单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响

目的：探索日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30对血吸虫虫卵肉芽肿细胞凋亡的影响。方法：BALB／c小鼠随机两组，实验组腹腔注射 NP30主动免疫3次，对照组腹腔注射生理盐水，分别在尾蚴攻击感染后第39，49，64，108，112天处死，应用透射电镜观察肝虫卵肉芽肿细胞凋亡的形态改变，流式细胞术（FCM）和末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测虫卵肉芽肿凋亡细胞。结果：透射电镜观察虫卵肉芽肿细胞有凋亡小体形成；经FCM和TUNEL检测实验组虫卵肉芽肿细胞凋亡明显多于对照组。结论：细胞凋亡在日本血吸虫虫卵肉芽肿的形成、细胞转化过程中起着重要作用。NP30抗病免疫作用的机制之一是促进虫卵肉芽肿细胞的凋亡。     

吡喹酮与左旋咪唑对日本血吸虫虫卵肉芽肿的影响

对感染15条日本血吸虫尾蚴的雌性小鼠分别于感染后45天起喂服吡喹酮及左旋咪唑，小鼠肝内虫卵肉芽肿平均直径和肉芽肿内嗜酸粒细胞明显减少，表明这两种药物对血吸虫虫卵肉芽肿的发展具有明显抑制作用。     

中药免疫增强剂用于提高吡喹酮杀血吸虫效果的实验研究

目的观察两种中药免疫增强剂对吡喹酮杀血吸虫效果的影响.方法将昆明小鼠感染日本血吸虫后,第28天开始用两不同中药制剂(即中药1号和中药2号)分别灌胃C组和D组小鼠,0.5 ml/只/d,连续1周.感染后第35天给予吡喹酮半剂量进行治疗.同时设单用吡喹酮半剂量治疗对照组,吡喹酮全剂量治疗对照组和不用药感染对照组.感染后第49天剖杀小鼠灌注收集虫体.计算杀虫率、观察小鼠肝切片中虫卵肉芽肿大小并测定小鼠血清中特异性抗体动态水平.结果两种中药制剂分别将吡喹酮的杀虫率提高了33.97%和41.18%:虫卵肉芽肿大小与对照组比差异无显著性;在给中药前各组小鼠血清中特异性抗体水平无显著差别,给中药后,中药组小鼠血清中特异性抗体水平逐渐升高,直到给吡喹酮治疗前的抗体水平均显著高于对照组.结论本研究选用的两种中药刺剂均能在不加重虫卵内芽肿病变的同时提高吡喹酮杀日本血吸虫效果,其作用机制可能与中药增强剂促进宿主免疫应答,增强血吸虫特异性抗体生成有关.     

经脾脏注射血吸虫虫卵实验方法的探讨

报告应用经脾脏注射虫卵法建立Ｃ５７ＢＬ／６小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型，并与自然感染模型作比较。结果表明，脾脏注射组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为１００％，其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程均与自然感区染模型相似。本实验提示经脾脏注射虫卵是一种较好的、建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的方法。     

Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。     

一种新型日本血吸虫疫苗(童虫活细胞)诱导小鼠产生有效保护性免疫力的研究

目的观察日本血吸虫童虫活细胞诱导小鼠产生的保护性免疫效果.方法采用日本血吸虫肝期童虫的活细胞和虫体组织碎片,在未加佐剂条件下分别接种昆明小鼠,每组10只,每2周接种1次,共4次,末次接种后第7天攻击感染血吸虫尾蚴30条/鼠,感染后第42天解剖小鼠,与对照组比较检测和分析虫体发育数、虫体大小、鼠肝病变及其组织内虫卵肉芽肿大小、血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1亚类比值.结果细胞接种组和虫体碎片接种组分别与PBS注射组比,虫体发育数分别下降67.6%%和46.3%;肝组织中虫卵数(LEPG)在细胞接种组和虫体碎片接种组中分别减少95.4%和64.8%;在细胞接种鼠组肝表面卵结节和虫卵肉芽肿及雄虫长度均显著小于其他两组者;特异性IgG2a/IgG1比值≥2,但总抗体水平低于虫体接种组.结论该研究首次建立了一种血吸虫细胞型疫苗研究模型,初步结果表明,在不加佐剂条件用血吸虫童虫活细胞可诱导小鼠产生显著的抗攻击感染免疫力,其机制可能主要为Th1介导的细胞免疫应答.     

