大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后NF-κB P50/c-Rel对Bcl-xL表达的影响

目的探讨脂质体(TransfastFastTM Transfection Reagent)介导转录因子NF-κB圈套物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODNs)对Wistar大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后受NF-κB P50、c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xL表达的影响。方法原代大脑皮质神经元体外培养,建立OGD/R模型,分为OGD 4 h/R 6 h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组;同时设立正常对照组。采用蛋白质印迹分析检测NF-κB P50、c-Rel蛋白表达;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠皮质神经元内Bcl-xL mRNA表达。结果蛋白质印迹分析显示OGD 4 h/R6 h组P50、c-Rel蛋白表达较正常组升高(P<0.01);转染NF-κB decoy ODNs后P50、c-Rel蛋白表达低于OGD 4 h/R 6 h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05);RT-PCR显示OGD 4 h/R 6 h组Bcl-xL mRNA表达较正常组升高(P<0.05);NF-κB decoy ODNs组Bcl-xL mRNA表达低于OGD 4 h/R 6 h组、脂质体组、无关decoy组(P<0.05)。结论 NF-κB decoy ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后受NF-κB亚基P50、c-Rel调控的抗凋亡因子Bcl-xL mRNA表达,这可能是NF-κB神经保护作用的部分机制。     

NF-κB靶向性哑铃形"圈套"ODNs抑制大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧后TNF-α的表达

目的 设计合成靶向哑铃形寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)圈套,检测其对大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后TNF-α表达的抑制效应.方法 原代大脑皮质神经元体外培养,建立氧糖剥夺/复氧模型,以正常组、OGD4 h/R6 h组、NF-κB decoy ODNs组、无关decoy ODNs组、脂质体组为实验组,采用Western blot检测NF-κB p65蛋白表达,分别采用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反廊法(RT-PCR)检测FNF-α蛋白和mRNA表达.结果 Westernblot检测显示NF-κB decoy ODNs组NF-κB P65蛋白表达明显低于OGD4 h/R6 h组、脂质体组、无关decoy ODNs组(P<0.05),与OGD4 h/R6 h组、脂质体组、无关decoy组相比NF-κB decoy ODNs组TNF-α蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.05);而脂质体组、无火decoy ODNs组对NF-κB P65蛋白、TNF-α蛋白和mRNA表达未见抑制(P>0.05).结论 靶向性NF-κB的哑铃形圈套ODNs可有效抑制大脑皮质神经元OGD/R后炎症因子TNF-α mRNA及蛋白的表达.     

苦碟子注射液对氧糖剥夺损伤脑微血管内皮细胞NF-κB表达的影响

目的研究苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧损伤大鼠脑微血管内皮细胞(Rat Brain Microvascular Endothelial Cells,RBMEC)中核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响,探究其治疗急性脑梗死可能的炎性作用机制。方法采用氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)的方法建立RBMEC缺血再灌注损伤模型。分为正常组、OGD/R组、苦碟子注射液组。氧糖剥夺6 h后,分别复氧0 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h,并予模型细胞2%、4%、8%浓度的苦碟子注射液(KDZ),采用MTS法测定细胞活性,分别筛选造模最佳时效点及药物最佳量效。采用免疫荧光染色法观察3组NF-κB表达,Western Blot方法检测3组NF-κB分别在总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白中的表达量。结果免疫荧光染色观察NF-κB的表达:与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组NF-κB表达显著增加(P0.01);与OGD 6 h/R 3 h组相比,KDZ 4%组NF-κB表达显著降低(P0.01)。Western Blot法检测NF-κB蛋白表达量:在总蛋白、核蛋白中,与正常组相比,OGD 6 h/R 3 h组NF-κB蛋白表达增加(P0.05,P0.01);与OGD 6 h/R 3 h组相比,KDZ 4%组NF-κB蛋白表达降低(P0.05,P0.01)。而在胞浆蛋白中,三组的NF-κB蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论苦碟子注射液可以下调缺血再灌注损伤RBMEC中NF-κB蛋白的异常高表达,并可以一定程度上抑制NF-κB的活化,减少NF-κB的核内转移。     

胰岛素对氧糖剥夺诱导大鼠脑神经元损伤的改善作用

目的:探讨胰岛素对氧糖剥夺诱导新生大鼠脑皮质神经元损伤的改善作用.方法:将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用胰岛素预处理加OGD/R处理,B、C组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性.采用脱氧尿嘧啶缺口末端标记法检测神经元凋亡情况,采用免疫细胞化学方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养子(BDNF)的表达.结果:①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数日明显少于B组,3组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论:胰岛素预处理可明显提高OGD/R后神经元的存活率,抑制神经元凋亡,使GAP-43、BDNF表达增加,实现神经元损伤的改善作用.     

