隐孢子虫卵囊基因组的提取及以保守基因为靶标的PCR检测

目的探讨提高PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法的特异性和敏感性,为防止隐孢子虫病流行提供检测依据。方法应用BALB／c小鼠感染扩增卵囊,不连续蔗糖密度梯度离心法从粪便中纯化卵囊,通过冻融和超声法破碎卵囊,然后以酚／氯仿／异戊醇法提取基因组DNA作为PCR扩增模板,根据隐孢子虫保守基因18S rRNA,设计一对特异性的引物,扩增约450bp的目的片段。结果超声处理法对隐孢子虫卵囊的破囊率为92％,明显高于冻融法的86％。2个组抽提的DNA作为模板均扩增出目的片段,但超声处理组敏感性高于冻融处理组,分别能检测到卵囊2个／mL和20个／mL。结论超声法对微小隐孢子虫卵囊的破碎效果优于冻融法,经改进的PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有特异性好和敏感性强的特点。     

两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法的建立

目的建立两种机会性寄生原虫——微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫（贾第虫）基因检测方法。方法从微小隐孢子虫和蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪便标本内分离纯化卵囊和包囊，提取基因组DNA。根据微小隐孢子虫18S rRNA基因和贾第虫磷酸丙糖异构酶（tim）基因各设计或合成两对特异性引物，采用PCR技术分别对从卵囊和包囊提取的和6种对照DNA样本（日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫以及人体血细胞DNA等），以及此二种虫相互间的DNA样本进行检测，以确定该法的特异性和敏感性。方法建立后，取艾滋病患者粪便标本对之进行检测。结果从微小隐孢子虫和贾第虫的DNA样本中分别扩增出各自相应基因的500bp和683bp长度的片段；最少可检测出20pg隐孢子虫和0．4pg贾第虫DNA；几种对照DNA样本均不发生交叉反应；受检的30例艾滋病患者粪便标本中，7例显示微小隐孢子虫阳性，未检出贾第虫。结论建立的基因检测方法，对微小隐孢子虫和贾第虫的检测具有高度的特异性和敏感性，可用于临床艾滋病合并感染的早期诊断和人群流行病学筛查。     

关于人源隐孢子虫排卵规律的探讨

目的探讨昆明小鼠在免疫抑制和非免疫抑制条件下,感染相同剂量3株人源隐孢子虫分离株的排卵规律。方法饮水中加地塞米松(DEX)抑制小鼠免疫功能,人工灌胃隐孢子虫卵囊(CSO)感染小鼠,观察小鼠粪便中CSO排出规律和小鼠临床表现。结果1号和2号分离株感染小白鼠后的排隐孢子虫卵囊规律几乎一致,二者与3号分离株感染小白鼠后的排隐孢子虫卵囊规律差别较大。结论可见能够感染人的隐孢子虫的虫种具有广泛性,这些研究结果,为进一步了解隐孢子虫的人畜互传途径和隐孢子虫病的防治提供了重要的理论依据,并为人源隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。     

我国部分农村地区儿童隐孢子虫感染现况调查

目的了解我国部分农村地区儿童隐孢子虫感染现况。方法采取随机整群抽样方法,对我国部分农村地区5 458名儿童采集粪便样本进行隐孢子虫卵囊检测,同时进行问卷调查。结果调查农村地区儿童隐孢子虫感染率为2.58%,其中一至三年级小学生和幼儿园儿童隐孢子虫感染率分别为2.83%和2.26%。湖北省、广东省和江苏省儿童隐孢子虫感染率由高到低依次为4.00%,2.40%和1.09%,差异有统计学意义(!2=32.38,P0.01)。近1年家庭饲养家畜的儿童隐孢子虫感染率为3.79%,近1年家庭没有饲养家畜的儿童隐孢子虫感染率为1.27%,差别具有统计学意义(!2=34.33,P0.01)。结论农村地区儿童隐孢子虫感染情况不容忽视,影响因素可能涉及地区、饮用水,家庭饲养牲畜以及个人卫生习惯等。     

