人CD4+FOXP3+T细胞的异质性研究进展

CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)是一群具有免疫调节功能的细胞,对维持自身免疫耐受和免疫自稳必不可少,FOXP3特异性表达于Treg细胞,是Treg细胞发育、活化、发挥功能的关键.目前,CD4+ FOXP3+T淋巴细胞常被用来定义Treg细胞进行科学研究,而最近研究表明,人CD4+ FOXP3+T淋巴细胞存在表型和功能上的异质性,这其中包括具有免疫抑制功能的CD4+ FOXP3+ Treg,还包含没有抑制功能的其它类型T细胞,而这些不同功能的细胞亚群可以通过表型的差异加以区分.本文就近年来关于CD4+ FOXP3 +T细胞亚群表型特征和功能的异质性研究作一综述.     

红细胞输注无效患者外周血T淋巴细胞亚群和CD4~+CD25~+调节性T细胞水平的变化

目的通过观察红细胞输注前后患者T淋巴细胞亚群和调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)水平的变化,探讨其与红细胞输注无效的关系。方法选择反复输注红细胞患者30例,采用流式细胞术检测输血前后外周血CD3+T细胞的水平和CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+CD25+Treg的水平。结果红细胞输注无效组患者输血后的CD3+T细胞以及CD3+CD4+T细胞的水平较输血前升高(P<0.05),CD3+CD8+T细胞无改变(P>0.05),CD4+CD25+Treg下降(P<0.05);而有效组患者CD4+CD25+Treg的水平增高(P<0.05),CD3+T细胞、CD3+CD4+及CD3+CD8+T细胞的水平无变化(P>0.05)。结论异体红细胞输注造成机体免疫功能改变,CD4+CD25+Treg水平的下降导致T细胞的异常活化,可能最终导致红细胞输注无效的发生。     

CD4~+Foxp3~+T淋巴细胞新功能亚群在系统性红斑狼疮中的分布和意义

目的:检测人外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞新的功能亚群,并分析其与系统性红斑狼疮(SLE)的关系。方法:以Foxp3-FITC、CD45RA-PE、CD3-ECD、CD4-PC7、CD25-PC5抗体组合采用五色流式细胞仪检测21例活动期SLE患者和22例健康体检者(正常对照组)外周血CD4+Foxp3+T淋巴细胞亚群。根据CD45RA和Foxp3的不同表达强度将CD4+Foxp3+T淋巴细胞亚群划分为3个不同的细胞亚群,并统计分析其在SLE中的分布情况。结果:根据Foxp3表达强度和CD45RA的表达差异可将CD4+Foxp3+T淋巴细胞分成3个亚群,CD45RA+Foxp3low(Ⅰ区)、CD45RA-Foxp3high(Ⅱ区)和CD45RA-Foxp3low(Ⅲ区)。SLE患者CD4+Foxp3+T淋巴细胞占CD4+T细胞的百分率为(9.805±5.331)%,高于正常对照组(5.717±2.689)%(P<0.01),其中主要是CD45RA-Foxp3low(Ⅲ区)细胞较正常对照组增多[(6.848±4.625)%比(4.013±2.246)%,P0.05)。SLE患者Foxp3mRNA水平较正常对照组有轻度升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。用CD45RA+Foxp3low(Ⅰ区)和CD45RA-Foxp3high(Ⅱ区)细胞来界定SLE患者的Treg细胞,其比率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:人外周血CD4+Foxp3+T细胞具有异质性,利用流式细胞仪结合CD45RA和Foxp3的不同表达强度,能清晰区分CD4+Foxp3+T细胞的3个不同表型的功能亚群。对CD4+Foxp3+T细胞的准确划分对于评价SLE等疾病中Treg细胞的分化、功能具有重要意义。     

