生长抑制因子基因1及其与p53基因的相互关系

生长抑制因子基因1(inhibitor of growth-1 gene，ING1)为生长抑制类基因，研究发现此基因与另一目前公认的抑癌基因p53具有复杂的协同关系，ING1蛋白不仅可以抑制p53蛋白的降解，而且在许多方面与p53蛋白具有相互协作的关系，本拟对它们之间相互关系的最新研究进展进行综述。     

pEGFP-ING4真核表达载体的构建及在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的构建携带生长抑制因子4(ING4)基因的真核表达载体pEGFP-ING4并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),为进一步研究ING4对胶质瘤血管生成影响提供基础。方法提取人胎盘细胞中总RNA,RT-PCR扩增ING4并克隆至pEGFP-C2载体,酶切电泳鉴定出阳性克隆送测序,利用靶向转染试剂jetPEI-HUVEC转染HUVEC,通过免疫组化检测转染细胞中ING4的表达。结果 成功扩增ING4基因,基因全长747 bp。重组质粒pEGFP-ING4的酶切鉴定及测序结果均证明ING4基因成功克隆到真核表达载体中。酶切片段电泳结果表明:目的条带与ING4的开放读码框大小相符;测序结果和ING4的开放读码框比对相似性为100%。转染重组质粒后的HUVEC中ING4蛋白表达水平增强。结论本实验成功构建携带ING4基因的真核表达载体pEGFP-ING4,并可在HUVEC中获得ING4蛋白的增强表达。     

脑胶质瘤的肿瘤抑制基因研究

脑胶质瘤的肿瘤抑制基因研究林松吴建中近年来，癌变机理的研究热点已从癌基因转移到肿瘤抑制基因（ＴＳＧ）。新的ＴＳＧ不断发现。生理情况下ＴＳＧ调节细胞生长、分化、抑制癌变，是细胞的正常基因。ＴＳＧ受到物理、化学和生物因素的作用失活，可使细胞生长失控。从１...     

P16基因与脑胶质瘤

P16/CDKN2基因又称多肿瘤抑制基因,它编码一种细胞周期素依赣性激酶C(Cdk_4)抑制蛋白,能特异地抑制Cdk_4活性,阻止细胞从G_1期进入S期,抑制细胞增殖。P16基因变异会导致细胞无控制地生长。P16基因变异包括缺失、突变和甲基化。许多实验证实P16基因变异与脑胶质瘤的进展有关。     

pEGFP-ING4抑制裸鼠皮下人U87移植瘤生长及肿瘤血管生成

目的 探讨pEGFP-ING4对裸鼠体内人U87细胞移植瘤生长及对肿瘤血管生成的影响.方法 将成功构建的18只人U87细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为pEGFP-ING4和pEGFP-C2转染组及PBS空白对照组3组,测量各组肿瘤的体积变化,荧光显微镜观察转染瘤体内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况,免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD).结果 荧光显微镜下pEGFP-ING4 组和pEGFP-C2组均观察到GFP表达,接种后第21d、28d、35d各组皮下肿瘤体积(mm3)为:PBS 组(201.8±19.3,418.9±26.4,622.1±51.3),pEGFP-C2 组(197.6±18.9,398.4±20.4,593.7±48.7),pEGFP-ING4 组(138.9±8.4,198.7±21.5,293.2±31.6),肿瘤接种后在同一时间点内,pEGFP-ING4 组肿瘤体积明显小于另外两组(P<0.05);MVD检测(个/mm2):PBS 组(15.83±0.98),pEGFP-C2 组(15.83±1.62),pEGFP-ING4 组(4.17±1.17),与另外两组比较,pEGFP-ING4 组MVD明显降低(P<0.01).结论 ING4基因能够明显抑制人U87细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制胶质瘤血管的生成可能是其抗肿瘤的重要机理之一.     

ING4在脑胶质瘤中的表达与curcumin治疗作用研究

目的 研究生长抑制因子4（ING4）在脑胶质瘤中的表达和姜黄素（curcumin）对脑胶质瘤的治疗作用,揭示curcumin抗脑胶质瘤作用的分子机制。方法 体外培养U251胶质瘤细胞并以不同浓度curcumin处理细胞;以药物敏感试验和流式细胞仪分别检测curcumin对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响,以DNA梯度凝胶电泳检测细胞凋亡,以Western blot分析curcumin处理后蛋白表达变化。结果 ING4蛋白在正常神经细胞中高表达,在U251细胞中几乎不表达。低剂量curcumin对U251细胞无明显抑制作用,而高剂量curcumin对U251细胞存在明显的生长抑制作用,生长抑制率达35%。10μMcurcumin作用24h后,U251细胞中ING4蛋白表达水平显著增加。结论 高剂量curcumin通过诱导ING4表达上调,抑制脑胶质瘤细胞体外生长。     

