氧化应激在PM_(2.5)诱导人支气管上皮细胞增殖中的作用

目的探讨不同质量浓度的大气颗粒物PM_(2.5)对人支气管上皮细胞(HBE)毒性和氧化应激的作用。方法用不同质量浓度(0、2.5、5、10、25、50、100、250、500mg/L)的PM_(2.5)处理HBE细胞,分别用八肽胆囊收缩素(CCK-8)检测细胞存活情况,用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平;用活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理HBE细胞后,观察PM_(2.5)所致HBE细胞相关指标的变化。结果以不同质量浓度的PM_(2.5)处理HBE细胞24h,25、50mg/L剂量组细胞存活率均高于对照组(P值均0.05),500mg/L剂量组细胞存活率低于对照组(P0.01)。与对照组相比,以不同质量浓度PM_(2.5)处理HBE细胞6h,细胞内ROS生成水平随着暴露浓度的增加而升高,呈明显的剂量效应关系(r2=0.792,P0.01)。HBE细胞经3mmol/L NAC预处理和25mg/L PM_(2.5)处理后,细胞内ROS水平、细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P值均0.05)。结论不同质量浓度的PM_(2.5)对HBE细胞增殖有双向刺激作用;PM_(2.5)可诱导HBE细胞内ROS增加,而适度的氧化应激可以促进HBE细胞增殖加快。     

石花菜乙酸乙酯提取物对增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的探讨石花菜乙酸乙酯提取物对人增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖及合成功能的影响。方法组织植块法分离培养瘢痕组织成纤维细胞并鉴定,MTT法检测石花菜乙酸乙酯提取物(0,2.5,5,10 mg/ml)对细胞活性的影响;此外不同浓度的石花菜乙酸乙酯提取物(0,2.5,5,10 mg/ml)刺激成纤维细胞48 h后,ELISA法检测细胞培养上清中成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及转化生长因子β1(TGF-β1)分泌水平。结果石花菜乙酸乙酯提取物呈时间及剂量依赖性抑制成纤维细胞活性。此外,5～10 mg/ml石花菜提取物使HS成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原生成及TGF-β1分泌显著少于对照组(p<0.05);2.5 mg/ml石花菜提取物虽不显著减少成纤维细胞的胶原合成,但与对照组相比,它可显著减少TGF-β1的分泌(p<0.05)。结论石花菜乙酸乙酯提取物能有效抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,并抑制细胞胶原合成及生长因子的分泌,对增生性瘢痕可能具有治疗作用。     

鱼腥草提取液抗流感、腮腺炎病毒效果观察

为了解中草药鱼腥草抗甲、乙型流感病毒和流行性腮腺炎病毒的效果,将鱼腥草的3种提取物分别在体外细胞上进行抗病毒实验.以抑制细胞病变作为实验药物对病毒起作用的判断标准.实验结果:鱼腥草挥发油对甲、乙型流感病毒和腮腺炎病毒均呈现一定的抑制效果,最低有效浓度(相当于含生药)分别为4.5mg/ml、2.25mg/ml和14mg/ml;鱼腥草乙酸乙酯提取物抑制甲、乙型流感病毒的最低有效浓度分别为3mg/ml和0.75mg/ml,但该提取物对腮腺炎病毒无抑制作用.鱼腥草水提取物对3种实验病毒均不起作用.此结果表明,鱼腥草中含有至少两种以上抗病毒活性因子,且其作用机制可能不同.     

4种方法检测大气颗粒物PM2.5的细胞毒性

目的采用多种检测原理和观察终点的细胞毒性试验综合评估提取PM2.5的细胞毒性效应,为深入研究PM2.5生物学效应提供实验依据。方法用去离子水提取PM2.5,溶于二甲亚砜获得PM2.5悬液。不同浓度PM2.5染毒支气管上皮(HBE)细胞24 h,采用噻唑蓝比色(MTT)、乳酸脱氢酶释放法(LDH法)、台盼蓝拒染法、吖啶橙-溴化乙锭双染法(AO-EB双染法)4种细胞毒性实验评估PM2.5的细胞毒性,并计算半数抑制浓度(IC_(50))。结果去离子水提取的PM2.5溶于二甲亚砜后呈黑褐色,肉眼可见颗粒成分。不同浓度的PM2.5处理HBE细胞24 h后,台盼蓝拒染法(IC_(50)=815.5μg/m L)、LDH释放法(IC_(50)=827.3μg/m L)及AO-EB双染法(IC_(50)=887.5μg/m L)检测结果与空白对照组和溶剂对照组相比,细胞存活率均显著下降(P0.05);而MTT法的细胞存活率检测结果显著高于对照组1.5~4.0倍(P0.05),与细胞实际生长状态不符。结论用去离子水提取PM2.5可减少溶剂带入,能够最大程度反映空气污染实际情况;实验采用的4种方法都可检测出水提PM2.5细胞毒性,但由于样品颜色的特殊性,MTT实验不能准确检测本研究中PM2.5的细胞毒性。     