日本血吸虫感染小鼠CD8+T细胞亚群的变化及其与肝脏免疫病理的相关性研究

目的:研究CD8+T细胞中Tc1(CD3+CD8+ IFN-γ+)?Tc2(CD3+CD8+IL-4+)和调节性CD8+T细胞(CD8+CD28-)亚群在日本血吸虫感染导致的小鼠肝脏免疫病理发生发展中可能的作用?方法:取正常小鼠及日本血吸虫感染8周的小鼠脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测Tc1?Tc2和调节性CD8+T细胞亚群分别占T淋巴细胞的比例及绝对数量,并分析感染血吸虫不同时期的CD8+T细胞亚群与血吸虫感染小鼠肝脏肉芽肿和肝纤维化指标的关系?结果:与正常对照小鼠比较,日本血吸虫感染后小鼠脾脏的单个核细胞绝对数显著增加(P < 0.001);日本血吸虫感染小鼠脾细胞中T细胞(CD3+)和CD8+T细胞(CD3+CD8+)的比例及绝对数均显著增加(P均 < 0.05);此外,感染小鼠脾淋巴细胞中Tc1?Tc2?调节性CD8+T比例均显著增加(P均 < 0.001);与正常小鼠相比,感染小鼠Tc2/Tc1比率显著增加(P < 0.001)?此外,多元线性逐步回归分析显示Tc2和调节性CD8+T细胞是影响血吸虫感染所致肝脏免疫病理的主要影响因素?结论:CD8+T细胞及其Tc1?Tc2?调节性CD8+T细胞亚群在日本血吸虫感染宿主的肝脏肉芽肿和纤维化发生发展中可能发挥重要作用?其中,Tc2和调节性CD8+T细胞可能分别促进/抑制血吸虫感染所致的肝脏免疫病理?     

日本血吸虫感染小鼠肝肉芽肿与Th1／Th2细胞因子水平的动态变化

目的 观察小鼠感染日本血吸虫后急、慢性期肝肉芽肿病变与Th1/Th2细胞因子的动态变化,探讨Th1/Th2在肉芽肿形成及调节中的作用。方法 采用石蜡切片,HE染色后观察感染小鼠肉芽肿病变,用ELISA双抗夹心法测定小鼠感染后0、4、6、8和12周血清及脾淋巴细胞IL-2、IFNr和IL-4水平的动态变化。结果 小鼠感染后6周出现明显肉芽肿病变,8周肉芽肿反应达高峰;12周则明显缩小;感染小鼠血清及脾淋巴细胞的Th1细胞因子IL-2和IFNr在感染后4～6周开始上升,8周达高峰,随后下降;而Th2细胞因子IL-4在感染后8周时迅速上升且随感染时间延长而明显升高。结论 Th1细胞因子IL-2和IFNr与血吸虫卵肉芽肿的诱导和形成密切相关。而Th2细胞因子ILL-4可抑制Th1细胞因子在血吸虫病慢性期虫卵肉芽肿自发性免疫调节中起重要作用。     

Th17细胞因子及炎症趋化因子在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达

目的 观察日本血吸虫感染C57BL/6小鼠肝脏Th17细胞因子及其相关炎症趋化因子动态变化和肝脏虫卵肉芽肿病变,探讨其在日本血吸虫虫卵肉芽肿病变形成中的作用.方法 建立日本血吸虫感染C57BL/6小鼠模型,感染后2、4、6、8、10和12周剖杀小鼠,用实时荧光定量PCR法检测小鼠肝脏白介素17(IL-17)、IL-6、...     

