p14ARF基因对胰腺癌血管生成的影响

目的探讨外源性p14ARF基因对胰腺癌PC-3细胞血管生成的影响。方法将转染了外源性p14ARF基因的人胰腺癌PC-3细胞株接种裸鼠形成实体瘤，用RT-PCR和Westernblot法观察VEGFmRNA及VEGF蛋白的表达，并对实体肿瘤的微血管密度进行检测。结果转染p14ARF基因后的PC-3细胞实体瘤中VEGFmRNA及VEGF蛋白的表达下调，血管密度降低。结论p14ARF基因能下调内源性VEGF的表达，有着抗血管生成的治疗意义。     

p14ARF基因转染治疗胰腺癌的研究

目的 探讨p14ARF抑癌基因转染对胰腺癌（PC－3细胞）生长抑制的影响。方法 用脂质介导方法将p14ARF基因转导到人胰腺癌细胞株PC－3,应用逆转录酶链反应（RT－PCR）检测p14ARFmRNA 表达;应用免疫印迹方法分析p14ARF转基因蛋白表达,并观察p14ARF基因转染的胰腺癌细胞生长情况。结果 p14ARFmRNA基因转染的PC－3细胞能够表达p14ARF,并通过免疫组化和免疫印迹证实外源性p14ARF基因已转入细胞并结合于细胞基因组中。结论 p14ARF基因转染后的PC－3细胞明显受到抑制,提示p14ARF基因转染治疗胰腺癌具有潜在的临床应用价值。     

p14ARF基因通过p53途径对肝癌细胞的生长的影响

目的　探讨 p14 ARF对含有野生型 p5 3(wtp5 3)的肝癌细胞生长的影响及其作用机制。方法　将含p14 ARF的基因转染到人肝癌细胞HepG2中 ,通过流式细胞仪及生长曲线观察其对HepG2细胞周期及细胞生长的影响。利用Western Blotting方法及 p2 1waf1启动子荧光素酶活性检测p14 ARF对HepG2细胞 p5 3蛋白表达的影响。 结果　转染p14 ARF基因的HepG2细胞的生长速度从第 3天开始较空载体 pcDNA 3组减慢 ,处在G0 G1期细胞数 ( 70 .6 6 % )与空载体组 ( 6 1.5 5 % )相比明显增加 ,转染 pcDNA3p14 ARF( 1.0 92 3± 0 .0 370 ) p2 1waf1启动子荧光素酶活性较空载体组( 0 .76 73± 0 .0 180 )明显升高 ( P <0 .0 5 )。Westernblotting结果表明 ,p5 3表达也明显增加。 结论p14 ARF基因通过上调HepG2细胞的 p5 3表达导致 p2 1waf1的表达升高使细胞阻滞于G0 G1期 ,从而抑制细胞的生长。     

p14ARF基因对胰腺癌细胞侵袭力的影响

目的探讨外源性p14ARF基因导入人胰腺癌PC-3细胞株后,细胞侵袭力的变化。方法用脂质体介导法将外源性p14ARF基因导入人胰腺癌PC-3细胞株后,用细胞穿透Matrigel 胶法比较转染前后细胞侵袭力的改变,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测与侵袭转移相关基质金属蛋白酶(MMP)2和MMP9表达。结果转染p14ARF基因后的PC-3细胞穿过Ma- trigel胶的能力减弱,48 h后平均穿膜细胞数从(92±12)个减少到(28±5)个,而且MMP9 mRNA 表达下降。结论 p14ARF基因能抑制胰腺癌PC-3细胞的侵袭能力。     

p16基因转染对人胰腺癌细胞系生长抑制作用的研究

目的　探讨p16基因对人胰腺癌细胞系JF30 5的生长抑制作用。　方法　用脂质体介导法将外源野生型p16基因转染不表达p16的人胰腺癌细胞系JF30 5 ,对转染后细胞DNA、RNA和蛋白进行分析并观察其生物学特性变化。　结果　外源野生型p16基因已整合入细胞并获稳定表达 ,表达有外源p16基因的细胞生长速度及集落形成率均有部分抑制。细胞周期分析可见G1期增加 ,S期下降。电镜观察超微结构出现生长抑制特征。　结论　p16基因可作为胰腺癌基因治疗目的基因之一。     