煤焦沥青烟提取物致人支气管上皮细胞BEAS-2B染色体不稳定性研究

目的 建立煤焦沥青烟提取物诱导的人支气管上皮细胞BEAS-2B株的恶化模型;观察不同时期细胞的染色体不稳定性与细胞恶性转化之间的关系.方法用四唑蓝(MTT)法测定煤焦沥青烟提取物的细胞毒性,以煤焦沥青烟提取物诱导并观察BEAS-2B细胞传代转化过程中的形态学改变;软琼脂克隆形成实验检测细胞恶性转化能力,流式细胞术检测细...     

煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞Nrf2-Keap1/ARE通路的影响

[目的]研究煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA和Nrf2蛋白表达的影响,以期探讨对抗煤焦沥青致细胞氧化损伤的分子靶标和通路。[方法]GC-MS检测煤焦沥青烟提取物的主要成分;采用细胞急性毒性实验,根据文献以及以往的实验将煤焦沥青烟提取物分为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00 mg/L五个染毒组,以BEAS-2B细胞为染毒对象进行实验;MTT法检测染毒BEAS-2B细胞生长增殖情况;RT-PCR检测Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA的表达量;Western blot测定Nrf2蛋白的表达量。[结果]煤焦沥青烟提取物主要成分中86.02%为多环芳烃类化合物;浓度为1.25 mg/L时促进BEAS-2B细胞增殖,2.5～10 mg/L抑制细胞增殖;染毒组Nrf2 mRNA及蛋白表达量低于对照组,而Keap1 mRNA表达量高于对照组,差别均有统计学意义（P〈0.05）;在1.25～5.00 mg/L浓度范围内,随着染毒浓度的增加,Nrf2 mRNA和蛋白表达呈递增趋势,而染毒浓度为10.00 mg/L时,Nrf2 mRNA和蛋白的表达量均有所减少（P〈0.05）;NQO1 mRNA在2.5～5.00 mg/L浓度范围内随染毒浓度的增加表达水平逐渐升高。[结论]煤焦沥青烟提取物刺激BEAS-2B细胞后,可能通过Nrf2-Keap1/ARE通路来调节细胞抗氧化应激能力。     

饮用水有机提取物对正常人肝HL-7702细胞的毒性

目的 研究饮用水有机提取物对正常人肝(HL-7702)细胞所致的毒性作用.方法 采集某水厂水源水和管网末梢水水样,富集并提取有机物.调整HL-7702细胞悬液密度为2×105/孔,分别加入终浓度为0(对照,二甲基亚砜)、1.25、5、20 ml原水有机提取物/ml,每24h更换一次培养液,培养72 h.测定细胞的存活率...     

四种细胞毒性试验测定柴油机尾气颗粒物提取物急性毒性的比较

目的比较四种体外细胞毒性试验检测柴油机尾气颗粒物(DEP)提取物急性毒性的能力。方法用浓度分别为5、10、20、40、80和160μg/ml的DEP提取物作用于16HBE细胞,于12、24及48h后,通过MTT法、中性红法、乳酸脱氢酶(LDH)法及蛋白测定法测细胞存活率。结果 MTT法在检测急性毒性方面与其它三种方法相比,染毒12h时就表现出了很高的敏感性。随着染毒时间的增加,MTT法与中性红法的敏感性逐渐提高,染毒24h后与对照组相比,各剂量组细胞存活率明显降低(P<0.05)。LDH法测定DEP提取物染毒24h后细胞存活率有所降低,但继续增加染毒时间,存活率不再发生变化。蛋白法测定染毒12h和24h的细胞存活率,仅高剂量组显著降低,染毒48h后,各剂量组细胞存活率均显著降低。结论四种不同的细胞毒性试验测定结果存在差异,MTT法和中性红法比蛋白法和LDH法更为敏感。结合各试验检测的毒性指标可以看出,DEP提取物主要影响16HBE细胞内各细胞器的功能,如线粒体、溶酶体;对于细胞贴壁的影响和细胞膜损伤程度的影响较弱。     