野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能

目的构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因（NF2）Ⅱ亚型的真核表达载体，观察其在人胚胎肾细胞293（HEK293）中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞（RT4）后的功能。方法以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板．应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2Ⅱ亚型基因，并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中：经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2Ⅱ亚型，用Lipofectamine2000脂质体导人人胚胎肾细胞293，通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平：随后转染大鼠神经鞘瘤细胞．利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响。结果经序列分析证实，克隆的NF2Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致。DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示，经双酶切后的质粒pEGFPcDNA片段大小约为4700bp：NF2Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为l770bp，NF2Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293，通过荧光显微镜和Westem Blotting方法得到证实；水溶性四氮唑法检测显示，转染pEGFP-NF2Ⅱ亚型并表达NF2Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同。结论所构建的野生型NF2Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达，且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性。     

人脑胶质瘤中ING4和CTGF的表达及其意义

目的 探讨人脑胶质瘤中生长抑制因子4(ING4)及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA的表达及其意义.方法 采用荧光实时定量聚合酶链式反应法检测ING4和CTGF mRNA在30例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织中的表达水平,统计分析表达水平和肿瘤级别之间的关系以及二者表达水平的相天性.结果 ING4 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级...     

FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制作用的研究

目的：探讨FasL基因诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法：脂质体介导FasL基因转染TJ905胶质瘤细胞系，原位杂交，FasL免疫组化鉴定转染成功,应用MTT法、Ki-67免疫组化检测TJ905细胞的增殖变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：FasL基因转染成功后，肿瘤细胞内FasL表达增加，细胞增殖率降低，而凋亡细胞数增多。结论；FasL基因诱导的细胞凋亡可能成为胶质瘤治疗的新途径之一。     

p16基因与脑胶质瘤

肿瘤的发生和发展是一个十分复杂的过程.现已肯定地认为,肿瘤是一种基因病变,癌基因的激活和抑癌基因的失活是正常机体癌变的主要机理.p16基因是继P53抑癌基因之后又一引人注目的新型肿瘤抑制基因,也是人们发现的第一个直接作用于细胞周期抑制细胞分裂的抑癌基因,其编码产物为CDK4抑制因子.由于CDK4在细胞增殖和恶性转化过程中发挥重要作用,所以该基因一经发现即成为肿瘤生物学、分子遗传学等领域研究的热点.     

重组Endostatin基因治疗大鼠胶质瘤及其微血管密度改变

目的探讨重组Endostatin基因（EScDNA）对大鼠胶质瘤的治疗效果及肿瘤微血管密度的变化.方法对质粒包埋的Endostatin基因（pSecTagA-EScDNA）测序鉴定后,转染人脐静脉内皮细胞（ECV-304）,验证Endostatin基因对血管内皮细胞增殖的抑制作用;以C6胶质瘤细胞植于SD大鼠腋部皮下制作胶质瘤模型,将pSecTagA-EScDNA直接瘤内注射.分别观察记录肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线：对肿瘤标本进行微血管标记、计数,并比较治疗前后肿瘤微血管数量的变化.结果重组Endostatin基因治疗后的肿瘤生长明显受抑制,使肿瘤退缩至休眠甚至完全消失;肿瘤微血管密度明显低于未治疗者.结论重组Endostatin基因通过抑制肿瘤血管新生对大鼠胶质瘤有良好的治疗效果.     

转染外源性p16基因对恶性胶质瘤生长抑制作用的动物体内实验研究

目的 :探讨p16基因在体内对恶性胶质瘤的生长抑制作用。方法 :将外源性p16基因导入C6 细胞内 ,应用立体定向技术将C6细胞种植于SD大鼠尾状核头部 ,用核磁共振 (MR)扫描技术 ,动态观察颅内肿瘤生长情况。并通过免疫组化、原位杂交和细胞凋亡检测肿瘤细胞的增殖活性。结果 :转染组和治疗组大鼠生存期较对照组明显延长。治疗组肿瘤随时间的延长逐渐缩小。免疫组化显示转染组和治疗组P16蛋白表达明显增强。原位杂交和细胞凋亡检测表明 ,转染组和治疗组大鼠肿瘤细胞增殖活性降低。结论 :p16基因在体内有抑制恶性胶质瘤生长的作用 ;瘤体内注入p16cDNA质粒 脂质体复合物 ,可使肿瘤生长受到明显抑制 ,并使多数肿瘤消失     

