鼠抗人肝癌单抗Hab_(18)—葡聚糖—阿霉素结合物在荷瘤裸鼠体内的放免定位及导向治疗的实验研究

本实验制备了鼠抗人肝癌单克隆抗体Hab_18—葡聚糖—阿霉素导向结合物,放免显像证实该结合物在荷人肝癌裸鼠体内能选择性地定位于人肝癌局部;对荷瘤鼠的毒理学实验中相同剂量的阿霉素组荷瘤鼠全部死亡,而导向结合物组全部存活;荷人肝癌裸鼠导向治疗结果表明:该结合物能有效地抑制人肝癌的生长,导向治疗组肿块较治疗前缩小.实验结果提示:Hab_18—DEX—ADM结合物对人肝癌有较好的导向治疗作用.其抗癌效果优于单纯ADM,而毒副作用却明显低于单纯ADM,有可能成为一种肝癌导向药物.     

碘标记单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内分布和放免显像的实验研究

碘标记单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内分布和放免显像的实验研究浙江省医学科学院同位素室（３１００１３）孙性善，郑根香，李洸，丁占初，缪云萍，俞淑清近年来，放射性核素标记抗肿瘤单克隆抗体（单抗）用于肿瘤定位诊断已取得良好进展［１］。我们在研制成抗大肠癌单抗ＨＣ...     

131I人源抗HBs Fab在裸鼠人肝癌模型定位的研究

目的在人源抗HBsFab表达载体构建、抗体片段表达及纯化成功后,进行放射免疫显像研究,以评价其在动物模型中的免疫导向活性。方法用131I标记人源抗HBsFab,经腹腔注射l,3,5,7d后行裸鼠人肝癌模型放射免疫显像,于第7天作组织分布测定,并以鼠源抗HBsAg单抗为对照进行比较。结果实验组在标记抗体注入后第3天即获阳性显像,第5天更加清晰,此时人源抗HBsFab、鼠源单抗及无关Fab的瘤／肝放射性比值分别为5＞4,4＞0和0＞9。结论人源抗HBsFab具有良好的导向活性,为其用于肝癌的导向治疗提供了实验依据。     

^131I标记抗人肝癌单抗在裸鼠人肝癌模型的定位

利用抗肿瘤相关抗原的抗体对肿瘤进行导向定位、治疗已引起医学界的普遍关注。核素标记的抗肝癌单抗的研究始于近年,国内尚无完整报道。本文用~(131)I标记的抗人肝癌单抗在裸鼠人肝癌模型上进行肿瘤定位,并分析了影响定位的因素及进一步改进的途径。     

照射后裸鼠人体原发性肝癌病理形态学及甲胎分泌变化的研究

裸鼠人体原发性肝癌经60钻γ线单次剂量10GY照射后,在9小时后开始发生明显的细胞形态学变化,主要表现在细胞分裂相的消失,灶性坏死,空泡样变,核染色质固缩和间质的大量出血。同时血清甲胎蛋白的浓度也有明显下降。照射后144～240小时,上述细胞损伤现象开始恢复,细胞开始增生,甲脂蛋白浓度也开始回升。本实验研究表明,裸鼠人体原发性肝癌对放射有一定的敏感性,是放射生物研究的一个较为理想的模型。     

131I标记抗人肿瘤分泌IgG轻链单克隆抗体荷瘤裸鼠体内分布与显像初步研究

[目的]用131I标记抗人肿瘤分泌IgG轻链单克隆抗体（ATILCMcAb）进行荷瘤裸鼠体内生物分布与显像研究,探讨其在放射免疫显像及靶向治疗中的应用前景。[方法]采用氯胺-T法标记,SephadexG-25柱层析分离纯化,纸层析法测定标记率和放化纯度。BALB/c裸鼠右侧腹股沟皮下注射宫颈癌上皮细胞（HeLa MR）,待肿瘤长至1cm左右,进行荷瘤裸鼠体内生物分布与显像实验。对照组为mIgG蛋白。[结果]131I-ATILCMcAb标记率89.9%±4.72%（n=4）,放射性比活度1.26MBq/μg,放化纯度98.1%±1.24%（n=4）,于4℃冰箱及37℃正常人混合血清存放72h后,放化纯度仍〉90%。131I-ATILCMcAb在血中的清除率较131I-mIgG快（P〈0.001）;除肝、膀胱和股骨外,各组织72h T/NT比值与131I-mIgG比较有显著性差异（P〈0.05）。荷瘤裸鼠体内显像实验显示24~72h,ATILCMcAb使肿瘤部位清晰显像。[结论]ATILCMcAb能够通过与肿瘤分泌的IgG特异结合而实现对肿瘤的探测,具有较好的生物学特性,为进一步的放射免疫显像及靶向治疗研究奠定了实验基础。     