蔬菜大棚土壤有机提取物致基因组不稳定表型研究

目的研究温室土壤中有机提取物(extractable organic matter,EOM)的遗传毒性。方法采集并制备某蔬菜大棚土壤的EOM。40只健康10周龄清洁级昆明雄性小鼠随机分为5组:阴性对照(DMSO)组和低剂量(0.5 g/ml)、中剂量(1.5 g/ml)和高剂量(3 g/ml)EOM染毒组以及阳性对照(环磷酰胺,100 mg/kg体重腹腔注射,染毒2次)组,每组8只。采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒4周。采用胞质分裂阻滞微核细胞组学试验检测有机提取物所致基因组不稳定表型和细胞毒性。结果随着有机提取物染毒浓度的增加,小鼠淋巴细胞微核细胞率、微核率、核质桥率、核芽率、细胞坏死率均呈上升趋势,双核细胞率和核分裂指数呈下降趋势,经相关分析,均P<0.05;而细胞凋亡率呈先升高后下降的趋势。结论温室土壤中有机提取物可以诱使小鼠外周血淋巴细胞产生基因组不稳定表型,并产生较强的细胞毒性,提示具有遗传毒性。     

利用实时细胞分析法和Alamar Blue法测定雾霾细颗粒物对呼吸系统的细胞毒性

目的利用实时细胞分析(real time cell analyze,RTCA)法及Alamar Blue法测定雾霾细颗粒物对于人支气管上皮细胞(BEAS-2B)和人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的毒性作用,比较两种方法检测雾霾细颗粒物对呼吸系统影响的差异。方法分别将BEAS-2B及MRC-5细胞接种于RTCA配套16孔板及普通96孔板。接种24 h后,分别用终浓度为2500、1250、625、312.5、156.25和78.125μg/m L的雾霾细颗粒物进行染毒。选择3、12、24、36和48 h通过RTCA法及Alamar Blue法两种方法进行测定,计算IC_(50)。采用SPSS 16.0,利用配对t检验,对两种方法所得IC_(50)进行统计分析,并分析其相关性。结果雾霾细颗粒物作用于两种细胞后分别利用RTCA法及Alamar Blue法测得的IC50具有相关性,但差异无统计学意义。结论雾霾细颗粒物对于呼吸系统细胞有毒性,RTCA法可以应用于雾霾细颗粒物体外毒性检测。     

鱼腥草提取液抗流感、腮腺炎病毒效果观察

为了解中草药鱼腥草抗甲、乙型流感病毒和流行性腮腺炎病毒的效果;将鱼腥的3种提取物分别在体外细胞上进行抗病毒实验。以抑制细胞病变作为实验药物对病毒起作用的判断标准,实验：鱼腥草挥发油对甲,乙型流感病毒和腮腺炎病毒均呈现一定的抑制效果,最低有效浓度（相当于含生药）分别为4．5mg/ml,2.25mg/ml和14mg/ml;鱼腥草乙酸乙酯提取物抑制甲,乙型流感病毒的最低有效浓度分别为3mg/ml和0．75mg/ml,但该提取物对腮腺炎病毒无抑制作用,鱼腥草水提取物对3种实验病毒均不起作用,此结果表明,鱼腥草中含有至少两种以上抗病毒活性因子,且其作用机制可能不同。     

