淋巴细胞趋化因子受体mRNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞的表达

目的探讨淋巴细胞趋化因子受体(XCR1)mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,及其与疾病的相关性。方法收集93例确诊的SLE患者和30名健康对照组,收集PBMC,提取RNA。应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测研究对象XCR1mRNA表达水平。结果!"XCR1mRNA在PBMC中表达水平,患者组(1.57±0.84)与正常对照组(0.19±0.14),两者差异无统计学意义(P>0.05)。活动期(2.09±1.38)与对照组比较,两者差异有统计学意义(t=2.392,P=0.02);活动期与非活动期(0.31±0.24)比较,差异有统计学意义(t=3.091,P=0.003);非活动期与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。"#SLE患者组XCR1mRNA水平与疾病活动度评分(SLEDAI)关系:SLE患者组PBMC中XCR1mRNA表达水平与SLEDAI作直线相关性分析,XCR1mRNA水平与SLEDAI(r=0.540,t=5.445,P=0.000)呈正相关。"$SLE患者PBMC中XCR1mRNA表达与临床表现及实验室检查相关性:SLE抗SSA抗体阳性患者(17/68,1.4±1.2)比阴性患者(51/68,3.5±4.9),其XCR1mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(t=2.78,P=0.007)。结论XCR1mRNA表达水平在PBMC中活动期SLE患者比非活动期及对照组增高,与疾病的活动性(SLEDAI)正相关,非活动期与对照组差异无统计学意义。SLE抗SSA抗体阳性患者比阴性患者,其XCR1mRNA表达水平降低,两组均较健康对照组增高。提示XCR1参与疾病的发展,与疾病的活动性相关,XCR1可能参与抗SSA抗体的形成过程,造成组织损伤。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞CD28 mRNA的表达

目的　探讨CD28在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其意义。方法　应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人PBMC中CD28mRNA的表达水平。结果　活动期SLE患者CD28的阳性表达率为20.6%,明显低于正常人对照组(70.0%),差异非常显著(P＜0.001);活动期SLE组CD28的平均表达水平(0.19±0.21)亦明显低于正常对照组(0.43±0.11),差异显著(P＜0.05)。结论　CD28的异常表达可能在SLE发病机制中起作用,CD28mRNA的低水平表达可能与外周血CD28＋T细胞凋亡增加或迁移到炎症部位有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞趋化因子受体4、5 mRNA的表达

目的探讨趋化因子受体CCR4及CCR5在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,与疾病的相关性.方法收集93例确诊的SLE患者和30名正常对照,通过外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测研究对象CCR4、CCR5 mRNA表达水平.结果趋化因子受体CCR4 mRNA在SLE患者PBMC中的表达水平,患者组(1.57±0.70)与正常对照组(0.19±0.18)比较,两者差异有显著性(t=3.012,P=0.003);活动期(2.03±1.04)非活动期(0.26±0.19)及对照组比较,两者差异有显著性;非活动期与对照组比较,差异无显著性(P＞0.05).趋化因子受体CCR5 mRNA在PBMC中表达水平,患者组(0.56±0.44)与对照组(0.37±0.14)比较,两者差异有显著性(t=3.262,P=0.002);活动期(0.53±0.51)与非活动期(0.59±0.34)比较,差异无显著性(P＞0.05);活动期与对照组比较(t=2.039,P=0.045)及非活动期与对照组比较(t=3.461,P=0.001),两者差异有显著性.SLE患者组CCR4及CCR5 mRNA水平与疾病活动度评分关系CCR4 mRNA水平与SLEDAI(r=0.376,t=3.851,P=0.000)呈正相关.CCR5 mRNA水平与疾病的活动性(SLEDAI)(r=0.062,t=-0,589,P=0.557)不相关.结论CCR4 mRNA表达水平在患者组比对照组表达增高,活动期比对照组表达水平增高,与疾病的活动性(SLEDAI)呈正相关.CCR5 mRNA表达在患者组比对照组增高,差异有显著性,与SLEDAI不相关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞环氧合酶同工酶mRNA的表达

