矢车菊素-3-O-葡萄糖苷的细胞抗氧化活性研究

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H2O2诱导细胞氧化应激损伤的抗氧化作用,为其在人类植物膳食以及功能食品方面的应用提供实验依据。方法 MTS法考察C3G对HEK-293细胞的毒性/增殖作用;通过H2O2诱导的HEK-293细胞氧化应激模型,基于细胞活力水平研究C3G对氧化应激细胞的保护作用;试剂盒检测细胞抗氧化酶类(CAT,SOD,GSH-Px)活性水平;细胞抗氧化活性(CAA)检测C3G对细胞的抗氧化作用。结果 1.25～20μmol/L C3G处理正常HEK-293细胞后对细胞活力无显著影响,确定该浓度对细胞无毒性/增殖作用;1.25～20μmol/L C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于损伤组,且具有浓度依赖效应;5、20μmol/L浓度C3G能显著提高氧化应激细胞CAT、SOD和GSH-Px活性;C3G能有效抑制AAPH自由基诱导的DCFH氧化,并呈现浓度依赖性降低,具有很强的细胞抗氧化能力。结论 C3G可通过提高细胞活力、增强抗氧化酶活性、抑制自由基氧化实现对细胞氧化应激损伤的保护作用。[营养学报,2019,41(3):293-297]     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对肥胖大鼠低度炎症反应及胰岛素敏感性的影响

目的 观察矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-glucoside, C3G)对肥胖大鼠血清炎症因子(TNF-α、IL-6和MCP-1)及胰岛素敏感性的影响。方法 3周龄雄性SD大鼠30只, 随机分为对照组(n=8)和高脂饮食组(n=22), 分别予以普通饲料及高脂饲料喂养5周。肥胖造模成功的17只大鼠再随机分为肥胖组(n=8)和C3G组(n=9)。C3G组予C3G 100 mg/(kg·d)灌胃, 其余组予等量生理盐水灌胃。实验结束时准确称量大鼠体重及内脏脂肪质量, 全自动生化分析仪测定空腹血糖(fasting glucose, FPG), 放免法测血清胰岛素(fasting insulin, FINS), ELISA测血清脂联素及TNF-α、IL-6、MCP-1水平, 并计算内脏脂肪比和胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index, IAI)。结果 肥胖组和C3G组大鼠体重、内脏脂肪比和血清TNF-α、IL-6、MCP-1水平明显高于对照组(P均<0.05), 而C3G组上述指标明显低于肥胖组(P均<0.05)。肥胖组和C3G组血清脂联素水平及IAI明显低于对照组(P均<0.05), 而C3G组上述指标明显高于肥胖组上述指标。结论 C3G能明显增加肥胖大鼠的胰岛素敏感性, 其可能与增加血清脂联素水平及降低血清炎症因子(TNF-α、IL-6、MCP-1)水平有关。     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷干预Caspase级联反应抑制H2O2诱导的细胞凋亡

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对H₂O₂诱导人胚肾HEK-293细胞损伤的抗凋亡作用。方法通过检测caspase(半胱天冬酶)-6和caspase-9活性水平考察C3G对损伤细胞的影响,并采用Western blot法检测cleaved caspase-3、cleavedPARP、Bcl-2和Bax的蛋白表达量变化。结果 H₂O₂损伤细胞后,凋亡相关蛋白酶活力提高,促凋亡蛋白表达提高;1.25、5、20μmol/L C3G预处理损伤细胞后,caspase-6和caspase-9活力显著低于损伤组(P<0.05),并呈浓度依赖性降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白表达量均呈浓度依赖性下调,显著低于损伤组(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较损伤组比显著提升(P<0.05)。结论矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H₂O₂诱导的HEK-293细胞损伤具有抗凋亡作用,其作用机制可能是通过调控caspa...     