食管癌转移淋巴结放免显像定位的研究

目的：为放射免疫显像在诊断食管癌淋巴结转移中的应用,提供基础研究支持。方法：（１）免疫组化（ＬＳＡＢ法）测定不同组织冷冻切片和抗人食管鳞癌单抗Ｇ９的反应;（２）＾１２５Ｉ标记Ｇ９,形成标记化合物,在荷食管癌裸鼠腹腔注射＾１２５Ｉ－Ｇ９后的连续３天内,测定各主要组织、器官的放射性。结果：（１）ＩＳＡＢ显示,食管癌原发灶和转移淋巴结呈阳性反应,正常食管和无转移淋巴结阴性。（２）＾１２５Ｉ－Ｇ９在裸鼠体     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇(TNP-470)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法:人肝癌转移模型(HCC)-LCI-D20原位移植瘤裸鼠32只,随机分4组(每组8只)给药:As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水(NS)对照组,给药21天后,对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度(MVD)、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果:As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组(P<0.05);计算两药相互作用系数(CDI)值:瘤重CDI(0.95)<1,体积CDI(0.89)<1,两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达;TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达,对移植瘤VEGF的表达无影响;联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达,抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义;各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组(P<0.05)。结论:As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生,能有效抑制移植瘤生长。     

以AFP为靶点的肝癌树突状细胞免疫治疗的实验研究

目的探讨AFP作为肝癌基因治疗和免疫治疗靶点的可行性以及AFP基因转染的树突状细胞（AFP-DC）疫苗对表达AFP肝细胞癌的免疫治疗作用.方法构建AFP-cDNA 真核表达载体,体外转染DC,制备AFP-DC瘤苗,诱导针对表达AFP的肝癌细胞株HepG2的特异性免疫反应,MTT法检测效应细胞对靶细胞的杀伤率.结果 AFP-DC瘤苗能够分泌AFP抗原,培养上清中AFP含量为0.8805 IU/ml,与空载体组和空白对照组相比,差异显著（P〈0.05）.免疫荧光检测可见AFP-DC胞浆及胞膜有AFP抗原分子表达;活化的CTL能够对表达AFP肝癌细胞起特异性杀伤作用,杀伤效率可达84.05%,与空载体组和空白对照组比较,差异显著（P〈0.05）.结论 AFP作为靶点治疗肝癌具有可行性,AFP可作为肝癌靶向治疗的新的突破点;AFP-DC疫苗可以作为表达AFP肝癌的一种免疫治疗手段,为DC瘤苗的临床应用奠定了基础.     

人甲胎蛋白单克隆抗体的研究和应用

60年代末,甲胎蛋白被确认为癌胚抗原。甲胎蛋白的多克隆抗体免疫检测在临床上已作为诊断原发性肝细胞癌和畸胎瘤的指标。80年代甲胎蛋白的单克隆抗体研制成功,对肝细胞分化、癌变过程的理论研究,纯化甲胎蛋白以及提供诊断试剂等,都具有重要意义。本文综述了近年来人甲胎蛋白的应用及研究进展。     

~(125)|标记的免疫毒素(TCS-Hepama-1)在荷人肝癌裸鼠体内分布及肿瘤显像

~(125)I标记的免疫毒素TCS-Hepama-1及对照用TCS-NM IgG在荷瘤裸鼠体内分布及肿瘤显像结果表明:实验组裸鼠尾静脉注入~(125)I-TCS-Hepama-1后第2天,血的放射性最高,随着时间延长,血及各组织器官的放射量逐渐减少,而肿瘤组织的每克放射剂量逐渐增多,第6天起T/NT值均＞1,第8天达最高,瘤/血、瘤/肝比为1.45及2.05。与对照组的比值0.31和0.97相比,差异显著(P＜0.05)。实验组从第2天起肿瘤即显示阳性定位,随肿瘤内放射浓度增加,肿瘤显像逐渐清楚,以第8天最为清晰。而对照组的裸鼠放射性呈全身均匀分布,肿瘤内未见浓聚,随时间延长放射性均匀减弱。说明Hepama-1在免疫毒素中仍保持其识别功能,免疫毒素TCS-Hepama-1在荷瘤裸鼠体内对人肝癌组织有很高的专一亲和力。     