加氯消毒对水中有机提取物致人胎肝细胞DNA损伤的影响

目的探讨自来水加氯消毒对水中有机提取物致细胞DNA损伤的影响。方法于2007年7月(夏季)和2008年3月(春季)采集以长江为水源的某水厂的水源水、经加氯消毒处理后的出厂水和末梢水,以人胎肝细胞(L-02)为靶细胞,采用单细胞凝胶电泳技术,检测水样有机提取物诱导细胞DNA损伤的效应。水样有机提取物设4个染毒浓度(1.2、6、30、150ml/ml),阳性对照为苯并(a)芘(200μmol/L),溶剂对照为二甲基亚砜(DMSO,10μl/ml)。结果春季水源水、出厂水和末梢水以及夏季出厂水和末梢水水样有机提取物在低、中、高浓度(6、30、150ml/ml)引起的L-02细胞DNA损伤较溶剂对照组明显增加。春夏两季加氯消毒后的出厂水和末梢水有机提取物在低、中、高浓度(6、30、150ml/ml)引起的L-02细胞DNA损伤较水源水明显增强。春季的水样有机提取物对细胞DNA的损伤作用高于夏季。结论水源水、出厂水和末梢水有机提取物均能引起L-02细胞的DNA损伤,氯化消毒增加了水源水的遗传毒性,春季水样的遗传毒性大于夏季。     

经氯化处理的生活污水的有机提取物对DNA的损伤

目的 了解氯化后生活污水中有机提取物对DNA的损伤作用,为今后防治其危害提供科学依据.方法 于2006年3月,采集甲大学、某饭店、乙大学的生活污水氯化前、后水样,采用其有机提取物对BALB/C小鼠分别进行彗星试验(0.04、0.2、1.0、5.0 mg/ml)、微核试验(高、中、低剂量组分别相当于提取物原液、20%原液、5%原液)和Ames试验(0.01、0.1、1.0、10、100μl/皿),检测水样有机提取物对DNA的损伤作用.结果 彗星试验显示,氯化前甲大学、某饭店、乙大学1.0、5.0 mg/ml组和氯化后甲大学0.04～5.0 mg/ml 组、某饭店0.2～5.0 mg/ml组、乙大学1.0、5.0 mg/ml组小鼠脾脏细胞头部染色体DNA含量百分比低于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).氯化后各染毒组小鼠脾脏细胞头部染色体DNA含量百分比低于氯化前.微核试验显示,氯化前甲大学、某饭店高剂量组雌性小鼠和甲大学、某饭店高、中剂量组雄性小鼠以及氯化后甲大学高、中剂量组、某饭店高、中、低剂量组雌、雄性小鼠骨髓细胞微核率高于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).Ames试验显示,氯化前某饭店100μl/皿组TA98-S9和甲大学、某饭店10、100μl/皿组TA98 S9以及氯化后某饭店10、100μl/皿组TA98-S9和甲大学、某饭店1.0～100μl/皿组TA98 S9的回变菌落数是空白对照组的2倍以上,且均呈一定的剂量-反应关系;而甲大学、某饭店、乙大学有机提取物对TA97、TA100、TA102均未引起阳性反应.结论 氯化后生活污水的有机提取物对DNA有损伤作用,且强于氯化前.     

煤焦沥青烟提取物诱导人支气管上皮细胞发生炎性凋亡的研究

目的 探讨煤焦沥青烟提取物(coal tar pitch smoke extract,CTP)刺激人支气管上皮细胞(BEAS-2B)是否发生炎性凋亡(pyroptosis).方法 用l、3μg/ml的CTP分别染毒BEAS-2B细胞8、24 h,以二甲基亚砜(DMSO)为对照,用乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活力测定试剂盒和白细胞介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β) ELISA试剂盒分别检测细胞培养上清中的LDH活力和IL-1β含量,用半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(caspase-1)活力测定试剂盒检测细胞caspase-1活力.结果 染毒8h,1、3 μg/ml CTP染毒组细胞中caspase-1的活力分别为(9.29±0.30) μmol/ml和(8.67±0.59) μmol/ml,均明显高于DMSO对照组[(7.42±0.59) μmol/ml],差异有统计学意义(P＜0.05);1、3μg/mlCTP染毒组LDH活力和IL-1β含量与DMSO对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).染毒24 h时,1、3μg/ml染毒组与DMSO对照组细胞中caspase-1活力差异无统计学意义(P＞0.05);1、3μg/ml染毒组培养液上清中LDH活力[(1323.03±28.53)、(1148.45±16.42) U/dl]和IL-1β含量[(125.37±25.00)、(92.04±19.09) pg/m]均高于对照组[LDH:(1091.93±26.64) U/dl,IL-1β:(46.20±14.43) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 煤焦沥青烟提取物刺激BEAS-2B细胞早期caspase-1活力升高,继之LDH酶活力及IL-1β含量均增高,可能发生pyroptosis.     