矢车菊素-3-O-葡糖苷干预核因子-κB通路抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)对H₂O₂诱导人胚肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK-293)损伤的抗凋亡作用。方法以0.4 mmol/L H₂O₂诱导HEK-293细胞凋亡,1.25、5、20μmol/L C3G预处理,检测凋亡细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率和线粒体膜电位,免疫印迹法和反转录定量PCR(qRT-PCR)检测核因子(nuclear factor,NF)-κB凋亡信号通路中P65蛋白和mRNA表达量。结果 H₂O₂损伤细胞后,LDH释放率提高[(100±5.53)%比(57.28±4.83)%],线粒体膜电位下降[(55.97±1.89)%比100%],P65蛋白[(122.73±7.45)%比100%]和mRNA[1.66±0.06比1.00]表达均显著上调,差异均有统计学意义(P<0.0...     

淫羊藿素在大鼠体内的组织分布

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)研究淫羊藿素(ICT)在大鼠体内的组织分布。方法乙腈提取大鼠组织匀浆中ICT,在C18色谱柱上以含有甲酸和甲酸铵的乙腈-水二元溶剂梯度洗脱分离ICT和内标化合物香豆雌酚(CMT),负离子电喷雾选择反应监测方式定量分析ICT(m/z 367.1→297.1)和CMT(m/z 267.0→211.1)。采集大鼠单次腹腔注射10 mg/kg ICT后不同时间的心、肝、脾、肺、肾和肌肉组织并测定ICT浓度。结果 ICT在0.2~20 ng/mL浓度范围内线性关系良好,定量下限为0.2 ng/mL。ICT在肌肉中的半减期最长(12.46 h),在肝中有最高浓度(2949 ng/g)。结论 ICT广泛分布在各组织中,48 h各组织中ICT清除均超过93%,表明ICT在组织中无蓄积。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中淫羊藿素

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中淫羊藿素(ICT)浓度,并用于研究大鼠静脉注射ICT的药动学。方法采用乙腈提取血浆中ICT,以香豆雌酚(CMT)为内标,在BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm)上以流动相乙腈-水-甲酸铵-甲酸梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温40℃,分析时间6.5 min;在电喷雾离子化电离源上以多反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 367.1→297.1(ICT)和m/z 267.0→211.1(CMT)。大鼠静脉注射10 mg/kg ICT,采集不同时刻血样并测定药物浓度。结果 ICT的线性范围为0.5~20 ng/ml,方法定量下限为0.5 ng/ml。ICT日内和日间精密度(RSD)在8.1%以内,准确度在95.3%~99.3%,提取回收率为90.1%~92.1%,基质效应为97.5%~101.2%。大鼠静脉注射ICT的t1/2为(1.13±0.32)h,表观分布容积为(4.54±0.27)L/kg,清除率为(2.91±0.68)L/(h·kg)。结论该方法速度快、专属性好、准确度高,适用于ICT临床前药动学研究。     

花色苷对THP-1细胞中ABCG1表达的影响及机制分析

目的研究花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(C3G)对人巨噬细胞THP-1中ABCG1表达的影响,并分析相关作用机制。方法以C3G干预培养诱导分化的THP-1细胞,荧光实时定量RT-PCR检测ATP结合盒式转运蛋白G1(ABCG1)以及其直接调节因子肝脏X受体α(liver X receptorα,LXRα)的mRNA表达,时间分辨荧光共振能量转移(time-resolved fluorescence resonance energy transfer,TR-FRET)方法检测C3G与LXRα配体结合域的结合能力。结果 100μmol/L C3G处理THP-1细胞16 h显著增加了ABCG1 mRNA的表达(为对照组的1.98倍,P<0.05);尽管在TR-FRET试验中,C3G并未呈现典型的配体结合曲线,而50μmol/L和100μmol/L C3G显著增加了THP-1细胞中LXRαmRNA的表达(分别为对照组的2.21倍和2.83倍,P<0.05)。结论 C3G促进了ABCG1表达,该机制可能通过增加核受体LXRαmRNA表达来实现。     

高效液相色谱-串联质谱测定鸡肉中氟喹诺酮类药物残留的研究

目的:建立鸡肉中培氟沙星、单诺沙星、双氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、沙拉沙星、环丙沙星、恩诺沙星和司帕沙星等9种氟喹诺酮类药物残留的高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法:样品经磷酸盐缓冲液提取后,用Waters Oasis (R) MAX小柱进行净化、提取,Cloversil-C18柱(150mm×4.6 mm i.d,5μm)分离;柱温:30℃;流动相:甲醇/乙腈/0.2%甲酸(15/15/70,v/v/v);通过电喷雾电离离子化在多离子监测(MRM)模式下测定.结果:各氟喹诺酮在0.05～50.0 μg/kg范围内均呈良好的线性关系,相关系数>0.998,回收率在89.0%～110.0%之间,相对标准偏差(RSD)在2.8%～9.1%之间,检出限均为0.05 μg/ks.结论:所建方法简便、快速、干扰少、特异性强,是鸡肉中9种氟喹喏酮残留检测的理想方法.     