目的　探讨原生型环氧合酶 (COX 1)和诱生型环氧合酶 (COX 2 )在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞 (PBMC)中的表达水平及其在SLE发病机制中的作用及其意义。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 34例活动期SLE患者和 30名正常人PBMC中COX 1和COX 2mRNA的表达水平。结果　活动期SLE患者COX 1和COX 2的阳性表达率与正常对照组相比差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;活动期SLE患者PBMC中COX 2mRNA的平均表达水平 (0 6 6±0 2 7)明显高于正常对照组 (0 43± 0 16 ) ,差异有非常显著性 (P <0 0 1) ;活动期SLE组COX 1的平均表达水平与正常对照组处于同一表达水平 ,差异性无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　活动期SLE患者外周血单个核细胞中COX 2mRNA的表达增加 ,通过诱导前列腺素 (PGs)的产生参与SLE的发病过程。为特异性COX 2抑制剂应用于SLE的治疗提供了理论依据。     

系统性红斑狼疮患者外周血多形核粒细胞磷脂酶A2 5-脂氧化酶和白三烯C4合成酶mRNA的表达

目的探讨磷脂酶A2(cPLA2)、5-脂氧化酶(5-LO)和白三烯C4合成酶(LTC4-S)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血多形核粒细胞(PMNs)中的表达水平,及其在SLE发病机制中的作用及意义.方法应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测了28例活动期SLE患者和25名正常人PMNs中cPLA2、5-LO和LTC4-S mRNA的表达水平.结果活动期SLE患者cPLA2、5-LO和LTC4-S的阳性表达率与正常对照组相比差异无统计学意义;但活动期SLE患者PMNs中的5-LO mRNA的平均表达水平(0.89±0.26)明显高于正常对照组(0.64±0.14),LTC4-S mRNA的平均表达水平(0.68±0.38)也明显高于正常对照组(0.40±0.14),两者差异均有统计学意义(P＜0.01);活动期SLE组cPLA2的平均表达水平(0.63±0.27)与正常对照组(0.50±0.19)处于同一表达水平,差异无统计学意义.结论活动期SLE患者PMNs中5-LO和LTC4-S mRNA的表达增加,通过诱导半胱氨酸白三烯(CysLTs)的产生参与SLE的发病过程,为特异性5-LO抑制剂或CysLTs受体拮抗剂应用于SLE的治疗提供了理论依据.     

系统性红斑狼疮患者骨髓CD34+细胞表面标志及与病情活动的相关性分析

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓CD34+细胞表面标志的变化,了解SLE患者造血干细胞是否存在异常。方法应用流式细胞术CD45/SSC设门分析10例SLE患者和10例正常人骨髓CD34+细胞CD90、CD117、CD123、CD164、CD166、CD95(FAS)、FAS-L、人类白细胞抗原(HLA)-DR等表面分子的表达及其与病情活动指标的相关性。结果活动期SLE患者骨髓CD34+细胞比例(1.5±0.4)%,明显低于正常人(2.3±0.8)%,P<0.01;非活动期患者(2.0±0.4)%与正常人相比差异无统计学意义。SLE患者CD34+、CD95+的表达明显高于正常人[(48.3±10.6)%vs(24.3±11.1)%,P<0.05],患者CDl23和CDl66也明显高于正常人[(45±22)%vs(20±4)%,P<0.05];[(31±20)%vs(11±6)%,P<0.05]。其余表面标志的表达与正常人相比差异无统计学意义。CDl23表达率与患者外周血白细胞计数负相关(r=-0.700,P< 0.05),与SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分无相关性。CD166表达与SLEDAI(r=0.472,P<0.05),血清C3 (r=-0.712,P<0.01),尿蛋白定量(24h)(r=0.558,P<0.05)显著相关。结论SLE患者骨髓CD34+细胞CD95、CDl23、CDl66的表达率增加,CDl23的表达率与外周血白细胞计数显著负相关:CDl66的表达率与SLEDAI评分、24h尿蛋白呈显著正相关,与血清C3呈显著负相关,CDl66可能是一个新的SLE疾病活动性标志。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞生长激素受体和mRNA表达的研究