PTEN和p27Kip1共表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的　通过腺病毒介导转染前列腺癌PC 3细胞 ,探讨人 10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白类似物 (PTEN)和p2 7Kip1对肿瘤细胞增殖和凋亡等方面的影响及二者的协同作用。方法　构建携带人PTEN和p2 7Kip1基因的腺病毒载体 ,体外转染PC 3细胞 ,通过RT PCR、Westernblot检测目的基因不同水平的表达。采用细胞生长试验、流式细胞仪检测PC 3转染前后细胞增殖、细胞周期和早期凋亡率的变化。结果　病毒滴度Ad PTEN为 1 8× 10 7pfu ml、Ad p2 7Kip1为 1 2× 10 9pfu ml,RT PCR检测有PTEN mRNA(46 2bp)和p2 7Kip1 mRNA (32 0bp) ,Westernblot检测有PTEN蛋白 (6 0KD)和P2 7蛋白 (2 7KD)特异表达 ,可明显抑制PC 3细胞的增殖 ,诱导细胞凋亡 ,联合基因治疗组与单基因组相比差异有显著意义。结论　成功构建携带人PTEN和p2 7Kip1的重组腺病毒载体 ,在前列腺癌细胞株PC 3得到了稳定、特异的高表达 ,联合基因疗法有望成为治疗前列腺癌的有效方法。     

外源性p16基因对食管癌患者癌细胞系的生长抑制作用

目的 观察外源性p16基因质粒导入食管癌患者食管鳞癌细胞系Ec109后的表达及其对Ec109细胞增殖生长状况的影响。方法 根据转染质粒的不同或是否行p16 cDNA质粒转染分为三组,每组分别为5个样本。PcDNA3-P16转染组（P16转染组）：采用脂质体（Lipofectamine）为载体,将PcDNA3-P16表达质粒寻入Ec109细胞;空载体转染组：用PcDNA－3－neo空载体以上述相同方法转染,作空白对照;未转染组：未用PcDNA3－P16质粒转染,作阴性对照。应用Northern斑点杂交、免疫组织化学、免疫荧光检测转化细胞的P16蛋白变化;流式细胞仪分析细胞周期变化,DNA片段化电泳检测细胞凋亡。结果 P16转染组外源性p16基因在Ec109细胞中表达后,细胞生长速度减慢,克隆形成能力下降,瞬时表达时有细胞凋亡发生,稳定表达后细胞存在G1期阻滞;空载体转染组和未转染组均未观察到以上结果。结论 脂质体介导的外源性p16基因转染对Ec109细胞有生长抑制作用,p16基因瞬时表达可诱导细胞凋亡。     

p16基因对前列腺癌细胞的体外作用研究

目的：研究可控性表达的p16基因对前列腺癌细胞的生长抑制作用。方法：通过可诱导的真核表达载体pMDNA-3-p16将外源野生型p16基因转染至该基因表达功能丧失的人前列腺癌细胞PC3中,使用ZnSO4作为诱导物,观察p16基因的可控性表达及其对前列腺癌细胞生物学特性的影响。 结果：转染了野生型p16基因的人膀胱癌细胞PC3-pMDNA3-p16经ZnSO4诱导后,开放了p16基因的转录和翻译,p16蛋白得到高水平表达,细胞生长速度及集落形成率均有了部分抑制,细胞周期分析可见G1期增加,S期下降。结论：P16基因与前列腺癌的发生、发展有关,为用p16基因进行前列腺癌的基因治疗提供了实验依据。     

腺病毒介导的p16基因转染对膀胱癌细胞生长影响的研究

目的　探讨复制缺陷型腺病毒介导的 p16基因转染对人膀胱癌细胞生长的影响。 　方法　将 p16重组腺病毒 (Ad p16 )感染p16蛋白表达阴性的人膀胱移行细胞癌T2 4细胞株 ,Ad LacZ、X gal染色法检测重组腺病毒的转染效率 ;Westernblot法检测 p16蛋白的表达 ;MTT法及流式细胞术评估Ad p16对T2 4细胞增殖的影响。　结果　在感染复数 (MOI)为 5 0时 ,重组腺病毒对T2 4细胞的转染率达 97% ;此Ad p16在T2 4细胞中可获高效表达 ;与转染Ad LacZ组及未转染组相比 ,转染Ad p16组T2 4细胞生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,细胞周期分析表明生长抑制主要发生在G1 S节点。　结论　腺病毒载体可有效地将外源 p16基因导入T2 4细胞 ;p16基因重组腺病毒载体转染能抑制T2 4细胞的生长。     