日本血吸虫感染BALB/c小鼠脾脏细胞学的变化

目的观察BALB/c小鼠感染日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)6～8周后脾脏细胞学的改变情况。方法用日本血吸虫尾蚴腹贴法建立日本血吸虫感染的小鼠模型。6～8周后观察肝脏、脾脏大小,称重;做脾脏淋巴细胞计数;用流式细胞仪检测脾脏淋巴细胞的大小、密度和T、B细胞分类以及Th细胞亚群情况;用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中可溶性虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)所诱导的特异性抗体IgG的产生情况。结果日本血吸虫感染BALB/c小鼠6～8周后,脾脏体积明显增大,重量增加,细胞数量明显增多。流式细胞仪检测发现脾脏中出现一群体积明显增大的细胞群,该群细胞表达少量的CD4、CD8、CD19和DX-5分子;Th1/Th2轴发生偏移,Th17细胞数量增多;ELISA结果表明血清中SEA特异性抗体IgG水平明显升高。结论日本血吸虫感染的BALB/c小鼠脾脏出现明显的细胞学改变,尤其是Th1细胞数目下降,浆细胞、Th2细胞及Th17细胞数目增多,为研究日本血吸虫感染后期虫卵肉芽肿形成的免疫病理机制奠定了基...     

维生素E对小鼠日本血吸虫性肝损害肝组织MDA、SOD及超微结构的影响

目的研究维生索E（VitE）对感染日本血吸虫小鼠肝组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性及肝细胞超微结构的影响，探讨VitE对小鼠日本血吸虫性肝损害的保护作用及其可能的机制。方法日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠构建日本血吸虫病模型，随机分成5组：正常对照组，模型组及VitE高、中、低剂量组（1、2、3组）。1、2，3组感染尾蚴同时分别给予高、巾、低剂量（150mg／kg、50mg／kg、5mg／kg）VitE，灌胃给药，每日1次共8周。于第8周末处死动物，HE及透射电镜对肝组织进行病理学检查．应用分光光度法检测肝组织MDA含量和SOD活性，并检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天门冬氨酸转氨酶（AST）水平。结果VitE抑制模型组肝脏虫卵肉芽肿反应，减小肉芽肿直径（P〈0.01），改善小鼠肝组织病理和超微结构变化；降低ALT和AST水平（P〈0．01）；降低肝组织MDA含量（P〈0.01），提高SOD活性（P〈0.01），均呈剂量效应关系。结论VitE对小鼠日本血吸虫性肝损害具有预防作用．其作用机制与VitE抑制肝脏虫卵肉芽肿和炎症反应、抗脂质过氧化作用及保护肝脏细胞免受自由基损害有关。     

日本血吸虫组织蛋白酶B2在小鼠抗血吸虫再感染中的作用

目的 构建日本血吸虫组织蛋白酶B（Sjcb2）真核表达载体,检测日本血吸虫组织蛋白酶B2单独和联合吡喹酮（PZQ）在小鼠抗血吸虫再感染中的作用.方法 将60只BALB/c雌性小鼠随机均分为六组,建立日本血吸虫感染动物模型：感染组、感染攻击组、空质粒处理组、Sjcb2免疫组、吡喹酮处理组、Sjcb2联合吡喹酮处理组.Sjcb2免疫组和Sjcb2联合吡喹酮组分别在初次尾蚴感染前第21天、14天及7天接种pcDNA3.1（＋）/Sjcb2重组质粒,空质粒处理组接种pcDNA3.1（＋）空质粒.初次尾蚴感染后第六周,对吡喹酮处理组和Sjcb2联合吡喹酮处理组小鼠给予PZQ治疗.除感染组外其它各组在第八周再次进行尾蚴攻击感染.分别于第8周和第14周取各组小鼠肝脏组织做病理切片,观察虫卵肉芽肿大小;采用间接ELISA法检测血清中特异性IgE和IgG亚型（IgG1,IgG2和IgG3）;检测各组小鼠荷成虫数,计算抗血吸虫再感染率.结果 Sjcb2免疫组、联合组与其它组分别比较,小鼠荷虫数显著性减少,抗血吸虫再感染率显著升高,虫卵肉芽肿直径显著减小,IgG1水平显著下降和IgE水平显著升高（P〈0.01）.结论 Sjcb2在小鼠模型中具有抗日本血吸虫再感染作用,抗血吸虫再感染率为70.3%,抗再感染作用机制可能与特异性IgE水平升高和IgG1水平下降有关.     