PTEN肿瘤抑制基因对神经干细胞增殖的调节

目前对神经干细胞增殖的调控机制还不够了解。作为一个肿瘤抑制基因,PTEN通过反向调节类脂第二信使的信号传导过程实现对肿瘤的抑制作用,而PTEN突变导致的功能减弱可引起PIP3的显著升高和AKT信号活化的增强,进而导致细胞凋亡的抑制、细胞过度增殖和肿瘤形成。最近一系列体内外研究发现PTEN突变可导致神经干细胞的细胞周期缩短和凋亡减少,提示PTEN对神经干细胞的增殖有负向调节作用。     

FasL基因治疗移植于裸鼠的人脑胶质母细胞瘤的实验研究

目的 :探讨FasL基因在体内诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法 :在裸鼠皮下种植Fas表达阳性的人脑胶质母细胞瘤细胞系TJ90 5 ,成瘤后 ,利用脂质体介导FasL基因瘤内治疗 ,在 3 9d观察期间 ,用千分尺测量肿瘤生长 ,最终取出肿瘤 ,用原位杂交 ,免疫组化鉴定FasL基因和蛋白的表达 ,应用TUNEL法检测细胞凋亡 ,Ki 67免疫组化检测细胞增殖。结果 :FasL基因瘤内注射观察 3 9d后 ,治疗组瘤体积明显小于对照组 (P <0 0 1) ,肿瘤组织细胞内FasL基因表达增加 ,凋亡细胞数增多 ,细胞增殖率降低。结论 :FasL基因对Fas表达阳性胶质瘤有治疗作用。     

人类野生型p53基因对9L胶质肉瘤的抑制作用

目的：观察人类野生型ｐ５３基因对ｐ５３突变的大鼠胶质肉瘤细胞９Ｌ的抑制作用。方法：在体外用逆转录病毒载体转移人野生型ｐ５３基因到９Ｌ胶质肉瘤细胞中，经Ｇ４１８筛选后，体外培养和大鼠体内接种；观察瘤细胞形态和肿瘤重量变化，用免疫组化法检测人ｐ５３蛋白的过度表达。结果：人野生型ｐ５３基因在体内体外均可明显抑制９Ｌ瘤细胞的生长，皮下肿瘤抑制率６２．９３％，脑内肿瘤抑制率为８５．１８％。转ｐ５３基因后肿瘤分化程度提高，部分肿瘤有非肿瘤性纤维母细胞增生和大量浆细胞浸润，瘤细胞生长状态欠佳。结论：转移异源性ｐ５３基因可以重建ｐ５３的肿瘤抑制功能；并可能增强免疫系统对表达异源性ｐ５３蛋白的瘤细胞的识别，激发抗肿瘤免疫反应。因此产生双重的抗肿瘤作用，有潜在的临床应用价值。     

诱导非典型蛋白激酶C基因沉默增加胶质瘤干细胞化疗药物敏感性的研究

目的 通过诱导非典型蛋白激酶C(aPKC)基因沉默增加胶质瘤干细胞对化疗药物的敏感性,为根治胶质瘤干细胞提供理论支持.方法 流式细胞术分离大鼠C6胶质母细胞瘤侧群细胞,RNA干扰(RNAi)技术沉默C6侧群细胞aPKC表达,MTT和锥虫蓝实验检测单纯疱疹病毒-胸苷激酶(HSV-tk)/更昔洛韦(GCV)对C6侧群细胞的杀伤效果;建立裸鼠皮下胶质瘤模型,测量肿瘤体积,肿瘤组织块称重,原位凋亡法检测细胞凋亡.结果 C6侧群细胞aPKC基因被有效沉默后,可显著增加其对HSV-tk/GCV药物的敏感性,表现为细胞凋亡和死亡数明显增加(P＜0.05);体内实验显示肿瘤体积和重量较对照组明显减小(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.05).结论 通过诱导aPKC基因沉默可进一步增加胶质瘤干细胞对化疗药物HSV-tk/GCV的敏感性,为胶质瘤干细胞的基因治疗提供了新的方法选择.     

脑胶质瘤中P33ING1的表达及临床意义

目的 检测脑胶质瘤中P33ING1的基因和蛋白表达,探讨其在胶质瘤发生、发展中的作用及临床意义.方法 选取行脑胶质瘤手术切除的新鲜胶质瘤标本50例,分别应用RT-PCR方法和S-P免疫组织化学方法检测P33ING1在瘤组织及正常脑组织中的表达.实验数据用SPSS11.5软件包进行统计.结果 50例胶质瘤中P33ING1 mRNA和蛋白的阳性表达率均为90%(45/50),正常脑组织中全部表达阳性(100%).P33ING1蛋白表达的LI值与P33ING1mRNA表达的RI值呈显著正相关(r=0.8841,P＜0.01).随着肿瘤级别的升高基因与蛋白水平的表达均随之减少(P＜0.01).结论 抑癌基因P33ING1异常表达与其恶性程度密切相关.检测其表达水平的变化对胶质瘤的早期诊断、基因介导治疗及判断预后方面均有重要指导意义.     