目的　探讨SLE患者外周血单个核细胞 (PBMC)的生长激素受体 (GHR)的表达与系统性红斑狼疮 (SLE)的关系。方法　采用放射性受体配基结合试验 (RLBA)及反转录 聚合酶链反应(RT PCR)研究外周血淋巴细胞GHR变化。结果　SLE活动期患者PBMC的GHR的特异性结合率 (SB) (3 4± 2 0 ) %、总结合率 (TB) (13 8± 5 7) %和静止期患者SB (1 3± 1 2 ) % ,TB (11 4±4 6 ) %均高于正常对照组SB (1 0± 1 0 ) % ,TB (8 3± 0 9) % (P <0 0 1) ;SLE活动期患者PBMC的mRNA的表达水平 (0 77± 0 6 6 )高于静止期患者 (0 4 5± 0 2 8) (P <0 0 5 )和正常对照组PBMC的mRNA的表达 (0 31± 0 2 2 ) (P <0 0 1)。结论　SLE患者PBMC的GHR高表达与SLE的病情活动性相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞抗凋亡基因Hax-1的验证及其mRNA表达

目的探讨抗凋亡基因Hax-1在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其在SLE发病中的作用及意义。方法运用GLGI技术对SLE患者CD4~ T细胞Long SAGE文库中单一匹配标签T4Y7进行鉴定和序列分析,进一步应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例活动期SLE患者和25名正常人PBMC中Hax-1 mRNA的表达水平。结果活动期SLE组Hax-1 mRNA的表达水平明显高于正常对照组,两者间差异有统计学意义(Z=-4．556,P＜0．01)；中度及重度活动期SLE患者PBMC中Hax-1 mRNA表达水平显著高于轻度活动组,两者间差异均具有统计学意义(P＜0．01)。结论活动期SLE患者PBMC中Hax-1 mRNA的表达较正常人明显增加,且与SEE的疾病活动性呈一定的线性相关关系。     

靶向STAT3 decoy寡核苷酸对SLE患者PBMC中IFI16表达的影响及其意义

目的观察特异性靶向信号转导和转录激活子3(STAT3)的decoy寡核苷酸(ODNs)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中干扰素诱导核蛋白16(IFI16)表达水平的影响。方法通过体外细胞培养术,将STAT3 decoy ODNs转染入提取的PBMC内,转染前后分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMC中IFI16的表达水平。结果转染STAT3 decoy ODNs前,IFll6 mRNA的表达水平在活动期、非活动期组与对照组比较明显增高,差异均有统计学意义(P＜0．05)。而活动期与非活动期组比较,差异无统计学意义(P＞0．05)。转染后,IFI16 mRNA的表达水平在活动期与非活动期组中均明显下降,与阴性对照比较差异均有统计学意义(P＜0．05),而正常组转染后与阴性对照比较差异无统计学意义(P＞0．05)。结论IFl16在SLE患者的异常高表达提示IFI16参与SLE的发病。SLE患者异常高表达的IFI16基因能被STAT3 decoy ODNs高度抑制,而在正常人不能被明显抑制,提示SLE患者异常高表达的IFI16是受JAK-STAT3信号转导途径调控的。     

系统性红斑狼疮患者血浆IL-17和IL-23的表达及意义

目的探讨IL-17和IL-23在系统性红斑狼疮(SLE)患者血浆中的表达水平及其临床意义。方法收集诊断明确的SLE患者33例,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分随机分为活动组和非活动组,根据肾脏受累与否分为肾炎组和非肾炎组,以性别和年龄相匹配的28例健康体检者作为对照组,采用ELISA法检测血浆中IL-17和IL-23的表达水平。结果活动组患者血浆IL-17和IL-23水平明显高于对照组(P均<0.01),亦高于非活动组(P<0.05或<0.01),但二者在SLE非活动组与对照组间及肾炎组与非肾炎组间差异无统计学意义;SLE患者血浆IL-17和IL-23水平与SLEDAI评分呈正相关(r分别为0.39、0.60,P<0.05或<0.01)。结论 IL-17和IL-23在活动期SLE患者血浆中表达明显增高,二者可能参与了SLE疾病的病理过程,且与疾病的活动性关系密切。     