淫羊藿素葡萄糖醛酸代谢物在大鼠体内的组织分布

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定大鼠组织中淫羊藿素葡萄糖醛酸代谢物(GICT)浓度,并用于定量研究GICT在大鼠体内的组织分布。方法大鼠组织样品匀浆后,乙腈沉淀蛋白,BEH C18色谱柱以乙腈-水-甲酸铵-甲酸梯度洗脱分离,采用串联四级杆、电喷雾电离源负离子反应监测模式检测。大鼠单次腹腔注射10 mg/kg淫羊藿素,采集不同时刻组织样品并测定GICT浓度。结果 GICT浓度在2~200 ng/ml时,线性关系良好(r>0.995),各组织中定量下限均为2 ng/ml,GICT在5、80和150 ng/ml浓度的准确度在93.2%~102.9%,精密度在8.9%以内。结论本UHPLC-MS/MS法专属性好、准确度高,适用于GICT在大鼠体内组织分布研究。GICT广泛分布于大鼠各组织中,其中肾中浓度最高,其次为肝,8 h时GICT在各个组织中均达到最高浓度。     

大鼠体内淫羊藿素葡萄糖醛酸代谢物的定量研究

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)同时测定大鼠血浆中淫羊藿素(ICT)及其葡萄糖醛酸代谢物(GICT)浓度,并用于定量研究ICT在大鼠体内的代谢。方法采用乙腈提取血浆中ICT和GICT,以香豆雌酚(CMT)为内标,在C18色谱柱上以乙腈-水-甲酸铵-甲酸梯度洗脱分离;在电喷雾离子化电离源上以选择反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 367.1→297.1(ICT),m/z 543.3→367.1(GICT)和m/z 267.0→211.1(CMT)。大鼠腹腔注射10 mg/kg ICT,采集不同时刻血样并测定ICT和GICT浓度。结果 ICT和GICT的线性范围分别为0.2~20 ng/ml和2~200 ng/ml,定量下限分别为0.2 ng/ml和2ng/ml。ICT和GICT的精密度(RSD)在10.3%以内,准确度在95.1%~103.7%,提取回收率为89.1%~92.4%,基质效应为93.2%~104.2%。结论 UHPLC-MS/MS法专属性好、准确度高,适用于ICT在大鼠体内代谢研究,2 h时GICT达到最大浓度。ICT在大鼠体内迅速代谢成葡萄糖醛酸Ⅱ相代谢物GICT。     

碱性鞘磷脂酶对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响及机制研究

目的探讨碱性鞘磷脂酶(Alk-SMase)对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,用100 units/L Alk-SMase孵育细胞24 h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2 h。用液闪计数仪(LSC)检测细胞胆固醇吸收量,薄层层析法分离膜磷脂、LSC检测细胞膜[14C]-鞘磷脂含量。结果 [14C]-胆固醇在Caco-2细胞中的吸收呈时间依赖性增加。Alk-SMase能够明显降低Caco-2细胞胆固醇吸收,并减少Caco-2细胞膜鞘磷脂含量,100 mu/ml Alk-SMase能够引起80%[14C]-标记的膜鞘磷脂水解。结论 Alk-SMase能够抑制Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其水解膜鞘磷脂有关。     

