特发性少精子症生精细胞增殖与凋亡变化的研究

目的 探讨特发性少精子症患者睾丸生殖细胞增殖与凋亡的病理生理机制。方法 选择特发性少精子症患者79例,行睾丸穿刺活检,所取睾丸组织采用免疫组织化学技术观察生精细胞增殖细胞核抗原的表达,采用原位3'羟基末端标记法观察生殖细胞的凋亡变化。同时以5 例暴死男性的睾丸作为正常对照组,经病理证实组织结构无异常。结果 与正常睾丸生精细胞相比,特发性少精子症患者增殖细胞核抗原增殖指数明显降低, P<0.001;而凋亡指数明显升高,P<0.01。结论 特发性少精子症患者精子减少的主要原因之一是由于生精细胞增殖能力减少及凋亡增加造成增殖与凋亡的平衡失调所致。     

大鼠嗅球成鞘细胞的分离、培养与鉴定

目的：探讨大鼠嗅球成鞘细胞（Olfactory cnsheating cells,OECs）分离与培养的方法。方法：无菌条件下嗅球置于少量人工脑脊液中，用眼科镊子直接将嗅球撕烂、挤压，得片状组织块，胰酶消化，吹打，细胞悬液进行培养。结果：本方法分离、培养的OECs具有双极或多极突起，且突起十分细长，神经生长因子受体和胶质纤维酸性蛋白免疫组化呈阳性。结论：该方法简便易行，为深入研究OECs神经生物学特性、阐明促进中枢神经元轴突生长的作用机制打下基础。     

老龄大鼠嗅球内神经元超微结构的观察

目的：电镜下观察老龄大鼠嗅球内神经元超微结构改变。方法：2%多聚甲醛、戊二醛混合固定液灌流大鼠,取嗅球,制备超薄切片,电镜观察。结果：突触小球、小球周细胞、僧帽细胞和刷细胞数量减少,核膜断裂,染色质外溢,粗面内质网、高尔基复合体减少。线粒体固缩或形成髓鞘样小体。结论：嗅球内突触小球和神经元减少,细胞器老化可能是导致老年性嗅觉障碍的主要原因。     

红景天对大鼠嗅球中凋亡相关基因表达的影响

目的：明确红景天素对老龄大鼠嗅球中凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响并探讨其意义。方法：健康老龄大鼠20只,随机分成注射红景天素实验组（10只）和等量生理盐水对照组（10只）。断头处死取嗅球,石蜡包埋,连续切片,免疫组化染色,光镜观察。结果：Bcl-2和Bax主要表达于大鼠嗅球中的僧帽细胞。红景天素实验组Bcl-2阳性细胞表达率显著高于生理盐水对照组（P<0.01）;Bax阳性细胞表达率实验组虽略低于对照组,但差异无显著性（P>0.05）。 结论:红景天能够诱导老龄大鼠嗅球中Bcl-2蛋白表达增多,抑制僧帽细胞的凋亡,对老龄大鼠嗅球具有抗凋亡作用。     

衰老大鼠嗅球神经细胞线粒体的改变与嗅觉障碍的关系初探

目的：探讨衰老大鼠嗅球内神经细胞线粒体的改变与嗅觉障碍的关系。方法：选用年老大鼠和年轻大鼠灌流固定,取嗅球,制备超薄切片电镜下对比观察。结果：衰老大鼠神经元的嗅球在分层上无明显改变,其嗅球线粒体超微结构发生了变化,线粒体嵴断裂分解成细粒状,形成了电子密度较高的固缩小本或同心圆形的髓鞘样小体。结论：嗅球线粒体超微结构改变可能是导致年老大鼠嗅觉障碍的原因之一。     

新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化方法研究

目的 探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞（OECs）的体外培养和纯化方法，为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法 用原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs，比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法的纯化效果，根据GFAP免疫细胞化学染色结果统计所得OECs的纯度，同时在相差显微镜下对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果 体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞，其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势，三种纯化方法均能使接种14d后的OECs纯度均值大于75％。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。结论 新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的；在脊髓损伤再生研究中，较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法，差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。     

大鼠肝再生过程中增殖细胞核抗原的表达

目的:探讨大鼠肝再生过程中肝细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化. 方法:建立肝切除动物模型,用免疫组织化学法、图像分析仪检测肝细胞PCNA的表达. 结果:PCNA强阳性肝细胞数及其总灰度值在肝大部切除后24 h明显增高,肝细胞阳性表达率在48 h达到峰值,至120 h趋于正常水平.结论:PCNA强阳性肝细胞呈规律性变化,提示残余肝可再生.     