微囊藻毒素-LR对人支气管上皮细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(microcystins-LR,MC-LR)对人支气管上皮细胞(16HBE)凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响。方法将16HBE细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1、10、20、30、40μg/ml的MC-LR溶液24h后,采用MTT法检测细胞活性。将16HBE细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、2.5、5、10μg/ml的MC-LR溶液培养24、48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白细胞色素C(Cyt-c)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、前凋亡蛋白(Bax)的相对表达量。结果与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组16HBE细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P0.05);随着MC-LR染毒浓度的升高,16HBE细胞的存活率呈逐渐下降的趋势,凋亡率呈上升趋势;随着MC-LR染毒时间的延长,16HBE细胞的凋亡率均呈上升趋势。当暴露时间一定时,与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组16HBE细胞Bax和Cyt-c蛋白的表达水平均升高,Bcl-2蛋白的表达水平均下降(除外2.5μg/ml MC-LR染毒24 h组),差异有统计学意义(P0.05);且随着MC-LR染毒浓度的升高和染毒时间的延长,16HBE细胞Bax和Cyt-c蛋白的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2蛋白的表达水平均呈下降趋势。结论 MC-LR能诱导16HBE细胞发生凋亡,并引起Cyt-c和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。     

黄芪提取物对Aβ_(25-35)诱导的海马神经细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨黄芪提取物(EA)对Aβ_(25-35)所致海马神经元损伤的保护作用及其作用机制。方法分离孕18 d的胎鼠的海马神经细胞进行体外培养,实验分为3组:对照组、模型组和黄芪组。对照组:只加入无B27神经生长因子的神经基础培养基(NB)原液培养24 h;模型组:加入无B27神经生长因子的NB原液,再加入终浓度为10μmol/L Aβ_(25-35)培养24 h;黄芪组:加入无B27神经生长因子的NB原液,先加入终浓度为黄芪提取物20 mg/L培养4 h,再加入终浓度为10μmol/L Aβ_(25-35)培养20 h。在倒置显微镜下观察各组海马神经细胞形态学变化;采用乳酸脱氢酶(LDH)法和3-(4,5-甲基噻唑-2)-2,5-苯基的氮唑溴盐(MTT)法检测细胞活性;Western blot检测各组海马神经细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果模型组的海马神经细胞活性明显下降,细胞出现凋亡的典型的形态学特征,Bcl-2蛋白的表达水平下降而Bax蛋白的表达水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。黄芪组海马神经细胞活性提高、凋亡的细胞数减少,Bcl-2蛋白的表达水平升高而Bax蛋白的表达水平下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪提取物对Aβ_(25-35)所诱导的海马神经元损伤具有一定的保护作用,可能与其降低海马神经细胞Bcl-2蛋白的表达水平升高Bax蛋白的表达水平有关。     

铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡相关蛋白表达的影响及凋亡的可能机制。方法体外培养HBE细胞,分为对照组、铀矿尘组(12.5、25、50、100、200μg/ml)。细胞染毒12 h后,用MTT法检测HBE细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及细胞色素C(CytC)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-9(caspase-9)的蛋白表达。结果当铀矿尘浓度为25~200μg/ml时,HBE细胞存活率均低于对照组,细胞凋亡率和坏死率均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。随着铀矿尘浓度的升高,HBE细胞Bax、Bcl-2、CytC、caspase-3、caspase-9蛋白表达量逐渐增加,均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论铀矿尘对HBE细胞的凋亡作用可能是通过线粒体途径实现的。     