胆管癌中p14ARF甲基化分析及其与p53表达相关性研究

细胞周期调控异常可导致恶性肿瘤的形成，人类最主要的细胞周期调控通路有两条即Rb（p16-Rb）和p53（p14ARF—p53）通路。p14ARF能稳定和提高细胞p53水平，增强p53在G1—S期和G2-M期的限制点效应，最终使细胞阻滞于G，期和G2期，具有显著的细胞周期负调控作用。本研究采用甲基化聚合酶链反应（PCR）和免疫组织化学技术检测胆管癌中p14ARF启动子甲基化和p53蛋白表达状况，旨在探讨p14ARF和p53基因在胆管癌发生、发展中的作用及相互关系。     

p53、p16在胆囊癌的表达及其临床意义

本研究应用免疫组化ABC法对53例胆囊癌组织及因其他疾病手术切除的正常胆囊组织15例(均经病理证实)进行了p53、p16基因产物的联合检测。结果:p53基因改变发生于胆囊肿瘤的早期,临床Ⅳ期和低分化腺癌的的表达水平分别高于Ⅰ期和高分化腺癌,提示p53的检测可能作为胆囊肿瘤预后及腺癌恶性程度判断的潜在指标。p16表达的改变主要发生在肿瘤的中、晚期,可能与肿瘤的转移和腺癌恶性程度有关,对判断肿瘤转移倾向有一定帮助。联合检测p53、p16可提高对肿瘤的生物学特性的反映。     

Comparison of p63 and p73 expression in benign and malignant salivary gland lesions

BACKGROUND: The p63 and p73 genes are members of the p53 family and play an important role in stem cell identity and cellular differentiation and are expressed in basal and myoepithelial cells. In this study, we examined the expression of p63 and p73 in 50 various benign salivary gland lesions and 45 malignant salivary gland tumors. METHODS: The 95 salivary gland tumors were selected from the archives of the Department of Pathology and Laboratory Medicine at the Hospital of the University of Pennsylvania. Sectioned formalin-fixed paraffin-embedded tissue cut at 3 mum was immunostained with antibodies that recognize all isozymes of p63 and p73 and evaluated with respect to percentage of positive cells and localization. RESULTS: In benign lesions, p63 and p73 nuclear reactivity was seen in 46 (92%) of 50 and 47 (94%) of 50 cases, respectively. In malignant tumors, p63 and p73 were seen in 34 (76%) of 45 and 40 (89%) of 45 cases, respectively. A significant difference between p63 and p73 positivity was only seen in adenoid cystic carcinomas (p = .006). Also, p73 was found in tumors with minimal basal/myoepithelial differentiation. CONCLUSIONS: Hence, p63 and p73 expression is retained in both benign and malignant salivary gland tumors with basaloid or myoepithelial differentiation. Hence, p63 seems to be a more specific marker of myoepithelial differentiation than p73.     

The expression profile of p14, p53 and p21 in tumour cells is associated with disease-specific survival and the outcome of postoperative chemotherapy treatment in muscle-invasive bladder cancer