不同树突状细胞对CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外扩增的影响

目的利用不同种类树突状细胞(dendritic cells,DC)体外扩增获得表型和功能稳定的CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)。方法免疫磁珠法(MACS)分离Balb/c小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,利用与调节性T细胞同基因或异基因成熟DC、未成熟DC和调节性DC刺激其扩增,流式细胞术测定其纯度和表型。以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,验证扩增前后Treg细胞的免疫抑制功能。结果MACS分离的CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(95.38±1.82)%,同基因和异基因DC都能有效刺激Treg细胞体外扩增,其中同基因成熟DC扩增效果最为明显。而且同基因成熟DC扩增后CD4+CD25+调节性T细胞纯度达到(94.16±1.88)%,而且高表达Foxp3分子。当CD4+CD25+调节性T细胞与效应T细胞比例为1∶1时,能够有效的抑制效应T细胞的增殖,而且,同基因成熟DC扩增的CD4+CD25+调节性T细胞的抑制效果比新分离的Treg效果更好。结论同基因成熟DC能够体外扩增表型和功能稳定的Treg细胞。     

CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞在结核病发生中的作用研究

目的:探讨CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在结核病发生中的作用。方法:采用回顾性分析的方法,分析我院收治的60例结核病患者(观察组)和60例健康体检者(对照组)的临床资料。结果:观察组治疗前CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例明显高于对照组,治疗2、6个月末观察组患者CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例明显降低,观察组CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例与CD4+T细胞、CD8+T细胞、IFN-γ和IL-4呈现明显的负相关(P<0.05)。结论:针对CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞在结核病发生机制中的作用,开展从免疫治疗和结核病疫苗设计提供新的作用靶点和诊疗依据,值得临床推广应用。     

CD4+T细胞的研究进展

近年来,随着对CD4+T细胞研究的深入,对Th1和Th2细胞的免疫生物学活性及免疫调节也有了进一步的认识.CD4+T细胞新亚型CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及Th17细胞受到了人们广泛的关注,尤其是细胞的分化调节、功能及相关疾病的发病机制.本文就CD4+T细胞各亚群的生物学特征及分工、亚群间的相互调节、免疫应答与疾病的关系等作一综述.     

2例异体手移植术后受者T细胞亚群与CD3~+HLA-DR~+细胞水平的动态观察

目的　研究异体复合组织移植 手移植术后病人外周血T淋巴细胞亚群及CD3+ HLA DR +T细水平的动态变化。方法　用流式细胞术测定了 2例异体手移植术后不同时间外周血CD3+ 、CD3+ CD4+ 、CD3+ CD8+ 、CD3+ HLA DR+ (活化T细胞 )细胞百分率 ,及CD4/CD8比值 ,以病人术前一周结果作对照。结果　使用免疫抑制剂后 ,于术后第 1日CD3+ 、CD3+ CD4+ 、CD3+CD8+ 、CD3+ HLA DR+ 细胞水平 ,CD4/CD8比值都开始降低 ,以 3～ 5日为最低水平。术后 8日 ,上述指标逐渐回升 ,至 15日后基本趋于平稳 ,但CD3+ 、CD3+ CD4+ 细胞及CD4/CD8比值仍明显低于术前 ,而CD3+ CD8+ 、CD3+ HLA DR+ 细胞水平则高于术前。结论　异体复合组织 手移植术后病人外周血T淋巴细胞亚群及CD3+ HLA DR+ 细胞水平的变化与单一组织器官移植 (肾移植 )术后稳定期的变化一致 ,也与病人术后的稳定病情相吻合。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞体外诱导扩增与临床应用研究进展

CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞在维持外周免疫耐受、预防自身免疫性疾病及移植排斥反应的过程中起着重要作用。Treg细胞治疗方法具有作用时间持久、低毒和靶向特定抗原的特点,但由于Treg细胞在外周血中数量甚少,限制其在临床的应用。研究表明体外扩增得到的Treg细胞的免疫治疗效果大于初始Treg细胞。本文就目前Treg细胞的体外诱导扩增和临床应用等方面的研究进展进行总结。     