飞燕草素葡萄糖苷抑制人血管内皮细胞凋亡的作用及机制研究

目的观察飞燕草素葡萄糖苷(Dp)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的影响,并探索相关分子机制。方法 CCK-8等试剂盒分别检测不同浓度的Dp(25、50、100、200μmol/L)对oxLDL诱导的细胞活力、MDA和LDH生成的影响;激光共聚焦显微镜检测Dp对oxLDL诱导的细胞内ROS生成、线粒体膜电位和线粒体膜通道孔开放状态的影响;流式细胞仪检测不同浓度的Dp对oxLDL诱导的细胞凋亡的影响;Western blot法检测Dp对oxLDL诱导的bcl-2及bax蛋白表达水平的影响。结果 Dp能明显抑制oxLDL诱导的EA.hy926细胞活力降低,及MDA和LDH生成增加,并呈浓度依赖关系;与oxLDL处理组比较,不同浓度的Dp预处理细胞2 h后,总凋亡细胞百分比显著降低(P<0.05);Dp能明显抑制oxLDL诱导的细胞内ROS生成、线粒体膜电位下降和线粒体膜通道孔开放,并能明显抑制oxLDL诱导的细胞内bcl-2蛋白表达水平降低及bax蛋白表达水平增高。结论 Dp可能通过线粒体途径抑制oxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡发生。     

姜黄素抑制Caco-2细胞胆固醇吸收的作用及机制研究

目的探讨姜黄素对Caco-2细胞胆固醇吸收的影响以及可能机制。方法建立Caco-2细胞单层模型,分别用25、50、100μmol/L姜黄素或胆固醇吸收转运蛋白尼曼-匹克C1型类似蛋白1(NPC1L1)的抑制剂依折麦布孵育细胞24h或2h后,再用[14C]-胆固醇微胶溶液孵育细胞2h。用液闪计数仪检测细胞胆固醇吸收量,荧光定量PCR和Western blot检测NPC1L1的基因和蛋白表达量。结果 Caco-2细胞[14C]-胆固醇吸收可被依折麦布呈浓度依赖性地抑制,表明本研究建立的单层Caco-2细胞模型的胆固醇吸收是由NPC1L1所介导的。姜黄素能有效的下调NPC1L1的基因及蛋白表达水平,降低Caco-2细胞胆固醇吸收,100μmol/L姜黄素可引起40%胆固醇吸收下降。结论姜黄素能够降低Caco-2细胞胆固醇吸收,这可能与其抑制NPC1L1表达有关。     

降血压肽Val-Leu-Pro-Val-Pro在Caco-2细胞模型中的吸收机制

目的研究降血压肽Val-Leu-Pro-Val-Pro(VLPVP)在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法用体外培养的Caco-2细胞单层模型,考察时间、pH值、药物浓度、吸收抑制剂及促进剂对VLPVP吸收的影响。用HPLC法检测VLPVP的浓度。结果VLPVP在pH7.4时转运量最大,且与浓度和时间呈正相关。肽转运载体竞争性抑制剂Gly-Pro、arphamenine A和细胞内吞抑制剂氧化苯胂对VLPVP的转运没有显著的抑制作用,而旁路转运促进剂去氧胆酸钠、多药耐药蛋白抑制剂MK-571和能量抑制剂叠氮化钠对VLPVP从AP侧至BL侧的转运有非常显著的促进作用,而叠氮化钠和MK-571对VLPVP从BL侧至AP侧的转运无显著影响。结论VLPVP以旁路转运为主要方式被小肠上皮细胞吸收,并受到多药耐药蛋白MRP2强烈的外排作用。     

消旋卡多曲分散片人体相对生物利用度研究

[目的]使用HPLC-MS/MS法测定卡多曲血浆药物浓度并用于消旋卡多曲分散片人体相对生物利用度研究。[方法]采用24例健康男性志愿者随机交叉自身对照试验设计,受试者分别单剂口服国产消旋卡多曲分散片(受试制剂)400mg及消旋卡多曲颗粒(参比制剂)400mg后,用HPLC-MS/MS测定消旋卡多曲活性代谢物(Thiophine,TP)浓度,由DASver2.0程序进行生物等效性分析。[结果]24例受试者口服受试制剂消旋卡多曲分散片400mg与参比制剂400mg的AUC_(0～11)分别为(2132.8±439.6)h.μg.L~(-1)及(2384.7±615.3)h.μg.L~(-1),其相对生物利用度(F_(0～11))为(92.7±23.2)%,C_(max)分别为(661.6±158.4)μg.L~(-1)及(763.8±268.3)μg.L~(-1),T_(max)分别为(1.65±0.91)h及(1.83±0.91)h。[结论]消旋卡多曲分散片与参比制剂的AUC_(0～11)、C_(max)经双单侧t检验结果均无统计学意义,T_(max)经非参数法检验差异无统计意义。消旋卡多曲分散片与消旋卡多曲颗粒生物等效。     