七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧损伤及自噬的影响

目的 探讨七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤、氧化应激及自噬的影响。方法 取(18±0.5)d孕鼠子宫内胎鼠海马组织,收集海马神经元进行培养,7d后培养的海马神经元随机分为3组：正常对照组(CON组)、氧糖剥夺/复氧组(OGD/R组)、七氟烷后处理组(OGD/R+SEVO组)。CON组正常培养;OGD/R组：氧糖剥夺1.5 h,复氧复糖24 h,建立OGD/R损伤模型;OGD/R+SEVO组经氧糖剥夺后即刻予2.4%七氟烷后处理1 h,复氧复糖23 h。处理结束后,比色法检测各组乳酸脱氢酶(LDH)的活性,原位末端标记法(TUNEL)检测各组神经元凋亡变化,免疫荧光法检测各组神经元线粒体活性氧和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸激酶(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)的表达。结果 与CON组比较,OGD/R组LDH释放增加(P<0.01),神经元凋亡增加,线粒体活性氧和自噬标志性蛋白LC3B表达增加(P<0.01), PINK1蛋白和Parkin蛋白表达上调(P<0.001,P<...     

清毒活血化痰复方抑制脐静脉内皮细胞株ECV304氧糖剥夺/复糖复氧模型中NF-κB和STAT3的表达

目的探讨清毒活血化痰复方对脐静脉内皮细胞氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的保护作用及其作用机制。方法 SD大鼠连续5 d每天灌胃清毒活血化痰复方(12 g/kg),正常对照组给予等量生理盐水,制备药物血清和正常血清。OGD/R损伤脐静脉内皮细胞株ECV304,复氧复糖过程中添加清毒活血化痰复方药物血清,并以正常血清为对照。正常对照组、缺氧缺糖后复氧复糖组(模型组)、清毒活血化痰复方药物血清组(中药组)分别于复氧复糖后4、24、48、72 h提取基因和蛋白用于检测。以MTT法检测细胞存活率,用RT-PCR检测NF-κB和STAT3的mRNA水平,Western blot检测NF-κB和STAT3的蛋白表达。结果清毒活血化痰复方药物血清作用24 h即显现出明显的促ECV304增殖的作用,于48 h时作用最明显。在各个时间段对NF-κB和STAT3的mRNA和蛋白表达均有抑制作用。结论清毒活血化痰复方药物血清可以有效改善OGD/R对脐静脉内皮细胞的损伤,促进细胞增殖,其作用机制可能与抑制NF-κB和STAT3的表达相关。     

JNK抑制剂及NAC对氧糖剥离后复氧复糖所致脊髓神经元损伤的保护作用

目的:初步探讨JNK(The c-Jun NH-terminal kinase)抑制剂及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对脊髓神经细胞氧糖剥夺复糖复氧的保护作用。方法:离体脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧损伤(oxggen-glucose deprivation/regain,OGD/R)模型建立。随机分组:A组对照组(n=6);B组JNK抑制剂组(n=6);C组NAC处理组(n=6)。分别于脊髓神经元氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)4 h后,再复氧复糖4、12、24 h,应用MTT法检测细胞凋亡。结果:成功建立OGD/R模型;脊髓神经元OGD/R后,B组和C组MTT各时间点吸光值均高于A组,但B组和C组间差异不显著。结论:JNK抑制剂及NAC能有效抑制体外培养的脊髓神经元氧糖剥夺复糖复氧所引起的凋亡。     