大理地区静脉吸毒人群隐孢子虫感染调查

目的调查静脉吸毒人群隐孢子虫的感染情况,初步研究性别、年龄、民族和吸毒年限与感染的关系。方法收集静脉吸毒者粪便标本500份,采用改良抗酸染色法检查粪便中的隐孢子虫卵囊。结果500份粪便中84份查到隐孢子虫卵囊,总感染率为16.8%;不同性别、年龄和民族的吸毒者隐孢子虫感染率有一定差别,但差异无统计学意义;随着吸毒时间的延长,隐孢子虫感染率也相应增高,不同吸毒年限感染率差异有统计学意义。结论静脉吸毒人群隐孢子虫的感染率高于普通人群,应加强对该人群的防治工作。     

江苏省某地农村集中式供水隐孢子虫污染与儿童感染现状研究

目的了解江苏省某地农村集中式供水隐孢子虫污染与儿童感染现状,探讨可能的传播途径及影响因素。方法对调查地区集中式供水设施进行卫生学调查,按照《生活饮用水标准检验方法》（GB/T5750–2006）检测24份水源水和出厂水中隐孢子虫卵囊含量。采取整群抽样方法调查供水地区1 651名儿童,通过问卷调查了解儿童一般人口学资料、生活习惯和环境卫生情况等,采集儿童粪便,用金胺酚─改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊。结果水源水及出厂水水样中均未检出隐孢子虫卵囊,儿童粪便中隐孢子虫卵囊阳性率为1.09%,感染率幼儿园儿童大于小学生（1~3年级）,儿童感染者多无自觉症状,未发现与感染有关的影响因素。结论该地农村儿童存在隐孢子虫感染,需要进一步对可能的感染途径和影响因素进行研究。     

长沙市某戒毒所男性吸毒人员中隐孢子虫感染状况的研究

目的：调查男性吸毒人员中隐孢子虫的感染状况，为制订隐孢子虫病的防制对策和措施提供科学依据。方法：采用现况研究，通过整群抽样，对男性吸毒人员进行现场问卷调查并采集粪便标本903份，用快速改良抗酸二步法染色以检查粪便中隐孢子虫卵囊。结果：903例中阳性172例，总阳性率为19.05％；不同年龄组隐孢子虫感染差异有显性；不同化程度和不同职业的隐孢子虫感染差异无显性；不同吸毒年限的隐孢子虫感染差异虽无显性，但随着吸毒年限的增加，阳性率也相应增加。结论：男性吸毒人员的隐孢子虫感染率比较高，可见，男性吸毒人员是隐孢子虫感染的高危人群，应作为重点防治对象。     

人畜粪便隐孢子虫快速检测方法研究

目的探求RIDA隐孢子虫快速检测法检测人和牲畜粪便隐孢子虫的优缺点,验证该方法与金胺-酚改良抗酸染色法检测结果的一致性。方法随机采集200位人的粪便和72头牲畜的粪便分别用RIDA隐孢子虫快速检测法和金胺酚-改良抗酸复染法检测隐孢子虫;用SPSS对两种检测方法的结果进行卡方检验。结果 RIDA隐孢子虫快速检测法检测出儿童和牲畜粪便的阳性率分别为5.00%和13.89%;用金胺酚-改良抗酸复染法检测出的人和牲畜粪便的阳性率分别为4.50%和25.00%;两种方法检测人类粪便的结果差异性无统计学意义(P0.05);但两种方法牲畜粪便的检测结果差异有统计学意义(P0.05)。结论 RIDA隐孢子虫快速检测法适用于检测大样本的人类粪便隐孢子虫,并具有较好的效果。     

