点,自面世以来被科学家认为是能替代常规PCR的一项扩增技术,非常适用于现场检测和基层检测。本文就LAMP技术的原理、特点、进展及其在病原微生物检测中的应用进行了简要的概述。     

MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的应用

质谱是测量离子质荷比的一种分析技术,其基本原理是样品中各组分在离子源中发生电离,产生不同荷质比的带正电荷的离子,阳离子经电场加速形成离子束,进入质量分析器,阳离子在电场和磁场的作用下发生偏转而被分开形成质谱图,从而确定离子的质量.质谱仪种类非常多,工作原理和应用范围也有很大的不同.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)是20世纪80年代发展起来的一种快速分析大分子的方法,现已广泛应用于生命科学及相关领域,是检测和鉴定蛋白质、多肽、多糖、核酸等生物分子的有力工具.早在1975年质谱技术就被尝试用于微生物鉴定,但是由于当时技术条件的限制以及细菌的生长条件和培养基对质谱结果的影响非常大,导致实验结果很难重复[1].MALDI-TOF MS的出现和迅速发展使较大分子质量的生物分子分析成为可能[2-3],并被成功应用于细菌鉴定[4-8].近几年由于质谱技术的不断改进和数据库的不断完善,微生物实验室已经能够应用MALDI-TOF MS快速、准确、低成本地对细菌和真菌进行鉴定[9-10].     

基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱对临床常见细菌和酵母菌的鉴定能力评价

目的利用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统、ATB Expression微生物鉴定及药敏系统鉴定临床常见的细菌和酵母菌,比较鉴定结果的一致性,评价MALDI-TOF MS对临床常见病原菌的鉴定能力。方法连续5 d鉴定123株临床分离株,其中革兰氏阳性菌42株,革兰氏阴性菌71株,酵母菌10株。细菌鉴定同时使用法国梅里埃公司的VITEK MS(采用MALDI-TOF MS技术)和VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统,酵母菌鉴定同时使用VITEK MS和ATB Expression微生物鉴定及药敏系统。将MALDI-TOF MS与传统生物化学方法得到的鉴定结果进行比较,结果不一致的菌株采用16S r RNA测序验证。结果 MALDI-TOF MS与传统生物化学方法得到的鉴定结果相比较,革兰氏阳性菌鉴定符合率为78.6%(33/42),革兰氏阴性菌鉴定符合率为84.5%(60/71),酵母菌鉴定符合率为100.0%(10/10)。其中金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肠球菌及大多数肠杆菌科细菌、非发酵菌的符合率可达95.0%。19株鉴定结果在种的水平上不一致的细菌经16S r RNA测序验证,MALDI-TOF MS的正确率为73.7%,传统生物化学鉴定结果的正确率为49.2%。结论与传统生物化学鉴定手段相比,MALDI-TOF MS对临床常见致病菌具有较好的鉴定能力,鉴定时间显著缩短,可实现临床微生物的快速、准确鉴定。     

变性高效液相色谱技术快速检测下呼吸道致病性细菌的实验研究

目的 运用变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测5种下呼吸道致病性细菌,建立一种快速检测下呼吸道致病性细菌的分子生物学方法.方法 以下呼吸道致病性细菌16S rRNA基因的保守区设计通用引物,并在引物前加上40-bpGC,特异性扩增该基因的保守区和可变区,运用DH-PLC技术对PCR产物进行分析.选取50株临床分离菌株验证该方法的有效性.结果 通用引物可特异性扩增细菌16S rRNA,PCR产物经DHPLC分析后每种细菌均能得到特征性的洗脱峰.DHPLC检测临床分离菌株结果显示,与常规培养方法的符合率为100%.结论 DHPLC技术具有准确、简便、快捷和高通量等特点,在临床检测下呼吸道致病性细菌中具有潜在的应用价值.     

液相芯片技术检测Y染色体无精症因子区域微缺失

目的 建立一种液相芯片技术检测Y染色体无精症因子区域微缺失诊断男性不育的新方法.方法 应用多重PCR和液相芯片技术,对178例无精症、134例少精症及严重少精患者和正常男性对照进行Y染色体微缺失检测.结果 在312例患者中发现40例Y染色体微缺失(12.8%),其中无精症患者中缺失率为14%(25/178),少精症患者缺失率为9.6%(11/114),严重少精症患者缺失率为20%(4/20).结论 应用液相芯片技术检测Y染色体微缺失,具有高通量、灵敏度高、特异性强、重复性好、快速简便、自动化等优点,与多重PCR相结合使对无精症和少精症的诊断更加准确、可靠.     

基于叉指金电极和声表面波技术的细菌内毒素快速检测方法的研究

目的 建立一种可用于定量细菌内毒素浓度的快速检测方法.方法 通过在叉指金电极上固定γ-氨丙基三乙氧基硅烷(3-APTES)和戊二醛为载体的多粘菌素B(PMB),使其与细菌内毒素的生物活性物质脂多糖发生反应；检测装置采用基于声表面波技术的双路差分电路,2路输出振荡信号经过混频器进行差分,根据频移量的变化表征内毒素含量.结果 频移变化与内毒素含量在75～130 EU/ml范围内基本成线性关系.结论 与传统法相比,检测时间缩短到10 min,测试灵敏度达到13.8 kHz/(EU·ml-1),重复性达到90％以上.     

一种快速检测细菌、真菌生长及繁殖的方法

目的　介绍一种快速检测细菌、真菌生长及繁殖的方法。　方法　用比色法 (colorimetricassay)和自动微孔扫描光谱法 (automaticmicroplatescanningspectrophotometer)检测细菌、真菌的生长、繁殖情况。　结果　细菌或真菌孢子甲产物的异丙醇溶液的吸光值A5 70与细菌或真菌孢子数呈线性关系。　结论　该方法可以用来检测细菌、真菌的生长和繁殖情况 ,具有快速、简便、灵敏的特点 ,特别是对生长缓慢、生长周期较长的真菌 ,其优势更为明显。     

焦磷酸测序技术及其在分子生物学领域的应用

焦磷酸测序技术是一项新型 DNA测序技术。在 DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶 4种酶的协同作用下 ,将引物上每一个 d NTP聚合与一次荧光信号释放偶联起来 ,通过检测荧光的释放和强度 ,达到实时测定 DNA序列的目的。操作中不需要电泳、样品标记和染色 ,具有高度的可重复性、并行性和自动化特点。本文综述了焦磷酸测序技术的基本原理、测序过程和它在 SNPs研究、病原微生物的快速鉴定、病因学分析、法医鉴定等方面应用     

多重实时荧光PCR法快速检测水体中致病性弧菌的研究

致病性弧菌检测方法主要是生化鉴定法,费时费力,而且对于生化反应不典型或生化反应极为相似的弧菌属无法准确鉴别,传统的生化鉴定法在大规模的病害调查过程和生产实践中无法做到快速准确方便.多重荧光PCR方法是在DNA分子水平进行微生物检测的一种新方法,根据样本中各种微生物的特异性基因对目标菌进行鉴定,可以稳定准确地在种属和菌株水平上鉴别微生物,弥补传统生化鉴定方法的缺陷[1-3].本研究通过优化多重荧光PCR方法体系,建立了水体中致病性弧菌的两个多重荧光PCR检测方法,该方法通过富集水体细菌,无需前增菌步骤,大大减少检测时间.实际工作中推广应用结果表明,多重荧光PCR方法检测7种弧菌,具有快速、准确度高、重复性好及敏感性高等特点.