Purpose: We investigated the effects of alterations in the biological markers p14, p53, p21, and p16 in relation to tumour cell proliferation, T-category, N- category, lymphovascular invasion, and the ability to predict prognosis in patients with muscle-invasive bladder cancer (MIBC) treated with cystectomy and, if applicable, chemotherapy.Materials and methods: We prospectively studied patients with urinary bladder cancer pathological stage pT1 to pT4 treated with cystectomy, pelvic lymph node dissection and postoperative chemotherapy. Tissue microarrays from paraffin-embedded cystectomy tumour samples were examined for expression of immunostaining of p14, p53, p21, p16 and Ki-67 in relation to other clinical and pathological factors as well as cancer-specific survival.Results: The median age of the 110 patients was 70 years (range 51-87 years), and 85 (77%) were male. Pathological staging was pT1 to pT2 (organ-confined) in 28 (25%) patients and pT3 to pT4 (non-organ-confined) in 82 (75%) patients. Lymph node metastases were found in 47 patients (43%). P14 expression was more common in tumours with higher T-stages (P?=?0.05). The expression of p14 in p53 negative tumours was associated with a significantly shorter survival time (P=0.003). Independently of p53 expression, p14 expression was associated with an impaired response to chemotherapy (P=0.001). The expression of p21 in p53 negative tumours was associated with significantly decrease levels of tumour cell proliferation detected as Ki-67 expression (P=0.03).Conclusions: The simultaneous expression of the senescence markers involved in the p53-pathway shows a more relevant correlation to the pathological outcome of MIBC than each protein separately. P14 expression in tumours with non-altered (p53-) tumours is associated with poor prognosis. P14 expression is associated with impaired response to chemotherapy. P21 expression is related to decreased tumour cell proliferation.     

p53,p21在乳癌中的表达及意义

目的 探讨p53,p21蛋白在乳癌中表达的临床意义。方法 用免疫组化SP法对20例癌旁乳腺组织和69例乳癌组织中p53和p21蛋白进行半定量检测。结果 癌旁乳腺组织中p53和p21表达阴性;乳腺癌组织中p53和p21阳性率分别为47．8％和43．5％;随细胞分化程度降低;p53表达阳性率明显升高,p21表达的阳性率明显降低。p21表达的阳性率在有、无淋巴结转移组差异显著（P＜0．05）;p53阳性、p21阴性组术后5年无瘤生存率明显低于p53阴性、p21阳性组（P＜0．05）;在乳癌组织中p21表达与p53明显相关（P＜0．05）。结论 p53和p21在乳癌中的表达可判断乳癌细胞分化程度及患者预后。     

中波紫外线照射对HaCaT细胞p53mRNA和p53蛋白表达的影响

目的：研究中波紫外线（UVB）照射对永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞的p5 3mRNA和p53蛋白表达的影响.方法：以一定剂量UVB照射HaCaT细胞,分别用RT-PCR法和Western blot方法检测照射后不同时间点的p5 3mRNA和p5 3蛋白的表达水平;同时检测不同剂量UVB照射后同一特定时间点p5 3mRNA和p53蛋白的表达水平.结果：30mJ/cm^2的UVB照射后HaCaT细胞的p5 3mRNA和p5 3蛋白表达逐渐增加,4h达到峰值,后逐渐恢复至照光后24h接近正常值;不同剂量UVB照射4h后,p53mR-NA和p53蛋白表达随剂量增加而增加.结论：HaCaT细胞p5 3mRNA和p5 3蛋白表达与UVB照射存在一定的时间和剂量关系.     

早期阴茎癌中p53、p16、EGFR、cyclinD1的表达

目的研究免疫组化指标p53、p16、EGFR、cyclinDl在早期阴茎癌中的表达及其与肿瘤复发的关系。方法回顾性分析2006年3月至2010年5月实施局部广泛切除术的早期阴茎癌33例。采用EnV确on／HRP两步法检测p53、p16、EGFR和cyclingD1的表达。结果33例中可获得完整病例资料的18例,平均年龄47．7（32-70）岁,平均随访时间21．9（5--45）个月。其中L期1例、T1a期12例、T1b期3例、T2期2例。由于样本量问题四项指标均无统计学意义。结论p53蛋白高表达是早期阴茎癌发生术后复发的可能危险因素,尚需进一步大样本研究证实。     