caspase-10在甲状腺分化癌中的表达及临床意义

Objective To investigate the expression of caspase-10 in differentiated thyroid carcinoma and association with its development and metastasis. Methods Thyroid samples from 37 patients in a period from January 2006 to December 2007, with differentiated thyroid carcinoma were retrospectively analyzed for caspase-10 by immunohistocbemistry(streptavidin-perosidase, S-P), compared to control group of 46 cases with nodtdar goiter. The relationship between the expression of caspase-10 and the clinical pathologic characteristics of thyroid carcinoma were also explored simultaneously. Results caspase-10 were observed as brown or yellow particles located in the cytoplasm or cell membrane of nodular goiter but there were no significant evidence for its positive expression in thyroid carcinoma, caspase-10 expression was markedly down-regulated in differentiated thyroid carcinoma(29.73%,11/37) compared with benign nodules(71.74%,33/46, χ2=14.528, P<0.01). The positive expression in 18 cases with lymph node metastasis(11.11%,2/18) was significantly lower than those in 19 patients without lymph node metastasis(47.37%,9/19; χ2=4.210, P<0.01). There was no significant correlation(P> 0.05) between the expression of caspase-10 and the clinical pathologic characteristics including male, age, TNM stage and pathologic type. Conclusion Down-regulation of caspase-10 may play a critical role in carcinogenesis and development of differentiated thyroid carcinoma.     

BTBD10基因的真核表达载体构建和亚细胞定位

目的构建BTBD10重组真核表达载体,观察BTBD10在HEK293细胞中的定位。方法利用PCR方法扩增BTBD10全长,经HindIII和BamHI酶切后连接入pGFP-C3真核表达载体,构建pGFP—C3-BTBD10重组表达质粒,转染HEK293细胞,利用激光共聚焦显微镜观察BTBD10在细胞中的定位。结果经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的BTBD10读码框。激光共聚焦显微镜观察到空质粒pGFP—C3转染后,整个细胞内弥散绿色荧光,而转染pGFP-C3-BTBD10重组载体后,可见绿色荧光分布于HEK293细胞膜一侧的细胞浆中,提示BTBD10定位于细胞浆中。结论成功构建人BTBD10真核表达载体,BTBD10定位于哺乳细胞的细胞浆中,可能发挥蛋白之间的相互作用。     

PEG10基因RNA干扰对人肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响

目的研究PEG10基因RNA干扰对肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响。方法psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞,MTT法检测细胞体外增殖速度,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞后,明显沉默了Hep3B mRNA和蛋白的表达,转染后48 h抑制效率最高。Hep3B细胞体外增殖受到抑制（P〈0.05）,流式细胞仪分析结果显示大量Hep3B细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察到凋亡细胞形态。结论PEG10基因RNA干扰在体外可明显沉默肝癌细胞内PEG10基因的表达,抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡。     

人遗传印记基因PEG10对L02细胞线粒体膜电位的影响

人遗传印记基因PEG10定位于人7号染色体长臂2区1带,是一个反转座子衍生而来的父系表达的遗传印记基因.PEG10基因高表达于肝癌细胞系HepG2和大多数肝细胞癌组织中,在良性肝病组织及非肝脏来源的肿瘤细胞系中没有检测出该基因的表达.PEG10基因的表达水平与肝细胞癌的转移潜能正相关,并且可以促进正常人肝细胞L02增殖,提示PEGl0基因可能在人肝细胞癌的发生过程中起重要作用.本研究通过检测L02细胞转染前后线粒体膜电位及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的改变,初步探讨PEG10基因促人肝细胞增殖的机制.     