大鼠嗅黏膜和嗅球嗅鞘细胞体外分离培养比较

目的:比较大鼠嗅黏膜(olfactory mucosa,OM)和嗅球(olfactory bulb,OB)的嗅鞘细胞(olfactory ensheathingcells,OECs)在体外分离培养中增殖和分化以及生物学特性的差异。方法:取SD大鼠OM和OB用差速贴壁法在体外分离培养OECs,扫描电镜观察两组OECs的形态,并用S-100和p75NGFR免疫荧光抗体双标记检测两组OECs在体外增殖和分化的情况。结果:扫描电镜观察到OM OECs以双极样为主;OB OECs有双极样、三极样和扁圆形3种形态,其中以双极样为主。免疫荧光双标结果显示:OM和OB组均有较多的S-100和p75NGFR双标阳性细胞,OM OECs胞体多为梭形,突起细长;OB OECs的形态多样,有双极样、三极样和扁圆形,胞体呈长梭形、圆形或三角形。两组OECs胞体面积和细胞周长相比较差异均无统计学意义。结论:OM OECs与OB OECs一样都能在体外分离培养与增殖。OM OECs与OB OECs分化成熟后的细胞无明显差异。     

兔原发性甲状旁腺机能亢进甲状旁腺细胞增生与凋亡的相关性

目的 探讨兔甲状旁腺细胞增殖与凋亡在原发性甲状旁腺机能亢进症(PHPT)发病机制中的作用.方法 健康成年中国白兔80只,随机分成两组,对照组40只以正常饮食(Ca:P,1:0.7)喂养,实验组40只以高磷饮食(Ca:P,1:7)喂养诱发原发性甲状旁腺机能亢进动物模型.在第3、4、5、6个月动物死亡后,分别对实验组和对照组动物行甲状旁腺细胞计数,同时采用免疫组织化学法观察腺体增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的表达及采用DNA片段末端标记作细胞凋亡的定量检测,并与对照组正常腺体作对照研究.结果 PHPT组腺体细胞计数(个/高倍视野)是正常对照组的1.61倍(分别为673±151与418±25,t=12.112,P＜0 01);PHPT组凋亡指数明显高于对照组(分别为200.2±125.6与11.0±3.0,t=-10 193,P＜0.01);PHPT组腺体细胞PCNA阳性率(50.5‰±11.6‰)显著高于对照组(26 7‰±2.8‰)(t=-13 120,P＜0 01),Bcl-2表达(460‰±190‰)显著高于对照组(67‰±4‰)(t=-14.120,P＜0.01);PCNA和Bcl-2表达与腺体细胞凋亡指数均呈正相关(r值分别为0.861和0.871,P＜0.05).结论 甲状旁腺细胞增生与凋亡失衡可能是导致PHPT发生的主要原因.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of proliferation and apoptosis of parathyroid cell in rabbits with primary hyperparathyroidism (PHPT) . Methods A total of 80 adult Chinese rabbits were randomly divided into two groups (n=40 each) . The control group was fed with a normal diet (Ca: P,1:0.7) while the experimental group a high phosphate diet (Ga: P, 1: 7) for3-,4- ,5-, or 6-month intervals to establish the animal model of PHPT. The parathyroid was totally removed for pathological examination after all rabbits were sacrificed. The thyroparathyroid complex was removed en bloc, fixed in neutral formalin and prepared for histological examination. The number of parathyroid cell in PHPT was calculated. Proliferation was determined by immunohistochemistry of proliferation cell nuclear antigen (PCNA) while apoptosis assessed by in situ dUTP biotin nick-end labeling (TUNEL). Results The number of parathyroid cell was 1.61 times in PHPT than that in the normal control (673±151, 418 ±25, t=-12.112, P＜0.01).Apoptotic index (AI) increased significantly more in PHPT than that in normal control (200.2‰±125.6‰, 11.0‰±3.0‰, t=-10.193, P＜0.01). The rate of PCNA positive-cell increased significantly more in PHPT than that in control (50.5%＞±11.6‰, 26.7‰±2.8‰,t=-13.120, P＜0.05).So did Bcl-2 (460‰±190‰, 67‰±4‰, t=-14.120,P＜0.05). There was a positive correlation between AI and PCNA (r=0.861, P＜0.05). It was the same as between AI and Bcl-2 (r=0.871, P＜0.05). The value of bone mineral density decreased significantly more in PHPT than that in normal control (152±34,189±12, t=9.236, P＜0.05). Conclusion PHPT may be mainly induced by an excessive proliferation of parathyroid cells and an acceleration of apoptotic process.     

糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡

目的 研究糖尿病大鼠肾皮质细胞凋亡的可能机制及其对糖尿病肾病的影响.方法 20只雄性SD大鼠随机分为糖尿病组和对照组.糖尿病大鼠模型采用链脲佐菌素65 mg/kg腹腔注射诱导建立.12周后观察2组体质量、血糖以及血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白等肾功能指标;采用透射电镜和原位末端标记法（TUNEL法）检测大鼠肾皮质细胞凋亡,并用免疫组织化学的方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）以及凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达.结果 建模12周的糖尿病组肾小球和肾小管细胞凋亡明显增多（P＜0.01）,肾小球和肾小管细胞PCNA表达无明显差别（P＞0.05）;与对照组比较,糖尿病组肾小管Bax和Caspase-3表达明显增加（P＜0.01）,Bcl-2表达明显减少（P＜0.05）;2组肾小球都不表达Bax和Bcl-2,糖尿病组肾小球有少量Caspase-3表达.结论 糖尿病大鼠肾皮质细胞过度凋亡.包括Bax、Bcl-2和Caspase-3在内的Caspase依赖的线粒体凋亡途径可能参与了糖尿病状态下肾小管细胞的凋亡;细胞凋亡的增多可能是糖尿病肾病发展的原因之一.     

弥漫增生型狼疮性肾炎肾组织中细胞凋亡的研究

目的探讨狼疮性肾炎(LN)肾组织中细胞凋亡程度及其与病理组织学及临床参数改变间的关系。方法对25例Ⅳ型LN与12例IgA肾炎(IgAN)、4例系膜增生性肾炎(MsPGN)、3例急性链球菌感染后肾炎(APSGN)的肾活检组织采用原位末端标记法检测凋亡细胞，免疫组化ABC法(PCNA)检测增殖细胞。结果狼疮性肾炎较其他类型增殖性肾小球肾炎肾组织中凋亡细胞数低，而PCNA阳性细胞数/TdT阳性细胞数的比值(P/T值)最高；肾小球及小管间质的P/T值均与肾组织病变慢性化指数相关，为r=0.4983(P=0.0132)，r＝0.8399(P＜0.001)，r=0.6614(P=0.0033)；肾小球及肾小管的P/T值与24h尿蛋白定量成正相关，为r＝0.8554(P＜0.001)，=0.7134(P=0.001)；与Ccr成负相关，为r=-0.4880(P=0.0133),r=-0.7229(P=0.001)；肾小管的P/T值与Scr成正相关,r=0.4107(P=00414)。结论增殖性狼疮性肾炎存在细胞凋亡不足，显著的细胞增殖而无相应的凋亡增强可能与狼疮性肾炎呈现慢性进展有关。     

结肠癌和癌前病变演化过程中细胞凋亡与增殖的关系

[目的 ]阐明结肠癌和癌前病变中细胞凋亡与增殖的关系 .[方法 ]应用免疫组织化学亲和素 过氧化物酶法检测 148例结肠病变标本中增殖细胞核抗原蛋白的表达 ;并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记技术检测 75例标本中的凋亡细胞 .[结果 ]增殖细胞核抗原蛋白在结肠癌和结肠腺瘤中的表达率较正常组织高 ,以结肠腺瘤为分界点 ,前半阶段凋亡指数逐渐上升 ,后半阶段则下降 ,而细胞增殖指数在整个演进过程中呈上升趋势 .[结论 ]增殖细胞核抗原在结肠癌和癌前病变中的表达率增高 ,与分化、浸润深度和有无淋巴结转移无关 ,但增殖细胞核抗原过表达与结肠癌分化有关 ,伴有丝分裂指数的升高 .     

新辅助化疗对直肠癌细胞凋亡与增殖的影响

目的:探讨新辅助化疗(FOLFOX方案)对直肠癌细胞凋亡与增殖的影响。方法:选择进展期直肠癌患者76例,随机分为两组:常规手术组和新辅助化疗 手术组,各38例。分别应用TUNEL法和免疫组织化学染色法检测直肠癌细胞的凋亡(AI)与增殖(PI),并计算二者之间的比值(AI/PI)。结果:新辅助化疗 手术组与单纯手术组AI、PI差异具有统计学意义(P<0.01),AI/PI差异有统计学意义(P<0.01)。结论:新辅助化疗(FOLFOX方案)可明显促进直肠癌细胞凋亡并抑制其增殖。     

宫颈癌中金属硫蛋白的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的 探讨宫颈癌及癌前病变中金属硫蛋白(MT)的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系.方法 应用免疫组化SP法检测不同病变宫颈组织中MT和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,应用TUNEL法检测原位细胞凋亡.结果 在正常宫颈、慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样变(CIN)Ⅰ～Ⅱ级、CINⅢ级、宫颈浸润癌中,MT阳性表达率和增殖指数(PI)均依次递增(均P＜0.05);在CINⅠ～Ⅱ级、CINⅢ级、宫颈浸润癌中,凋亡指数(AI)逐渐降低(均P＜0.05),但明显高于正常宫颈和慢性宫颈炎;MT表达阳性组PI较高,AI较低,与MT阴性组比较,差异有显著性意义(均P＜0.05);MT的表达与宫颈癌的病理类型和组织学分级密切相关(均P＜0.05),与临床分期和淋巴结转移无关.结论 MT可能通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡参与了宫颈癌的发生,检测MT的表达对宫颈癌的早期诊断及恶性程度的评价具有重要参考价值.     