经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的构建与评价

目的 构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果，为血吸虫肝病研究提供新的动物模型。方法 将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组，其中对照组5只，注射虫卵组10只。第-14天将5 000个活虫卵注射至小鼠腹腔，第0天麻醉小鼠后剖开腹腔，经门静脉注入5 000个虫卵，对照组注射等体积的磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）。分别于第10天、第30天处死虫卵组小鼠各5只，第10天处死对照组小鼠，收集小鼠血清和肝组织，通过进行苏木素-伊红染色（HE染色）、马松染色（Masson染色），微孔板分光光度计法检测丙氨酸转氨酶（alanine aminotransferase, ALT）、天门氨酸转氨酶（aspartate aminotransferase, AST）、肝脏羟脯氨酸（hydroxyproline, HYP）含量，以及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝纤维化相关基因、Th1和Th2型免疫反应相关基因，分析肝损伤、虫卵肉芽肿和纤维化以及适应性免疫反应等指标，评价经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的效果。结果 经门静脉注射虫卵10 d和30 ...     

绞股蓝总皂甙减轻小鼠血吸虫性肝纤维化的实验观察

本实验采用绞股蓝总皂甙（ＧＰｓ）治疗小鼠血吸虫病，观察其对血吸虫性肝纤维化的影响。结果表明，ＧＰｓ治疗组肝虫卵肉芽肿反应增长比和肝纤维化程度均明显小于感染对照组（Ｐ〈０．０５），提示ＧＰｓ具有减轻血吸虫性肝纤维化的作用，也提示自由基在血吸虫虫卵肉芽肿形成和发展中起了重要作用。     

绞股蓝总皂甙减轻小鼠血吸虫性肝纤维化的实验观察

本实验采用绞股蓝总皂甙（ＧＰｓ）治疗小鼠血吸虫病，观察其对血吸虫性肝纤维化的影响。结果表明：ＧＰｓ治疗组肝虫卵肉芽肿反应增长比和肝纤维化程度均明显小于感染对照组（Ｐ＜０．０５）。提示ＧＰｓ具有减轻血吸虫性肝纤维化的作用。也提示自由基在血吸虫虫卵肉芽肿形成和发展中起了重要作用     

被动转移抗SIEA－Cp101血清对人工感染日本血吸虫鼠肺虫卵肉芽形成的影响

目的　了解SIEA Gp10 1对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响。方法　采用虫卵肉芽肿肺模型对SIEA Gp10 1的作用进行研究。将 36只昆明鼠随机分为 5组 ,各组被动转移的成分分别为 :抗SIEA Gp10 1,抗SIEA2 8kDa ,抗SIEA Gp10 1与抗SIEA2 8kDa混合血清 ,同时设正常兔血清组与生理盐水对照组。分别于第 1、3、5天尾静脉注射抗血清、正常兔血清或生理盐水 ,各组于第 2天注射日本血吸虫成熟虫卵 ,第 8天取鼠肺组织切片 ,观察虫卵肉芽肿变化并测量、比较虫卵肉芽肿大小。结果　正常兔血清组与生理盐水组相比 ,虫卵肉芽肿大小无统计学差别 (P >0 0 5 ) ;与正常兔血清组比较 ,实验组虫卵肉芽肿的大小分别下降了 18 0 8%、2 8 30 %和 6 44 % ,其中抗SIEA2 8kDa差别显著 (P<0 0 5 ) ,抗SIEA Gp10 1和混合血清组差别不显著 (P >0 0 5 )。肉芽肿内外细胞成分的观察显示 ,正常兔血清组与生理盐水组无明显的差别 ;而抗SIEA2 8kDa血清被转组 ,虫卵破坏加快 ,部分虫卵卵内仅见残渣和少量炎性细胞。抗SIEA Gp10 1与混合血清组部分虫卵坏死 ,有一定数量的炎性细胞浸润。结论　SIEA2 8kDa分子具有抗卵胚发育和抑制虫卵肉芽肿形成的作用。混合血清组较抗SIEA2 6 2 8kDa组虫卵破坏较轻 ,虫卵肉芽肿增大 ,细胞数量增多 ,是否     