沉默RND3表达对氧糖缺失/复氧复糖损伤海马神经细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的 探讨沉默Rho家族GTP酶3(RND3)表达对氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)损伤海马神经细胞炎症反应和细胞凋亡的影响.方法 使用包有沉默RND3表达的短发夹RNA(shRND3)及其阴性对照(shRND3-NC)序列的慢病毒载体分别对海马神经细胞进行转染.转染成功后对细胞进行2 h的缺氧缺糖培养再行复氧复糖建立OGD/R模型.CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR检测RND3及炎症和凋亡相关分子的mRNA表达,Elisa检测细胞上清液中炎症因子的浓度,Western Blot检测RND3和凋亡蛋白以及胞核内NF-κB的蛋白表达,Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 与正常细胞相比,OGD/R损伤后细胞活力降低(P＜0.001),炎症因子(TNF-α、IL-6和 IL-1β)和 NF-κB 表达升高(P＜0.001),促凋亡蛋白(Caspase-3和Bax)表达升高(P＜0.001),抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低(P＜0.001),细胞的凋亡率升高(P＜0.001).与沉默RND3阴性组相比,沉默RND3后,细胞活力增加(P＜0.01),炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1 β)和NF-κB表达降低(P＜0.001),促凋亡蛋白(Caspase-3和Bax)表达降低(P＜0.001),抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达升高(P＜0.001),细胞的凋亡率下降(P＜0.001).结论 沉默RND3表达通过抑制炎症反应和细胞凋亡减轻海马神经细胞的OGD/R损伤,沉默RND3抑制炎症反应的机制可能与抑制NF-κB通路有关.     

沉默RND3表达对氧糖缺失/复氧复糖损伤海马神经细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的 探讨沉默Rho家族GTP酶3(RND3)表达对氧糖缺失/复氧复糖(OGD/R)损伤海马神经细胞炎症反应和细胞凋亡的影响.方法 使用包有沉默RND3表达的短发夹RNA(shRND3)及其阴性对照(shRND3-NC)序列的慢病毒载体分别对海马神经细胞进行转染.转染成功后对细胞进行2 h的缺氧缺糖培养再行复氧复糖建立OGD/R模型.CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR检测RND3及炎症和凋亡相关分子的mRNA表达,Elisa检测细胞上清液中炎症因子的浓度,Western Blot检测RND3和凋亡蛋白以及胞核内NF-κB的蛋白表达,Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞仪检测细胞的凋亡率.结果 与正常细胞相比,OGD/R损伤后细胞活力降低(P＜0.001),炎症因子(TNF-α、IL-6和 IL-1β)和 NF-κB 表达升高(P＜0.001),促凋亡蛋白(Caspase-3和Bax)表达升高(P＜0.001),抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达降低(P＜0.001),细胞的凋亡率升高(P＜0.001).与沉默RND3阴性组相比,沉默RND3后,细胞活力增加(P＜0.01),炎症因子(TNF-α、IL-6和IL-1 β)和NF-κB表达降低(P＜0.001),促凋亡蛋白(Caspase-3和Bax)表达降低(P＜0.001),抗凋亡蛋白(Bcl-2)表达升高(P＜0.001),细胞的凋亡率下降(P＜0.001).结论 沉默RND3表达通过抑制炎症反应和细胞凋亡减轻海马神经细胞的OGD/R损伤,沉默RND3抑制炎症反应的机制可能与抑制NF-κB通路有关.     