Cyclin D1和p16在肥大乳房腺体组织中的表达及意义

目的：探讨Cyclin D1以及p16蛋白在肥大乳房乳腺组织中的表达及意义。方法：采用免疫组化SP法,检测35例肥大乳房及16例正常体积乳房乳腺组织中cyclinD1及p16蛋白的表达情况及相互联系。结果：35例肥大乳房腺体组织中Cyclin D1蛋白阳性表达率51.4%（18/35）,16例正常体积乳房标本腺体组织中无一例Cyclin D1呈阳性表达（0/16）,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。肥大乳房组腺体组织中p16蛋白阴性表达率为77.2%（27/35）,正常体积乳房腺体组织中阴性率为31.3%（5/16）,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。在Cyclin D1阳性表达的18例样本中,p16阴性表达者17例,阳性表达者1例,Cyclin D1阴性表达的17例样本中,p16阴性表达者10例,阳性表达者7例。Pearson相关性分析显示,Cyclin D1与p16的表达呈负相关（P〈0.05）。结论：①Cyclin D1在肥大乳房腺体中呈高表达,p16呈低表达,提示其可能参与了肥大乳房的发生和发展;②Cyclin D1和p16在肥大乳房组织中的表达呈负相关,提示二者存在着一定的调控关系。     

PTEN蛋白和p27在胃癌中的表达和相关性研究

目的：研究胃癌中抑癌基因PTEN和p27的表达和丽者间的关系.方法：应用免疫组化方法检测36例胃癌组织、10例癌旁组织和8例正常胃组织中PTEN和p27蛋白的表达情况.结果：胃癌组织中PTEN和p27阳性表达率分别为61.1%（22/36）和63.9%（23/36）（P＞0.05）,均低于正常胃组织阳性率100%（P＜0.05）胃癌组织中PTEN和p27阳性表达存在正相关关系（r=0.3043 P＜0.05）,结论：PTEN和p27基因的异常改变参与胃粘膜细胞的恶性转化过程,PTEN和p27蛋白表达水平可作为评价胃癌病理生物学行为的客观指标之一.     

Survivin、VEGF和p53在乳腺癌组织中的表达及相关性研究

目的:研究凋亡抑制基因Survivin、血管内皮生长因子(vascular endothelial groth factor, VEGF)、p53蛋白在乳腺癌组织中的表达,并探讨其临床意义.方法:用免疫组织化学SP法,对60例乳腺癌组织(A组)、22例乳腺良性增生组织(B组)及10例乳腺癌旁正常组织(C组)中的Survivin、VEGF及p53蛋白进行检测.结果:Survivin阳性表达率在A组和B组分别为76.7%(46/60) 和18.2%(4/22),在C组不表达(P＜0.05);Survivin表达与乳腺癌病理组织学分级、HER2表达有关.VEGF阳性表达率在A组和B组分别为73.3%(44/60)和31.8%(7/22),在C组为10%(1/10)(P＜0.05);VEGF表达与乳腺癌淋巴结转移、病理组织学分级、HER2表达及临床分期有关.p53阳性表达率在A组和B组分别为51.7%(31/60)和13.6%(3/22),在C组不表达(P＜0.05);p53表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移、病理组织学分级、HER2表达及临床分期均有关.在乳腺癌组织中Survivin的表达与VEGF、p53的表达呈正相关.结论:Survivin、VEGF及p53 在A组的表达明显高于B组和C组,并与转移和病理分级等生物学特征有关,在乳腺癌发生、发展中可能起重要作用,Survivin有望成为乳腺癌基因治疗的新靶点.     

p16蛋白在经胎盘诱发大鼠脑肿瘤不同时期的表达

目的 利用亚硝基乙基脲(ENC)经胎盘诱发大鼠脑肿瘤的模型,对肿瘤发生前、后各阶段p16蛋白表达进行连续动态观察,方法对该模型出生后60d、90d、120d、150d的子代鼠脑进行p16蛋白免疫组化染色观察。结果(1)60d组的p16蛋白均表达阳性,无缺失发生;90d组偶有阴性;120(1组阳性率下降;150d组阳性率明显下降。瘤周组织的阳性表达率高于瘤内组织。(2)p16蛋白卜要定位于细胞核,极少部分定位于细胞浆。结论(1)随着本模型肿瘤发生率的增加,大鼠脑内p16蛋白的表达下降,说明p16基因突变过程正是肿瘤的发生发展时期,p16基因活动下降与本模型胶质瘤的发生发展有关。(2)p16蛋白定位主要位于细胞核内,极少部分位于胞浆。