吸烟小鼠呼吸道上皮凋亡与增殖间的关系

利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）免疫组织化学染色对不同阶段吸烟小鼠呼吸道粘膜上皮凋亡细胞、增殖细胞的阳性细胞率与分布进行检测，并结合电镜的形态学观察对照研究。结果：正常呼吸道粘膜上皮凋亡细胞位于表层、增殖细胞带位于基底部，而吸烟小鼠丧失了上述分布特征。小鼠吸烟４周时，呼吸道上皮凋亡细胞和增殖细胞阳性率均明显高于未吸烟正常对照组。吸烟８周时，凋亡细胞和增殖细胞阳性率与吸烟４周时相比明显减少。吸烟１２周时，凋亡细胞明显增多，而增殖细胞明显减少。结论：吸烟小鼠呼吸道上皮开始不仅存在大量细胞凋亡而且出现活跃的细胞增殖，随着吸烟时间延长，呼吸道上皮以细胞凋亡占优势，呈现为细胞损伤逐渐加重而细胞再生修复能力减弱的病变特征     

蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

目的：观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因（type Ⅱ procollagen gene,Col2a1）的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素（6．25、12．5、25和50μmol／L）组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和细胞周期素D1（cyclinD1）的表达。结果：第2代原代软骨细胞活力正常,Col2al表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论：蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。     

子宫肌瘤中细胞增殖和凋亡的研究

目的通过检测子宫肌瘤组织及正常子宫平滑肌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡调控基因bcl-2的表达,探讨细胞增殖和细胞凋亡在子宫肌瘤发病机制中的作用.方法用免疫组织化学ABC法检测40例(增生期22例,分泌期18例)子宫肌瘤组织和正常子宫平滑肌组织中的PCNA和bcl-2蛋白的表达.结果 PCNA和bcl-2在肌瘤组织中表达均强于正常子宫平滑肌组织,且分泌期强于增生期(P＜0.01).但在正常子宫平滑肌组织中两者增生期和分泌期的表达则无显著性差异(P＞0.05).结论 PCNA和bcl-2表达的增加可能在子宫肌瘤的肿瘤发生过程中起重要作用.子宫肌瘤的发生不仅与肌瘤细胞增殖活性增高有关,而且与肌瘤细胞的凋亡受抑制有关.这种作用可能受到孕激素的调节.     

新辅助化疗对宫颈鳞癌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察新辅助化疗对宫颈鳞癌细胞增殖及凋亡的影响.方法对24例宫颈鳞癌进行1个疗程的以顺铂为主联合羟基喜树碱、博来霉素方案的新辅助化疗,以流式细胞术检测化疗前后的宫颈鳞癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡指数(AI).结果化疗临床有效率为58.3%;化疗后宫颈鳞癌组织中PCNA的表达由(0.386±0.078)降至(0.125±0.040),差异显著(t=22.859,P＜0.001),而AI由(0.052±0.027)升至(0.248±0.078),差异显著(t=16.06,P＜0.001);化疗后临床有效者AI升高程度高于无效者,差异显著(t=2.398,P=0.029).结论对宫颈鳞癌进行顺铂联合羟基喜树碱、博来霉素的新辅助化疗能显著抑制肿瘤细胞增殖、增加凋亡,PCNA表达的下调及AI上调可能是新辅助化疗抗癌作用的重要机制之一.     

原发性帕金森病患者嗅球体积测量的影像学研究

目的：探讨嗅球结构体积在原发性帕金森病（Parkinson’Sdisease）和正常人的差异。方法：20列原发性帕金森病患者以及12列年龄匹配的志愿者被选入本次实验,分别对他们进行Hoehn-Yahr分级,帕金森病统一评价量表（UPDRS）,左右侧肢体功能评分,简易精神状态量表（MMSE）,蒙特利尔认知评估（MOCA）和磁共振成像检查。结果：正常对照组与帕金森病患者组的嗅球体积有统计学差异,帕金森病患者的嗅球体积与左右侧肢体运动功能评分、UPDRS评分、Hoehn—Yahr分级、MMSE、MOCA无明显相关性,但与患者的病程有显著相关性。结论：利用高分辨率磁共振成像计算嗅球嗅束体积能够作为帕金森病患者的早期诊断指标之一。