雌激素对氧糖剥夺诱导神经元损伤的保护作用

目的 探讨雌激素对氧糖剥夺诱导新生大鼠皮质神经元损伤的保护作用.方法 将培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为3组,A组为正常对照组,B组采用氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)处理,C组采用雌激素预处理加OGD/R处理,各组在OGD/R后0、1、6、12、24 h各时间点,以MTT法检测细胞活性,采用TUNEL法检测神经元凋亡情况,采用细胞免疫组化方法检测生长相关蛋白(GAP-43)、脑源性神经营养因子(BDNF)的表达.结果 ①B组的神经元细胞活性较A组明显下降,C组细胞活性明显高于B组,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).②B组凋亡神经元细胞明显多于正常对照组,OGD/R后6、12、24 h,C组凋亡细胞数目显著少于B组,三组比较差异有统计学意义(P<0.05).③B组GAP-43、BDNF的表达较正常对照组明显增加,OGD/R后6、12、24 h,C组GAP-43、BDNF表达较B组明显增加.结论 雌激素可明显提高OGD/R后神经元的存活率,使GAP-43、BDNF表达增加,抑制神经元凋亡,实现神经元损伤的保护作用. Abstract： Objective To explore the protective effects of estrogen on injury induced by OGD/R(oxygen-glucose deprivation/rehabilitation of oxygen-glucose) in neonatal rats.Methods Cortical neurons cultured for 7 days were randomly divided into group A (normal control group),group B (OGD/R, alone) and group C (pretreatment with estrogen-17βE2,and OGD/R). Then detect cell survival rate by MTT colorimetry, count the apoptotic neurons by TUNEL, observe the expression of growth associated protein(GAP-43), brain-derived neurotrophic factor (BDNF) using immunocytochemical on each time point after OGD/R 0,1, 6, 12, 24 h of each group. Results ①Compared with group A, the cell survival rate in group B decreased, the survival rate was increased in group C due to pretreatment of estrogen. ②The apoptotic neurons in group B were more than those in group A, and it was less in the group C than in group B after OGD/R 6,12,24 h. ③The expression of GAP-43, BDNF was increased in group B,and it was higher in group C than group B after OGD/R 6,12,24 h. Conclusions The study indicated that estrogen could improve the survival rate of neurons after OGD/R, increase expressions of GAP-43, BDNF,inhabit neurocyte apoptosis,and these mechanisms play neuroprotective effects.     

西洋参茎叶总皂苷抑制氧糖剥夺/复氧引起的BV-2小胶质细胞炎性活化作用及其机制研究

目的：研究西洋参茎叶总皂苷（PQS）对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）引起的小鼠BV-2小胶质细胞炎性活化的抑制作用，并初步阐明其作用机制。方法：BV-2细胞分为对照组、OGD/R组、PQS各剂量+OGD/R组。对照组细胞在常规条件下培养；OGD/R组细胞在OGD/R条件下培养；PQS各剂量+OGD/R组细胞给予PQS(30、60、90μg/mL)预处理后，转入OGD/R条件培养。通过酶联免疫法检测上清液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的含量，通过CCK-8法检测PQS对OGD/R条件下细胞增殖活性的影响，流式细胞术检测胶质细胞活化标志蛋白离子钙结合适配器分子1(Iba-1)和酸性溶霉菌糖蛋白（CD68）的表达，Western blot检测核因子-κB(NF-κB)p65磷酸化及其抑制因子NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)和NF-κB抑制因子（NKRF）蛋白的表达。结果：OGD/R诱导能够明显增加BV-2细胞上清液中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量（P<0.01），增强BV-2细胞对数期增殖活性（P<0.0...     

TRPM7在七氟烷预处理抑制大鼠氧糖剥夺海马神经元凋亡和炎症反应中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道M7 (TRPM7)在七氟烷(Sev)预处理抑制大鼠氧糖剥夺(OGD)海马神经元凋亡和炎症反应中的作用.方法选择出生1d的SD大鼠50只,提取海马神经元,将其分为5组,包括对照组、Sev预处理组(Sev组)、OGD组、Sev预处理+OGD组(Sev+OGD组)和Sev预处理十缓激肽+OGD组(联合组).缺糖缺氧1.5h后复糖复氧,再正常培养24 h后制备OGD模型.对照组海马神经元仅做正常培养;Sev组海马神经元行2％ Sev预处理1 h;OGD组海马神经元仅制备OGD模型;Sev+OGD组神经元行2％ Sev预处理1h,24 h后制备OGD模型;联合组神经元Sev预处理同时在培养基中加入缓激肽(终浓度200 μmol/L),其余处理同Sev+OGD组.正常培养24 h时后,检测海马神经元TRPM7 mRNA和蛋白表达水平、存活率和凋亡率、IL-1β、TNF-α的mRNA及上清蛋白表达水平.结果 与对照组比较,OGD组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率明显降低(P＜0.05).与OGD组比较,Sev组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而存活率明显升高(P＜0.05).与Sev组比较,联合组海马神经元TRPM7 mRNA及蛋白表达水平、凋亡率、IL-1β、TNF-α mRNA及上清蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),而存活率显著降低(P＜0.05).结论 Sev预处理可通过缓解神经元TRPM7过度表达,减轻OGD后海马神经元凋亡和炎症反应.     