肿瘤浸润CD4+T淋巴细胞的抗肿瘤免疫机制

肿瘤浸润CD4+T淋巴细胞是一群从肿瘤组织中发现的具有抗原特异性CD4阳性的T淋巴细胞。肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)包括CD4+T细胞亚群和CD8+特异性T细胞亚群。通过体外大量培养TILs再将其回输至患者体内的过继性细胞治疗(adoptive cell therapy,ACT)可有效杀伤肿瘤细胞,且其中CD8+T细胞起到直接杀伤肿瘤的作用。CD4+T细胞通过识别MHC/肽段复合物杀伤肿瘤,在抗肿瘤免疫反应中也起到重要的作用。但有关CD4+T细胞在肿瘤免疫反应中作用的研究相对较少。本文主要就肿瘤浸润性CD4+T细胞的主要分子特征及研究进展作一综述。     

调节性T细胞在慢性特发性血小板减少性紫癜中的作用

特发性血小板减少性紫癜（ITP）与免疫异常密切相关。目前认为慢性ITP患者存在Th1／Th2失衡，并以Th1反应占优势。调节性T细胞（Treg）是机体重要的T细胞亚群，在自身免疫性疾病的发生和发展中具有重要作用，其表型为CD4^＋CD25^＋。FOXP3是Treg的特征性转录因子，其表达水平能反映Treg功能。为了研究Treg在ITP发病中的作用，我们对25例慢性ITP患者CD4^＋CD25^＋T细胞的数量及功能进行检测。     

沙利度胺对多发性骨髓瘤患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞作用的临床研究

本研究探讨沙利度胺治疗前后多发性骨髓瘤（MM）患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例及变化规律，为有效的免疫治疗提供理论依据。采用流式细胞术检测MM患者外周血CD3、CD4、CD8、NK及CD4^＋CD25^＋Treg细胞的比例；采用成组设计的两样本均数比较的t检验进行统计学分析，以P〈0．05为检验水准。结果表明：MM患者治疗前CD4^＋CD25^＋highT比例较正常人明显升高（P〉0．01），沙利度胺治疗有效患者的CD4^＋CD25^＋highT比例较治疗前明显降低（P〈0．01），治疗无效者Treg比例无显著变化（P〉0．05）。16例经化疗完全缓解，CD4^＋CD25^＋highT比例为6．91±1．12％，较治疗前升高，但无显著性差异（P〉0．05）。沙利度胺治疗有效者CD3^＋T、CD4^＋T、NK细胞比例及CD4／CD8比值较治疗前明显升高（P〉0．05或0．01），CD8^＋T治疗前后无显著变化（P〉0．05）。结论：CD4^＋CD25^＋Treg细胞的免疫抑制作用可能是MM免疫逃逸的重要机制，下调MM患者CD4^＋CD25^＋Treg可能是沙利度胺治疗MM有效的机制之一。     

Unique chemotactic response profile and specific expression of chemokine receptors CCR4 and CCR8 by CD4(+)CD25(+) regulatory T cells

Chemokines dictate regional trafficking of functionally distinct T cell subsets. In rodents and humans, a unique subset of CD4(+)CD25(+) cytotoxic T lymphocyte antigen (CTLA)-4(+) regulatory T cells (Treg) has been proposed to control peripheral tolerance. However, the molecular basis of immune suppression and the trafficking properties of Treg cells are still unknown. Here, we determined the chemotactic response profile and chemokine receptor expression of human blood-borne CD4(+)CD25(+) Treg cells. These Treg cells were found to vigorously respond to several inflammatory and lymphoid chemokines. Treg cells specifically express the chemokine receptors CCR4 and CCR8 and represent a major subset of circulating CD4(+) T cells responding to the chemokines macrophage-derived chemokine (MDC)/CCL22, thymus and activation-regulated chemokine (TARC)/CCL17, I-309/CCL1, and to the virokine vMIP-I (ligands of CCR4 and CCR8). Blood-borne CD4(+) T cells that migrate in response to CCL1 and CCL22 exhibit a reduced alloproliferative response, dependent on the increased frequency of Treg cells in the migrated population. Importantly, mature dendritic cells preferentially attract Treg cells among circulating CD4(+) T cells, by secretion of CCR4 ligands CCL17 and CCL22. Overall, these results suggest that CCR4 and/or CCR8 may guide Treg cells to sites of antigen presentation in secondary lymphoid tissues and inflamed areas to attenuate T cell activation.     