慢性重型乙型肝炎患者隐孢子虫感染的研究

目的探讨慢性重型肝炎与隐孢子虫感染的关系，为防治该病提供依据。方法用金胺-酚染色法(AA—P)和改良抗酸染色法(MAF)检测218例慢性重型乙型肝炎(慢重肝)患者和140例腹泻儿童粪便标本隐孢子虫卵囊，用PCR技术检测其DNA，并进行内切酶分析；对隐孢子虫感染影响因素进行分析。结果经AA-p、MAF和PCR检测，慢重肝患者隐孢子虫感染率分别为4．1％、3．2％和6．0％；腹泻儿童感染率为0．7％、0．7％和1．4％、PCR结果显示，慢重肝患者隐孢子虫感染率高于腹泻儿童；阳性患者腹泻史、动物接触史明显高于阴性患者，农村患者感染率高于城市患者结论慢性重型肝炎患者对隐孢子虫的易感性增加，隐孢子虫感染是引起慢性重型肝炎患者腹泻和可能加重其病情的因素之一。     

湖北赤壁市农村儿童隐孢子虫感染情况

目的调查赤壁市农村儿童隐孢子虫感染情况及影响因素,为隐孢子虫病的防治提供依据。方法采取整群抽样方法调查儿童。采集儿童粪便用金胺一酚改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊。通过问卷了解调查对象一般人口学资料、生活习惯和环境卫生情况等。结果在农村地区共调查1128名儿童,隐孢子虫感染率为3．19％（36／1128）,其中小学生和幼儿园儿童分别为3．33％和3．02％,男生和女生隐孢子虫病感染率分别为3．42％和2．89％。临床主要表现为腹泻,以水样便居多。近1年家人寄生虫感染（OR=35．124,95％CI：11．379-108．422）和最近3个月家人患腹泻或痢疾（OR=13．586,95％CI：5．359～34．447）是隐孢子虫子感染的危险因素。结论该地农村儿童存在隐孢子虫的感染,应进一步加强预防隐孢子虫子感染的健康教育和卫生宣传。     

艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫及病原菌感染调查

目的调查北京地区艾滋病相关性慢性腹泻患者中隐孢子虫及其他病原微生物感染状况。方法收集67例北京地区艾滋病相关性慢性腹泻患者粪便,对患者粪便标本进行集卵,检测隐孢子虫卵囊,同时对留取的粪便检测隐孢子虫卵囊片段;用流式细胞仪检测患者血液中CD4+细胞计数;检测其是否存在引起腹泻的病原菌和艰难梭菌毒素。结果 4例粪便标本检测隐孢子虫卵囊阳性,且PCR检测均为阳性,2种方法阳性符合率100%,确定感染率为5.97%(4/67),感染者均为获得性免疫缺陷综合征中晚期患者,其血液中CD4+细胞计数<200、200～499、≥500 cells/μL的患者感染率分别为5.9%(2/34)、7.4%(2/27)、0;被感染者均系无业人员,生活来源无保障,生存环境较差;对67份标本同期进行细菌培养及涂片革兰染色,其中60份标本真菌培养阳性,经鉴定均为念珠菌,艰难梭菌毒素A/B检测有1例阳性。结论北京地区艾滋病慢性腹泻患者中存在着隐孢子虫感染,其感染率与患者性别无关,与患者生存环境有一定关系;患者CD4+细胞计数水平降低及疾病发展到中晚期的患者易发生隐孢子虫感染;北京地区艾滋病慢性腹泻患者中普遍存在真菌肠道感染。     

隐孢子虫病研究进展

隐孢子虫是一类寄生于人和动物体内的肠道原虫，从粪便以卵囊形式排出体外。隐孢子虫存在于各种水体中，如地表水、地下水、过滤水、污染湖水、游泳池水等。隐孢子虫有多种，引起人类感染的主要是伯温隐孢子虫。介水性隐孢子虫病是由饮用含隐孢子虫卵囊的水所引起的以腹泻为主要症状的消化道传染病。目前，隐孢子虫病已被视为全球腹泻病中最常见的病因之一，且因其为艾滋病的常见并发症而引起重视。世界卫生组织和美国疾病预防控制中心均将该病列为新发传染病。现对其研究进展作一综述。     