七氟醚后处理对氧糖剥夺/复氧复糖诱导HT22细胞DNA损伤及SIRT1表达的影响

目的 探讨七氟醚后处理对HT22细胞氧糖剥夺/复氧复糖后DNA损伤及沉默信息调节因子1(SIRT1)表达的影响.方法 随机将对数生长期的HT22细胞分为7组:空白对照组(CON),氧糖剥夺/复氧复糖4 h组(OGD/R 4 h),氧糖剥夺/复氧复糖4 h+1％七氟醚后处理组(OGD/R 4 h+1％SEVO),氧糖剥夺...     

莱菔硫烷对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对体外培养皮质神经元氧糖剥夺(OGD)/复氧(R)损伤的保护作用。方法出生O～1d的SD乳大鼠皮质神经元原代培养5～6d后,随机分为正常对照组、OGD组及SFN组。建立皮质神经元的OGD模型,1h后复氧,模拟再灌注模型,OGD/R期间给予0.1、0.5、1、2.5μmol/L SFN,复氧2...     

Sulfiredoxin-1对大鼠星形胶质细胞缺血损伤的保护作用

目的 探讨小分子蛋白Sulfiredoxin-1(Srxn1)对大鼠星形胶质细胞缺血损伤的保护作用以及Srxn1是否参与活化NF-κB炎症信号通路的分子机制.方法 通过H2 O2处理、氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation followed by recovery,OGD/R)模型,模拟体内脑缺血再灌注损伤;通过慢病毒载体片段Lenti-Srxn1-sh1和Lenti-Srxn1-sh2干扰Srxn1的表达,采用MTT法检测两种损伤模型中细胞的存活率,采用双荧光免疫细胞化学法检测NF-κB入核情况,Western blot检测p-NFκB p65、MIF的蛋白表达.结果 在H2O2和OGD/R模型中,两组慢病毒干扰片段均可以降低Srxn1蛋白的表达.与Control组比较,干扰Srxn1基因能够明显降低细胞存活率,增加NF-κB p65入核,使p-NFκB p65和巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)蛋白表达显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 Srxn1作为体内重要的神经保护因子,可以减少大鼠星形胶质细胞缺血性损伤的作用机制之一可能是与其激活NF-κB信号通路相关.     

亚低温对OGD/R模型新生大鼠海马神经元损伤的保护分子机制研究

目的 观察亚低温（MH）对新生大鼠海马神经元氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 体外培养新生大鼠海马神经元,将实验细胞随机分为对照组、OGD/R组、OGD/R+MH组和OGD/R+MH+Chl组;OGD/R组神经元给予OGD处理6 h,再于37℃复糖复氧处理24 h建立OGD/R模型。OGD/R+MH组和OGD/R+MH+Chl组神经元均给予OGD处理6 h,再分别于32℃不加或加氯喹（Chl）条件下复糖复氧处理24 h。收集各组复糖复氧处理24 h后的细胞及细胞培养上清液;采用电镜观察神经元超微结构变化,MTT法检测神经元活力,ELISA法检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,TUENL染色法检测神经元凋亡情况,Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3剪切体（Cleaved caspase-3）、聚ADP核糖聚合酶剪切体（Cleaved PARP）、溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、泛素结合蛋白P62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）表达水平。结果 与对照组比较,OGD/R组出现明显的细胞器损伤、降解、线粒体肿胀等神经元损伤表现,神经元活...     

石斛碱对氧糖剥夺/再灌注诱导Ht22细胞损伤的神经保护作用及其机制研究

目的:探讨石斛碱(dendrobium alkaloids,DNLA)对氧糖剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)作用的Ht22海马神经元细胞系的神经保护作用及其机制。方法:体外培养Ht22细胞系,同时将细胞随机分为9组:无任何处理的正常对照组(Control组)、OGD/R组、OGD/R+DNLA治疗组(0.03 mg/mL)、OGD/R+DNLA治疗组(0.3 mg/mL)、OGD/R+DNLA治疗组(3 mg/mL)、OGD/R+焦亡相关蛋白Caspase-1的抑制剂VX765组(10 ng/mL)、OGD过程中培养基加入聚乙二醇PEG3000(1%)后再灌注组(OGD/R+PEG3000→Media)、OGD/R后培养基中加入PEG3000(1%)组(OGD/R+Media→PEG3000)、PEG3000(1%)组。对Ht22细胞OGD 2 h后复糖复氧24 h建立OGD/R模型;DNLA自OGD前12 h开始即加入并持续到复氧复糖结束;VX765则自氧糖剥夺开始即加入并持续到复糖复氧结束。MTT法检测细胞死亡...     