槲皮素及其糖苷衍生物在Caco-2单层细胞上的吸收特征

目的探讨槲皮素及其糖苷衍生物在人小肠吸收模型Caco-2细胞单层上的吸收特征。方法采用Caco-2单层细胞模型,研究槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷的肠道吸收特征,以LC-MS法测定槲皮素、槲皮苷、异槲皮苷、异鼠李亭。结果槲皮素及其糖苷衍生物孵育30～150min后,均能在透过侧检测到槲皮素、槲皮苷和异槲皮苷以及槲皮素的甲基化代谢产物之一异鼠李亭;透过的槲皮素及其代谢产物异鼠李亭含量在150min孵育时间内呈先升后降的趋势特征;而槲皮苷和异槲皮苷的透过量则随孵育时间呈持续升高的趋势,在孵育后期可检测到微量异鼠李亭。结论槲皮素、槲皮苷和异槲皮苷可以完整的分子形式被Caco-2细胞单层吸收,其吸收特征有显著差异,并在吸收过程中伴有广泛的代谢转化。[营养学报,2012,34(4):358-361,367]     

十二指肠上皮细胞基底侧存在主动铁吸收的机制

用放血法制备大鼠失血性贫血模型；向腹腔内注射铁－氨三乙酸络合物制备铁过剩模型；以元处置大鼠作为对照。向隔离十二指肠段注射￣（５９）ＦｅＣｌ＿３，ｌｈ后测定单位重量十二指肠、肝、脾每分钟脉冲数，同时用放射自显影法显示十二指肠上皮细胞￣（５９）Ｆｅ分布。结果表明：与对照组相比，贫血组大鼠十二指肠吸收铁增加，向肝、脾的铁转运也明显增加。而铁过剩组大鼠进入十二指肠上皮细胞的铁明显减少。免疫组织化学显示肠上皮细胞基底侧有转铁蛋白受体分布。作者认为：十二指肠上皮细胞基底侧存在转铁蛋白及其受体介导的主动非血红素铁运转机制。铁缺乏时这一机制被激活，铁从小肠上皮细胞进入体内增加，上皮细胞内铁减少，促进铁从肠腔进入上皮细胞；铁过剩时，从肠上皮细胞进入体内的铁减少，肠上皮细胞内铁含量增加，减少铁吸收，由此维持体内铁水平的相对稳定     

雄激素对锌吸收影响的研究

用饲养法进行了为期7天的锌吸收率测定。切除睾丸的大鼠锌吸收率为44.21±1.88％((?)±SE),明显低于不切除睾丸的大鼠(49.44±1.17％),切除睾丸后补充丙酸睾丸素(20mg/kg,隔日一次)使锌吸收率恢复(49.13±1.88％)。结果表明,雄激素对锌吸收有促进作用。     

动物源性食品中氯霉素残留量的检测方法研究

[目的]建立氯霉素残留量的检测方法,以了解深圳市市售动物源性食品中氯霉素残留的污染状况,为市场卫生监管提供依据。[方法]用定量酶联免疫法对市售动物源性食品进行初筛,然后对阳性样品用高效液相色谱-质谱联用法进行确证。[结果]应用酶联免疫法对测定动物源食品中氯霉素残留量,方法的线性范围为0.025～2.0μg/L,标准曲线相关系数为0.998,回收率为63.3%～84.7%,检出限为0.02μg/kg。高效液相色谱-质谱联用法测定动物源性食品中氯霉素含量,方法的线性范围为0.1～10.0μg/L,线性相关系数为0.9994,定量检出限为0.02μg/kg,回收率为81.0%～89.5%。[结论]酶联免疫法灵敏度高,样品处理简单,适合大批量样品中氯霉素半定量筛选,成本较低;高效液相-质谱联用法灵敏度高,抗干扰能力强,适合对样品中氯霉素残留进行检测及结构确证。