抗人肝癌细胞单克隆抗体免疫组化及免疫电镜研究

本文用抗人肝癌细胞的单克隆抗体,采用ABC法,50例临床病理诊断为肝细胞肝癌及正常组织等的石蜡切片进行了免疫组化研究,发现该抗体染色在肝癌阳性率为88％(44/50例),而在全身绝大部份脏器的正常组织无交叉反应。这一结果表明,该抗体对肝癌组织具有一定的特异性。为证实此抗体定位的相应抗原部位,我们还通过免疫电镜包埋前和包埋后两种不同的染色方法,对5例临床手术切除的新鲜肝癌标本进行了超微结构定位观察。结果,此抗体主要定位于细胞膜性结构,包括细胞膜连接,线粒体膜和内质网膜。推测此抗体为肝癌细胞相关膜抗原的单克隆抗体。此抗原物质的发现,为肝癌诊断及研究展示了新的前景。     

抗Ⅳ型胶原酶单抗在人肺癌裸鼠移植模型中的免疫显像

背景与目的：基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)在肿瘤生长和转移的多个环节发挥着重要作用,Ⅳ型胶原酶作为MMPs家族的重要成员之一已成为肿瘤研究的新靶点。本文通过荷瘤裸鼠的显像实验,评价抗Ⅳ型胶原酶单克隆抗体3G11的体内特异性分布。方法：用lodogen法将^131I或^125I标记亲和纯化的单抗3G11,ELISA检测标记前后单抗的活性变化。^131I-3G11在3种不同体系(生理盐水,小牛血清,裸鼠血清)中37℃温育,检测体外稳定性。每只正常BALB／c小鼠静脉注入388．5kBq ^125-I3G11,测定单抗的药动学指标。建立人高转移PG肺癌细胞移植肿瘤模型的BALB/c(nu/nu)裸鼠每只静脉注入6．44MBq ^131I-3G11,进行免疫显像。结果：单抗3G11经亲和纯化后纯度大于98％,碘标记使单抗活性降低10％～20％。单抗3G11的体内代谢呈二室模型分布,T1/2α为7．2h,T1/2β为345．2h。^131I-3G11标记物体外72h能基本保持稳定,在荷瘤裸鼠体内72h显像清晰,至120h效果更明显。结论：显像实验证明单抗3G11对肿瘤组织有较好的特异性和亲和性。     

PCNA与AFP在人肝癌组织中的表达及其预后意义

作者采用免疫组化染色技术，检测５２例肝癌组织中ＰＣＮＡ和ＡＦＰ的表达。结果表明ＰＣＮＡ和ＡＦＰ在癌组织中的表达率明显高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）；ＰＣＮＡ与ＡＦＰ在癌组织中的表达率存在一定的相关性（ｒ＝０．３７，Ｐ＜０．０５），癌组织中ＰＣＮＡ阳性表达率越高（≥４５％），患者生存期越短。作者认为ＡＦＰ基因的激活能促进癌性增殖；ＰＣＮＡ在癌组织中表达率越高，反映了细胞增殖越活跃，倍增时间越短，肿瘤细胞的生物学特性表现为细胞分化程度低，恶性程度高，组织侵袭力强，复发及远处转移早，患者临床预后差。     