咸宁咸安区儿童隐孢子虫感染情况调查

目的了解咸宁市咸安区儿童隐孢子虫感染情况,为科学防控隐孢子虫病提供科学依据。方法使用统一儿童问卷调查表,调查儿童生活习惯、健康状况,并采集咸安区部分幼儿园/小学儿童粪便样本1 035份,采用金胺—酚抗酸改良染色法镜检隐孢子虫卵。结果 1 035名儿童隐孢子虫卵囊镜检阳性58名,阳性率为5.60%;男性、女性隐孢子虫感染率分别为5.98%、5.18%,男女性别差异无统计学意义(χ2=0.313,P>0.05);幼儿园、小学儿童隐孢子虫感染率分别为6.07%、5.25%,两者差异无统计学意义(χ2=0.317,P>0.05)。结论咸宁市咸安区儿童存在隐孢子虫的感染,应加强预防隐孢子虫病的知识宣传,倡导健康的生活方式,养成良好的卫生习惯,以预防隐孢子虫感染。     

荆州市游泳儿童隐孢子虫感染调查

目的了解湖北荆州市游泳儿童隐孢子虫的感染现状。方法在荆州市区域范围内随机抽取5家游泳馆,于2017年8月中旬,对其换水方式、换水频率、消毒频率等进行问卷调查;选择游泳馆内年龄14岁的游泳儿童,调查其年龄、身高、体重、生活习惯、生活环境、游泳习惯等;同时采集儿童24 h内的新鲜粪便,并检测粪便隐孢子虫卵囊。结果共调查216人,游泳儿童隐孢子虫感染率是3.7%(8/216)。男童隐孢子虫的感染率[0.84%(1/119)]低于女童[7.22%(7/97)],差异有统计学意义(P0.05)。不同年龄组、游泳习惯、游泳馆类型及游泳池消毒情况游泳儿童隐孢子虫感染率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论荆州市游泳儿童存在隐孢子虫感染,应进一步加强隐孢子虫有关的卫生宣传和健康教育。     

十堰市幼儿园儿童隐孢子虫感染情况

隐孢子虫病是由隐孢子虫引起的人兽共患病,其特点是宿主种类多,生活史简单,不需要转换宿主,以腹泻为主要症状。隐孢子虫病在国外较多见。我国1987年在南京发现首例患者[1],以后该病的发病率日益增高[2-3]。为了解十堰市幼儿隐孢子虫感染情况及流行特点,笔者对十堰市幼儿园儿童进行了隐孢子虫感染现况调查,报道如下。1对象与方法1.1对象整群抽取十堰市城区及丹江口市、郧县、郧西县、房县、竹山县12所幼儿园(城市6所、乡镇6所)儿童粪便标本1118份,其中男童587人,女童531人;城市699人,乡镇419人。年龄为3~6岁。1.2方法以班为单位,分批集中进行…     

微小隐孢子虫CRIP基因克隆与分析

目的 比对分析微小隐孢子虫南京(NJ)株亲环素-RNA相互作用蛋白(CRIP)与其他隐孢子虫株CRIP基因序列的差异.方法 根据GenBank微小隐孢子虫IowaⅡ株CRIP基因序列设计并合成2对引物,应用巢式聚合酶链反应(PCR)技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增CRIP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将重组质粒pMD18-T-CpCRIP进行PCR和双酶切鉴定后测序,应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他种属的CRIP基因序列同源性.结果 巢式PCR扩增获得的特异性CRIP基因序列,经PCR及双酶切鉴定确为pMD18-T-CpCRIP重组质粒;测序结果显示,该序列有119 bp,微小隐孢子虫NJ株CRIP基因全长为909bp,编码302个氨基酸;测序结果和同源性分析显示,中国微小隐孢子虫NJ株CRIP基因序列与国外的微小隐孢子虫IowaⅡ株同源性为98％;该隐孢子虫NJ株CRIP基因序列获GenBank登录号JQ396883.结论 微小隐孢子虫NJ株CRIP基因与其他微小隐孢子虫株存在基因变异.     