纳米介导的缺氧诱导因子1α小干扰RNA抑制人食管鳞癌TE-1细胞生长*☆

背景：纳米微粒作为一种比较理想的非病毒基因递送载体,具有无免疫原性和致瘤性等优越性。利用纳米技术和基因干扰技术阻断缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α)在食管鳞癌组织的表达,降低癌细胞对化疗药物的耐药性,理论上成为能够抑制食管癌细胞生长的有效方法。 目的：探讨HIF-1α小干扰RNA纳米微粒对人食管鳞癌TE-1细胞生长的抑制作用。 设计、时间及地点：以体外培养的食管鳞癌TE-1细胞为对象,基因水平完全随机对照实验,于2007-01/2008-12在中山大学附属第三医院中心实验室完成。 材料：由上海生物工程公司合成HIF-1α小干扰RNA,采用超声乳化法制备纳米微粒。人食管鳞癌TE-1细胞株购自中科院上海细胞库。 方法：体外培养的人食管鳞癌TE-1细胞分为4组：分别为生理盐水组,不含基因的纳米微粒组,HIF-1α小干扰RNA组,HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组。 主要观察指标：RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达,Western-blot法检测HIF-1α蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖情况。 结果：处理72 h后HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组细胞的HIF-1αmRNA表达和HIF-1α蛋白表达低于其他3组(P < 0.01),细胞凋亡率高于其他3组 (P < 0.01)。HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组细胞增殖受明显抑制,生长缓慢,与其他3组比较,差异有显著性意义(P < 0.01）。 结论：HIF-1α小干扰RNA纳米微粒能够有效减少食管鳞癌TE-1细胞的HIF-1αmRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞的凋亡,显著抑制TE-1细胞的生长。 关键词：RNA干扰;基因,HIF-1α;纳米;细胞凋亡;食管肿瘤     

胶质瘤中miR-410靶向作用于MET的初步研究

目的探讨mi R-410在胶质瘤细胞的作用机制。方法收集50例人胶质瘤标本以及胶质母细胞瘤U251和U87细胞系。采用mi Randa靶基因预测软件对mi R-410的靶基因预测分析,初步判断其与MET基因的相关性;利用免疫组化和原位杂交技术检测人脑胶质瘤标本中mi R-410和MET的表达;荧光素酶报告基因实验检测mi R-410对MET的靶向作用;Western blot检测mi R-410模拟物转染肿瘤细胞后MET蛋白的变化。结果经mi Randa靶基因分析:MET m RNA的3’非编码区(3’UTR)与mi R-410的种子序列存在理论上的互补匹配序列。免疫组化和原位杂交技术检测:肿瘤标本中mi R-410和MET具有负相关性(r=-0.69783,P0.001)。荧光素酶实验进一步证实胶质母细胞瘤中MET基因是mi R-410的直接靶点。肿瘤细胞转染mi R-410模拟物后对MET蛋白的表达具有明显的抑制作用(P0.05)。结论在胶质瘤细胞中mi R-410靶向作用MET,可能是胶质瘤治疗的新靶点。     

p53基因、PTEN基因协同对胶质瘤U251细胞系生长抑制作用的研究

目的探讨p53基因和PTEN基因在脑胶质瘤细胞系U251发生发展过程中的作用机制。方法用不同MOI的p53腺病毒表达载体pAdCMV-p53及空载体pAdCMV-lacZ分别感染表达野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的细胞系,RT-PCR及Westernblot方法检测转染效率;并通过MTT检测生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期及TUNEL检测分析细胞凋亡等指标观察p53基因及PTEN基因对U251细胞生长的影响。结果MOI为100时,p53基因可引起U251细胞G0G1期阻滞、诱导细胞凋亡,生长抑制;MOI为50时,U251-p53 PTEN生长抑制率明显高于U251-p53,并能出现细胞凋亡,而U251-p53仅出现少量细胞凋亡。结论p53基因可以通过细胞周期G0G1期阻滞及诱导细胞凋亡抑制胶质瘤细胞系U251的生长;PTEN基因可以促进p53基因对胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用,并能增加U251细胞对p53基因诱导凋亡的敏感性。