对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

目的探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果.方法将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,回收单一目的片段并再行电泳,观察非目的片段的分离效果.结果第一次回收的"单一"目的片段中,除目的DNA外,还含有多条较小的DNA分子;再次电泳回收的单一目的片段中,肉眼已看不见其它DNA分子,其纯度已大为提高;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段.结论琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子.     

不同酶切体系对胶回收纯化DNA浓度的影响

目的 通过建立不同的酶切体系,找寻酶切效果好、胶回收试剂盒纯化DNA得率高的实验设计.方法 使用XhoⅠ单酶切重组质粒pcDNA3-P2X4,酶切体系的体积分别为:150μl、160μl、170μl、180μl;酶切体系组成为:dddH2O(补足体积)、Buffer R(应用浓度是酶切体积的10%)、质粒DNA(无论所得质粒浓度如何,琼脂糖凝胶电泳胶回收的DNA上样量统一为23μg),XhoⅠ10μl(6μl、4μl两次加入);反应温度为:37℃ ;酶切的时间为2～3h.结果 酶切体系越大,所需要的酶切时间越短、酶切效果越好、酶切条带越接近Marker标准条带(通过电泳拍照观察所得),但是胶回收纯化后DNA的浓度却越低:150μl体系 DNA的浓度=308.96±8.71μg/ml,160μl体系 DNA的浓度=286.62±8.37μg/ml,170μl 体系DNA的浓度=245.80±15 64μg/ml,180μl体系 DNA的浓度=198.00±16.54μg/ml(方差分析,P<0.05,n=5).结论 将酶切的体系放大,杂质将相对稀释,不需增加酶的用量就能取得较好的酶切效果;提取质粒的浓度和纯度也决定着酶切效果.     

DNA检测中琼脂糖凝胶重复使用效果

目的：摸索在DNA检测中琼脂糖凝胶多次重复使用的效果。方法：按常规制备琼脂糖凝胶,胶不离框,上样、电泳,电泳后胶连框一起放于饭盒内,盖好盒盖,于4℃冰箱保存。下次使用时保证电泳方向与前次相反,即把胶调转方向加样、电泳。结果：重复使用6~7次,DNA条带仍清晰可见。结论：这是一种简便易行、效率高、节省实验经费并易于推广的好方法。     

琼脂糖凝胶厚度对DNA电泳的影响

目的 研究不同厚度的琼脂糖凝胶对电泳的影响。方法 用扩增得到的产物进行不同厚度的琼脂糖凝胶电泳．溴化已锭染色成像并求出进行相对迁移率等相关分析。结果迁移距离5～7m厚度凝胶时最大；10mm以内相对迁移率随着凝胶厚度的增加而增大，10mm以上相对迁移率反而降低；电泳图像以3～10mm较好。结论 5～7mm厚度的琼脂糖凝胶进行电泳较合适。     

从琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA方法的总结

<正>在分子生物学实验的操作中,许多情况下要利用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳观察、纯化和回收DNA片段。DNA片段回收是其中的重要步骤,根据实验的目的不同,回收的DNA可用于载体连接、基因重组、序列分析、探针制备等后续工作。DNA回收技术操作简单而迅速,并且能分离用其他方法(如密度梯度离心等)不能满意分离的DNA片段。在实际工作中,根据实验需求,准确、简便、快速、经济的DNA片段     

液化低熔点琼脂糖凝胶直接消化DNA法在构建突变体中的应用

用多级多聚酶链反应与液化低熔点琼脂糖凝胶中直接消化ＤＮＡ相结合方法构建了８个突变体，经证实其重组ＤＮＡ的阳性率为１００％。从低熔点琼脂糖凝胶中切下目的ＤＮＡ，在６８℃完全熔化后用５倍体积的双蒸水稀释，该化合物即可直接用于酶解反应。混合物中凝胶比例以１０ｇ／Ｌ为宜。因而克服了凝胶中因目的ＤＮＡ量少而纯化后回收率低无法进一步实验的弱点。     