体外扩增CD4＋CD25＋Treg细胞的效果比较及体外免疫抑制功能鉴定

本研究比较3种不同细胞组分扩增CD4＋ CD25＋ Treg的效果并鉴定其免疫抑制功能.用免疫磁珠分选法从小鼠脾细胞中分选出CD4＋T细胞、CD4＋ CD25＋ Treg细胞和CD4＋ CD25-T细胞,负载CD3/CD28克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激,分别对CD4＋T细胞、CD4＋ CD25＋ Treg细胞和CD4＋ CD25-T细胞进行体外扩增培养,流式细胞术检测扩增后CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比例及Foxp3基因的表达,用混合淋巴细胞反应（MLR）检测CD4＋ CD25＋ Treg对CD4＋ CD25-T细胞增殖的抑制作用,CCK-8方法检测细胞抑制率.结果表明：经过2周培养,3组细胞均有明显的扩增.CD4＋T细胞组扩增倍数为（77.8±5.32）倍,CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比例由（6.61±1.00）％增加到（15.33±1.31）％.CD4＋ CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为（95.20 ±7.67）倍,CD4＋ CD25＋ Treg细胞的比例由培养前（0.37±0.13）％增加到（9.84±0.98）％.磁珠分选后的CD4＋ CD25＋ Treg细胞的扩增倍数为（41.20±6.92）倍,细胞纯度由（86.75±1.25）％下降到（85.32±1.62）％,Foxp3表达由（76.92±1.13）％下降到（75.33±2.11）％,扩增前后的细胞纯度和Foxp3表达,差异无统计学意义（P＞0.05）.体外抑制实验显示体外扩增的CD4＋ CD25＋ Treg细胞对CD4＋ CD25-T细胞增殖有明显的抑制作用,对效应性T细胞增殖的抑制效能与其细胞数呈正相关.结论：本研究在体外成功扩增了小鼠CD4＋ CD25＋ Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4＋ CD25＋ Treg细胞组扩增的CD4＋ CD25＋ Treg细胞数量多,细胞纯度高.     

致敏小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增

本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增。流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4%台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P<0.05)。分选出CD4+ CD25+ Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32%,Foxp3表达由(76.92±1.72)%稍下降至(75.33±2.11)%(P>0.05)。结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25+ Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力;体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+ CD25+ Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变。     

天然调节性T细胞的调节因素研究进展

天然CD4^＋CD25^＋调节T细胞来源于胸腺,通过直接接触机制抑制效应细胞的增殖,调节自身免疫和移植免疫。本文主要综述了影响天然调节T细胞分化、发育和功能的主要因素和可能机制。Foxp3是Treg的标志,检测其表达可以作为判定Treg的方法。IL-2主要通过IL-2Rα及STAT5途径促进Treg的增殖活化。膜型和分泌型TGF-β具有不同功能,膜型TGF-β1可能主要介导Treg的抑制功能,而分泌型TGF-β可能主要促进Treg的增殖。树突状细胞由于作用途径不同,对Treg既有正调节,也有负调节。CTLA-4途径可能通过作用于Treg自身、DC或效应细胞直接或间接地调节Treg的功能。     

CD4+CD25+调控T细胞及其在移植耐受中的作用

CD4^ CD25^ 调控T细胞是一群表型和功能特异的T细胞亚群,能抑制CD4^ CD25^-和CD8^ T细胞的活化和增殖,以及IL-2和IFN-γ的产生,在移植免疫耐受中发挥着重要的作用,其免疫调控机理仍不明确。CD4^ CD25^ 在体外能有效地被分离、活化和扩增,并能保持其免疫调控能力,其活化后的免疫抑制功能是抗原非特异性的。体外活化和扩增的CD4^ CD25^ 调控T细胞有广阔的应用前景。     

转录因子T-bet、GATA-3、FoxP3及CD4~+CD25~+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