聚花过路黄对原代大鼠脑微血管内皮细胞糖-氧剥夺诱导下NFκ-B p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的影响

目的 通过测定聚花过路黄(Lysimachia congestifloa hemsl,LCH)对原代大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)糖-氧剥夺诱导下NF-κB p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的变化,探讨其可能的细胞保护机制.方法 选用初生的Wistar大鼠,建立脑微血管内皮细胞培养模型,以糖-氧剥夺方法 (oxygen-glucose deprivation,OGD)复制体外模拟的脑缺血再灌注模型,观察试验各组(即正常组、模型组、LCH低剂量组及LCH高剂量组)缺氧缺糖6 h、复氧复糖18 h后BMECs的活性(CCK-8比色法)变化,相差显微镜下BMECs的细胞形态学改变,免疫组化测定NF-κB p65蛋白表达的变化以及荧光定量RT-PCR测定NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达的变化.结果 BMECs活性,LCH高、低剂量组明显高于模型组(均P＜0.01);BMECs的细胞损伤变化,LCH高剂量组明显轻于模型组;NF-κB p65阳性表达,LCH高、低剂量组分别明显低于模型组(均P＜0.01);NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达,LCH高、低剂量组明显低于模型组(均P＜0.01),LCH低剂量组高于LCH高剂量组(P＜0.01). 结论 LCH对糖-氧剥夺诱导下的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制NF-κB p65的活化及其下游靶基因ICAM-1的异常表达有关.其抑制效应可能存在一定的量-效关系.     

姜黄素调控KLF2表达对BV2细胞 OGD模型中的作用及机制

目的：研究姜黄素对氧糖剥夺(OGD)模型损伤神经元的保护作用并探讨其机制。方法：采用BV2细胞在OGD环境中培养2h模拟神经元缺血缺氧损伤,MTT法检测BV2小胶质细胞活力,Western blot法检测KLF2、p-NF-κB、NF-κB蛋白的表达水平;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β的含量。结果：与Control组相比,OGD组BV2细胞活力显著降低,KLF2蛋白表达下降,p-NF-κB蛋白表达增高,炎症因子TNF-α、IL-1β水平增高(P<0.05);10μmol/L的姜黄素可显著增加OGD诱导的BV2细胞活力,上调KLF2蛋白表达,下调p-NF-κB的表达,降低炎症因子的水平(P<0.05)。而KLF2-si RNA显著逆转姜黄素对OGD诱导的BV2细胞上述保护作用(P<0.05)。结论：姜黄素上调KLF2的表达并降低促炎细胞因子TNF-α、IL-1β的水平,其机制可能通过抑制NF-κB信号通路来实现对神经元缺血缺氧损伤的神经保护作用。     

缺氧-复氧肾小管上皮细胞损伤的信号传导机制

目的 探讨肾小管上皮细胞在缺氧-复氧(H-R)损伤后的信号传导机制.方法 将不同方法处理的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、模型组和PDTC组,模型组和PDTC组再分别分成缺氧6、12、24 h组、缺氧24 h后分别复氧6、12、24 h组;检测细胞成活率、NF-κB p65蛋白表达、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及蛋白表达情况.结果 与对照组比较,模型组随缺氧时间延长细胞数量逐渐减少,24 h达高峰(P＜0.05),复氧后细胞数量略有增加;随缺氧时间延长NF-κB p65阳性蛋白表达增多,复氧6h组达高峰(P＜0.05);ICAM-1 mRNA及蛋白表达随H-R时间延长渐增高(P＜0.05).PDTC组中NF-κBp65蛋白和ICAM-1 mRNA及蛋白表达较模型组有明显下降(P＜0.05).结论 H-R诱导HK-2细胞中NF-κcB p65的活化,从而上调ICAM-1 mRNA及蛋白表达.