肠道微生态对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白occludin保护作用的研究

目的研究肠道微生态对三硝基苯磺酸(trinitro-benzen-sulfonic acid,TNBS)诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的保护作用。方法建立TNBS诱导大鼠结肠炎模型。实验分为正常组、模型组和双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌(金双歧)组。进行疾病活动指数(DAI)和组织学损伤评分,用ELISA法测定结肠组织TNF-α、IL-10和血清内毒素水平,采用免疫组织化学染色检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白occludin的分布。结果TNBS诱导大鼠结肠炎后,DAI和组织学损伤评分增高,结肠组织TNF-α水平升高,IL-10水平降低和血清内毒水平升高,而经双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌处理后,DAI和组织学损伤评分有明显下降,结肠组织TNF-α水平降低,IL-10水平升高和血清内毒素水平降低,组间比较差异有显著性(P0.05)。TNBS诱导大鼠结肠炎后,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达亦减少,而双歧杆菌嗜酸乳杆菌肠球菌三联活菌(金双歧)处理后可使TNBS引起的TJ结构受损减轻,相关蛋白的表达增多(P0.05)。结论肠道微生态对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞TJ蛋白具有明显的保护作用,其可能的机制是通过纠正肠道微生态,上调肠上皮细胞TJ蛋白occludin的表达,降低结肠组织TNF-α水平,提高IL-10水平,从而抑制内毒素通过紧密连接进入体循环。     

肠道微生态对三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白occludin保护作用的研究

目的研究肠道微生态对三硝基苯磺酸(trinitro-benze-sulfonic acid,TNBS)诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的保护作用。方法建立TNBS诱导大鼠结肠炎模型。实验分为正常组、模型组和双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、肠球菌三联活菌(金双歧)组。进行疾病活动指数(DAI)和组织学损伤评分。用ELISA法测定结肠组织TNF-α、IL-10和血清内毒素,采用免疫组织学染色检测紧密连接(tight junction,TJ)相关蛋白occludin的分布。结果 TNBS诱导大鼠结肠炎后,DAI和组织学损伤评分增高,结肠组织TNF-α水平升高,IL-10水平降低和血清内毒素水平升高,而经金双歧处理后,DAI和组织学损伤评分明显下降,结肠组织TNF-α水平降低,IL-10水平升高和血清内毒素水平降低,组间比较差异有显著性(P0.05)。TNBS诱导大鼠结肠炎后,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达亦减少,而金双歧处理后,可使TNBS引起的TJ结构受损减轻,相关蛋白的表达增多(P0.05)。结论肠道微生态对TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白具有明显的保护作用。     

趋化因子IP-10和MIP-3α在大鼠同种异体肝移植免疫中的作用

IP-10是趋化因子CXC家族中的一员,其靶细胞主要为抗原特异性T细胞,在动物心脏移植和小肠移植免疫中的作用已得到证实,但其在肝移植方面的研究相对较少。MIF-3α是CC家族的成员,其在招募树突状细胞(DC)进入炎症区域,处理和呈递抗原并进而活化T细胞中有一定作用,但在移植免疫方面研究较少,故本实验通过检测IP-10、MIP-3α的表达来研     

白介素-10对内毒素性肺损伤保护作用

白介素-10(IL-10)是体内主要的抗炎细胞因子之一,可抑制大量前炎介质和趋化物质的产生,对炎症反应的调控起重要的作用。本文就其来源、分子结构、生物学活性和其对内毒素性肺损伤保护作用的的分子学机制及临床研究进展作一综述。     

BTBD10基因的细胞、组织mRNA表达谱研究

目的研究人BTBD10基因mRNA在不同组织、不同细胞系的表达水平。方法用DIG-11-dUTP标记人BTBD10编码区基因作为探针，利用Northern blot杂交观察BTBD10 mRNA在14种正常人体组织和5种细胞株的表达水平。结果BTBD10基因呈单一转录本，大小约为3kb，BT—BD10基因表达较广泛，在各组织和细胞株中均有不同程度的表达，其中在脑、骨骼肌、脂肪、肝脏、主动脉、十二指肠、肺脏、胰岛β细胞株等表达较高，而胰腺、垂体、心脏中表达量低。结论人BTBD10表达广泛，可能在多种组织中发挥重要作用。     

结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达

目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。