人源性抗肝癌单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的建立产生人源性抗肝癌单克隆抗体的人-鼠杂交瘤.方法用IL-2和美洲商陆(PWM)体外刺激肝癌病人外周血淋巴细胞,再与小鼠骨髓瘤细胞NS-1融合,待杂交瘤生长进行筛选、克隆化及特性分析.结果建立了3株产生人源性抗肝癌单克隆抗体的人-鼠杂交瘤-AF3,CB7、CH1.三种单抗均识别肝癌细胞表面抗原,并具有显著的补体依赖的细胞毒活性.其中AF3的效价最高.结论通过人-鼠杂交瘤技术获得了产生人源性抗肝癌单克隆抗体的杂交瘤细胞系.抗体效价高,是一种较理想的单克隆抗体.     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇（TNP-470）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：人肝癌转移模型（HCC）-LCI—D20原位移植瘤裸鼠32只，随机分4组（每组8只）给药：As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水（Ns）对照组，给药21天后，对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度（MVD）、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果：As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组（P〈0．05）；计算两药相互作用系数（CDI）值：瘤重CDI（0．95）〈1，体积CDI（0．89）〈1，两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达；TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达，对移植瘤VEGF的表达无影响；联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达，抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义；各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组（P〈0．05）。结论：As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生，能有效抑制移植瘤生长。     

重组人肿瘤坏死因子治疗原发性肝癌的实验研究

体外细胞毒实验测试发现重组人肿瘤坏死因子ａｌｐｈａ（ｒＨＴＮＦ_α）对体外培养的人原发性肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１和ＢＥＬ７４０４有较强的细胞毒作用，这种作用具有剂量依赖性。形态学研究表明，受ｒＨＴＮＦ作用的肝癌细胞呈现调亡细胞的特征，即胞核固缩，部分成片状，细胞变小，聚集成团落，在体外实验的基础上，对ＳＭＭＣ－７７２１，细胞的裸鼠人肝癌模型进行实验治疗，结果提示：瘤内单独注射ｒＨＴＮＦ（５００Ｕ／只，ｑｄｘ３），即有一定抗瘤效应，合用ＤＤＰ后效果明显，这些结果预示ｒＨＴＮＦ在肝癌治疗中的潜在意义。     

人小细胞肺癌NCI-H446裸鼠模型的99mTc-octreotide受体显像研究

背景与目的小细胞肺癌恶性程度高,早期诊断对其预后有重要价值,目前的检查方法比较局限,传统影像学方法特异性差,而PET/CT价格昂贵,难于推广应用。小细胞肺癌属神经内分泌肿瘤,高表达生长抑素受体,是其早期进行分子影像诊断的理论基石。本实验旨在观察99mTc-octreotide在正常裸鼠体内的分布、代谢及荷人NCI-H446小细胞肺癌裸鼠模型体内显像变化,为临床小细胞肺癌早期诊断奠定基础。方法建立人小细胞肺癌的裸鼠肿瘤模型,正常裸鼠及荷瘤鼠静脉注射99mTc-octreotide显像剂后行动态及延迟显像。运用感兴趣区（regionofin-terest,ROI）技术勾画各时相裸鼠各脏器、肿瘤（T）及肿瘤对侧对应部位（N）放射性计数,计算相应T/N比值,并建立30min内各ROI的时间-放射性（A-T）曲线。结果①正常裸鼠的肾脏、肝脏内99mTc-octreotide分布最多,肺部、心脏部位分布较低,头部放射性分布最少,99mTc-octreotide主要通过泌尿系统排泄;各脏器30min内A-T曲线显示放射性分布随时间延迟呈逐渐下降趋势。②5例荷瘤裸鼠的肿瘤显像均呈阳性;静脉注射99mTc-octreotide后肿瘤部位在3h显像最清楚,整个检查时间内肝脏放射性强度明显高于肿瘤组织,肺部放射性与肿瘤部位较相近。半定量分析结果显示,静脉注射99mTc-octreotide后肿瘤组织与对侧肢体肌肉的T/N比值在0.5h、2h、3h、4h分别为1.163±0.03、2.08±0.12、3.03±0.23、2.689±0.31;各时相T/N比值差异有统计学意义（F=51.69,P<0.000,1）;通过两两比较发现,静脉注射显像剂后3h的T/N比值与其他各时相差异均有统计学意义（P<0.05）;不同检查时间肝脏部位的放射性平均计数高于肿瘤部位,肺部的平均计数与肿瘤相近。肿瘤部位A-T曲线显示,注射99mTc-octreotide后2min-3min出现一过性放射性分布高峰。结论运用99mTc-octreotide作显像剂,人小细胞肺癌NCI-H446裸鼠模型具有极高的显像阳性率,且3h肿瘤显像最清楚。