微小隐孢子虫20K亲环蛋白基因克隆及分析

目的 克隆微小隐孢子虫(Cp)南京株(NJ)的20K亲环蛋白(CyP)基因,并对其核苷酸和氨基酸序列进行分析.方法 采用昆明种小鼠建立微小隐孢子虫NJ株感染模型,根据微小隐孢子虫Iowa Ⅱ株20K CyP基因序列设计合成2对引物,应用巢式PCR技术从微小隐孢子虫NJ株基因组DNA中扩增20K CyP基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,将阳性克隆重组质粒进行菌落PCR及双酶切鉴定;应用生物信息学方法分析微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因与其他虫株核苷酸和氨基酸序列差异,并分析该基因蛋白结构域.结果 巢式PCR扩增得到特异的20K CyP基因,经PCR及双酶切鉴定获得了正确的pMD18-T-20K CyP重组质粒;测序结果显示,微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因全长519 bp,编码173个氨基酸,该基因已登录GenBank,登录号为JQ284431;氨基酸序列分析表明,微小隐孢子虫NJ株与Iowa Ⅱ株20K CyP基因编码的氨基酸序列具有100％同源性;对20K Cyp基因进行蛋白结构域分析,显示该基因序列所编码的蛋白具有特异性类亲环蛋白A、B、H的肽脯氨酰顺反异构酶(PPIase)区域,该区域与人的亲环蛋白A、B、H具有相似性.结论 成功克隆微小隐孢子虫NJ株20K CyP基因,该基因具有高度保守性.     

潍坊地区儿童隐孢子虫感染的流行病学调查

隐孢子虫病是近年来新发现的一种世界性人畜共患病 ,常引起人类和多种动物的腹泻 ,在免疫缺陷病人、艾滋病病人和儿童中发病率较高。我们于 1996年 3月～ 1997年 6月对潍坊地区儿童隐孢子虫的感染情况进行了现场调查。1.对象与方法 :对象为潍坊市市区和潍坊市南部山区5～ 13岁小学生 ,及部分儿童家中饲养的家畜。取儿童新鲜粪便直接涂片 ;动物粪便过滤离心后 ,取沉渣涂片 ,标本以金胺 酚法及改良抗酸法染色 ,以显微镜下发现隐孢子虫卵囊为确诊依据。对检出卵囊的儿童静脉抽血 ,采用抗生物素 生物素 免疫酶化学法进行细胞免疫功能测定。另取…     

金坛市农村集中式供水隐孢子虫污染及儿童感染现状

目的了解金坛市农村集中式供水隐孢子虫污染及人群感染等情况。方法采集12家农村集中式供水单位出厂水,用Filta-Max方法检测隐孢子虫包囊和卵囊;采集农村儿童粪便,采用金胺-酚改良抗酸染色法检查隐孢子虫感染情况。采用问卷调查法了解农村集中式供水单位情况;了解儿童家庭情况、生活习惯、最近健康状况、饮食情况等资料。结果农村集中式供水单位的出厂水未检出隐孢子虫。儿童隐孢子虫感染率为1.09%,小学生和幼儿分别为0.51%和1.61%,差异有统计学意义(P0.05)。低年龄特征、近1年家人有寄生虫感染和最近3个月家人患腹泻或痢疾是隐孢子虫感染的危险因素(P0.05)。结论在预防隐孢子虫污染饮水的同时,应加强防治知识宣传,改善环境,养成良好的卫生习惯。     

螺旋霉素治疗婴儿隐孢孑虫性腹泻无效:一项随机双盲试验的结果

在一项回顾性研究中,作者证实住院的腹泻婴儿粪便中有隐孢子虫卵囊者发病率较高,住院时间长,且病死率也高。事实上隐孢子虫感染在营养不良的儿童中普遍存在。已证明隐孢子虫易寄生于严重T细胞缺陷者,例如艾滋病患者。鉴于有用螺旋霉素治疗肠隐孢子虫病获得成功的报告,本文进行了一项双盲对照试验,以评估螺旋霉素治疗婴幼儿隐孢子虫性腹泻的疗效。 1987年3～5月,某医院儿科腹泻病房