琼脂糖凝胶电泳法测定血清中各种脂蛋白胆固醇

目的：对琼脂糖凝胶电脉法同时测定血清极密度脂蛋白（VLDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）和脂蛋白（a)Lp(a）的胆固 即VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C含量的方法进行评价。方法：采用Helena REP全自动快速电泳系统分离血清VLDL,LDL,HDL和Lp(a),然后结合胆固醇染色法同时测定VLDL－C,LDL－C,HDL－C和Lp(a)-C的含量,分别了该法的精密度,准确度和干扰因素,并将该法与传统方法如测定HDL－C的磷钨酸－镁沉淀法（PTA－Mg2 )法,测定LDL－C的聚乙烯硫酸沉淀法（PVS法）及测定Lp(a)的免疫秀射比浊法（ITA法）进行比较,结果：电泳法测定VLDL－C,LDL－C和HLD－C批内CV分别为5．16％－7．46％,1.26％－3．28%,3．78－5．86％;批间CV分别为8．35％－11．25％,2．78％－4．08％,4．23％－6．36％。检测线性范围总胆固醇为94．3％和89．6。电泳法与传统法测定LDL－C,HDL－C的相关系数（r)分别为0．9609,0．9557,电泳法测定Lp(a)-C与ITA法测定Lq(a)的r为9235,以该法检测北京地区98例健康人,HDL－C,VLDL－C,LDL－C,Lp(a)－C参考范围分别为0．95－2．10mmol/L,0.07-0.46mmol/L,1.77-2.87mmol/L,0-0.22mmol/L。结论：电泳法测定值与传统法一致,电泳法操作简便,快速经济,可同时测定4种脂蛋白胆固醇,适合于临床常规及研究使用。     

琼脂糖凝胶电泳法快速筛选轮状病毒

本文用琼脂糖凝胶电泳检测轮状病毒RNA,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果相比较,结果43份聚丙烯酰胺凝胶电泳阳性的标本,琼脂糖凝胶电泳亦均为阳性。两种方法检测轮状病毒RNA的敏感度一致,而琼脂糖电泳省时、简便、经济。可作为一种快速方法用于轮状病毒感染的筛选和快速诊断。     

尿蛋白琼脂糖凝胶电泳及临床应用

1997年底我们引进了法国 Sebia公司的全自动电泳扫描系统 ,建立了尿蛋白琼脂糖凝胶电泳技术并应用于临床。现报告如下。1　仪器、试剂与方法1.1　 Hydrasys自动程控电泳系统 ,Hyrys光密度仪购自法国 Sebia公司 ;琼脂糖凝胶板、浓缩电泳缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品预染液购自 Sebia公司 ;15 %醋酸脱色液、15 %甘油贮存液自配。1.2　方法1.2 .1　尿蛋白定量 :磺基水杨酸—硫酸钠浊度法。1.2 .2　尿蛋白电泳 :收集 2 4小时新鲜尿液 ,蛋白浓度控制在 2 g/ L以内 ,尿液经预染液预染后 ,加 5μl样品于凝胶片加样槽中 ,扩散 10 m in,将加样端…     

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展

当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡,开展对细胞凋亡的研究,首先要解决是方法问题,作者从凋亡细胞的特性性核ＤＮＡ片段检测着手,阐述了多种凋亡细胞核ＤＮＡ片段检测方法以及近年来的一些新进展。     

尿蛋白琼脂糖凝胶电泳分析及临床应用

电泳法分离鉴定尿蛋白具有重要的临床意义。目前临床常用醋酸纤维素薄膜电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离鉴定尿蛋白。前一种电泳法虽操作简单,但敏感度低,后一种电泳法虽分辩率高,但操作繁琐。我们采用薄层平板琼脂糖凝胶电泳分离鉴定尿蛋白,既克服上述两种电泳法的缺点,又取得较好的效果,易于在一般实验室推广应用。     