锰铅镉复合暴露对人神经母细胞瘤细胞的毒性作用

目的探索重金属复合暴露对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞的毒性效应。方法将SK-N-SH细胞分别暴露于空白培养基(对照)和氯化锰(125、250、500、750、1 000、1 500、2 000、4 000、6 000μmol/L),乙酸铅(500、750、1 000、1 500、2 000、2 500、3 000μmol/L),氯化镉(5、10、15、20、30、40、60、80μmol/L)单一及二元、三元复合溶液24、48、96 h后,检测细胞存活率,计算锰、铅、镉的药物抑制浓度(IC)。其中,二元、三元复合溶液的浓度均为相应金属IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)的等毒效应比混合,分别用毒性单位法、混合毒性指数法对毒性效应进行评价。结果与对照组相比,不同浓度锰、铅、镉单独染毒不同时间SK-N-SH细胞的存活率均较低,除500μmol/L铅染毒24、96 h组和5μmol/L镉染毒24、48 h组外,差异均有统计学意义(P0.05);随着锰、铅、镉单独染毒浓度的升高和染毒时间的延长,SK-N-SH细胞的存活率均呈下降趋势。三种金属对SK-N-SH的细胞急性毒性依次为镉(IC_(50):38.728μmol/L)锰(IC_(50):442.739μmol/L)铅(IC_(50):1 624.850μmol/L)。同一金属不同染毒时间的IC_(50)排序均为96 h48 h24 h。锰和镉复合暴露对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h均表现为拮抗作用,在48 h均表现为协同作用;96 h在毒效应为IC_(10)、IC_(20)时均表现为部分相加作用,在IC_(30)、IC_(50)时均表现为协同作用。镉和铅对SK-N-SH细胞的联合毒性在24 h毒效应为IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)时均表现为拮抗作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用;在48 h毒效应为IC_(10)时表现为拮抗作用,在IC_(20)、IC_(30)、IC_(50)时均表现为部分相加作用;在96 h时均表现为部分相加作用。铅和锰对SK-N-SH细胞的联合毒性在24、96 h毒效应为IC_(50)时分别表现为简单相加、协同作用,其余均表现为部分相加作用。锰、铅、镉对SK-N-SH细胞的联合作用在24、96 h时均表现为部分相加作用;48 h时在IC_(10)、IC_(20)、IC_(30)均表现为协同作用,在IC_(50)时表现为部分相加作用。结论三种金属对SK-N-SH细胞的毒性均表现为随暴露时间的延长而增强的趋势。金属复合暴露呈现复杂的毒性效应,毒性效应与特定的金属组合、暴露时间、暴露浓度密切相关。     

维生素E对纳米二氧化硅诱导人支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的探讨纳米二氧化硅(nano-SiO_2)暴露对人支气管上皮细胞(16 HBE)的损伤作用及维生素E对其的保护作用。方法根据CCK-8细胞毒性结果,选取对照,微米级SiO_2(micro-SiO_2,20μg/ml)、纳米nano-SiO_2(5、10和20μg/ml)和维生素E(20μg/ml nano-SiO_2+50μmol/L维生素E)处理16 HBE细胞24 h,采用倒置显微镜观察细胞形态改变,Hochest 33342和膜联蛋白V-碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡,RNA酶A消化和PI染色来检测细胞周期分布。结果当nano-SiO_2浓度达10μg/ml时,细胞活力明显降低(P0.05),随着nano-SiO_2浓度进一步增高,细胞活力呈剂量依赖性降低;细胞体积缩小,核固缩,细胞的折光性减弱。随着nano-SiO_2浓度的增加,凋亡率呈剂量依赖性升高;而维生素E组较20μg/ml nano-SiO_2组,细胞凋亡率有所降低;细胞周期出现轻微的G1期阻滞,维生素E可以改善这种阻滞现象。结论维生素E干预对由于nano-SiO_2引起的16 HBE的凋亡及细胞周期改变具有一定的保护作用。     

碳黑纳米颗粒诱导人支气管上皮细胞炎症反应中环状RNA的表达改变

目的探索碳黑纳米颗粒(CBNPs)对人支气管上皮细胞(16HBE细胞)的毒性效应, 并根据全转录组高通量测序对差异表达的环状RNA进行筛选与鉴定, 为CBNPs暴露的生物标志物研发与其在表观遗传毒理学的应用提供依据。方法于2020年6月, 用20、40和80 μg/ml浓度的CBNPs对16 HBE细胞进行染毒处理, 以不加任何干预的16HBE细胞作为对照组, 通过CCK8与乳酸脱氢酶(LDH)实验检测CBNPs细胞毒性。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及ELISA法检测各浓度CBNPs染毒72 h后白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)mRNA及蛋白水平改变, Western blot检测核因子-κB(NF-κB)相关炎性蛋白[Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子-κB(P-NF-κB)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)]的表达水平;根据高通量测序结果筛选并通过qRT-PCR鉴定差异表达的circRNA, 选择稳定差异表达且与NF-κB通路关联性最强的circRNA进行环状性能鉴定。结果与对照组比较, 40、80 μg...