本研究旨在探讨转录因子T-bet、GATA-3和CD4+CD25+调节性T细胞及其转录因子FoxP3在儿童过敏性紫癜(HSP)发病机制中的作用。2009年2月-2010年2月在本院收治的46例急性期HSP患儿(HSP组)及30例健康对照儿童(对照组)纳入研究。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA-3及FoxP3 mRNA的表达。运用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群CD4+CD25+的表达。结果表明,HSP组患儿GATA-3 mRNA相对表达水平(964.30±655.18)显著高于对照组儿童GATA-3 mRNA相对表达水平(78.09±57.20,P<0.01)。HSP组患儿T-bet mRNA(53.98±35.79)、FoxP3 mRNA(32.17±23.04)和CD4+CD25+(5.34±2.51)相对表达水平低于对照组儿童T-bet mRNA(181.56±96.90)、FoxP3 mRNA(147.91±99.15)和CD4+CD25+(7.85±1.97)相对表达水平(P<0.01)。结论:HSP患儿急性期存在Th1特异性转录因子T-betmRNA表达下调,Th2特异性转录因子GATA-3 mRNA表达上调。HSP患儿急性期存在CD4+CD25+调节性T细胞及其特异性转录因子FoxP3 mRNA表达下调,调节性T细胞的减少及由此引发的免疫抑制效应不足可能是HSP急性期免疫失衡的重要原因之一。本研究为从调节性T细胞及其调控的分子机制角度进一步阐明儿童HSP的发病机制提供了实验依据。     

Induced and natural regulatory T cells in human cancer

Introduction: Evidence suggests that FOXP3(+)CD25(high)CD4(+) regulatory T cells (Treg) which accumulate in cancer may have beneficial or unfavorable effects on prognosis. The presence in tumor-associated inflammatory infiltrates of two subsets of Treg with distinct phenotypic and functional profiles might explain these conflicting observations. Areas covered: Human inducible (i) Treg arising by tumor-driven conversion of conventional CD4(+) T cells are highly suppressive, therapy-resistant Treg which down-regulate anti-tumor immune responses, promoting tumor growth. Natural (n) Treg, normally responsible for maintaining peripheral tolerance, control cancer-associated inflammation, which favors tumor progression. This division of labor between nTreg and iTreg is not absolute, and overlap may be common. Nevertheless, iTreg play a critical and major role in cancer and cancer therapy. The tumor microenvironment determines the type, frequency and suppression levels of accumulating Treg. Expert opinion: In cancer, a selective removal or silencing of iTreg and not of nTreg should be a therapeutic goal. However, the implementation of this challenging strategy requires further studies of cellular and molecular crosstalk among immune cells in the tumor microenvironment.     

骨髓源性而非脾源性树突状细胞能够诱导产生调节性T细胞

越来越多的证据表明,树突状细胞(DC)能够通过刺激CD4+T细胞产生调节性T细胞(Treg)而参与免疫耐受。本研究旨在探索骨髓源性DC(bone marrow-derived DC,BM-DC)或脾源性DC(spleen derived DC,spDC)诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg产生的可能性。以GM-CSF和IL-4从C57BL/6小鼠骨髓前体细胞诱导产生骨髓未成熟DC(immature DC,imDC);6 d后,imDC经脂多糖(LPS)进一步刺激16 h得到成熟树突状细胞(mature DC,mDC);同时用免疫磁珠从小鼠脾脏分选得到spDC,以这3种DC分别与新鲜分离的BALB/c小鼠脾CD4+T细胞混合培养,诱导CD4+CD25+FOXP3+Treg的产生;用流式细胞仪检测CD4+T细胞中FOXP3的表达,对比分析3种DC诱导产生CD4+CD25+FOXP3+Treg的能力。结果表明:经C57BL/6小鼠骨髓imDC、mDC的刺激,BALB/c小鼠CD4+T细胞中的FOXP3表达率从(8.57±1.14)%分别提高到(15.80±1.35)%、(17.93±1.45)%(P<0.01);经spDC的刺激,BALB/c小鼠的CD4+T细胞中的FOXP3表达率则从(8.57±1.14)%下降到(3.95±0.79)%(P<0.05)。结论:体外诱导的BM-DC而非spDC能够诱导Treg的产生,具有介导免疫耐受的作用。