血红蛋白浓度对Hb琼脂糖凝胶电泳中HbA_2定量的影响

目的探讨点样前血红蛋白(haemoglobin,Hb)浓度对全自动琼脂糖凝胶电泳中HbA2定量的影响,以固定合适的点样前的Hb浓度范围,建立本实验室正常成人HbA2的参考值。方法35例正常人标本按点样前Hb浓度分为4组(各组浓度约为80、16、8和4g/L),用全自动琼脂糖凝胶进行Hb电泳测定各组HbA2含量,以方差分析对各组之间均数作两两比较。固定上样前Hb4～8g/L条件下测定100例正常成人HbA2含量。结果点样前4组不同Hb浓度下HbA2含量分别为(8.0±1.2)%、(4.4±0.36)%、(3.5±0.39)%、(3.3±0.22)%。经方差分析,Hb浓度约为8g/L、4g/L之间HbA2含量差异无显著性(P>0.05),其他各组之间HbA2含量差异均有显著性。固定上样前Hb浓度4～8g/L条件下,测定100例正常成人HbA2的含量为(3.2±0.29)%(正常参考值范围2.7%～3.8%)。结论点样前不同Hb浓度对全自动琼脂糖凝胶电泳中HbA2定量有显著性影响,合适的点样前Hb浓度应为<8g/L。固定点前Hb浓度在4～8g/L条件下,得出本实验室正常人HbA2的参考值范围为2.7%～3.8%。     

琼脂糖电泳中核酸染料Goldview最佳使用方案的建立

目的确定琼脂糖凝胶电泳中使用核酸染料Goldview的最佳浓度和方法,尽可能减少实验中Goldview用量,控制其对实验室环境的污染。方法配置含不同浓度Goldview的上样缓冲液,混合不同浓度DNA溶液的琼脂糖凝胶电泳,然后对比预染样品法、前染法及后染法的染色效果。结果实验结果显示上样缓冲液中含0.4%Goldview的预染样品法电泳检测核酸的效果最佳且能检测的核酸样品浓度在16.5ng或以上为最佳。结论核酸染料Goldview在核酸的琼脂糖凝胶电泳中使用的最佳方案为预染样品法,实验中推荐浓度达到普通实验要求,并且最易控制对周围环境的污染。     

谈琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法

本文详细介绍了琼脂粮凝胶电泳标本的拍摄方法，并提出获得高质量图片的具体措施。     

乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳的改良

临床实验室测定乳酸脱氢酶（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）同工酶的方法目前分为二类，一类是应用免疫抑制法在自动生化分析仪上测定，另一类是做各种载体的电泳来分离区带。我们对醋酸纤维膜和琼脂糖两种载体进行实验，改良了琼脂糖凝胶电泳的方...     

几种从凝胶中回收YAC DNA的方法及其效果的比较

几种从凝胶中回收ＹＡＣＤＮＡ的方法及其效果的比较＊朱冠山缪为民△周炜▲姚玉河▲焦炳华△柴建华▲自１９８７年首次构建了人类基因组酵母人工染色体（ＹＡＣ）分子克隆库［１］，目前ＹＡＣ的克隆容量已达８００～１０００ｋｂ，由此而成为基因组作图和测序的一个最重...     

分离乳酸脱氢酶同工酶的琼脂糖凝胶电泳法改进

作者改进了琼脂糖凝胶电泳法用以分离乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶，可以提高电泳分离的效果，避免胶层开裂或脱落，提高扫描曲线的分辨率。     

改良琼脂糖凝胶电泳法测定血清LDH同工酶的应用

目的 寻求更加准确、简便、快速、实用的乳酸脱氢酶同工酶（LDH）测定方法。方法 据LDH同工酶等电点不同,选择琼脂糖胶作支持物,对以往LDH同工酶测定方法进行改进,将五型LDH同工酶进行分离并定量测定。结果 改进后的LDH同工酶测定方法稳定,区带清晰,重复性好,结果可靠,试剂可长期保存。结论 改良琼脂糖凝胶电泳法测定血清LDH同工酶应用前景良好。     

琼脂糖凝胶电泳的条件优化——质粒DNA重组片段的限制性内切酶谱鉴定

随着质粒构建,转染,扩增等基因表达相关的分子生物学技术在科研中的广泛开展,DNA的琼脂糖凝胶电泳技术由于其操作简单、快速、灵敏等优点,已成为分离和鉴定生物大分子（核酸）的重要手段和常用方法。影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素很多,包括DNA分子大小和构象,琼脂糖浓度,所加电压,电泳缓冲液的离子浓度,