虫卵可溶性抗原对日本血吸虫卵肉芽肿形成的影响

用日本吸虫卵可溶性抗原(SEA)皮下注入正常小鼠。末次注射第23天从尾静脉注入新鲜日本血吸虫卵。注射虫卵后第18天观察小鼠肺内虫卵肉芽肿反应的增长比。结果用SEA 0.1微克,0.5微克及1.0微克/克体重的三个实验组肺组织内虫卵肉芽肿反应明显减弱。提示对正常小鼠用0.1～1微克/克体重的SEA为诱发免疫调节的适宜剂量。为用SEA诱发宿主对虫卵肉芽肿应答的免疫耐受性研究提供选择依据。     

α干扰素治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化实验研究

目的观察IFN-α是否具有抗日本血吸虫病肝纤维化的作用及疗效.方法以日本血吸虫尾蚴感染IcR小鼠造成肝纤维化模型.10周后顿服吡喹酮杀虫治疗,继以IFN-α皮下注射治疗,并与模型对照组和0.9%氯化钠注射液治疗组比较.肝脏组织切片作苏木素-伊红、苦味酸-酸性品红染色,观察肝脏虫卵肉芽肿平均大小、胶原面积百分比及肝纤维化程度（SSS评分）.结果IFN-α治疗组肝脏虫卵肉芽肿平均大小缩小（P〈0.05）、胶原面积百分比降低（P〈0.05）、SSS评分较模型对照组下降〉2分（P〈0.05）.结论IFN-α治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化有效.     

免疫调节剂SCA诱导的抗血吸虫性肝病变及其机制的研究

目的探讨感染日本血吸虫的BALB/c小鼠诱导的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变效应及其分子机制.方法取鼠肝连续切片,HE染色,光镜下测量肉芽肿大小(平均面积和体积);用流式细胞仪测定鼠脾T淋巴细胞亚群CD4+和CD8+百分数及二者的比值;用ELISA检测小鼠血清特异性抗体IgG及其亚类IgG1和IgG3水平.结果服用SCA(SCA-1,SCA-2)实验小鼠肝内肉芽肿病变均非常显著地小于感染对照组(均P＜0.01);实验鼠肝内虫卵肉芽肿的平均面积和体积,与对照组比较,减小率达40.71%～53.08%;实验组CD4+/CD8+值(2.72～3.67),显著地高于对照组(1.89)(均P＜0.05);用药组的特异性抗体IgG及其亚类IgG1和IgG3水平,均显者地高于对照组(均P＜0.01或0.05).结论中药合剂SCA是一种新型、高效无毒的免疫调节剂,其抗病免疫的分子机制与细胞免疫和体液免疫应答的增强密切相关.     

慢性血吸虫病孕鼠肝脏病变的计量分析

目的:了解慢性血吸虫病孕鼠肝脏的病变程度.方法:以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,在感染后100d(慢性期),雌雄小鼠交配使其受孕,在妊娠早期及分娩后取材,以图像分析仪对肝内虫卵肉芽肿进行体视学分析,同时观察孕期小鼠存活状况及虫荷.结果:各组间虫荷差异无显著性意义,但受孕组病鼠死亡明显增多,感染产后组小鼠的肝脏虫卵肉芽肿面积较感染未合笼组明显缩小(P＜0.05),其肉芽肿纤维面积也较感染早孕组及感染未合笼组显著缩小(P＜0.01).结论:妊娠期合并慢性血吸虫病使病变加重可能与免疫抑制有关.